本發(fā)明整體而言是關(guān)于疫苗制劑，更具體而言是關(guān)于具有組合佐劑的疫苗制劑。

背景技術(shù)：

許多疫苗均以佐劑為其關(guān)鍵成分。絕大多數(shù)現(xiàn)有疫苗均僅含有單一佐劑。由于其本身限制，任一種佐劑均無法誘發(fā)各種疫苗所需的全部保護(hù)免疫反應(yīng)。因此需要探求在疫苗制劑中包含多種佐劑的技術(shù)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

一方面，本發(fā)明是關(guān)于一種疫苗組合物，其包含：

(a)治療有效量的免疫原性蛋白質(zhì)，其至少包含病原體的抗原；

(b)基于皂苷的佐劑(saponin-baseadjuvant)，其選自以下項目所構(gòu)成群組：gpi-0100、quila及qs-21；以及

(c)toll樣受體激動劑佐劑[toll-likereceptor(tlr)agonistadjuvant]，其選自以下項目所構(gòu)成群組：單磷酰脂質(zhì)a(monophosphoryllipida,mpl)及cpg1826。

在本發(fā)明另一實施方式中，該組合物進(jìn)一步包含至少一種添加劑，該添加劑選自以下項目所構(gòu)成群組：甘露醇(mannitol)、蔗糖(sucrose)、海藻糖(trehalose)、組氨酸(histindine)、甘氨酸(glycine)、精氨酸(arginine)、山梨糖醇(sorbitol)、聚山梨醇酯80(polysorbate80)、葡萄糖(glucose)、乳糖(lactose)、麥芽糖(maltose)、麥芽糊精(maltodextrins)、檸檬酸鹽(citrate)、三羥甲基氨基甲烷(tris)及磷酸鈉(sodiumphosphate)。

在本發(fā)明另一實施方式中，該免疫原性蛋白質(zhì)是融合蛋白，其包含：

(a)抗原呈遞細(xì)胞(apc)結(jié)合域[antigen-presentingcell(apc)-bindingdomain]或cd91受體結(jié)合域(cd91receptor-bindingdomain)，位于該融合蛋白的n端；

(b)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域(proteintransductiondomain)，位于該apc結(jié)合域或該cd91受體結(jié)合域的c端，該蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域選自以下項目所構(gòu)成群組：

(i)融合多肽包含：

(1)t細(xì)胞致敏信號轉(zhuǎn)導(dǎo)肽(tcellsensitizingsignal-transducingpeptide)，在長度上具有28-53個氨基酸殘基，包含seqidno:31的氨基酸序列，其中xaa⁸為i或l；xaa¹⁰為v、f或a，xaa¹¹為m或l，xaa¹⁷為l或i，位于該融合多肽的n端；

(2)轉(zhuǎn)位肽(translocationpeptide)，在長度上具有34-112個氨基酸殘基，包含與seqidno:3、20、4、或41具有至少90％同一性的氨基酸序列；以及

(3)連接子(linker)，包含seqidno:15，鏈接該t細(xì)胞致敏信號轉(zhuǎn)導(dǎo)肽與該轉(zhuǎn)位肽；

(ii)t細(xì)胞致敏信號轉(zhuǎn)導(dǎo)肽，在長度上具有28-53個氨基酸殘基，包含seqidno:31的氨基酸序列，其中xaa⁸為i或l；xaa¹⁰為v、f或a，xaa¹¹為m或l，xaa¹⁷為l或i；以及

(iii)轉(zhuǎn)位肽，在長度上具有34-61個氨基酸殘基，包含與seqidno:3、20或41具有至少90％同一性的氨基酸序列；以及

(c)病原體的抗原，位于該蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的c端；

其中如果該蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域為(biii)的轉(zhuǎn)位肽，則該apc結(jié)合域或該cd91受體結(jié)合域不含綠膿桿菌外毒素a(pseudomonasexotoxina,pe)結(jié)合域ia的氨基酸序列。

在本發(fā)明另一實施方式中，該蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含seqidno:30的序列。

在本發(fā)明另一實施方式中，該apc結(jié)合域或該cd91受體結(jié)合域是多肽，其包含與選自以下項目所構(gòu)成群組的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列：seqidno:5、9、6、7及8。

在本發(fā)明另一實施方式中，該apc結(jié)合域或該cd91受體結(jié)合域包含與選自以下項目所構(gòu)成群組的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列：seqidno:5、9、6、7及8。

在本發(fā)明另一實施方式中，該apc結(jié)合域或該cd91受體結(jié)合域是多肽，其包含選自以下項目所構(gòu)成群組的序列的氨基酸序列：seqidno:5、9、6、7及8。

可選地，該apc結(jié)合域選自以下項目所構(gòu)成群組：受體相關(guān)蛋白質(zhì)-1(receptor-associatedprotein-1,rap1)結(jié)構(gòu)域iii、α-2-巨球蛋白受體相關(guān)蛋白質(zhì)(alpha-2-macroglobulinreceptor-associatedprotein,a2m)、hiv-tat，及熱休克蛋白(heatshockproteins,hsps)，以及綠膿桿菌外毒素a(pe)結(jié)合域ia。

在本發(fā)明另一實施方式中，該融合蛋白不含綠膿桿菌外毒素a(pe)結(jié)合域ia的氨基酸序列。

在本發(fā)明另一實施方式中，該融合蛋白進(jìn)一步包含內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列，位于該融合蛋白的c端。

在本發(fā)明另一實施方式中，該內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(er)滯留序列包含lys-asp-glu-leu(seqidno:14)的氨基酸序列。er滯留序列可包含選自以下項目所構(gòu)成群組的序列：seqidno:14、16-19?？蛇x地，該er滯留序列可包含選自以下項目所構(gòu)成群組的序列：seqidno:16-19。

在本發(fā)明另一實施方式中，如果該抗原包含10個或更多表位(epitopes)，則該融合蛋白的c端不具有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列。

在本發(fā)明另一實施方式中，該蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域為(bi)的融合多肽。

在本發(fā)明另一實施方式中，該蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域為(bii)的t細(xì)胞致敏信號轉(zhuǎn)導(dǎo)肽。

在本發(fā)明另一實施方式中，該融合蛋白進(jìn)一步包含額外連接子，其位于該蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域與該抗原之間，該額外連接子包含seqidno:15。

在本發(fā)明另一實施方式中，該蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域為(biii)的轉(zhuǎn)位肽。

在本發(fā)明另一實施方式中，該融合蛋白進(jìn)一步包含額外連接子，其位于該apc結(jié)合域或該cd91受體結(jié)合域與該轉(zhuǎn)位肽之間，該額外連接子包含seqidno:15。

在本發(fā)明另一實施方式中，該蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域包含seqidno:30的序列。

在本發(fā)明另一實施方式中，該t細(xì)胞致敏信號轉(zhuǎn)導(dǎo)肽包含與seqidno:1或2具有至少90％同一性的氨基酸序列。

在本發(fā)明另一實施方式中，該t細(xì)胞致敏信號轉(zhuǎn)導(dǎo)肽包含選自以下項目所構(gòu)成群組的氨基酸序列：seqidno:1及2。

在本發(fā)明另一實施方式中，該轉(zhuǎn)位肽包含選自以下項目所構(gòu)成群組的氨基酸序列：seqidno:3、20、4及41。

在本發(fā)明另一實施方式中，該轉(zhuǎn)位肽在長度上具有34-61個氨基酸殘基。

在本發(fā)明另一實施方式中，上述融合蛋白的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域具有以下特性：(i)該t細(xì)胞致敏信號轉(zhuǎn)導(dǎo)肽包含seqidno:1或2的氨基酸序列；以及(ii)該轉(zhuǎn)位肽包含與seqidno:3具有至少95％同一性的氨基酸序列。

該t細(xì)胞致敏信號轉(zhuǎn)導(dǎo)肽展現(xiàn)誘發(fā)抗體的特征，該抗體可識別并結(jié)合t細(xì)胞上cd28受體的氨基酸序列k¹x²e³x⁴x⁵y⁶p⁷p⁸p⁹y¹⁰(seqidno:32)，其中x²為i或l；x⁴為v、f或a，且x⁵為m或l。

抗原呈遞細(xì)胞(apc)可選自以下項目所構(gòu)成群組：樹突細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、b細(xì)胞及單核血球。

在本發(fā)明一個實施方式中，apc的細(xì)胞膜包含cd91受體。

在本發(fā)明另一實施方式中，該病原體為至少一種選自以下項目所構(gòu)成群組：人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus,hpv)、豬生殖與呼吸綜合癥病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,prrsv)、人類免疫缺陷病毒(humanimmuno-deficientvirus,hiv-1)、流感病毒(influenzavirus)、登革熱病毒(denguevirus)、丙型肝炎病毒(hepatitiscvirus,hcv)、乙型肝炎病毒(hepatitisbvirus,hbv)及豬圓環(huán)病毒2(porcinecircovirus2,pcv2)。

在本發(fā)明一個實施方式中，該病原體抗原選自以下項目所構(gòu)成群組：人乳頭瘤病毒(hpv)e7蛋白質(zhì)、乙型肝炎病毒(hbv)hbx蛋白質(zhì)、丙型肝炎病毒(hcv)核心抗原、流感病毒m2抗原以及腫瘤相關(guān)抗原。

在本發(fā)明一個實施方式中，該hpve7蛋白質(zhì)包含與seqidno:21具有至少90％同一性的氨基酸序列。

在本發(fā)明另一實施方式中，該腫瘤相關(guān)抗原選自以下項目所構(gòu)成群組：ssx2、mage-a3、ny-eso-1、ilrp、wt12-281、rnf43(2-116+696-783)及cea-ne3。

在本發(fā)明另一實施方式中，該抗原為hpve7抗原，包含與選自以下項目所構(gòu)成群組的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列：seqidno:21及22。在本發(fā)明一個優(yōu)選實施方式中，該抗原為hpve7抗原，其包含seqidno:21的氨基酸序列。

在本發(fā)明另一實施方式中，該融合蛋白進(jìn)一步包含內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列，其位于該融合蛋白的c端。

在本發(fā)明一個實施方式中，該免疫原性蛋白質(zhì)為融合蛋白，其包含seqidno:54的序列。例如，該免疫原性蛋白質(zhì)可為融合蛋白pe407-e7-k3(seqidno:54)。

在本發(fā)明另一實施方式中，該免疫原性蛋白質(zhì)為融合蛋白，其包含seqidno:55的序列。例如，該免疫原性蛋白質(zhì)可為融合蛋白rap1-cd28convpet-e7-k3(seqidno:55)。

在本發(fā)明另一實施方式中，該免疫原性蛋白質(zhì)為融合蛋白，其包含：

(a)抗原呈遞細(xì)胞(apc)結(jié)合域或cd91受體結(jié)合域，位于該融合蛋白的n端；

(b)轉(zhuǎn)位肽，在長度上具有34-112個氨基酸殘基，包含與seqidno:3、4、20或41具有至少90％同一性的氨基酸序列，位于該apc結(jié)合域或該cd91受體結(jié)合域的c端；

(c)病原體的抗原；

(d)核輸出信號(nuclearexportsignal,nes)，包含seqidno:44的氨基酸序列；以及

(e)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列，位于該融合蛋白的c端；

其中該核輸出信號位于該抗原與該內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列之間，或該轉(zhuǎn)位肽與該抗原之間。

