本發(fā)明屬于廢棄資源再生利用的技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及五味子藥渣廢棄資源再生利用，具體涉及利用五味子藥渣回收獲得高純度五味子木脂素及其殘渣酵母菌固態(tài)發(fā)酵聯(lián)產(chǎn)高蛋白飼料的技術(shù)。
背景技術(shù)：
五味子為木蘭科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果實，習(xí)稱“北五味子”，具有豐富的藥用、食用價值，是臨床配伍飲片和五味子相關(guān)制劑生產(chǎn)的重要原料之一。五味子藥渣的產(chǎn)生主要源于五味子提取物、制劑、配方顆粒以及五味子其他資源性產(chǎn)品的制造過程。這些廢棄物主要被丟棄和作為垃圾焚燒，不僅對環(huán)境造成了嚴重的污染，也浪費了珍貴的資源。而現(xiàn)代有關(guān)五味子制劑的提取工藝多以水提醇沉工藝為主，所以五味子固態(tài)廢棄物中尚富含木脂素類、蛋白質(zhì)類、糖類以及纖維類等可利用物質(zhì)，具有很高的利用價值，值得進一步開發(fā)利用和資源化。因此，對五味子藥渣進行資源再利用和系統(tǒng)回收利用具有重要的生態(tài)意義和經(jīng)濟意義。
目前，已有研究學(xué)者發(fā)現(xiàn)可以用中藥渣培養(yǎng)食用菌、用中藥渣發(fā)酵制肥料、用中藥渣固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料以及用中藥渣造紙和制備絮凝劑等。通過各種生物技術(shù)將這些中藥廢棄物資源進行處理、變廢為寶已逐漸成為一條可行的路徑，其中使用中藥渣固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)飼料，不但可以緩解環(huán)境污染，也能減少資源浪費，尤其是藥渣中活性功效成分，使動物飼料具備防病、抗病和提高動物免疫力的作用，成為新一代動物保健品飼料。
發(fā)酵工藝過程往往涉及到微生物細胞的生長繁殖、產(chǎn)物的合成以及與之緊密關(guān)聯(lián)的各種酶所催化的生化反應(yīng)，微生物的形態(tài)和生理習(xí)性、種群行為都受發(fā)酵工藝條件的影響。對與發(fā)酵相關(guān)的生物學(xué)因素以及培養(yǎng)條件進行優(yōu)化，可以找到一條最優(yōu)的發(fā)酵工藝，同時也節(jié)省了發(fā)酵成本。
利用微生物將中藥渣發(fā)酵成為動物營養(yǎng)飼料，以及魚、蝦等海洋生物的飼料添加劑，是目前流行的資源化利用途徑。因五味子藥渣中含有大量蛋白、多糖等可利用營養(yǎng)成分，而發(fā)酵之后藥渣中蛋白、多糖含量大幅提高，因此可以使用五味子藥渣固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)肉雞、仔豬等動物的蛋白飼料，還可以把五味子藥渣發(fā)酵培養(yǎng)物添加到魚、海蝦等海洋生物的營養(yǎng)飼料中，不但可以緩解環(huán)境污染，也能減少資源浪費，動物飼料、海洋生物飼料也具備防病、抗病和提高動物免疫力的作用，這對環(huán)境保護和五味子殘渣的循環(huán)利用有著重大現(xiàn)實意義。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
發(fā)明目的：本發(fā)明的目的是針對目前五味子藥渣這種可再生利用資源處理存在的浪費和環(huán)境污染問題，提供一種利用五味子藥渣聯(lián)產(chǎn)高純度五味子木脂素和固態(tài)發(fā)酵五味子殘渣獲得高蛋白飼料的方法，該方法能有效的實現(xiàn)五味子藥渣的循環(huán)利用和系統(tǒng)利用，節(jié)約資源，減少環(huán)境污染。所提取回收的高純度五味子木脂素可以做為提高免疫力、保肝作用的保健食品或飼料添加劑的原料；醇提取后的五味子殘渣通過酵母菌固態(tài)發(fā)酵法發(fā)酵制備的高蛋白含量的蛋白飼料，適口性好，并有利于動物防病、提高機體免疫力的作用。
