本發(fā)明涉及藥物制備技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種薔薇酸在制備抗缺氧藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
細(xì)胞是人體的結(jié)構(gòu)和功能單位。人體結(jié)構(gòu)的老化，首先表現(xiàn)為細(xì)胞的衰老和細(xì)胞數(shù)量的減少。當(dāng)細(xì)胞減少到一定數(shù)量時，就會使器官功能下降，甚至危及生命。21世紀(jì)的人體保健目標(biāo)，就是要保護細(xì)胞，改善細(xì)胞代謝，增強細(xì)胞的抗病能力。由于空氣中氧氣不足(高原缺氧)或人體自身的生理、病理原因而不能攝入足夠的氧，或細(xì)胞不能充分利用氧氣(亞健康缺氧)，均可引起人體代謝、生理功能或形態(tài)上的改變，這種狀態(tài)就是缺氧(anoxia)。急性或嚴(yán)重缺氧常出現(xiàn)呼吸困難、皮膚和黏膜發(fā)紺、精神異常，甚至意識喪失或昏迷：慢性缺氧常表現(xiàn)乏力、頭痛、眩暈、面色蒼白、食欲不振等癥狀；當(dāng)人體細(xì)胞含氧量低于正常值的65％時，缺氧細(xì)胞甚至易癌變，導(dǎo)致癌癥。
目前臨床對于人體亞健康性缺氧多采用各種中藥復(fù)方保健品用于抗缺氧。通常有紅景天、冬蟲夏草、銀杏、沙棘、黨參、黃芪、茯苓、人參、唐古特青蘭、刺五加、靈芝、枸杞等等中藥及其有效成分的復(fù)方制劑。對于高原缺氧常用的抗缺氧藥物包括以紅景天提取物為主的復(fù)方制劑；復(fù)方丹參片或復(fù)方丹參滴丸；21金維他；由地塞米松、氨茶堿和安定制成的化學(xué)藥復(fù)方制劑高原康等。乙酰唑胺是FDA批準(zhǔn)的單一成分的抗高原缺氧藥物。上述藥物中中藥復(fù)方通常起效慢，服用時間長，適用于亞健康的保健調(diào)理，但對于高原缺氧尤其是急性高原缺氧作用不理想。而化學(xué)合成藥的使用往往會在抗缺氧的同時帶來其他副作用。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種薔薇酸在制備抗缺氧藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明制備的藥物具有良好的臨床應(yīng)用前景，制備得到的抗缺氧藥物能夠?qū)崿F(xiàn)缺氧類疾病的治療。
本發(fā)明提供了一種薔薇酸在制備抗缺氧疾病藥物中的應(yīng)用。
優(yōu)選的是，所述抗缺氧疾病包括心肌缺氧導(dǎo)致的胸悶、氣短、心絞痛；腦缺氧所致的頭暈、頭痛；高原缺氧性腦水腫、高原缺氧性肺水腫。
優(yōu)選的是，所述藥物的劑型包括片劑、膠囊、糖漿劑和顆粒劑。
優(yōu)選的是，所述藥物還包括輔料，所述輔料包括淀粉、乳糖、蔗糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、微粉硅膠、乙醇、檸檬酸、苯甲酸鈉、香精和色素。。
優(yōu)選的是，所述藥物的劑量為0.8～2.4mg/kg。
本發(fā)明提供了一種薔薇酸在制備抗缺氧藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明制備的藥物可通過提高機體抗氧化能力，改善細(xì)胞呼吸功能，其抗缺氧起效劑量小，且在細(xì)胞及整體動物均未觀察到明顯的毒性作用，可用于緩解和治療缺氧導(dǎo)致的機體不適和病變，尤其適用于高原缺氧導(dǎo)致的高原反應(yīng)和臟器損傷。具有良好的臨床應(yīng)用前景，制備得到的抗缺氧藥物能夠?qū)崿F(xiàn)缺氧類疾病的治療。試驗結(jié)果表明，本發(fā)明制備的藥物能夠顯著減輕急性低壓缺氧大鼠腦水腫，對內(nèi)皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞缺氧損傷亦具有顯著的保護作用。
具體實施方式
本發(fā)明提供了一種薔薇酸在制備抗缺氧疾病藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明對所述薔薇酸的來源沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的薔薇酸的市售產(chǎn)品即可，如購自安徽蕪湖甙爾塔醫(yī)藥科技有限公司的薔薇酸。在本發(fā)明中，所述薔薇酸的純度優(yōu)選>98％。