在本發(fā)明另一實施方式中，該免疫原性蛋白質(zhì)為融合蛋白，其包含：

(a)抗原呈遞細(xì)胞(apc)結(jié)合域或cd91受體結(jié)合域，位于該融合蛋白的n端；

(b)轉(zhuǎn)位肽，在長度上具有34-61個氨基酸殘基，包含與seqidno:3、20或41具有至少90％同一性的氨基酸序列，位于該apc結(jié)合域或該cd91受體結(jié)合域的c端；

(c)病原體的抗原；

(d)核輸出信號，包含seqidno:44的氨基酸序列；以及

(e)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列，位于該融合蛋白的c端；

其中該核輸出信號位于該抗原與該內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列之間，或該轉(zhuǎn)位肽與該抗原之間。

在本發(fā)明另一實施方式中，該seqidno:44的c端氨基酸為丙氨酸(alanine)。

在本發(fā)明另一實施方式中，該核輸出信號包含seqidno:45的氨基酸序列。

在本發(fā)明另一實施方式中，該內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列包含seqidno:14的氨基酸序列。

在本發(fā)明另一實施方式中，該核輸出信號及該er滯留序列形成融合肽，其為包含與seqidno:43具有至少90％同一性的氨基酸序列。

在本發(fā)明另一實施方式中，該轉(zhuǎn)位肽在長度上具有34-61個氨基酸殘基。

在本發(fā)明另一實施方式中，該轉(zhuǎn)位肽在長度上具有34-46個氨基酸殘基。

在本發(fā)明另一實施方式中，該apc結(jié)合域或該cd91受體結(jié)合域不含綠膿桿菌外毒素a(pe)結(jié)合域ia的氨基酸序列。

在本發(fā)明另一實施方式中，該apc結(jié)合域或該cd91受體結(jié)合域包含seqidno:5的氨基酸序列。

在本發(fā)明另一實施方式中，該apc結(jié)合域或該cd91受體結(jié)合域的氨基酸序列為seqidno:9。

在本發(fā)明另一實施方式中，該抗原是來自病原體的兩個或多個抗原肽的融合抗原。

在本發(fā)明另一實施方式中，該er滯留序列的長度超過4個氨基酸殘基。

在本發(fā)明另一實施方式中，該轉(zhuǎn)位肽包含與seqidno:3、4、20或41具有至少95％同一性的氨基酸序列。

在本發(fā)明另一實施方式中，該apc結(jié)合域或該cd91受體結(jié)合域展現(xiàn)能夠識別并結(jié)合抗原呈遞細(xì)胞(apc)上受體的特性，該抗原呈遞細(xì)胞(apc)選自以下項目所構(gòu)成群組：樹突細(xì)胞、單核血球、b細(xì)胞及淋巴細(xì)胞。

在本發(fā)明另一實施方式中，該病原體選自以下項目所構(gòu)成群組：豬生殖與呼吸綜合癥病毒(prrsv)、豬圓環(huán)病毒2(pcv2)、口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus,fmdv)、豬瘟病毒(classicalswinefevervirus,csfv)、新城雞瘟病毒(newcastlediseasevirus,ndv)、傳染性胃腸炎病毒(transmissiblegastroenteritisvirus,tgev)、豬流行性下痢病毒(porcineepidemicdiarrheavirus,pedv)、流行性感冒病毒、假性狂犬病病毒(pseudorabiesvirus)、微小病毒(parvovirus)、豬水皰病病毒(swinevesiculardiseasevirus,svdv)、痘病毒(poxvirus)、輪狀病毒(rotavirus)、肺炎霉?jié){菌(mycoplasmapneumonia)、皰疹病毒(herpesvirus)、傳染性支氣管炎病毒(infectiousbronchitisvirus)及傳染性華氏囊病病毒(infectiousbursaldiseasevirus)。

該疫苗組合物可采腸胃外給藥劑型，例如皮下或肌內(nèi)注射。

另一方面，本發(fā)明關(guān)于上述組合物在制造一種藥劑中的用途，所述藥劑用以在有此需要的患者中誘發(fā)病原體抗原特異性t細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)。

可選地，另一方面，本發(fā)明關(guān)于上述組合物在有此需要的患者中誘發(fā)病原體抗原特異性t細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)的用途。

進(jìn)一步可選地，本發(fā)明關(guān)于一種在有此需要的患者中誘發(fā)經(jīng)強化的抗原特異性t細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)的方法，其包括對有此需要的患者中施用治療有效量的上述組合物，由此在有此需要的患者中誘發(fā)經(jīng)強化的抗原特異性t細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)。

上述及其他方面將通過以下優(yōu)選實施例的描述參照以下附圖描述，根據(jù)其所作的變化及修改均應(yīng)屬于本發(fā)明新穎概念的精神及范疇。

附圖闡明本發(fā)明的一種或多種實施例，并配合書面敘述共同說明本發(fā)明的原理。各附圖中以相同的附圖標(biāo)記指代實施例中相同或相似的組件。

附圖說明

圖1為構(gòu)建體示意圖。

圖2的表格顯示各種疫苗組合物誘發(fā)的細(xì)胞介導(dǎo)免疫原性。

圖3的表格顯示各種疫苗組合物誘發(fā)的體液免疫原性。

圖4顯示免疫接種程序。

圖5a的圖表顯示基于皂苷的佐劑gpi-0100與tlr激動劑佐劑對刺激免疫原性蛋白質(zhì)pe407-e7-k3所誘發(fā)t細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)上的相互作用。

圖5b為將圖5a的數(shù)據(jù)以gpi-0100(50微克/劑)為基準(zhǔn)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化后的圖表。

圖6的圖表顯示圖5a動物組的抗體效價。

圖7a的圖表顯示基于皂苷的佐劑qs-21與tlr激動劑佐劑對刺激免疫原性蛋白質(zhì)pe407-e7-k3所誘發(fā)t細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)的相互作用。

圖7b為將圖7a的數(shù)據(jù)以qs-21(10微克/劑)為基準(zhǔn)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化后的圖表。

圖7c為將圖7a的數(shù)據(jù)以gpi-0100(100微克/劑)為基準(zhǔn)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化后的圖表。

圖8的圖表顯示圖7a動物組的抗體效價。

圖9的圖表顯示各種疫苗制劑誘發(fā)的t細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)。

圖10a的表格顯示多種包含免疫原性蛋白質(zhì)及一種或兩種佐劑的疫苗制劑。

圖10b為腫瘤小鼠模型的免疫接種程序。

圖11的圖表顯示經(jīng)pe407-e7-k3結(jié)合各種佐劑(n＝4)接種的動物組腫瘤大小曲線。安慰劑組施用pbs(亦即無佐劑及pe407-e7-k3)。

具體實施方式

本發(fā)明將于以下實例詳細(xì)描述，此處所舉實例僅為說明之用，本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)可由此想到多種修改與變化。在此詳述本發(fā)明的各種實施例。在附圖中，類似的組件標(biāo)以類似的編號。在本說明書及所附的權(quán)利要求書中，除非前后文另有指明，否則“一”、“一種”及“該”的意義包括復(fù)數(shù)。同樣，本說明書及所附的權(quán)利要求書中，除非前后文另有指明，否則“在…內(nèi)”的意義包括“在…內(nèi)”及“在…上”。此外，說明書中所用的標(biāo)題或副標(biāo)題僅為方便讀者參照，不應(yīng)影響本發(fā)明的范圍。此說明書中所用的其他術(shù)語將于下文明確體定義。

定義

本說明書中所用術(shù)語普遍具有其在此技術(shù)中針對本發(fā)明相關(guān)用途及各術(shù)語所用上下文所應(yīng)理解的通常意義。以下就某些用于描述本發(fā)明的術(shù)語進(jìn)行說明，以利于讀者了解本發(fā)明的描述。為求便利，某些術(shù)語可能帶有強調(diào)性標(biāo)示，例如使用斜體字和/或引號。強調(diào)性標(biāo)示的使用并不影響術(shù)語的范圍及意義；術(shù)語的范圍及意義在相同的上下文中不論有無強調(diào)性標(biāo)示均為相同。應(yīng)理解相同的事物可通過多種方式表述。因此，在此所討論的一個或多個術(shù)語可能使用替代性用語及同義詞，術(shù)語在此闡述或討論與否并非表示該術(shù)語有無特殊重要性。在此提供特定術(shù)語的同義詞。對于一種或多種同義詞的使用并非排除其他同義詞的使用。本說明書中各處使用的實例，包括在此所述的術(shù)語范例，均僅屬說明用途，不應(yīng)對本發(fā)明或任何例示的術(shù)語的范圍及含義構(gòu)成限制。同理，本發(fā)明并不受限于本說明書中所提出的各種實施例。

除非另有定義，否則在此使用的所有技術(shù)及科學(xué)術(shù)語均具有本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域人員通常理解的含義。若有抵觸，應(yīng)以本文件及其所提供的定義為準(zhǔn)。

美國專利申請公開案第20140154285a1號及第20140154280a1號中所述將例如融合蛋白等免疫原性蛋白質(zhì)使用作為免疫原性增強劑，用以誘發(fā)抗原特異性t細(xì)胞反應(yīng)，各案整體在此通過引用并入本文。

toll樣受體(tlr)4配體，特別是激動劑(agonist)，例如脂質(zhì)a衍生物，具體而言是單磷酰脂質(zhì)a(monophosphoryllipida)，或更具體而言是3脫酰單磷酰脂質(zhì)a(3deacylatedmonophoshoryllipida,3d-mpl)。glaxosmithklinebiologicalsn.a.所銷售的3d-mpl以mpl為名，而在本說明書中將其稱為mpl或3d-mpl。

美國專利第5,057,540號、kensil,c.r.發(fā)表的“皂苷作為疫苗佐劑(saponinsasvaccineadjuvants)”(critrevtherdrugcarriersyst,1996,12(1-2):1-55)以及ep0362279b1，均對quila[取自南美皂樹(quillajasaponariamolina)的樹皮]及其分離部分有所描述。

qs-21為取自南美皂樹樹皮的天然皂苷。qs-21為quila的hplc純化無毒分離部分，在美國專利第5,057,540號中有所描述。

術(shù)語“抗原呈遞細(xì)胞(apc)或輔助細(xì)胞(accessorycell)”意指能夠展現(xiàn)與其表面上主要組織相容性復(fù)合體(mhc)復(fù)合的外來抗原的細(xì)胞。t細(xì)胞可利用其細(xì)胞受體(tcr)識別該復(fù)合體。該細(xì)胞處理抗原并將其呈遞給t細(xì)胞。專門的抗原呈遞細(xì)胞的主要種類包括：樹突細(xì)胞(dc)、巨噬細(xì)胞、單核血球及特定b細(xì)胞。

術(shù)語“抗原呈遞細(xì)胞(apc)結(jié)合域”意指可結(jié)合至抗原呈遞細(xì)胞(apc)的結(jié)構(gòu)域。apc結(jié)合域可為一種多肽，其包含與選自以下項目所構(gòu)成群組的序列具有至少90％同一性的氨基酸序列：seqidno:5、6、7、8及9。apc結(jié)合域為能夠識別并結(jié)合apc上受體的配體。