本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的：
一種利用五味子藥渣聯(lián)產(chǎn)木脂素和蛋白飼料的方法，先從五味子藥渣中回收獲得高純度五味子木脂素，其殘渣再通過酵母菌固態(tài)發(fā)酵聯(lián)產(chǎn)高蛋白飼料。能有效的系統(tǒng)利用廢棄五味子藥渣，減少環(huán)境污染，實現(xiàn)資源化最大利用和循環(huán)利用。
作為優(yōu)選方案，以上用五味子藥渣聯(lián)產(chǎn)木脂素和蛋白飼料的方法包括以下步驟：
(1)將采用水提取后的五味子藥渣干燥、粉碎為顆粒；
(2)將五味子藥渣顆粒放入提取罐中，加入藥渣重量的8～16倍的60％～90％體積濃度的乙醇，回流提取1～3次，每次60～120min，獲得乙醇提取液；
(3)將乙醇提取液進行濃縮，濃縮至重量體積比3：1～1：1，獲得濃縮液；
(4)將濃縮液上大孔吸附樹脂柱，采用的乙醇進行洗脫，收集洗脫液，濃縮獲得五味子總木脂素提取物；
(5)將經(jīng)步驟(2)乙醇提取木脂素后的五味子殘渣進行干燥，備用；
(6)培養(yǎng)基制備：制備的培養(yǎng)基包括平板培養(yǎng)基、豆汁培養(yǎng)基、固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基；
(7)固態(tài)發(fā)酵：將熱帶假絲酵母菌(Candida tropicalis)在平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)12～36h，待酵母菌長出后，用接種環(huán)接種酵母菌于配好的土豆汁培養(yǎng)基中制成菌體懸液，然后置于搖床中8～12h后，取一定量的菌體混懸液于另一土豆汁培養(yǎng)基中，置于搖床中12～20h；然后按8％～12％的接種量將酵母菌接種于固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，然后在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3d～7d，發(fā)酵完成；
(8)將發(fā)酵完成的物料進行干燥，即得固態(tài)蛋白飼料。
作為優(yōu)選方案，以上提供的利用五味子藥渣制備中高純度木脂素的優(yōu)選方法為：將五味子藥渣顆粒(40目)放入提取罐中，加入藥渣重量的10倍的90％乙醇，回流提取2次，每次120min，獲得乙醇提取液；
乙醇提取液進行減壓濃縮，濃縮至重量體積比2：1，獲得濃縮液；
將濃縮液上D101大孔吸附樹脂柱，采用95％的乙醇進行洗脫3倍柱體積的洗脫液，獲得純度為40.8％的五味子總木脂素提取物，其中五味子甲素5.8％、五味子乙素11.9％、五味子丙素3.6％、五味子醇甲12.8％、五味子醇乙6.7％。
作為優(yōu)選方案，本發(fā)明所述經(jīng)醇提取后的五味子殘渣再通過酵母菌固態(tài)發(fā)酵聯(lián)產(chǎn)高蛋白飼料的方法，
培養(yǎng)基的制備：包括平板培養(yǎng)基、豆汁培養(yǎng)基、固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基。
a.平板培養(yǎng)基：在1.0L的純水中加入10g葡萄糖，10g蛋白胨，5g酵母提取物以及20g的瓊脂。在121℃高壓滅菌鍋中滅菌30min，用于熱帶假絲酵母菌的平板培養(yǎng)。
b.豆汁培養(yǎng)基：取200mg土豆，加入1.8mL左右的純水，加熱煮沸制成1.0L的土豆汁，放入20.0g葡萄糖，分裝在250mL的敞口錐形瓶中，于120℃高壓滅菌鍋中滅菌30min，用于熱帶假絲酵母菌的液體培養(yǎng)。
