本發(fā)明涉及達(dá)托霉素傳遞體的制備工藝，特別是一種新型達(dá)托霉素傳遞體透皮制劑的制備方法。
背景技術(shù)：
達(dá)托霉素是二十世紀(jì)八十年代的后期從玫瑰孢鏈霉菌的發(fā)酵產(chǎn)物中分離提取得到的，是一種新型的環(huán)脂肽類的抗生素，是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的環(huán)脂肽類的抗生素。它屬于環(huán)十脂肽類的結(jié)構(gòu)群。因而，達(dá)托霉素是環(huán)酯肽類新抗生素家族的第一個(gè)產(chǎn)品。它是從小鏈霉菌發(fā)酵液當(dāng)中提取得到的十三個(gè)氨基酸組成的結(jié)構(gòu)新穎的環(huán)脂肽類抗生素，其中十個(gè)氨基酸構(gòu)成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，在環(huán)外癸酸和色氨酸發(fā)生酯化。它不僅具有新穎的化學(xué)結(jié)構(gòu)，且其作用模式也與任一已獲準(zhǔn)抗生素不同。它能在多個(gè)方面破壞細(xì)菌細(xì)胞膜功能，由此迅速殺死革蘭陽(yáng)性菌。達(dá)托霉素除能作用于大多數(shù)臨床相關(guān)革蘭陽(yáng)性菌外，更重要的是在體外對(duì)已呈甲氧西林、萬(wàn)古霉素和利奈唑胺等耐藥性分離菌株仍具強(qiáng)力活性。
透皮試劑是指由皮膚外側(cè)進(jìn)入血液和皮下各層組織的總稱，透皮試劑能夠維持體內(nèi)的血液濃度保持在恒定的有效藥物濃度水平，還能避免藥物經(jīng)過(guò)胃腸道，在胃腸道降解和肝臟的首過(guò)效應(yīng)；給藥方式溫和，可靠、簡(jiǎn)單。
然而，關(guān)于達(dá)托霉素透皮試劑的制備并不完善，本申請(qǐng)針對(duì)該問(wèn)題進(jìn)行了優(yōu)化。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種新型達(dá)托霉素傳遞體透皮制劑的制備方法，本方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果直觀，預(yù)測(cè)性好，能夠廣泛應(yīng)用于達(dá)托霉素透皮制劑的制備工藝。
本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：一種新型達(dá)托霉素傳遞體透皮制劑的制備方法，包括以下步驟：
S1、稱取卵磷脂和膽固醇，并用氯仿：甲醇＝1：3(V/V)的混合溶液溶解后，轉(zhuǎn)移至燒瓶?jī)?nèi)，在37℃的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干溶劑，使得卵磷脂和膽固醇在燒瓶?jī)?nèi)部均勻分布成膜；
S2、待燒瓶?jī)?nèi)的溶劑揮發(fā)完全后，加入0.01M的PBS緩沖液，再將燒瓶固定在37℃的恒溫水浴搖床中，以130rpm/s的轉(zhuǎn)速震搖1h；
S3、觀察燒瓶壁上的膜是否水化下來(lái)，若還有膜沒(méi)有被水化，則繼續(xù)震搖直到燒瓶壁上的膜被水化完全，即得到達(dá)托霉素傳遞體樣品溶液；
S4、取出達(dá)托霉素傳遞體樣品溶液于EP管中，在超聲破碎儀中超聲破碎，使聚集的脂質(zhì)體分散開(kāi)；
S5、在均質(zhì)儀上分別使達(dá)托霉素傳遞體樣品溶液分別通過(guò)200nm、100nm、50nm的膜，讓達(dá)托霉素傳遞體的粒徑分布均勻；
S6、將經(jīng)過(guò)步驟S5的達(dá)托霉素傳遞體裝入分子截留量為3500的透析袋中透析8h，每4h換一次透析液，透析液為0.1M的PBS緩沖液，使其將沒(méi)有包封在脂質(zhì)體內(nèi)部的達(dá)托霉素去掉，即得達(dá)托霉素傳遞體。
進(jìn)一步的，卵磷脂：達(dá)托霉素＝10-2(m：m)；卵磷脂：膽固醇＝10-20(m：m)。
進(jìn)一步的，在步驟S2中，PBS緩沖液的pH為7.4。
進(jìn)一步的，在步驟S2中，PBS緩沖液中溶有少量達(dá)托霉素。
進(jìn)一步的，在步驟S4中，超聲破碎儀的功率為800W，超聲波發(fā)生10s間隙10s。
本發(fā)明的有益效果是：
(1)優(yōu)化了傳統(tǒng)達(dá)托霉素的制備工藝，使得達(dá)托霉素透皮制劑的制備簡(jiǎn)便，結(jié)果直觀，預(yù)測(cè)性好；
(2)達(dá)托霉素傳遞體透皮制劑的包封率、載藥量、粒徑、電位以及穩(wěn)定性相比傳統(tǒng)制備工藝有很大提高。