分化簇91(clusterofdifferentiation91,cd91)為可形成細(xì)胞膜中的受體，并參與受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用(receptor-mediatedendocytosis)的蛋白質(zhì)。

術(shù)語“蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域”意指多肽或融合多肽，其可致敏t細(xì)胞，并從而強化抗原特異性t細(xì)胞反應(yīng)，和/或?qū)⒖乖瓕?dǎo)引或指向(亦即靶向)抗原呈遞的第一型主要組織相容性復(fù)合體(mhc-i)路徑(亦即胞毒性t細(xì)胞路徑)。

術(shù)語“致敏t細(xì)胞”普遍是指cd8+及cd4+t細(xì)胞受到致敏作用影響，且因此cd8+(ctl)及cd4+t細(xì)胞對于抗原激發(fā)的反應(yīng)受到強化?？乖禺愋约?xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)的測量方式將對抗原反應(yīng)時所產(chǎn)生的抗原特異性誘導(dǎo)的γ-干擾素(γ-interferon)量化。例如，如果沒有致敏信號(亦即無蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域)，抗原獨自作用可能僅產(chǎn)生微弱或甚至完全無法產(chǎn)生細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)，亦即，cd8+及cd4+t細(xì)胞僅產(chǎn)生少量或甚至完全不產(chǎn)生抗原特異性的γ-干擾素，而如果配合致敏信號(蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域)，抗原便可產(chǎn)生經(jīng)強化的細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)。因此，致敏信號(蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域)的功能在于提升cd4+及cd8+t細(xì)胞在宿主體內(nèi)的敏感度，而使宿主在其后受抗原刺激時，因cd4+及cd8+t細(xì)胞事先已經(jīng)致敏化，故而該抗原可誘導(dǎo)經(jīng)強化的抗原特異性t細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)。

蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域可為“融合多肽”，其中融合多肽包含t細(xì)胞致敏信號轉(zhuǎn)導(dǎo)肽、連接子以及轉(zhuǎn)位肽。例如，該融合多肽可為“cd28convpet”多肽。

術(shù)語“cd28conv”意指cd28保留區(qū)域，其為“t細(xì)胞致敏信號轉(zhuǎn)導(dǎo)肽”。此為誘發(fā)cd28激動劑抗體(cd28agonistantibody)的表位。

術(shù)語“pet”或“petcore”意指長度上包含34個氨基酸殘基的pe轉(zhuǎn)位結(jié)構(gòu)域核心。

“cd28conv”與“pet”之間有連接子。融合多肽“cd28convpet”的方向或排列十分重要，因為“cd28conv”(或t細(xì)胞致敏信號轉(zhuǎn)導(dǎo)肽)必須位于pet(或轉(zhuǎn)位肽)的上游，亦即，pet必須位于“cd28conv”的c端才能強化t細(xì)胞反應(yīng)。特別地，“cd28convpet”對cd28conv產(chǎn)生的igg效價(稱為cd28特定激動劑抗體)遠(yuǎn)高于反向融合肽petcd28conv。cd28特定激動劑抗體對cd4+及cd8+t細(xì)胞均能產(chǎn)生致敏作用。正確定向的融合多肽cd28convpet在cd28conv與pet區(qū)域之間有一個連接子(r¹x²r³x⁴k⁵r⁶)。此連接子包含抗原呈遞細(xì)胞(apc)特定蛋白酶(組織蛋白酶l)切位點lys-arg(kr)。因此，融合蛋白rap1-cd28convpet-抗原-k3可被消化為兩個片段：rap1-cd28conv及pet-抗原-k3。rap1-cd28conv片段可進(jìn)一步在溶酶體中消化，且cd28conv的表位經(jīng)由mhcii路徑呈遞至apc細(xì)胞表面，進(jìn)而誘發(fā)產(chǎn)生cd28激動劑抗體的體液免疫反應(yīng)。因此，cd28激動劑抗體是由b細(xì)胞產(chǎn)生。該cd28激動劑抗體可結(jié)合至t細(xì)胞表面的cd28，并預(yù)先活化t細(xì)胞(cd4+及cd8+t細(xì)胞)。

“t細(xì)胞致敏信號轉(zhuǎn)導(dǎo)肽”在長度上具有28-53個氨基酸殘基且包含與seqidno:31具有至少90％同一性的氨基酸序列，其中x⁸為i或l；x¹⁰為v、f或a，x¹¹為m或l，x¹⁷為l或i。

t細(xì)胞致敏信號轉(zhuǎn)導(dǎo)肽包含主要區(qū)k¹x²e³x⁴x⁵y⁶p⁷p⁸p⁹y¹⁰(seqidno:32)，其中x²為i或l；x⁴為v、f或a，x⁵為m或l。

美國專利第20140154285a1號提及特定用于小鼠的t細(xì)胞致敏信號轉(zhuǎn)導(dǎo)肽(tdiyfckiefmypppyldneksngtiih；seqidno:31，其中x⁸為i，x¹⁰為f，x¹¹為m，x¹⁷為l)。

pe轉(zhuǎn)位肽可包含與seqidno:3、4、20或41具有至少90％同一性的氨基酸序列。例如，pe轉(zhuǎn)位肽的氨基酸序列可為全長pe(seqidno:10)的a.a.280-a.a.313(seqidno:3)、a.a.268-a.a.313(seqidno:20)、a.a.253-a.a.313(seqidno:41)或a.a.253-a.a.364(seqidno:4)。亦即，pe轉(zhuǎn)位肽的氨基酸序列可包含pe結(jié)構(gòu)域ii(a.a.253至a.a.364；seqidno:4)的任何部位，只要其包含a.a.280-a.a.313(seqidno:3)必要片段即可。

抗原可為致病蛋白、多肽或肽，其可引起因病原體造成的疾病，或能夠在受病原體或腫瘤相關(guān)抗原(tumor-associatedantigen,taa)感染的宿主體內(nèi)誘發(fā)免疫反應(yīng)，所述腫瘤相關(guān)抗原(taa)為明確表達(dá)于腫瘤細(xì)胞中的多肽。抗原可選自病原體或癌細(xì)胞，包括但不限于，人乳頭瘤病毒(hpv)、豬生殖與呼吸綜合癥病毒(prrsv)、人類免疫缺陷病毒-1(hiv-1)、流感病毒、登革熱病毒、丙型肝炎病毒(hcv)、乙型肝炎病毒(hbv)、豬圓環(huán)病毒2(pcv2)、豬瘟病毒(csfv)、口蹄疫病毒(fmdv)、新城雞瘟病毒(ndv)、傳染性胃腸炎病毒(tgev)、豬流行性下痢病毒(pedv)、流行性感冒病毒、假性狂犬病病毒、微小病毒、豬水皰病病毒(svdv)、痘病毒、輪狀病毒、肺炎霉?jié){菌、皰疹病毒、傳染性支氣管炎病毒、傳染性華氏囊病病毒、非小細(xì)胞肺癌(non-smallcelllungcancer)、乳腺癌(breastcarcinoma)、黑色素瘤(melanoma)、淋巴瘤(lymphomas)、大腸癌(coloncarcinoma)、肝細(xì)胞癌(hepatocellularcarcinoma)及其任何組合。例如，hpve7蛋白質(zhì)(e7)、hcv核心蛋白(hcv核心)、hbvx蛋白質(zhì)(hbx)為疫苗開發(fā)所選用的抗原?？乖蔀閮煞N或更多種選自一種或多種致病蛋白的抗原所融合而成的融合抗原。例如，prrsvorf6與orf5片段的融合抗原，或prrsv與pcv2病原體的抗原蛋白融合。

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列的作用在于協(xié)助抗原自胞吞區(qū)室(endocytoticcompartment)轉(zhuǎn)位進(jìn)入er，并使其保留在內(nèi)腔中。其包含序列l(wèi)ysaspgluleu(kdel)或rdel。er滯留序列可包含kkdlrdelkdel(seqidno:16)、kkdelrdelkdel(seqidno:17)、kkdelrvelkdel(seqidno:18)或kdelkdelkdel(seqidno:19)的序列，或是主要由上述序列所構(gòu)成，或是由上述序列所構(gòu)成。

分子量39kda的受體相關(guān)蛋白質(zhì)(rap1)為er常駐蛋白(erresidentprotein)及l(fā)dl受體相關(guān)蛋白質(zhì)的分子伴侶(molecularchaperone)。其對于cd91(kd～3nm)的結(jié)合親和力極高，且由三個具有類似功能的區(qū)域組成。

pe407(seqidno.40)在前案專利(us7,335,361b2)中稱為pe(δiii)。

核輸出信號(nes)意指蛋白質(zhì)中4個疏水性殘基的短氨基酸序列，將其標(biāo)定以利用核運輸從細(xì)胞核經(jīng)核孔復(fù)合體輸出至細(xì)胞質(zhì)。輸出蛋白(exprotins)識別并結(jié)合nes。最常見的疏水性殘基間隔為l¹x²x³k⁴l⁵x⁶x⁷l⁸x⁹l¹⁰x¹¹(seqidno.44)，其中“l(fā)”為亮氨酸，“k”為賴氨酸，且“x^2,3,6,7,9,11”為任何自然產(chǎn)生的氨基酸。例如，人造nes可包含序列l(wèi)euglnlyslysleuglugluleugluleuala(lqkkleelela；seqidno:45)。

術(shù)語“nesk”意指nes與er滯留信號的融合肽(亦即，nes融合至er滯留信號)。其為人工肽，負(fù)責(zé)處理核輸出信號(nes)和er滯留序列功能。因此，其可從細(xì)胞核將抗原經(jīng)核孔復(fù)合體輸出至細(xì)胞質(zhì)，并協(xié)助抗原從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)位至er并將抗原保留于er的內(nèi)腔內(nèi)。例如，nesk的氨基酸序列可為lqkkleelelakdel(seqidno:43)。

術(shù)語“患者”意指人類或非人類動物。

術(shù)語“治療”意指對于具有癌癥或感染的患者，或有罹此疾病癥狀或傾向的人，施予有效量的融合蛋白，以期治愈、緩和、解除、醫(yī)治、改善或預(yù)防該疾病、其癥狀或其傾向。該病患可由醫(yī)療專業(yè)人士依據(jù)任何適當(dāng)診斷方法的結(jié)果而判定。

術(shù)語“有效量”意指在受治療對象身上產(chǎn)生療效所需活性化合物的用量。如本領(lǐng)域的技術(shù)人員所知，有效劑量依據(jù)給藥路徑、賦形劑使用及是否與其他治療方式同時使用而異。

縮寫：cd28，分化簇28。

實施例

以下依據(jù)本發(fā)明實施例提供示范性儀器、裝置、方法及其相關(guān)結(jié)果，但不構(gòu)成對于本發(fā)明范圍的限制。應(yīng)知曉實例中為便于閱讀，可能加注標(biāo)題或副標(biāo)，其不應(yīng)限制本發(fā)明的范圍。此外，下文提出特定并公開特定理論，然而其不論對錯，只要本發(fā)明的實施不受影響，不論任何特定理論或行動方案均不應(yīng)限制本發(fā)明的范圍。