c.固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基：原料按重量份計包括：五味子殘渣80～100份、硫酸銨3～10份、磷酸二氫鉀0.5～1份、硫酸鎂0.3～1.5份、氯化鈉0.5～1.5份、氯化鈣0.1～0.5份、麥麩10～50份，料液質(zhì)量比為1:1～1:3。于120℃高壓滅菌鍋中滅菌30min，冷卻后加入10～30倍殘渣的纖維素酶(紫外滅菌)攪拌。
作為更加優(yōu)選方案，本發(fā)明提供的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基制備方法為：五味子殘渣100g，過40目篩，然后依次加入4g硫酸銨，0.5g磷酸二氫鉀，0.5g硫酸鎂，0.5g氯化鈉、0.1g氯化鈣和20g麥麩，料液質(zhì)量比為1:2。于120℃高壓滅菌鍋中滅菌30min，冷卻后加入3000mg纖維素酶(紫外滅菌)攪拌。
作為優(yōu)選方案，本發(fā)明提供的固態(tài)發(fā)酵工藝方法為：將熱帶假絲酵母菌在平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)24h，待酵母菌長出后，用接種環(huán)接種2環(huán)酵母菌于配好的50mL土豆汁培養(yǎng)基中制成菌體懸液，置于搖床中10h后，取2mL的菌體混懸液于另一50mL土豆汁培養(yǎng)基中，置于搖床中16h。于固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中加入接種量為10％的酵母菌，然后在溫度為30℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5d。
有益效果：本發(fā)明具有以下優(yōu)點：
本發(fā)明提供的一種利用五味子藥渣聯(lián)產(chǎn)木脂素和蛋白飼料的方法，先從五味子藥渣中回收獲得高純度五味子木脂素，其殘渣再通過酵母菌固態(tài)發(fā)酵聯(lián)產(chǎn)高蛋白飼料。本發(fā)明能有效的系統(tǒng)利用廢棄五味子藥渣，減少環(huán)境污染，實現(xiàn)資源化最大利用和循環(huán)利用。所述的高純度木脂素是一類重要的天然有效活性成分，具有顯著降低血清中ALT、AST水平，減緩肝細胞變性壞死，明顯減輕由缺血再灌注導(dǎo)致的心肌損傷，以及鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、保護腦神經(jīng)等多種功效?？捎糜诩甭愿窝撞∪?、缺血性心臟疾病病人的保健、防治作用。所述聯(lián)產(chǎn)的一種五味子蛋白飼料具有蛋白質(zhì)含量高，脂肪含量高，營養(yǎng)豐富，適口性好的優(yōu)點，并有利于動物防病、提高機體免疫力的作用。
具體實施方式
下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實施例所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結(jié)果僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會限制權(quán)利要求書中所詳細描述的本發(fā)明。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。實施例1
一種利用五味子藥渣聯(lián)產(chǎn)木脂素和蛋白飼料的方法，所述的方法通過以下步驟實現(xiàn)：
(1)將五味子藥渣用粉碎機粉碎并過篩至20目。
