本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，特別是涉及一種布洛芬立方液晶前體溶液、立方液晶納米粒及其制備方法。

背景技術(shù)：

布洛芬(ibuprofen，IBU)是一種非甾體類抗炎藥物，具有很好的解熱鎮(zhèn)痛及抗炎效果。用于緩解輕至中度疼痛如頭痛、關(guān)節(jié)痛、偏頭痛、牙痛、肌肉痛、神經(jīng)痛、痛經(jīng)。也用于普通感冒或流行性感冒引起的發(fā)熱。

布洛芬屬于生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)的Ⅱ類藥物，溶解度低、滲透性高。藥物的溶出是其吸收的限速階段，嚴(yán)重影響了藥物的口服生物利用度。此外，布洛芬生物半衰期短(～1.8h)，為保持有效的治療濃度，患者需頻繁大量服藥，這會對胃腸道有一定的刺激性。溶解度差和半衰期短嚴(yán)重地限制了布洛芬的臨床應(yīng)用。因此，有必要研發(fā)新的給藥劑型克服布洛芬在口服吸收過程中溶解度差的問題，以提高布洛芬口服的生物利用度。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

基于此，本發(fā)明提供了一種布洛芬立方液晶前體溶液，用于制備用于口服的布洛芬立方液晶納米粒，以克服布洛芬口服給藥過程中溶解度低，體內(nèi)半衰期短的缺點，以提高布洛芬口服的生物利用度。

具體技術(shù)方案如下：

一種布洛芬立方液晶前體溶液，主要由布洛芬、液晶材料和穩(wěn)定劑制備而成，所述布洛芬、液晶材料和穩(wěn)定劑的質(zhì)量比為0.01-2:10：0.5-2.5；所述液晶材料為植烷三醇；所述穩(wěn)定劑選自脂肪酸甘油酯、多元醇型非離子表面活性劑、聚氧乙烯型非離子表面活性劑、泊洛沙姆和卵磷脂中的至少一種。

在其中一些實施例中，所述布洛芬、液晶材料和穩(wěn)定劑的質(zhì)量比為0.4-1.6:10：0.8-2。

在其中一些實施例中，所述穩(wěn)定劑選自泊洛沙姆。

在其中一些實施例中，所述泊洛沙姆選自泊洛沙姆407、泊洛薩姆188、泊洛薩姆338中的至少一種。

在其中一些實施例中，所述布洛芬立方液晶前體溶液，主要由布洛芬、植烷三醇和泊洛沙姆407制備而成，所述布洛芬、植烷三醇和泊洛沙姆407的質(zhì)量比為1-1.4:10：0.8-1.2。

本發(fā)明還提供了上述布洛芬立方液晶前體溶液的制備方法。

具體技術(shù)方案如下：

一種上述的布洛芬立方液晶前體溶液的制備方法，包括以下步驟：將布洛芬、穩(wěn)定劑和植烷三醇于40-70℃加熱熔融，渦旋，充分混合均勻，室溫下靜置，即得所述布洛芬立方液晶前體溶液。

本發(fā)明還提供了上述布洛芬立方液晶前體溶液的應(yīng)用。

具體技術(shù)方案如下：

上述的布洛芬立方液晶前體溶液在制備布洛芬立方液晶納米粒中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了一種布洛芬立方液晶納米粒，可顯著提高布洛芬口服的生物利用度。

具體技術(shù)方案如下：

一種布洛芬立方液晶納米粒，主要由上述的布洛芬立方液晶前體溶液分散在水中制備而成。

本發(fā)明還提供了上述布洛芬立方液晶納米粒的制備方法。

具體技術(shù)方案如下：

一種上述的布洛芬立方液晶納米粒的制備方法，包括以下步驟：

在布洛芬立方液晶前體溶液中加水，用超聲波粉碎儀進(jìn)行超聲分散，得布洛芬立方液晶粗分散溶液；

將布洛芬立方液晶粗分散溶液進(jìn)行高壓均質(zhì)，均質(zhì)壓力為600-1500bar，循環(huán)次數(shù)為3-13次，即得布洛芬立方液晶納米粒溶液。

在其中一些實施例中，所述均質(zhì)壓力為1100-1300bar，循環(huán)次數(shù)為8-10次。

在其中一些實施例中，所述水的加入量為布洛芬立方液晶前體溶液總重量的20-50倍。

在其中一些實施例中，所述超聲分散的條件為：分散時間為10-15min，功率為150-400w，工作時間為4-6s，間斷時間為8-12s。

在其中一些實施例中，所述布洛芬立方液晶納米粒的制備方法還包括以下步驟：在所述布洛芬立方液晶納米粒溶液中加入凍干保護(hù)劑，充分溶解后，進(jìn)行冷凍干燥，即得布洛芬立方液晶納米粒的凍干粉末。