免疫原性蛋白質(zhì)制備：

免疫原性蛋白質(zhì)在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)。其可能僅為抗原，或為抗原及er滯留信號(k3)融合到綠膿桿菌外毒素a結(jié)構(gòu)域i及ii(亦即pe407)的c端，以產(chǎn)生pe407-(抗原)-k3融合蛋白，或為抗原及er滯留訊號融合到rap1-cd28convpet融合蛋白的c端，以產(chǎn)生rap1-cd28convpet-(抗原)-k3融合蛋白(圖1)。在此所用抗原為e7抗原，且以下實驗使用產(chǎn)生的兩種融合蛋白pe407-e7-k3(seqidno:54)及rap1-cd28convpet-e7-k3(seqidno:55)。

不同免疫原性組合物的免疫原性分析：

e7免疫原性蛋白質(zhì)(包括e7抗原、pe407-e7-k3融合蛋白或rap1-cd28convpet-e7-k3融合蛋白)被搭配以不同的佐劑，如鋁鹽(alum)、gpi-0100或qs-21，并于小鼠身上測試其免疫原性。所有免疫原性蛋白質(zhì)與鋁鹽、gpi-0100或qs-21結(jié)合時均可能誘發(fā)中度至強度e7抗原特定體液免疫反應(yīng)。e7抗原或pe407-e7-k3融合蛋白結(jié)合gpi-0100或qs-21時，可誘發(fā)輕度至重度的e7抗原特定細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)。另一方面，rap1-cd28convpet-e7-k3融合蛋白如果結(jié)合鋁鹽、gpi-0100及qs-21時，可誘發(fā)中度至強度細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)。上述結(jié)果顯示gpi-0100及qs-21為較能刺激體液免疫反應(yīng)及細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)兩者的佐劑。此外，pe407-e7-k3或rap1-cd28convpet-e7-k3融合蛋白僅有在與基于皂苷的佐劑(如gpi-0100或qs-21)結(jié)合時，才能誘發(fā)比e7抗原更強的反應(yīng)。

t細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)的動物研究

從樂斯科生物科技股份有限公司購入5周齡雌性小鼠c57bl/6。每籠5只給予12小時晝/12小時夜照明周期。供其自由取用食物飲水，豢養(yǎng)一周并于實驗前維持標(biāo)準(zhǔn)條件。用于實驗的免疫原性蛋白質(zhì)為生控基因疫苗股份有限公司所生產(chǎn)，經(jīng)凍干的pe407-e7-k3(seqidno:54)，每瓶含0.6毫克蛋白質(zhì)。佐劑如下：gpi-0100(hawaiibiotech)；mpl(cat.no.699800p，avanti)；polyi：c(cat.no.tlrl-pic-5，invivogen)；r837(cat.no.tlrl-imqs，invivogen)；r848(cat.no.tlrl-r848，invivogen)；cpg1826(cat.no.tlrl-1826，invivogen)；以及實驗室級qs-21(thevax)。

免疫接種程序示于圖4。小鼠于3周期間每周一次以表1及圖5a-b、7a-c所示的疫苗制劑接種。所有小鼠于最后一次免疫接種完的7天后處死，收取脾臟。將脾細(xì)胞分離出來。

佐劑制劑

評估表1所列佐劑制劑以調(diào)查免疫原性組合物的最佳免疫反應(yīng)。

表1

cd8⁺細(xì)胞的胞內(nèi)細(xì)胞激素染色。

在6孔平底組織培養(yǎng)盤裝入脾細(xì)胞(2*10⁷)并于37℃培養(yǎng)兩小時，加入或不加入1微克/毫升hpv16-e7肽(其為全長pe的第49-57個氨基酸)及布雷非德菌素a(brefeldina)以及莫能菌素(monensin)，以增加細(xì)胞中細(xì)胞激素的累積，提升對于細(xì)胞激素產(chǎn)生細(xì)胞(cytokine-producingcell)的可檢測性。經(jīng)培養(yǎng)后，以300×g離心5分鐘將細(xì)胞移入試管。棄置上清液，大致震蕩混合孔盤內(nèi)容物，然后以每一樣本0.2毫克的熒光素異硫氰酸酯共軛(fluoresceinisothiocyanate-conjugated)抗小鼠cd8(復(fù)制體53-6.7，ebioscience)及抗小鼠cd3(復(fù)制體17a2，biolegend)進(jìn)行表面標(biāo)記物染色30分鐘。在黑暗中于冰上以1毫升熒光流式細(xì)胞分選儀(facs)緩沖液(1％fbs于pbs中)及ic固定溶液(ebioscience)清洗細(xì)胞30分鐘，之后再次懸浮于1毫升細(xì)胞透化清洗緩沖液(biolegend)。將細(xì)胞以permwash(bdpharmingen)清洗兩次，而后以0.2毫克/樣本的比例，在黑暗中于冰上以在細(xì)胞透化清洗緩沖液中稀釋的異藻藍(lán)蛋白共軛(allophycocyanin-conjugated)抗小鼠ifn-γ(復(fù)制體xmg1.2，ebioscience)對胞內(nèi)ifn-γ進(jìn)行染色30分鐘。將細(xì)胞再次懸浮于1毫升facs緩沖液中，然后使用facscalibur流式細(xì)胞儀加以分析。

在免疫原性檢驗中，通過測量脾細(xì)胞中的cd3+/cd8+/ifn+t細(xì)胞數(shù)量評估各種疫苗制劑所誘發(fā)的抗原特異性t細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)。圖5a顯示以各種疫苗制劑治療的動物組每2*10⁷脾細(xì)胞中的e7特定cd8+/ifn+雙陽性cd3+t細(xì)胞百分比。將各組數(shù)據(jù)與以pe407-e7-k3與50微克/劑的gpi-0100組合治療的動物組的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較(圖5b)。數(shù)據(jù)顯示gpi-0100結(jié)合mpl或cpg1826可將免疫原性蛋白質(zhì)誘發(fā)的t細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)強化2至3倍。

圖7a顯示以不同疫苗制劑接種的動物組每2*10⁷脾細(xì)胞中的e7特定cd8+/ifn+雙陽性cd3+t細(xì)胞百分比。將各組數(shù)據(jù)與以pe407-e7-k3與qs-21(10微克/劑；圖7b)或gpi-0100(100微克/劑；圖7c)組合治療的動物組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。數(shù)據(jù)顯示，相較于僅含單一佐劑qs-21(10微克/劑)的疫苗組合物，qs-21結(jié)合mpl(10微克/劑)或cpg1826(10微克/劑)可將免疫原性蛋白質(zhì)pe407-e7-k3誘發(fā)的t細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)強化3至4倍(圖7b)。此外，由包含組合佐劑qs-21及mpl或qs-21及cpg1826的疫苗制劑于動物組所誘發(fā)的t細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)為僅包含單一佐劑gpi-0100(100微克/劑)(圖7c)的疫苗制劑的8倍。

體液免疫性的研究

以如上所述的方式對動物進(jìn)行接種并收集血清樣本。將每一動物于各收集時點的血清樣本在阻斷緩沖液中稀釋一萬倍。使用elisa法測定hpv16e7特定igg程度(涂覆e7pet32a1微克/孔)。

圖6顯示疫苗組合物使用單一tlr激動劑佐劑時，僅誘發(fā)少量抗體，但如果以tlr激動劑佐劑配合基于皂苷的佐劑gpi-0100(50微克/劑)使用，則在第三次免疫接種后于小鼠身上誘發(fā)大量抗體。

圖8顯示疫苗組合物使用單一tlr激動劑佐劑時，僅誘發(fā)少量抗體，但如果以tlr激動劑佐劑配合基于皂苷的佐劑qs-21(10微克/劑)使用，包含qs-21+mpl或qs-21+cpg1826兩種佐劑的制劑在對動物組進(jìn)行第二次免疫接種后，在動物體內(nèi)產(chǎn)生大量抗體(數(shù)據(jù)未示出)。qs-21結(jié)合所有tlr激動劑佐劑均于第三次免疫接種后產(chǎn)生大量抗體。數(shù)據(jù)顯示qs-21或gpi-0100與polyi:c的組合并沒有強化qs-21或gpi-0100的效果，因此gpi-100或qs-21可能是經(jīng)由tlr3相關(guān)機制運作。咪唑喹啉佐劑(r837、r848)的作用路徑與cpg1826相同，但卻展現(xiàn)完全不同的t細(xì)胞介導(dǎo)免疫性。至于咪唑喹啉是否能夠經(jīng)由k細(xì)胞和/或巨噬細(xì)胞作用則仍有待調(diào)查。

不同平臺融合蛋白所誘發(fā)的t細(xì)胞介導(dǎo)免疫原性反應(yīng)

進(jìn)一步利用上述發(fā)現(xiàn)的最佳佐劑組合檢驗不同免疫原性蛋白質(zhì)pe407-e7-k3及rap1-cd28convpet-e7-k3所誘發(fā)的t細(xì)胞介導(dǎo)免疫原性反應(yīng)，并執(zhí)行與圖5a所示相同的免疫原性測定。從樂斯科生物科技股份有限公司購入5周齡小鼠57bl/6。免疫接種程序與圖4所示相同。表2顯示用于此研究的疫苗制劑。

圖9顯示融合蛋白rap1-cd28convpet-e7-k3誘發(fā)的t細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)較融合蛋白pe407-e7-k3強。然而，不論使用何種佐劑組合，兩種平臺所誘發(fā)的t細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)的模式相似。

表2

tc-1腫瘤動物模型的研究

疫苗：100微克的pe407-e7-k3與不同佐劑或其組合配制成劑。疫苗制劑如圖10a所示。以tc-1細(xì)胞株(5*10⁴細(xì)胞/小鼠，皮下注射)刺激7天之后，每7天對小鼠接種疫苗一次，共計三次(圖10b)。結(jié)果顯示相較于單一佐劑gpi-0100(100微克/劑)，組合佐劑qs-21(10微克/劑)與mpl(10微克/劑)、qs-21(10微克/劑)與cpg1826(10微克/劑)、gpi-0100(50微克/劑)與mpl(50微克/劑)，或gpi-0100(50微克/劑)與cpg1826(50微克/劑)更能夠有效抑制tc-1腫瘤細(xì)胞的生長(圖11)。

表3顯示各種融合蛋白成分的序列標(biāo)識符(seqidno.)。

表4顯示在動物體內(nèi)測試t細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)效果的融合蛋白及抗原序列。

表3

*：粗體字代表人工核輸出信號的氨基酸序列；帶下劃線的字代表內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留信號的氨基酸序列。

**：vp1-3a肽(seqidno:50)是由vp1的a.a.127-a.a.176與3a的a.a.21-a.a.35所組成的融合抗原；亦即fmdvvp1肽(seqidno:48)與fmdv3a肽(seqidno:49)的融合蛋白。

***：fhn肽(seqidno:53)是由融合蛋白的a.a.65-a.a.82與血球凝集素神經(jīng)氨酸酶的a.a.101-a.a.111所組成的融合抗原；亦即，ndvf肽(seqidno:51)與ndvhn肽(seqidno:52)的融合蛋白。

表4

上述實施例及實例的選擇及描述用以說明本發(fā)明的原理及其實際應(yīng)用，以利于本領(lǐng)域的技術(shù)人員運用本發(fā)明及各種實施例，并就實際使用需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)母鞣N修改。熟悉本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)的人員應(yīng)可輕易想到不脫離本發(fā)明精神及范疇的替代實施例。本說明書中引述及討論的所有參考文獻(xiàn)均以其整體于此合并參照，如同其各自于此提及而并入本說明書的程度。