在本發(fā)明中，所述抗缺氧疾病包括心肌缺氧導(dǎo)致的胸悶、氣短、心絞痛；腦缺氧所致的頭暈、頭痛；高原缺氧性腦水腫、高原缺氧性肺水腫。
在本發(fā)明中，所述藥物的劑型包括片劑、膠囊、糖漿劑和顆粒劑。本發(fā)明對所述劑型藥物的制備方法沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的相應(yīng)劑型的常規(guī)制備方法即可。
在本發(fā)明中，所述藥物還包括輔料，所述輔料包括淀粉、乳糖、蔗糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、微粉硅膠、乙醇、檸檬酸、苯甲酸鈉、香精和色素中的一種或多種。本發(fā)明對所述輔料的添加量沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的各輔料的常規(guī)添加量進行添加即可。本發(fā)明對所述輔料的來源沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的上述輔料的市售產(chǎn)品即可。
在本發(fā)明中，所述藥物的劑量為0.8～2.4mg/kg。
下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明提供的一種薔薇酸在制備抗缺氧藥物中的應(yīng)用做進一步詳細(xì)的介紹，本發(fā)明的技術(shù)方案包括但不限于以下實施例。
實施例1
以薔薇酸為原料制成的片劑
將上述配方采用壓片機進行直接壓片，得到片劑。
實施例2
以薔薇酸為原料制成的膠囊
薔薇酸20mg
淀粉70mg
將上述組分混合，裝入2號膠囊。
實施例3
以薔薇酸為原料制成的口服糖漿劑：
將上述組分加入水中調(diào)至所需量，混勻后裝瓶即可。
實施例4
以薔薇酸為原料制成的顆粒劑：
將上述組分混合后加入顆粒機中，制成顆粒后進行包裝。
實施例5
薔薇酸抗高原缺氧所致心肌損傷
1、方法
(1)實驗分組：將50只wister大鼠隨機分為常氧對照組、急性高原缺氧模型組、陽性藥地塞米松組、薔薇酸高劑量組和薔薇酸低劑量組，每組10只大鼠。在20±2℃飼養(yǎng)，自由飲水。高劑量組和低劑量組大鼠每次分別灌胃給予薔薇酸15mg/kg和5mg/kg，每次間隔12h，共給藥3次；陽性藥組大鼠則每次灌胃給予地塞米松6mg/kg，給藥次數(shù)及間隔時間同薔薇酸組；常氧對照組和急性高原缺氧模型組大鼠以同樣間隔時間和次數(shù)灌胃給予等體積生理鹽水。
(2)高原缺氧模型建立：除常氧對照組外，各組大鼠于末次灌胃后立即置于低壓氧艙中進行缺氧實驗，在15min內(nèi)使氧艙達(dá)到海拔7000m高度的大氣壓，溫度15±2℃，濕度30％±5％，缺氧18h。缺氧結(jié)束后在15min內(nèi)使低壓氧艙內(nèi)壓力降至海拔高度150m大氣壓(實驗地區(qū)海拔高度)。常氧對照組大鼠則于相同溫、濕度在艙外正常飼養(yǎng)。
(3)指標(biāo)檢測：
①生化指標(biāo)檢測：各組大鼠出艙后迅速腹腔注射25％烏拉坦麻醉，打開胸腔，摘取心臟，按照試劑盒說明制備心肌組織勻漿并檢測心肌組織勻漿中LDH、SOD活性和MDA、GSH含量。
②H.E染色：將制備好的心肌組織切片用二甲苯脫蠟，并經(jīng)逐級乙醇溶液入水。隨后用蘇木素浸染5min，自來水沖洗，鹽酸乙醇分化30s，自來水浸泡15min，隨后置入伊紅液中2min，常規(guī)脫水、透明、封片。正置顯微鏡下觀察各組大鼠心肌組織病理學(xué)變化。
③Nagar-Olsen染色：將制備好的心肌組織切片用二甲苯脫蠟，并經(jīng)逐級乙醇溶液入水。隨后用蘇木素浸染30s，蒸餾水沖洗，鹽酸乙醇分化15s，自來水沖洗5min，浸染置0.1％堿性復(fù)紅液3min，蒸餾水沖洗10s，隨后浸入純丙酮8min，0.1％苦味酸純丙酮溶液進行迅速分化，常規(guī)脫水、透明、封片。
2結(jié)果