(2)將五味子藥渣顆粒放入提取罐中，加入藥渣重量的8倍的70％乙醇，回流提取3次，每次90min，獲得乙醇提取液；乙醇提取液進行減壓濃縮，濃縮至重量體積比1：1，獲得濃縮液；將濃縮液上AB-8大孔吸附樹脂柱，采用80％乙醇進行洗脫5倍柱體積的洗脫液，獲得純度為36.6％的五味子總木脂素提取物，其中五味子甲素5.6％、五味子乙素10.1％、五味子丙素3.4％、五味子醇甲11.3％、五味子醇乙6.2％。
(3)本發(fā)明所述經(jīng)醇提取后的五味子殘渣再通過酵母菌固態(tài)發(fā)酵聯(lián)產(chǎn)高蛋白飼料的方法，包括以下步驟：
①培養(yǎng)基的制備：包括平板培養(yǎng)基、豆汁培養(yǎng)基、固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基。
a.平板培養(yǎng)基：在1.0L的純水中加入10g葡萄糖，10g蛋白胨，5g酵母提取物以及20g的瓊脂。在121℃高壓滅菌鍋中滅菌30min，用于熱帶假絲酵母菌的平板培養(yǎng)。
b.豆汁培養(yǎng)基：取200mg土豆，加入1.8mL左右的純水，加熱煮沸制成1.0L的土豆汁，放入20.0g葡萄糖，分裝在250mL的敞口錐形瓶中，于120℃高壓滅菌鍋中滅菌30min，用于熱帶假絲酵母菌的液體培養(yǎng)。
c.固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基：五味子殘渣80g，過40目篩，然后依次加入4g硫酸銨，0.5g磷酸二氫鉀，0.5g硫酸鎂，0.5g氯化鈉、0.1g氯化鈣和20g麥麩，料液質(zhì)量比為1:3。于120℃高壓滅菌鍋中滅菌30min，冷卻后加入2500mg纖維素酶(紫外滅菌)攪拌。
②固態(tài)發(fā)酵過程：將熱帶假絲酵母菌在平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)20h，待酵母菌長出后，用接種環(huán)接種2環(huán)酵母菌于配好的50mL土豆汁培養(yǎng)基中制成菌體懸液，置于搖床中8h后，取2mL的菌體混懸液于另一50mL土豆汁培養(yǎng)基中，置于搖床中12h。于固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中加入接種量為8％的酵母菌，然后在溫度為30℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3d。
③將發(fā)酵完成的物料進行干燥，即得固態(tài)蛋白飼料。其中總蛋白含量20.4％、還原糖含量9.2％、淀粉含量8.2％。
實施例2
一種利用五味子藥渣聯(lián)產(chǎn)木脂素和蛋白飼料的方法，其特征是，所述的方法通過以下步驟實現(xiàn)：
(1)將五味子藥渣用粉碎機粉碎并過篩至40目。
(2)將五味子藥渣顆粒放入提取罐中，加入藥渣重量的10倍的90％乙醇，回流提取2次，每次120min，獲得乙醇提取液；乙醇提取液進行減壓濃縮，濃縮至重量體積比2：1，獲得濃縮液；將濃縮液上D101大孔吸附樹脂柱，采用95％的乙醇進行洗脫3倍柱體積的洗脫液，獲得純度位40.8％的五味子總木脂素提取物，其中五味子甲素5.8％、五味子乙素11.9％、五味子丙素3.6％、五味子醇甲12.8％、五味子醇乙6.7％。
(3)本發(fā)明所述經(jīng)醇提取后的五味子殘渣再通過酵母菌固態(tài)發(fā)酵聯(lián)產(chǎn)高蛋白飼料的方法，包括以下步驟：
①培養(yǎng)基的制備：包括平板培養(yǎng)基、豆汁培養(yǎng)基、固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基。
a.平板培養(yǎng)基：在1.0L的純水中加入10g葡萄糖，10g蛋白胨，5g酵母提取物以及20g的瓊脂。在121℃高壓滅菌鍋中滅菌30min，用于熱帶假絲酵母菌的平板培養(yǎng)。