序列表

<110>生控基因疫苗股份有限公司

<120>包含免疫原性蛋白質(zhì)及組合佐劑并用以誘發(fā)抗原特異性t細(xì)胞反應(yīng)的疫苗組合物

<130>10021-004pct

<150>us/62121406

<151>2015-02-26

<160>55

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>28

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>hcd28核心

<400>1

thraspiletyrphecyslysilegluvalmettyrproproprotyr

151015

leuaspasnglulysserasnglythrileilehis

2025

<210>2

<211>53

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>hcd28最大

<400>2

asncysaspglylysleuglyasngluservalthrphetyrleugln

151015

asnleutyrvalasnglnthraspiletyrphecyslysilegluval

202530

mettyrproproprotyrleuaspasnglulysserasnglythrile

354045

ilehisvallysgly

50

<210>3

<211>34

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>pet核心

<400>3

glytrpgluglnleugluglncysglytyrprovalglnargleuval

151015

alaleutyrleualaalaargleusertrpasnglnvalaspglnval

202530

ilearg

<210>4

<211>112

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>pet最大

<400>4

glyglyserleualaalaleuthralahisglnalacyshisleupro

151015

leugluthrphethrarghisargglnproargglytrpgluglnleu

202530

gluglncysglytyrprovalglnargleuvalalaleutyrleuala

354045

alaargleusertrpasnglnvalaspglnvalileargasnalaleu

505560

alaserproglyserglyglyaspleuglyglualaileargglugln

65707580

progluglnalaargleualaleuthrleualaalaalagluserglu

859095

argphevalargglnglythrglyasnaspglualaglyalaalaasn

100105110

<210>5

<211>104

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>rap1最小

<400>5

alaglupheglugluproargvalileaspleutrpaspleualagln

151015

seralaasnleuthrasplysgluleuglualapheargglugluleu

202530

lyshispheglualalysileglulyshisasnhistyrglnlysgln

354045

leugluilealahisglulysleuarghisalagluservalglyasp

505560

glygluargvalserargserargglulyshisalaleuleuglugly

65707580

argthrlysgluleuglytyrthrvallyslyshisleuglnaspleu

859095

serglyargileserargalaarg

100

<210>6

<211>153

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>a2m最小

<400>6

valtyrleuglnthrserleulystyrasnileleuproglulysglu

151015

glupheprophealaleuglyvalglnthrleuproglnthrcysasp

202530

gluprolysalahisthrserpheglnileserleuservalsertyr

354045

thrglyserargseralaserasnmetalailevalaspvallysmet

505560

valserglypheileproleulysprothrvallysmetleugluarg

65707580

serasnhisvalserargthrgluvalserserasnhisvalleuile

859095

tyrleuasplysvalserasnglnthrleuserleuphephethrval

100105110

leuglnaspvalprovalargaspleulysproalailevallysval

115120125

tyrasptyrtyrgluthraspgluphealailealaglutyrasnala

130135140

procysserlysaspleuglyasnala

145150

<210>7

<211>24

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>hiv-tat最小

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argglyaspprothrglyglnglugluserlysglulysvalglulys

151015

gluthrvalvalaspprovalthr

20

<210>8

<211>641

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>hsps最小

<400>8

metalalysalaalaalaileglyileaspleuglythrthrtyrser

151015

cysvalglyvalpheglnhisglylysvalgluileilealaasnasp

202530

glnglyasnargthrthrprosertyrvalalaphethraspthrglu

354045

argleuileglyaspalaalalysasnglnvalalaleuasnprogln

505560

asnthrvalpheaspalalysargleuileglyarglyspheglyasp

65707580

provalvalglnseraspmetlyshistrppropheglnvalileasn

859095

aspglyasplysprolysvalglnvalsertyrlysglygluthrlys

100105110

alaphetyrproglugluilesersermetvalleuthrlysmetlys

115120125

gluilealaglualatyrleuglytyrprovalthrasnalavalile

130135140

thrvalproalatyrpheasnaspserglnargglnalathrlysasp

145150155160

alaglyvalilealaglyleuasnvalleuargileileasnglupro

165170175

thralaalaalailealatyrglyleuaspargthrglylysglyglu

180185190

argasnvalleuilepheaspleuglyglyglythrpheaspvalser

195200205

ileleuthrileaspaspglyilephegluvallysalathralagly

210215220

aspthrhisleuglyglygluasppheaspasnargleuvalasnhis

225230235240

phevalglugluphelysarglyshislyslysaspileserglnasn

245250255

lysargalavalargargleuargthralacysgluargalalysarg

260265270

thrleuserserserthrglnalaserleugluileaspserleuphe

275280285

gluglyileaspphetyrthrserilethrargalaargphegluglu

290295300

leucysseraspleupheargserthrleugluprovalglulysala

305310315320

leuargaspalalysleuasplysalaglnilehisaspleuvalleu

325330335

valglyglyserthrargileprolysvalglnlysleuleuglnasp

340345350

phepheasnglyargaspleuasnlysserileasnproaspgluala

355360365

valalatyrglyalaalavalglnalaalaileleumetglyasplys

370375380

sergluasnvalglnaspleuleuleuleuaspvalalaproleuser

385390395400

leuglyleugluthralaglyglyvalmetthralaleuilelysarg

405410415

asnserthrileprothrlysglnthrglnilephethrthrtyrser

420425430

aspasnglnproglyvalleuileglnvaltyrgluglygluargala

435440445

metthrlysaspasnasnleuleuglyargphegluleuserglyile

450455460

proproalaproargglyvalproglnilegluvalthrpheaspile

465470475480

aspalaasnglyileleuasnvalthralathrasplysserthrgly

485490495

lysalaasnlysilethrilethrasnasplysglyargleuserlys

500505510

glugluilegluargmetvalglnglualaglulystyrlysalaglu

515520525

aspgluvalglnarggluargvalseralalysasnalaleugluser

530535540

tyralapheasnmetlysseralavalgluaspgluglyleulysgly

545550555560

lysileserglualaasplyslyslysvalleuasplyscysglnglu

565570575

valilesertrpleuaspalaasnthrleualaglulysaspgluphe

580585590

gluhislysarglysgluleugluglnvalcysasnproileileser

595600605

glyleutyrglnglyalaglyglyproglyproglyglypheglyala

610615620

glnglyprolysglyglyserglyserglyprothrileglugluval

625630635640

asp

<210>9

<211>252

<212>prt

<213>綠膿桿菌

<400>9

alagluglualapheaspleutrpasnglucysalalysalacysval

151015

leuaspleulysaspglyvalargserserargmetservalasppro

202530

alailealaaspthrasnglyglnglyvalleuhistyrsermetval

354045

leugluglyglyasnaspalaleulysleualaileaspasnalaleu

505560

serilethrseraspglyleuthrileargleugluglyglyvalglu

65707580

proasnlysprovalargtyrsertyrthrargglnalaargglyser

859095

trpserleuasntrpleuvalproileglyhisglulysproserasn

100105110

ilelysvalpheilehisgluleuasnalaglyasnglnleuserhis

115120125

metserproiletyrthrileglumetglyaspgluleuleualalys

130135140

leualaargaspalathrphephevalargalahisgluserasnglu

145150155160

metglnprothrleualaileserhisalaglyvalservalvalmet

165170175

alaglnthrglnproargargglulysargtrpserglutrpalaser

180185190

glylysvalleucysleuleuaspproleuaspglyvaltyrasntyr

195200205

leualaglnglnargcysasnleuaspaspthrtrpgluglylysile

210215220

tyrargvalleualaglyasnproalalyshisaspleuaspilelys

225230235240

prothrvalileserhisargleuhispheproglu

245250

<210>10

<211>613

<212>prt

<213>綠膿桿菌

<400>10

alagluglualapheaspleutrpasnglucysalalysalacysval

151015

leuaspleulysaspglyvalargserserargmetservalasppro

202530

alailealaaspthrasnglyglnglyvalleuhistyrsermetval

354045

leugluglyglyasnaspalaleulysleualaileaspasnalaleu

505560

serilethrseraspglyleuthrileargleugluglyglyvalglu

65707580

proasnlysprovalargtyrsertyrthrargglnalaargglyser

859095

trpserleuasntrpleuvalproileglyhisglulysproserasn

100105110

ilelysvalpheilehisgluleuasnalaglyasnglnleuserhis

115120125

metserproiletyrthrileglumetglyaspgluleuleualalys

130135140

leualaargaspalathrphephevalargalahisgluserasnglu

145150155160

metglnprothrleualaileserhisalaglyvalservalvalmet

165170175

alaglnthrglnproargargglulysargtrpserglutrpalaser

180185190

glylysvalleucysleuleuaspproleuaspglyvaltyrasntyr

195200205

leualaglnglnargcysasnleuaspaspthrtrpgluglylysile

210215220

tyrargvalleualaglyasnproalalyshisaspleuaspilelys

225230235240

prothrvalileserhisargleuhispheprogluglyglyserleu

245250255

alaalaleuthralahisglnalacyshisleuproleugluthrphe

260265270

thrarghisargglnproargglytrpgluglnleugluglncysgly

275280285

tyrprovalglnargleuvalalaleutyrleualaalaargleuser

290295300

trpasnglnvalaspglnvalileargasnalaleualaserprogly

305310315320

serglyglyaspleuglyglualailearggluglnprogluglnala

325330335

argleualaleuthrleualaalaalaglusergluargphevalarg

340345350

glnglythrglyasnaspglualaglyalaalaasnalaaspvalval

355360365

serleuthrcysprovalalaalaglyglucysalaglyproalaasp

370375380

serglyaspalaleuleugluargasntyrprothrglyalagluphe

385390395400

leuglyaspglyglyaspvalserpheserthrargglythrglnasn

405410415

trpthrvalgluargleuleuglnalahisargglnleuglugluarg

420425430

glytyrvalphevalglytyrhisglythrpheleuglualaalagln

435440445

serilevalpheglyglyvalargalaargserglnaspleuaspala

450455460

iletrpargglyphetyrilealaglyaspproalaleualatyrgly

465470475480

tyralaglnaspglngluproaspalaargglyargileargasngly

485490495

alaleuleuargvaltyrvalproargserserleuproglyphetyr

500505510

argthrserleuthrleualaalaproglualaalaglygluvalglu

515520525

argleuileglyhisproleuproleuargleuaspalailethrgly

530535540

progluglugluglyglyargleugluthrileleuglytrpproleu

545550555560

alagluargthrvalvalileproseralaileprothraspproarg

565570575

asnvalglyglyaspleuaspproserserileproasplysglugln

580585590

alaileseralaleuproasptyralaserglnproglylyspropro

595600605

arggluaspleulys

610

<210>11

<211>323

<212>prt

<213>人類

<400>11

tyrserargglulysasnglnprolysproserprolysarggluser

151015

glygluglupheargmetglulysleuasnglnleutrpglulysala

202530

glnargleuhisleuproprovalargleualagluleuhisalaasp

354045

leulysileglngluargaspgluleualatrplyslysleulysleu

505560

aspglyleuaspgluaspglyglulysglualaargleuileargasn

65707580

leuasnvalileleualalystyrglyleuaspglylyslysaspala

859095

argglnvalthrserasnserleuserglythrglngluaspglyleu

100105110

aspaspproargleuglulysleutrphislysalalysthrsergly

115120125

lyspheserglyglugluleuasplysleutrpargglupheleuhis

130135140

hislysglulysvalhisglutyrasnvalleuleugluthrleuser

145150155160

argthrglugluilehisgluasnvalileserproseraspleuser

165170175

aspilelysglyservalleuhisserarghisthrgluleulysglu

180185190

lysleuargserileasnglnglyleuaspargleuargargvalser

195200205

hisglnglytyrserthrglualaglupheglugluproargvalile

210215220

aspleutrpaspleualaglnseralaasnleuthrasplysgluleu

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glualapheargglugluleulyshispheglualalysileglulys