附圖說(shuō)明
圖1為本發(fā)明達(dá)托霉素傳遞體透皮制劑粒徑分布圖和透射電鏡圖。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合附圖進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明的技術(shù)方案，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不局限于以下所述。
本發(fā)明包括一種新型達(dá)托霉素傳遞體透皮制劑的制備方法，具體包括以下步驟：
S1、稱取卵磷脂和膽固醇，并用氯仿：甲醇＝1：3(V/V)的混合溶液溶解后，轉(zhuǎn)移至燒瓶?jī)?nèi)，在37℃的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干溶劑，使得卵磷脂和膽固醇在燒瓶?jī)?nèi)部均勻分布成膜；
S2、待燒瓶?jī)?nèi)的溶劑揮發(fā)完全后，加入0.01M的PBS緩沖液，再將燒瓶固定在37℃的恒溫水浴搖床中，以130rpm/s的轉(zhuǎn)速震搖1h；
S3、觀察燒瓶壁上的膜是否水化下來(lái)，若還有膜沒(méi)有被水化，則繼續(xù)震搖直到燒瓶壁上的膜被水化完全，即得到達(dá)托霉素傳遞體樣品溶液；
S4、取出達(dá)托霉素傳遞體樣品溶液于EP管中，在超聲破碎儀中超聲破碎，使聚集的脂質(zhì)體分散開(kāi)；
S5、在均質(zhì)儀上分別使達(dá)托霉素傳遞體樣品溶液分別通過(guò)200nm、100nm、50nm的膜，讓達(dá)托霉素傳遞體的粒徑分布均勻；
S6、將經(jīng)過(guò)步驟S5的達(dá)托霉素傳遞體裝入分子截留量為3500的透析袋中透析8h，每4h換一次透析液，透析液為0.1M的PBS緩沖液，使其將沒(méi)有包封在脂質(zhì)體內(nèi)部的達(dá)托霉素去掉，即得達(dá)托霉素傳遞體。
本發(fā)明采用薄膜分散法制備成達(dá)托霉素傳遞體透皮制劑，其包封率、載藥量、粒徑、電位以及穩(wěn)定性相比傳統(tǒng)制備工藝有很大提高。然而，據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)及實(shí)驗(yàn)得知，影響達(dá)托霉素傳遞體的包封率、載藥量和粒徑等因素主要有以下3個(gè)方面：卵磷脂與達(dá)托霉素藥物的比例、卵磷脂與膽固醇的比例、在超聲破碎儀上的超聲時(shí)間。
包封率、載藥量的測(cè)定：
按照達(dá)托霉素傳遞體透皮制劑的最優(yōu)制備工藝制備達(dá)托霉素傳遞體透皮制劑。在用均質(zhì)機(jī)處理完以后，把樣品均分為兩組：第一組直接用0.1％(v/v)Triton X-100處理，使包封在脂質(zhì)體內(nèi)部的達(dá)托霉素釋放出來(lái)，再在HPLC上檢測(cè)，測(cè)定其中達(dá)托霉素的量為W。，第二組經(jīng)透析取出沒(méi)有包封的達(dá)托霉素后在用10％v/v Triton X-100破乳，HPLC檢測(cè)其中達(dá)托霉素的量為W。所以其包封率和載藥量分別為：
包封率＝W/W。×100％；
載藥量＝2W/(2W。+所加卵磷脂的量+所加膽固醇的量)×100％。
另外，達(dá)托霉素傳遞體透皮制劑的粒徑和電位的測(cè)定通過(guò)馬爾文粒徑儀上測(cè)定，測(cè)定圖形如圖1所示。
對(duì)于達(dá)托霉素傳遞體透皮制劑穩(wěn)定性的測(cè)定為：將制備好的達(dá)托霉素傳遞體透皮制劑樣品放置在4℃的冰箱中，每過(guò)7d取部分樣品出來(lái)檢測(cè)其包封率、載藥量、粒徑、電位等，與第1d的相比，觀察是否有變化。
按照達(dá)托霉素傳遞體透皮制劑最優(yōu)制備工藝制備出的達(dá)托霉素傳遞體透皮制劑的包封率為87.85±2.15％，載藥量為5.61±0.14％，粒徑為55.4nm，電位為-15.1mv，在4℃的冰箱中放置2個(gè)月，如表1所示。
表1：達(dá)托霉素穩(wěn)定性測(cè)定的對(duì)比表
由上表可知，達(dá)托霉素傳遞體透皮制劑的包封率、載藥量、粒徑、電位幾乎沒(méi)有變化。說(shuō)明此制備工藝制備出的達(dá)托霉素傳遞體透皮制劑包封率、載藥量高，粒徑小，穩(wěn)定性好。
以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的具體實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。