b.豆汁培養(yǎng)基：取200mg土豆，加入1.8mL左右的純水，加熱煮沸制成1.0L的土豆汁，放入20.0g葡萄糖，分裝在250mL的敞口錐形瓶中，于120℃高壓滅菌鍋中滅菌30min，用于熱帶假絲酵母菌的液體培養(yǎng)。
c.固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基：五味子殘渣100g，過40目篩，然后依次加入4g硫酸銨，0.5g磷酸二氫鉀，0.5g硫酸鎂，0.5g氯化鈉、0.1g氯化鈣和20g麥麩，料液質(zhì)量比為1:2。于120℃高壓滅菌鍋中滅菌30min，冷卻后加入3000mg纖維素酶(紫外滅菌)攪拌。
②固態(tài)發(fā)酵過程：將熱帶假絲酵母菌在平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)24h，待酵母菌長出后，用接種環(huán)接種2環(huán)酵母菌于配好的50mL土豆汁培養(yǎng)基中制成菌體懸液，置于搖床中10h后，取2mL的菌體混懸液于另一50mL土豆汁培養(yǎng)基中，置于搖床中16h。于固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中加入接種量為10％的酵母菌，然后在溫度為30℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5d。
③將發(fā)酵完成的物料進行干燥，即得固態(tài)蛋白飼料。其中總蛋白含量25.2％、還原糖含量11.3％、淀粉含量10.6％。
實施例3
一種利用五味子藥渣聯(lián)產(chǎn)木脂素和蛋白飼料的方法，其特征是，所述的方法通過以下步驟實現(xiàn)：
(1)將五味子藥渣用粉碎機粉碎并過篩至40目。
(2)將五味子藥渣顆粒放入提取罐中，加入藥渣重量的12倍的80％乙醇，回流提取2次，每次100min，獲得乙醇提取液；乙醇提取液進行減壓濃縮，濃縮至重量體積比3：1，獲得濃縮液；將濃縮液上D101大孔吸附樹脂柱，采用70％乙醇進行洗脫3倍柱體積的洗脫液，獲得純度為39.7％的五味子總木脂素提取物，其中五味子甲素5.6％、五味子乙素11.1％、五味子丙素4.4％、五味子醇甲12.7％、五味子醇乙5.9％。
(3)本發(fā)明所述經(jīng)醇提取后的五味子殘渣再通過酵母菌固態(tài)發(fā)酵聯(lián)產(chǎn)高蛋白飼料的方法，包括以下步驟：
①培養(yǎng)基的制備：包括平板培養(yǎng)基、豆汁培養(yǎng)基、固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基。
a.平板培養(yǎng)基：在1.0L的純水中加入10g葡萄糖，10g蛋白胨，5g酵母提取物以及20g的瓊脂。在121℃高壓滅菌鍋中滅菌30min，用于熱帶假絲酵母菌的平板培養(yǎng)。
b.豆汁培養(yǎng)基：取200mg土豆，加入1.8mL左右的純水，加熱煮沸制成1.0L的土豆汁，放入20.0g葡萄糖，分裝在250mL的敞口錐形瓶中，于120℃高壓滅菌鍋中滅菌30min，用于熱帶假絲酵母菌的液體培養(yǎng)。
c.固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基：五味子殘渣80g，過40目篩，然后依次加入4g硫酸銨，0.5g磷酸二氫鉀，0.5g硫酸鎂，0.5g氯化鈉、0.1g氯化鈣和20g麥麩，料液質(zhì)量比為1:3。于120℃高壓滅菌鍋中滅菌30min，冷卻后加入2500mg纖維素酶(紫外滅菌)攪拌。
②固態(tài)發(fā)酵過程：將熱帶假絲酵母菌在平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)36h，待酵母菌長出后，用接種環(huán)接種2環(huán)酵母菌于配好的50mL土豆汁培養(yǎng)基中制成菌體懸液，置于搖床中12h后，取2mL的菌體混懸液于另一50mL土豆汁培養(yǎng)基中，置于搖床中10h。于固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中加入接種量為9％的酵母菌，然后在溫度為30℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5d。