245250255

hisasnhistyrglnlysglnleugluilealahisglulysleuarg

260265270

hisalagluservalglyaspglygluargvalserargserargglu

275280285

lyshisalaleuleugluglyargthrlysgluleuglytyrthrval

290295300

lyslyshisleuglnaspleuserglyargileserargalaarghis

305310315320

asngluleu

<210>12

<211>357

<212>prt

<213>人類

<400>12

metalaproargargvalargserpheleuargglyleuproalaleu

151015

leuleuleuleuleupheleuglyprotrpproalaalaserhisgly

202530

glylystyrserargglulysasnglnprolysproserprolysarg

354045

gluserglygluglupheargmetglulysleuasnglnleutrpglu

505560

lysalaglnargleuhisleuproprovalargleualagluleuhis

65707580

alaaspleulysileglngluargaspgluleualatrplyslysleu

859095

lysleuaspglyleuaspgluaspglyglulysglualaargleuile

100105110

argasnleuasnvalileleualalystyrglyleuaspglylyslys

115120125

aspalaargglnvalthrserasnserleuserglythrglngluasp

130135140

glyleuaspaspproargleuglulysleutrphislysalalysthr

145150155160

serglylyspheserglyglugluleuasplysleutrparggluphe

165170175

leuhishislysglulysvalhisglutyrasnvalleuleugluthr

180185190

leuserargthrglugluilehisgluasnvalileserproserasp

195200205

leuseraspilelysglyservalleuhisserarghisthrgluleu

210215220

lysglulysleuargserileasnglnglyleuaspargleuargarg

225230235240

valserhisglnglytyrserthrglualaglupheglugluproarg

245250255

valileaspleutrpaspleualaglnseralaasnleuthrasplys

260265270

gluleuglualapheargglugluleulyshispheglualalysile

275280285

glulyshisasnhistyrglnlysglnleugluilealahisglulys

290295300

leuarghisalagluservalglyaspglygluargvalserargser

305310315320

argglulyshisalaleuleugluglyargthrlysgluleuglytyr

325330335

thrvallyslyshisleuglnaspleuserglyargileserargala

340345350

arghisasngluleu

355

<210>13

<211>101

<212>prt

<213>人類免疫缺陷病毒

<400>13

metgluprovalaspproargleugluprotrplyshisproglyser

151015

glnprolysthrprocysthrlyscystyrcyslyslyscyscysleu

202530

hiscysglnvalcysphemetthrlysglyleuglyilesertyrgly

354045

arglyslysargargglnargargargalaproglnaspasnlysasn

505560

hisglnvalserleuserlysglnprothrserargalaargglyasp

65707580

prothrglyglnglugluserlysglulysvalglulysgluthrval

859095

valaspprovalthr

100

<210>14

<211>4

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列

<400>14

lysaspgluleu

1

<210>15

<211>6

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>cd28-pet連接子

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa可以是任何自然產(chǎn)生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>xaa可以是任何自然產(chǎn)生的氨基酸

<400>15

argxaaargxaalysarg

15

<210>16

<211>12

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列

<400>16

lyslysaspleuargaspgluleulysaspgluleu

1510

<210>17

<211>13

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列

<400>17

lyslysaspgluleuargaspgluleulysaspgluleu

1510

<210>18

<211>13

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列

<400>18

lyslysaspgluleuargvalgluleulysaspgluleu

1510

<210>19

<211>12

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>內(nèi)質(zhì)網(wǎng)滯留序列

<400>19

lysaspgluleulysaspgluleulysaspgluleu

1510

<210>20

<211>46

<212>prt

<213>綠膿桿菌

<400>20

proleugluthrphethrarghisargglnproargglytrpglugln

151015

leugluglncysglytyrprovalglnargleuvalalaleutyrleu

202530

alaalaargleusertrpasnglnvalaspglnvalilearg

354045

<210>21

<211>98

<212>prt

<213>人乳頭瘤病毒16型

<400>21

methisglyaspthrprothrleuhisglutyrmetleuaspleugln

151015

progluthrthraspleutyrcystyrgluglnleuasnaspserser

202530

gluglugluaspgluileaspglyproalaglyglnalagluproasp

354045

argalahistyrasnilevalthrphecyscyslyscysaspserthr

505560

leuargleucysvalglnserthrhisvalaspileargthrleuglu

65707580

aspleuleumetglythrleuglyilevalcysproilecyssergln

859095

lyspro

<210>22

<211>105

<212>prt

<213>人乳頭瘤病毒18型

<400>22

methisglyprolysalathrleuglnaspilevalleuhisleuglu

151015

proglnasngluileprovalaspleuleucyshisgluglnleuser

202530

aspsergluglugluasnaspgluileaspglyvalasnhisglnhis

354045

leuproalaargargalagluproglnarghisthrmetleucysmet

505560

cyscyslyscysglualaargilelysleuvalvalgluserserala

65707580

aspaspleuargalapheglnglnleupheleuasnthrleuserphe

859095

valcysprotrpcysalaserglngln

100105

<210>23

<211>190

<212>prt

<213>丙型肝炎

<400>23

metserthrasnprolysproglnarglysthrlysargasnthrasn

151015

argargproglnaspvallyspheproglyglyglyglnilevalgly

202530

glyvaltyrleuleuproargargglyproargleuglyvalargala

354045

thrarglysthrsergluargserglnproargglyargargglnpro

505560

ileprolysalaargargprogluglyargthrtrpalaglnprogly

65707580

tyrprotrpproleutyrglyasngluglymetglytrpalaglytrp

859095

leuleuserproargglyserargproasntrpglyprothrasppro

100105110

argargargserargasnleuglylysvalileaspthrleuthrcys

115120125

glyphealaaspleumetglytyrileproleuvalglyalaproleu

130135140

glyglyvalalaargalaleualahisglyvalargvalleugluasp

145150155160

glyvalasntyralathrglyasnleuproglycysserpheserile

165170175

pheleuleualaleuleusercysleuthrthrproalaser

180185190

<210>24

<211>154

<212>prt

<213>乙型肝炎

<400>24

metalaalaargmetcyscysglnleuaspproalaargaspvalleu

151015

cysleuargprovalglyalagluserargglyargproleuprogly

202530

proleuglyalaleuproproserseralaseralavalproalaasp

354045

hisglyserhisleuserleuargglyleuprovalcysserpheser

505560

seralaglyprocysalaleuargphethrseralaargargmetglu

65707580

thrthrvalasnalaprotrpserleuprothrvalleuhislysarg

859095

thrileglyleuserglyargsermetthrtrpilegluglutyrile

100105110

lysaspcysvalphelysasptrpglugluleuglyglugluilearg

115120125

leulysvalphevalleuglyglycysarghislysleuvalcysser

130135140

proalaprocysasnphephethrserala

145150

<210>25

<211>192

<212>prt

<213>豬圓環(huán)病毒

<400>25

asnglyilepheasnthrargleuserargthrpheglytyrthrile

151015

lysargthrthrvallysthrprosertrpalavalaspmetmetarg

202530

pheasnileasnasppheleuproproglyglyglyserasnproarg

354045

servalpropheglutyrtyrserileserlysvallysvalgluphe

505560

trpprocysserproilethrglnglyaspserglyvalglyserser

65707580

alavalileleuaspaspasnphevalthrlysalathralaleuthr

859095

tyraspprotyrvalasntyrserserarghisthrilethrglnpro

100105110

phesertyrhisserargtyrphethrprolysprovalleuaspser

115120125

thrileasptyrpheglnproasnasnlysargasnglnleutrpleu

130135140

argleuglnthralaglyasnvalasphisvalglyleuglythrala

145150155160

phegluasnseriletyraspglnglutyrasnileargvalthrmet

165170175

tyrvalglnpheargglupheasnleulysaspproproleuasnpro

180185190

<210>26

<211>220

<212>prt

<213>豬生殖與呼吸綜合癥病毒

<400>26

arghishisphethrprosergluargglnleucysleuserserile

151015

glnthralapheasnglnglyalaglythrcysileleuseraspser

202530

glyargilesertyrthrvalglupheserleuprothrhishisthr

354045

valargleuileargvalthralaproproseralaleuaspglnval

505560

ileargasnalaleualaserproglyserglyglyaspleuglyglu

65707580

alailearggluglnprogluglnalaargleualaleuthrleuala

859095

alaalaglusergluargphevalargglnglythrglyasnaspglu

100105110

alaglyalaalaasnalaaspvalvalserleuthrcysprovalala

115120125

alaglyglucysalaglyproalaaspserglyaspalaleuleuglu

130135140

argasntyrprothrglyalaglupheleuglyaspglyglyaspval

145150155160

arghishisphethrprosergluargglnleucysleuserserile

165170175

glnthralapheasnglnglyalaglythrcysileleuseraspser

180185190

glyargilesertyrthrvalglupheserleuprothrhishisthr

195200205

valargleuileargvalthralaproproserala

210215220

<210>27

<211>165

<212>prt

<213>豬生殖與呼吸綜合癥病毒

<400>27

asnasnlysglucysthrvalalaglnalaleuglyasnglyasplys

151015

pheargalathrasplysargvalvalaspserleuargalailecys

202530

alaaspleugluglyserserserproleuprolysvalalahisasn

354045

leuglyphetyrpheserproaspleuthrglnphealalysleupro

505560

ilegluleuaspprohistrpprovalvalserthrglnasnasnglu

65707580

lystrpproaspargleuvalalaserleuargproleuasplystyr

859095

serargalacysileglyalaglytyrmetvalglyproservalphe

100105110

leuglythrproglyvalvalsertyrtyrleuthrlysphevallys

115120125

glyglualaglnvalleuprogluthrvalpheserthrglyargile

130135140

gluvalaspcysargglutyrleuaspasparggluarggluvalala

145150155160

alaserleuprohis

165

<210>28

<211>58

<212>prt

<213>豬生殖與呼吸綜合癥病毒

<400>28

glyserserleuaspaspphecystyraspserthralaproglnlys

151015

valleuleualapheserilethrtyralaserasnaspserserser

202530

hisleuglnleuiletyrasnleuthrleucysgluleuasnglythr

354045

asptrpleualaasnlyspheasptrpala

5055

<210>29

<211>62

<212>prt

<213>豬生殖與呼吸綜合癥病毒

<400>29

metglyserleuaspaspphecysasnaspserthralaalaglnlys

151015

leuvalleualapheserilethrtyrthrproilephevalalagly

202530

glyserserserthrtyrglntyriletyrasnleuthrilecysglu

354045

leuasnglythrasptrpleuserasnhispheasptrpala

505560

<210>30

<211>68

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>cd28-pet

<220>

<221>misc_feature

<222>(8)..(8)