在其中一些實施例中，所述凍干保護(hù)劑的加入量與立方液晶納米粒溶液的質(zhì)量體積比為：0.04-0.06g：1mL。

在其中一些實施例中，所述凍干保護(hù)劑選自甘露醇、蔗糖、葡糖糖或乳糖。

在其中一些實施例中，所述冷凍干燥包括：先于-18～-22℃的冰箱中預(yù)凍10-14h，再于冷凍干燥機中凍干22-26h，冷凍干燥機的條件為：-48～52℃冷阱溫度，真空度為0.08-0.12Mbar。

立方液晶是一種新型脂質(zhì)藥物載體，是由兩親性脂質(zhì)分散在水性環(huán)境中自發(fā)形成各種幾何形態(tài)構(gòu)成的一個中介相形態(tài)(Mesophase)。因其獨特的三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)而具有良好的藥物傳遞性能。其三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)主要由親水域中的雙連續(xù)水通道和親脂域中的脂質(zhì)雙分子層構(gòu)成的晶格單元在空間上延伸折疊，堆疊成具有三維，循環(huán)排列和最小表面積特點的緊密結(jié)構(gòu)。難溶性藥物具有較強的疏水性，與脂質(zhì)結(jié)構(gòu)極性相近，在親脂域中具有較高的溶解度。

本發(fā)明的布洛芬立方液晶前體溶液、立方液晶納米粒及其制備方法具有以下優(yōu)點和有益效果：

本發(fā)明的發(fā)明人通過大量實驗研究發(fā)現(xiàn)將布洛芬與特定的液晶材料以及穩(wěn)定劑以特定比例配合制備的立方液晶前體溶液，可用于制備藥物包封率高、粒徑較小且分布均勻的布洛芬立方液晶納米粒。立方液晶納米粒是一種新型納米脂質(zhì)藥物載體，其巨大的膜表面積和獨特的三維晶格結(jié)構(gòu)對難溶的藥物具有良好的增溶效果和緩釋性能。因而本發(fā)明的布洛芬立方液晶納米粒能顯著提高布洛芬的口服生物利用度。

藥物顆粒大小，藥物與溶出介質(zhì)的接觸面積，以及溶出層與介質(zhì)之間的藥物濃度差是影響難溶性藥物溶出度的關(guān)鍵參數(shù)。本發(fā)明的布洛芬立方液晶納米粒，其粒徑較小(小于250nm)，且粒徑均一性好，有利于腸上皮細(xì)胞內(nèi)吞并轉(zhuǎn)運到細(xì)胞內(nèi)；布洛芬包載進(jìn)液晶結(jié)構(gòu)中后，由晶體顆粒轉(zhuǎn)變成無定型的分子態(tài)，以穩(wěn)定的無定型的分子態(tài)分散在晶格單元的脂質(zhì)雙分子層中，均勻分布于親脂域中，雙連續(xù)水通道與脂質(zhì)雙分子層的巨大交界面積顯著增加了布洛芬的溶出表面積；同時布洛芬水溶性差疏水性強，在親脂域中有較大的溶解度，在溶出層和介質(zhì)之間形成較大的藥物濃度差，可進(jìn)一步增大布洛芬的溶出度；此外，布洛芬立方液晶納米粒三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中的脂質(zhì)雙分子層，具有類細(xì)胞結(jié)構(gòu)，與細(xì)胞有很強的親和性，具有良好的生物相容性，可以顯著增加立方液晶納米粒對胃腸道上皮細(xì)胞的黏附性和穿透能力，延長載布洛芬的納米粒在胃腸道的滯留時間并促進(jìn)載藥納米粒在胃腸道中的跨膜轉(zhuǎn)運吸收，改善布洛芬在體內(nèi)的循環(huán)和分布。因此，本發(fā)明的布洛芬立方液晶納米粒能夠克服布洛芬口服給藥過程中的溶解障礙，促進(jìn)藥物在胃腸道的黏附和跨膜轉(zhuǎn)運，且能緩慢釋放藥物，延長藥物釋放時間，延長布洛芬在體內(nèi)的半衰期，改善藥物在體內(nèi)的循環(huán)分布，有效提高布洛芬的口服生物利用度。

本發(fā)明的布洛芬立方液晶納米粒，能夠有效的將難溶性藥物布洛芬包埋于液晶結(jié)構(gòu)中，藥物的包封率高，克服了其口服生物利用度低的缺點，同時納米粒溶液也有利于口服，能夠提高患者的順應(yīng)性。

本發(fā)明的布洛芬立方液晶納米粒顯著提高了布洛芬的口服相對生物利用度，同時能使布洛芬緩慢釋放，具有24小時緩釋的效果，為布洛芬提供了一種能夠緩慢釋放、吸收良好、生物利用度高的布洛芬新型口服制劑。

本發(fā)明的布洛芬立方液晶納米粒的制備方法工藝簡單，包封率高，使制備得到的布洛芬立方液晶納米粒粒徑小且分布均勻，生產(chǎn)成本較低，有利于工業(yè)化生產(chǎn)，具有良好的應(yīng)用前景，同時有利于推進(jìn)液晶納米的工業(yè)化發(fā)展。