③將發(fā)酵完成的物料進行干燥，即得固態(tài)蛋白飼料。其中總蛋白含量21.3％、還原糖含量12.1％、淀粉含量9.3％。
實施例4防肝損傷藥理實驗
一、實驗材料與藥物
1.藥物和試劑
AST，ALT，MDA，SOD試劑盒及考馬斯亮藍蛋白試劑盒均購于南京建成生物工程研究所；四氯化碳(CCl4，分析純,上海凌峰化學(xué)試劑有限公司)，使用時用花生油配制成0.1％的花生油溶液；聯(lián)苯雙酯片(江蘇鵬鷂藥業(yè)有限公司)，臨用時碾成細粉加生理鹽水制成混懸液。
2.實驗動物
清潔級雄性ICR小鼠，體重18～22g，由浙江省實驗動物中心提供，合格證號SCXK(浙)2008-0033。
3.實驗儀器
酶聯(lián)免疫儀(美國Bio-Tek公司)；UV-2000型紫外分光光度計(北京萊柏泰科儀器有限公司)；BT125型電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；KQ-250E型超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)；Anke GL-16GII型離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠)。
4.受試藥物及處理方法
分別取實施例1～3制備得到的五味子總木脂素，加水稀釋制成所需濃度；陽性藥為聯(lián)苯雙酯，給藥前以蒸餾水溶解配制成所需濃度。
二、實驗方法
1.對CCl4致小鼠急性肝損傷的影響
取60只小鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按體重隨機分成6組，每組10只，分別為正常對照組，CCl4至肝損傷模型組，實施例1,2和3制備得到的五味子總木脂素組(0.25g/kg/d)，聯(lián)苯雙酯組(120mg/kg/d)。對照組及模型組給予同量的生理鹽水，給藥組連續(xù)灌胃10d，于末次給藥后1h，除正常組ip 0.9％NaCl 10mL/kg外，其余各組均ip 0.1％CCl4花生油溶液10mL/kg。16h后，所有小鼠采用眼眶后靜脈叢采血，分離血清，測定血清中ALT及AST的活性。取血后處死小鼠，隨即取部分肝臟，用生理鹽水制備成10％的肝勻漿，按照試劑盒說明測定MDA含量及SOD活力。
2.統(tǒng)計學(xué)處理
所有實驗數(shù)據(jù)均采用SPSS11.5統(tǒng)計處理軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，結(jié)果以表示，組間比較采用方差分析。
三、實驗結(jié)果
1.五味子總木脂素對CCl4致小鼠急性肝損傷的影響
CCl4肝損傷模型組與正常組比較，小鼠血清ALT、AST和肝組織MDA水平明顯升高(P<0.01)，SOD活性明顯降低(P<0.01)；實施例1,2和3制備得到的五味子總木脂素組、聯(lián)苯雙酯組與模型組比較均不同程度地使肝損傷小鼠血清ALT、AST降低(P<0.01)；五味子總木脂素組和聯(lián)苯雙酯組與模型組比較均不同程度地使肝損傷小鼠肝組織MDA水平降低(P<0.05)，SOD水平升高(P<0.05)。具體實驗結(jié)果見表1。
表1各組對CCl4致急性肝損傷小鼠血清ALT、AST及肝臟SOD、MDA的影響(mean±SD，n＝10)
注：與模型組比較，##P<0.01,#P<0.05。
實施例5心肌損傷藥理實驗
一、實驗材料與藥物
1.藥物和試劑
MDA，SOD，NO試劑盒均購于南京建成生物工程研究所。
2.實驗動物