<223>xaa可以是任何自然產(chǎn)生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(10)..(11)

<223>xaa可以是任何自然產(chǎn)生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(17)..(17)

<223>xaa可以是任何自然產(chǎn)生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(30)..(30)

<223>xaa可以是任何自然產(chǎn)生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(32)..(32)

<223>xaa可以是任何自然產(chǎn)生的氨基酸

<400>30

thraspiletyrphecyslysxaagluxaaxaatyrproproprotyr

151015

xaaaspasnglulysserasnglythrileilehisargxaaargxaa

202530

lysargglytrpgluglnleugluglncysglytyrprovalglnarg

354045

leuvalalaleutyrleualaalaargleusertrpasnglnvalasp

505560

glnvalilearg

65

<210>31

<211>28

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>cd28共有序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(8)..(8)

<223>xaa可以是任何自然產(chǎn)生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(10)..(11)

<223>xaa可以是任何自然產(chǎn)生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(17)..(17)

<223>xaa可以是任何自然產(chǎn)生的氨基酸

<400>31

thraspiletyrphecyslysxaagluxaaxaatyrproproprotyr

151015

xaaaspasnglulysserasnglythrileilehis

2025

<210>32

<211>10

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>cd28關(guān)鍵區(qū)

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>xaa可以是任何自然產(chǎn)生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(5)

<223>xaa可以是任何自然產(chǎn)生的氨基酸

<400>32

lysxaagluxaaxaatyrproproprotyr

1510

<210>33

<211>187

<212>prt

<213>人類

<400>33

metasnglyaspaspalaphealaargargprothrvalglyalagln

151015

ileproglulysileglnlysalapheaspaspilealalystyrphe

202530

serlysgluglutrpglulysmetlysalaserglulysilephetyr

354045

valtyrmetlysarglystyrglualametthrlysleuglyphelys

505560

alathrleuproprophemetcysasnlysargalagluaspphegln

65707580

glyasnaspleuaspasnaspproasnargglyasnglnvalgluarg

859095

proglnmetthrpheglyargleuglnglyileserprolysilemet

100105110

prolyslysproalaglugluglyasnaspserglugluvalproglu

115120125

alaserglyproglnasnaspglylysgluleucysproproglylys

130135140

prothrthrserglulysilehisgluargserglyprolysarggly

145150155160

gluhisalatrpthrhisargleuarggluarglysglnleuvalile

165170175

tyrglugluileseraspproglugluaspasp

180185

<210>34

<211>314

<212>prt

<213>人類

<400>34

metproleugluglnargserglnhiscyslysproglugluglyleu

151015

glualaargglyglualaleuglyleuvalglyalaglnalaproala

202530

thrglugluglnglualaalaserserserserthrleuvalgluval

354045

thrleuglygluvalproalaalagluserproaspproproglnser

505560

proglnglyalaserserleuprothrthrmetasntyrproleutrp

65707580

serglnsertyrgluaspserserasnglngluglugluglyproser

859095

thrpheproaspleugluserglupheglnalaalaleuserarglys

100105110

valalagluleuvalhispheleuleuleulystyrargalaargglu

115120125

provalthrlysalaglumetleuglyservalvalglyasntrpgln

130135140

tyrphepheprovalilepheserlysalaserserserleuglnleu

145150155160

valpheglyilegluleumetgluvalaspproileglyhisleutyr

165170175

ilephealathrcysleuglyleusertyraspglyleuleuglyasp

180185190

asnglnilemetprolysalaglyleuleuileilevalleualaile

195200205

ilealaarggluglyaspcysalaprogluglulysiletrpgluglu

210215220

leuservalleugluvalphegluglyarggluaspserileleugly

225230235240

aspprolyslysleuleuthrglnhisphevalglngluasntyrleu

245250255

glutyrargglnvalproglyseraspproalacystyrglupheleu

260265270

trpglyproargalaleuvalgluthrsertyrvallysvalleuhis

275280285

hismetvallysileserglyglyprohisilesertyrproproleu

290295300

hisglutrpvalleuarggluglygluglu

305310

<210>35

<211>181

<212>prt

<213>人類

<400>35

phemetglnalagluglyargglythrglyglyserthrglyaspala

151015

aspglyproglyglyproglyileproaspglyproglyglyasnala

202530

glyglyproglyglualaglyalathrglyglyargglyproarggly

354045

alaglyalaalaargalaserglyproglyglyglyalaproarggly

505560

prohisglyglyalaalaserglyleuasnglycyscysargcysgly

65707580

alaargglyprogluserargleuleugluphetyrleualametpro

859095

phealathrprometglualagluleualaargargserleualagln

100105110

aspalaproproleuprovalproglyvalleuleulysgluphethr

115120125

valserglyasnileleuthrileargleuthralaalaasphisarg

130135140

glnleuglnleuserilesersercysleuglnglnleuserleuleu

145150155160

mettrpilethrglncyspheleuprovalpheleualaglnpropro

165170175

serglyglnargarg

180

<210>36

<211>296

<212>prt

<213>人類

<400>36

pheserglyalaleuaspvalleuglnmetlysglugluaspvalleu

151015

lyspheleualaalaglythrhisleuglyglythrasnleuaspphe

202530

glnmetgluglntyriletyrlysarglysseraspglyiletyrile

354045

ileasnleulysargthrtrpglulysleuleuleualaalaargala

505560

ilevalalailegluasnproalaaspvalservalileserserarg

65707580

asnthrglyglnargalavalleulysphealaalaalathrglyala

859095

thrproilealaglyargphethrproglythrphethrasnglnile

100105110

glnalaalaphearggluproargleuleuvalvalthraspproarg

115120125

alaasphisglnproleuthrglualasertyrvalasnleuprothr

130135140

ilealaleucysasnthraspserproleuargtyrvalaspileala

145150155160

ileprocysasnasnlysglyalaalahisservalglyleumettrp

165170175

trpmetleualaarggluvalleuargmetargglythrileserarg

180185190

gluhisprotrpgluvalmetproaspleutyrphetyrargasppro

195200205

glugluileglulysglugluglnalaalaalaglulysalavalthr

210215220

lysgluglupheglnglyglutrpthralaproalaprogluphethr

225230235240

alathrglnprogluvalalaasptrpsergluglyvalglnvalpro

245250255

servalproileglnglnpheprothrgluasptrpseralaglnpro

260265270

alathrgluasptrpseralaalaprothralaglnalathrglutrp

275280285

valglyalathrthrasptrpser

290295

<210>37

<211>279

<212>prt

<213>人類

<400>37

glyseraspvalargaspleuasnalaleuleuproalavalproser

151015

leuglyglyglyglyglycysalaleuprovalserglyalaalagln

202530

trpalaprovalleuaspphealaproproglyalaseralatyrgly

354045

serleuglyglyproalaproproproalapropropropropropro

505560

proproprohisserpheilelysglngluprosertrpglyglyala

65707580

gluprohisglugluglncysleuseralaphethrvalhispheser

859095

glyglnphethrglythralaglyalacysargtyrglyprophegly

100105110

proproproproserglnalaserserglyglnalaargmetphepro

115120125

asnalaprotyrleuprosercysleugluserglnproalailearg

130135140

asnglnglytyrserthrvalthrpheaspglythrprosertyrgly

145150155160

histhrproserhishisalaalaglnpheproasnhisserphelys

165170175

hisgluaspprometglyglnglnglyserleuglygluglnglntyr

180185190

servalproproprovaltyrglycyshisthrprothraspsercys

195200205

thrglyserglnalaleuleuleuargthrprotyrserseraspasn

210215220

leutyrglnmetthrserglnleuglucysmetthrtrpasnglnmet

225230235240

asnleuglyalathrleulysglyvalalaalaglyserserserser

245250255

vallystrpthrgluglyglnserasnhisserthrglytyrgluser

260265270

aspasnhisthrthrproile

275

<210>38

<211>406

<212>prt

<213>人類

<400>38

serglyglyhisglnleuglnleualaalaleutrpprotrpleuleu

151015

metalathrleuglnalaglypheglyargthrglyleuvalleuala

202530

alaalavalglusergluargseralagluglnlysalaileilearg

354045

valileproleulysmetaspprothrglylysleuasnleuthrleu

505560

gluglyvalphealaglyvalalagluilethrproalagluglylys

65707580

leumetglnserhisproleutyrleucysasnalaseraspaspasp

859095

asnleugluproglypheileserilevallysleugluserproarg

100105110

argalaproalahisproleuilecysglyproproglyleuasplys

115120125

argleuleuprogluthrproglyprocystyrserasnserglnpro

130135140

valtrpleucysleuthrproargglnproleugluprohispropro

145150155160

glygluglyproserglutrpserseraspthralagluglyargpro

165170175

cysprotyrprohiscysglnvalleuseralaglnproglyserglu

180185190

glugluleuglugluleucysgluglnalavalserglyglyhisgln

195200205

leuglnleualaalaleutrpprotrpleuleumetalathrleugln

210215220

alaglypheglyargthrglyleuvalleualaalaalavalgluser

225230235240

gluargseralagluglnlysalaileileargvalileproleulys

245250255

metaspprothrglylysleuasnleuthrleugluglyvalpheala

260265270

glyvalalagluilethrproalagluglylysleumetglnserhis

275280285

proleutyrleucysasnalaseraspaspaspasnleugluprogly

290295300

pheileserilevallysleugluserproargargalaproalahis

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proleuilecysglyproproglyleuasplysargleuleuproglu

325330335

thrproglyprocystyrserasnserglnprovaltrpleucysleu

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thrproargglnproleugluprohisproproglygluglyproser

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glutrpserseraspthralagluglyargprocysprotyrprohis

370375380

cysglnvalleuseralaglnproglysergluglugluleugluglu

385390395400

leucysgluglnalaval

405

<210>39

<211>284

<212>prt

<213>人類

<400>39

lysleuthrilegluserthrpropheasnvalalagluglylysglu

151015

valleuleuleuvalhisasnleuproglnhisleupheglytyrser

202530

trptyrlysglygluargvalaspglyasnargglnileileglytyr

354045

valileglythrglnglnalathrproglyproalatyrserglyarg

505560

gluileiletyrproasnalaserleuleuileglnasnileilegln

65707580

asnaspthrglyphetyrthrleuhisvalilelysseraspleuval

859095

asngluglualathrglyglnpheargvaltyrprogluleuprolys

100105110

proserileserserasnasnserlysprovalgluasplysaspala

115120125

valalaphethrcysgluprogluthrglnaspalathrtyrleutrp

130135140

trpvalasnasnglnserleuprovalserproargleuglnleuser

145150155160

asnglyasnargthrleuthrleupheasnvalthrargasnaspthr

165170175

alasertyrlyscysgluthrglnasnprovalseralaargargser

180185190

aspservalileleuasnvalleutyrglyproaspthrproileile

195200205

serproproaspsersertyrleuserglyalaasnleuasnleuser

210215220

cyshisseralaserasnproserproglntyrsertrpphevalasn

225230235240

glythrpheglnglnhisthrglnvalleuleuilealalysilegln

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proasnasnasnglythrtyralacysphevalserasnleualathr