與常氧對照組相比，急性低壓缺氧模型組心肌組織LDH活性顯著提高(P<0.01)，MDA含量顯著上升(P<0.05)，GSH含量顯著降低(P<0.01)，SOD活性顯著降低(P<0.05)。薔薇酸高低濃度組和地塞米松組LDH活性及MDA含量與急性低壓缺氧模型組相比均顯著降低，SOD活性和GSH含量與急性低壓缺氧模型組相比均顯著提高(P<0.01或P<0.05)。與常氧對照組相比，急性低壓缺氧模型組。薔薇酸高低濃度組和地塞米松組MDA含量與急性低壓缺氧模型組相比均顯著降低(P<0.01或P<0.05)(表1)。
表1薔薇酸對急性低壓缺氧大鼠心肌組織SOD,MDA,GSH的影響(x±s,n＝10)
注:**P<0.01vs常氧對照組；#P<0.05，##P<0.01vs缺氧模型組
實施例6
薔薇酸對EA.hy926內(nèi)皮細(xì)胞缺氧損傷的保護作用研究
1、方法
(1)EA.hy926內(nèi)皮細(xì)胞缺氧損傷模型建立EA.hy926內(nèi)皮細(xì)胞用含10％FBS的高糖DMEM培養(yǎng)液(培養(yǎng)液含有100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素)在二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，將生長成單層的EA.hy926細(xì)胞換無血清無糖的DMEM培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)12小時后，用預(yù)先以95％N2-5％CO2混合氣飽和30min的D-hanks液替代正常培養(yǎng)基，而后將培養(yǎng)板移入混合氣體培養(yǎng)箱(95％N2、5％CO2、O2濃度＜1％)，于37℃缺氧培養(yǎng)2h。實驗設(shè)空白對照組、缺氧模型組、薔薇酸高濃度組(1×10-11mol/L)、薔薇酸中濃度組(1×10-12mol/L)和薔薇酸低濃度組(1×10-13mol/L)、維拉帕米對照組(1×10-11mol/L)，共6組，每組8孔。除空白對照組外，其他各組均缺氧處理2h，正常對照組則于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中同步孵育2h。
(2)MTT法檢測缺氧損傷內(nèi)皮細(xì)胞代謝活力取出各組樣本，每孔加入20μlMTT(5g/L)，于37℃、5％CO2孵箱中繼續(xù)孵育4h，終止培養(yǎng)，倒板。加入150μl DMSO振搖15min，使結(jié)晶充分溶解，于測定波長570nm、參考波長630nm處，測定各孔吸光度(OD)值。
(3)生化指標(biāo)檢測接種于24孔板的EA.hy926內(nèi)皮細(xì)胞，缺氧損傷模型組及薔薇酸干預(yù)組缺氧處理2h，正常對照組二氧化碳培養(yǎng)箱同步孵育，取各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液200μl，按試劑盒說明用比色法測定培養(yǎng)基中LDH活性，細(xì)胞內(nèi)MDA含量，SOD、CAT活性和GSH含量。
2、結(jié)果
與正常對照組相比，缺氧損傷模型組內(nèi)皮細(xì)胞活力明顯降低，MDA含量明顯增高，GSH含量和SOD、CAT活性明顯下降，LDH外漏增加(P<0.01)；與模型組相比，各濃度薔薇酸內(nèi)皮細(xì)胞代謝活力、SOD、CAT活性及GSH含量均提高，MDA產(chǎn)生及LDH外漏均減少。(表2-4)(P<0.01)。
表3薔薇酸對缺氧損傷EA.hy926細(xì)胞代謝活力及細(xì)胞外LDH活性的影響(x±s,n＝8)
**P<0.01vs對照組；#P<0.05，##P<0.01vs模型組
表4薔薇酸對缺氧損傷EA.hy926細(xì)胞內(nèi)SOD活性及MDA含量的影響(x±s，n＝8)
Note:**P<0.01vs對照組；#P<0.05，##P<0.01vs模型組
表5薔薇酸對缺氧損傷EA.hy926細(xì)胞內(nèi)CAT活性及GSH含量的影響(x±s,n＝8)
Note:**P<0.01vs對照組；#P<0.05，##P<0.01vs模型組
經(jīng)一年動物實驗觀察，應(yīng)用本發(fā)明藥物對動物未發(fā)現(xiàn)明顯的毒副作用。
以上可看出，薔薇酸具有顯著的抗缺氧損傷作用，此外動物實驗證實該藥物毒性較低，可以用于制備防治缺氧損傷的藥物。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。