健康雄性SD大鼠，體重222～240g，由浙江省實驗動物中心提供，合格證號SCXK(浙)2008-0033。
3.受試藥物及處理方法
分別取實施例1～3制備得到的五味子總木脂素，稀釋制成所需濃度；陽性藥為聯(lián)苯雙酯，給藥前溶解配制成所需濃度。
二、實驗方法
1.心肌缺血再灌注損傷模型的建立及取材
各組動物術(shù)前禁食24小時,20％烏拉坦(1g.kg-1)腹腔麻醉，氣管插管，連呼吸機，機械通氣；描記肢導(dǎo)心電圖；胸骨左緣2mm處開胸，剪開心包，暴露冠脈，在左前降支起點后0.5cm穿一絲線，墊一硅膠管，血壓穩(wěn)定時結(jié)扎，關(guān)閉胸腔。結(jié)扎45分鐘后經(jīng)尾靜脈注入治療藥物及溶液，治療藥物組按10g.Kg-1(按人和動物體重比例計算,為臨床劑量的5倍)，用生理鹽水稀釋到3.0ml，再灌注前靜脈注入，其余兩組以等量生理鹽水注入。然后打開胸腔，剪去結(jié)扎線，假手術(shù)組置線后不予結(jié)扎，冠脈斷流及再通與否依心電圖ST段抬高及恢復(fù)為準。再灌注1小時后，取部分左室標本處理后做SOD、MDA、NO指標的檢測。
2.對缺血再灌注損傷大鼠T波變化的幅度和心律失常發(fā)生率的影響
記錄大鼠結(jié)扎前5分鐘和結(jié)扎后1,10,20分鐘以及再灌后1,5,30分鐘,3小時的心電圖(LII)，計算T波抬高和降低的mV數(shù)，以其絕對值按1mv＝20mm對T波變化的幅度進行比較。同時對心律失?？偘l(fā)生率包括心動過速、心室纖維性顫動和T波改變超過1mm的發(fā)生率進行統(tǒng)計。
3.對心肌缺血再灌注組織中MDA,SOD和NO生成的影響
大鼠心臟制備心肌勻漿上清液，然后按試劑盒操作說明，分別測定心肌中MDA,SOD和NO含量。
三、實驗結(jié)果
1.對缺血再灌注損傷大鼠心電圖T波變化的幅度和心律失常的發(fā)生率的影響,大鼠冠狀動脈左前降支結(jié)扎45分鐘后再灌1小時，可以引起大鼠的心肌缺血再灌注損傷，表現(xiàn)心電圖的T波發(fā)生改變，心律失常發(fā)生率明顯升高；五味子總木脂素可顯著抑制再灌后大鼠心電圖T波變化的幅度和心律失常的發(fā)生率。
2.對大鼠缺血再灌注心肌組織中MDA，SOD和NO生成的影響
模型組MDA及NO含量明顯高于假手術(shù)組，SOD的活力顯著降低，與假手術(shù)組比較有顯著差異(P<0.01)。與模型組比較，實施例1～3制備得到的五味子總木脂素組能減少心肌中MDA的生成，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；能明顯提高再灌注組織中SOD的活力，差異非常顯著(P<0.01)。能抑制NO的生成(P<0.05)，見表2。
表2大鼠心肌組織MDA含量SOD活性及NO含量的變化
注：與模型組比較，##P<0.01,#P<0.05。
實施例6
按本發(fā)明實施例1,2和3方法制備得到的固態(tài)蛋白飼料，添加到飼料中分別喂養(yǎng)仔豬各50頭，3組仔豬每月增重分別為14公斤、15公斤和15公斤，未出現(xiàn)病態(tài)。本發(fā)明制備得到的五味子蛋白飼料具有蛋白質(zhì)含量高，脂肪含量高，營養(yǎng)豐富，適口性好的優(yōu)點，并有利于動物防病、提高機體免疫力的作用。
本發(fā)明提供的一種利用五味子藥渣聯(lián)產(chǎn)木脂素和蛋白飼料的方法，所獲得的得高純度木脂素具有顯著降低保肝、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、保護腦神經(jīng)等多種功效?？捎糜诩甭愿窝撞∪恕⑷毖孕呐K疾病病人的保健、防治作用。所獲得的五味子蛋白飼料具有蛋白質(zhì)含量高，營養(yǎng)豐富，適口性好，并有利于動物防病、提高機體免疫力的作用。同時五味子藥渣的系統(tǒng)利用和循環(huán)利用有利于節(jié)約資源、降低成本、保護環(huán)境。