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glyargasnasnserilevallysserilethrval

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<210>40

<211>407

<212>prt

<213>綠膿桿菌

<400>40

alagluglualapheaspleutrpasnglucysalalysalacysval

151015

leuaspleulysaspglyvalargserserargmetservalasppro

202530

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leugluglyglyasnaspalaleulysleualaileaspasnalaleu

505560

serilethrseraspglyleuthrileargleugluglyglyvalglu

65707580

proasnlysprovalargtyrsertyrthrargglnalaargglyser

859095

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100105110

ilelysvalpheilehisgluleuasnalaglyasnglnleuserhis

115120125

metserproiletyrthrileglumetglyaspgluleuleualalys

130135140

leualaargaspalathrphephevalargalahisgluserasnglu

145150155160

metglnprothrleualaileserhisalaglyvalservalvalmet

165170175

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210215220

tyrargvalleualaglyasnproalalyshisaspleuaspilelys

225230235240

prothrvalileserhisargleuhispheprogluglyglyserleu

245250255

alaalaleuthralahisglnalacyshisleuproleugluthrphe

260265270

thrarghisargglnproargglytrpgluglnleugluglncysgly

275280285

tyrprovalglnargleuvalalaleutyrleualaalaargleuser

290295300

trpasnglnvalaspglnvalileargasnalaleualaserprogly

305310315320

serglyglyaspleuglyglualailearggluglnprogluglnala

325330335

argleualaleuthrleualaalaalaglusergluargphevalarg

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<211>61

<212>prt

<213>綠膿桿菌

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<212>prt

<213>綠膿桿菌

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151015

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202530

alailealaaspthrasnglyglnglyvalleuhistyrsermetval

354045

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115120125

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130135140

leualaargaspalathrphephevalargalahisgluserasnglu

145150155160

metglnprothrleualaileserhisalaglyvalservalvalmet

165170175

alaglnthrglnproargargglulysargtrpserglutrpalaser

180185190

glylysvalleucysleuleuaspproleuaspglyvaltyrasntyr

195200205

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210215220

tyrargvalleualaglyasnproalalyshisaspleuaspilelys

225230235240

prothrvalileserhisargleuhispheprogluglyglyserleu

245250255

alaalaleuthralahisglnalacyshisleuproleugluthrphe

260265270

thrarghisargglnproargglytrpgluglnleugluglncysgly

275280285

tyrprovalglnargleuvalalaleutyrleualaalaargleuser

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leuglnlyslysleuglugluleugluleualalysaspgluleu

151015

<210>44

<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>nes共有序列

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(3)

<223>xaa可以是任何自然產(chǎn)生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(6)..(7)

<223>xaa可以是任何自然產(chǎn)生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(9)..(9)

<223>xaa可以是任何自然產(chǎn)生的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(11)..(11)

<223>xaa可以是任何自然產(chǎn)生的氨基酸

<400>44

leuxaaxaalysleuxaaxaaleuxaaleuxaa

1510

<210>45

<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>nes

<400>45

leuglnlyslysleuglugluleugluleuala

1510

<210>46

<211>192

<212>prt

<213>豬圓環(huán)病毒

<400>46

asnglyilepheasnthrargleuserargthrpheglytyrthrile

151015

lysargthrthrvallysthrprosertrpalavalaspmetmetarg

202530

pheasnileasnasppheleuproproglyglyglyserasnproarg

354045

servalpropheglutyrtyrserileserlysvallysvalgluphe

505560

trpprocysserproilethrglnglyaspserglyvalglyserser

65707580

alavalileleuaspaspasnphevalthrlysalathralaleuthr

859095

tyraspprotyrvalasntyrserserarghisthrilethrglnpro

100105110

phesertyrhisserargtyrphethrprolysprovalleuaspser

115120125

thrileasptyrpheglnproasnasnlysargasnglnleutrpleu

130135140

argleuglnthralaglyasnvalasphisvalglyleuglythrala

145150155160

phegluasnseriletyraspglnglutyrasnileargvalthrmet

165170175

tyrvalglnpheargglupheasnleulysaspproproleuasnpro

180185190

<210>47

<211>328

<212>prt

<213>豬瘟病毒

<400>47

argleusercyslysgluasphisargtyralaileserserthrasn

151015

gluileglyproleuglyalagluglyleuthrthrthrtrplysglu

202530

tyrserhisglyleuglnleuaspaspglythrvalargalailecys

354045

ilealaglyserphelysvalthralaleuasnvalvalserargarg

505560

tyrleualaserleuhislysargalaleuprothrservalthrphe

65707580

gluleuleupheaspglythrserproalailegluglumetglyglu

859095

asppheglypheglyleucyspropheaspthrthrprovalvallys

100105110

glylystyrasnthrthrleuleuasnglyseralaphetyrleuval

115120125

cysproileglytrpthrglyvalileglucysthralavalserpro

130135140

thrthrleuargthrgluvalvallysthrphelysargglulyspro

145150155160

pheprohisargalaaspcysvalthrthrilevalglulysgluasp

165170175

leuphehiscyslysleuglyglyasntrpthrcysvallysglyasn

180185190

provalthrtyrthrglyglyglnvallysglncysargtrpcysgly

195200205

pheaspphelysgluproaspglyleuprohistyrproileglylys

210215220

cysileleualaasngluthrglytyrargvalvalaspserthrasp

225230235240

cysasnargaspglyvalvalileserthrgluglygluhisglucys

245250255

leuileglyasnthrthrvallysvalhisalaleuaspglyargleu

260265270

alaprometprocysargprolysgluilevalserseralaglypro

275280285

valarglysthrsercysthrpheasntyrthrlysthrleuargasn

290295300

lystyrtyrgluproargaspsertyrpheglnglntyrmetleulys

305310315320

glyglutyrglntyrtrppheasp

325

<210>48

<211>50

<212>prt

<213>口蹄疫病毒

<400>48

alathrvaltyrasnglyserserlystyrglyaspthrserthrser

151015

asnvalargglyaspleuglnvalleualaglnlysalagluargthr

202530

leuprothrserpheasnpheglyalailelysalathrargvalthr

354045

gluleu

50

<210>49

<211>15

<212>prt

<213>口蹄疫病毒

<400>49

alaalailegluphephegluglymetvalhisaspserilelys

151015

<210>50

<211>65

<212>prt

<213>口蹄疫病毒

<400>50

alathrvaltyrasnglyserserlystyrglyaspthrserthrser

151015

asnvalargglyaspleuglnvalleualaglnlysalagluargthr

202530

leuprothrserpheasnpheglyalailelysalathrargvalthr

354045

gluleualaalailegluphephegluglymetvalhisaspserile

505560

lys

65

<210>51

<211>18

<212>prt

<213>副黏液病毒

<400>51

leuleuproasnmetprolysasplysgluglycysalalysalapro

151015

leuglu

<210>52

<211>11

<212>prt

<213>副黏液病毒

<400>52

proaspgluglnasptyrglnileargmetala

1510

<210>53

<211>29

<212>prt

<213>副黏液病毒

<400>53

leuleuproasnmetprolysasplysgluglycysalalysalapro

151015

leugluproaspgluglnasptyrglnileargmetala

2025

<210>54

<211>525

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>pe407-e7-k3融合蛋白

<400>54

alagluglualapheaspleutrpasnglucysalalysalacysval

151015

leuaspleulysaspglyvalargserserargmetservalasppro

202530

alailealaaspthrasnglyglnglyvalleuhistyrsermetval

354045

leugluglyglyasnaspalaleulysleualaileaspasnalaleu

505560

serilethrseraspglyleuthrileargleugluglyglyvalglu

65707580

proasnlysprovalargtyrsertyrthrargglnalaargglyser

859095

trpserleuasntrpleuvalproileglyhisglulysproserasn

100105110

ilelysvalpheilehisgluleuasnalaglyasnglnleuserhis

115120125

metserproiletyrthrileglumetglyaspgluleuleualalys

130135140

leualaargaspalathrphephevalargalahisgluserasnglu

145150155160

metglnprothrleualaileserhisalaglyvalservalvalmet

165170175

alaglnthrglnproargargglulysargtrpserglutrpalaser

180185190

glylysvalleucysleuleuaspproleuaspglyvaltyrasntyr

195200205

leualaglnglnargcysasnleuaspaspthrtrpgluglylysile

210215220

tyrargvalleualaglyasnproalalyshisaspleuaspilelys

225230235240

prothrvalileserhisargleuhispheprogluglyglyserleu

245250255

alaalaleuthralahisglnalacyshisleuproleugluthrphe

260265270

thrarghisargglnproargglytrpgluglnleugluglncysgly

275280285

tyrprovalglnargleuvalalaleutyrleualaalaargleuser

290295300

trpasnglnvalaspglnvalileargasnalaleualaserprogly

305310315320

serglyglyaspleuglyglualailearggluglnprogluglnala

325330335

argleualaleuthrleualaalaalaglusergluargphevalarg

340345350

glnglythrglyasnaspglualaglyalaalaasnalaaspvalval

355360365

serleuthrcysprovalalaalaglyglucysalaglyproalaasp

370375380

serglyaspalaleuleugluargasntyrprothrglyalagluphe

385390395400

leuglyaspglyglyaspvalgluphehismetvalaspmethisgly

405410415

aspthrprothrleuhisglutyrmetleuaspleuglnprogluthr

420425430

thraspleutyrcystyrgluglnleuasnaspserserglugluglu

435440445

aspgluileaspglyproalaglyglnalagluproaspargalahis

450455460

tyrasnilevalthrphecyscyslyscysaspserthrleuargleu

465470475480

cysvalglnserthrhisvalaspileargthrleugluaspleuleu

485490495

metglythrleuglyilevalcysproilecysserglnlysproleu

500505510

glulysaspgluleulysaspgluleulysaspgluleu

515520525

<210>55

<211>290

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<223>rap1-cd28convpet-e7-k3融合蛋白

<400>55

alaglupheglugluproargvalileaspleutrpaspleualagln

151015

seralaasnleuthrasplysgluleuglualapheargglugluleu

202530

lyshispheglualalysileglulyshisasnhistyrglnlysgln

354045

leugluilealahisglulysleuarghisalagluservalglyasp

505560

glygluargvalserargserargglulyshisalaleuleuglugly

65707580

argthrlysgluleuglytyrthrvallyslyshisleuglnaspleu

859095

serglyargileserargalaarggluleuthraspiletyrphecys

100105110

lysilegluphemettyrproproprotyrleuaspasnglulysser

115120125

asnglythrileilehisargalaargtyrlysargglytrpglugln

130135140

leugluglncysglytyrprovalglnargleuvalalaleutyrleu

145150155160

alaalaargleusertrpasnglnvalaspglnvalileargglyser

165170175

gluphemethisglyaspthrprothrleuhisglutyrmetleuasp

180185190

leuglnprogluthrthraspleutyrcystyrgluglnleuasnasp

195200205

sersergluglugluaspgluileaspglyproalaglyglnalaglu

210215220

proaspargalahistyrasnilevalthrphecyscyslyscysasp

225230235240

serthrleuargleucysvalglnserthrhisvalaspileargthr

245250255

leugluaspleuleumetglythrleuglyilevalcysproilecys

260265270

serglnlysproleuglulysaspgluleulysaspgluleulysasp

275280285

gluleu

290