附圖說明

圖1為實施例1中超聲分散后未經(jīng)高壓均質(zhì)的布洛芬立方液晶粗分散溶液中納米粒的粒徑；

圖2為實施例1中高壓均質(zhì)后制備的布洛芬立方液晶納米粒的粒徑；

圖3為實施例1中布洛芬含量對立方液晶納米粒粒徑的影響；

圖4為實施例1中布洛芬含量對立方液晶納米粒的包封率的影響；

圖5為實施例2中F127和F68對布洛芬立方液晶納米粒粒徑的影響；其中A為PYT:F127＝10:1均質(zhì)后第一天，B為PYT:F127＝10:1均質(zhì)后第3天，C為PYT:F68＝10:1均質(zhì)后第1天，D為PYT:F68＝10:1均質(zhì)后第3天；

圖6為實施例5中布洛芬立方液晶納米粒的粒徑圖；

圖7為實施例5中布洛芬立方液晶納米粒的形態(tài)表征圖；其中A為原子力學(xué)顯微鏡圖，B為冷凍透射電鏡圖；

圖8為實施例6中的DSC圖；其中a為布洛芬原料藥，b為布洛芬和空白立方液晶納米粒的物理混合物，c為布洛芬立方液晶納米粒，d為空白立方液晶納米粒；

圖9為實施例7中布洛芬立方液晶納米粒的粒徑和包封率；

圖10為實施例8中布洛芬原料藥和布洛芬立方液晶納米粒的在pH 1.2(A)和pH 7.4(B)的體外釋放曲線；

圖11為實施例9中布洛芬原料藥和立方液晶納米粒在比格犬灌胃給藥后的平均血藥濃度-時間變化曲線。

具體實施方式

以下通過具體實施例以及附圖對本發(fā)明的布洛芬立方液晶前體溶液、立方液晶納米粒及其制備方法做進(jìn)一步詳細(xì)的說明。

實施例1

本實施例的布洛芬立方液晶納米粒的制備方法，包括如下步驟：

按表1所示的原料處方稱取布洛芬、F127和植烷三醇置于100mL塑料離心管中，于水浴60℃加熱熔融，渦旋，充分混合均勻，室溫靜止放置2天，即得布洛芬立方液晶前體溶液。

在布洛芬立方液晶前體溶液中加入30mL水，用超聲波粉碎儀進(jìn)行超聲分散，時間為10min，所用超聲功率為200W，超聲工作時間5s，間斷時間10s，得布洛芬立方液晶粗分散溶液，該粗分散溶液中的粒子粒徑分布不均勻，而且有微米級的粒子(見圖1)。

將布洛芬立方液晶粗分散溶液進(jìn)行高壓均質(zhì)(均質(zhì)壓力為1200bar，循環(huán)次數(shù)為9次)，高壓均質(zhì)后可以使納米粒粒徑減小，得到粒徑分布均勻的立方液晶納米粒(見圖2)，即得布洛芬立方液晶納米粒溶液。

表1布洛芬立方液晶前體溶液的原料處方

測定本實施例制備的布洛芬立方液晶納米粒的粒徑以及包封率。

粒徑測定方法如下:用超純水稀釋立方液晶納米粒后，取1mL納米粒溶液加入到樣品池中，25℃平衡2min，采用粒徑分析儀Zetasizer Nano ZS90測定立方液晶納米粒的粒徑和多分散系數(shù)(PDI)。

包封率的測定采用超濾離心法。精密移取所制備布洛芬立方液晶納米粒溶液0.5mL于超濾離心管的內(nèi)管中，4000r/min離心20min，收集外管中游離的布洛芬溶液，用甲醇洗滌后，并用甲醇定容至10mL容量瓶中，采用高效液相色譜方法測定游離的布洛芬含量C_free。同時，精密移取載布洛芬的立方液晶納米粒溶液0.5mL于10mL容量瓶中，加入甲醇破乳并定容，同法測定立方液晶納米粒總藥量C_total。使用下列包封率計算公式，計算立方液晶納米粒的包封率。

高效液相色譜條件如下，色譜柱:Odyssil C18(250×4.6mm，5μm)；流動相:甲醇:0.01mol·L-1磷酸二氫鉀:磷酸＝400:100:0.05,(v/v)；柱溫:35℃；檢測波長:263nm；流速:1.0mL·min-1；進(jìn)樣量:20μL。

粒徑和包封率結(jié)果分別見圖3和圖4。布洛芬立方液晶納米粒的粒徑分別為235.1±3.7nm、231.26±6.9nm、237.5±2.8nm、238.5±5.1nm，287.4±6.1nm，結(jié)果表明在一定范圍內(nèi)隨著布洛芬與植烷三醇的質(zhì)量比增大，布洛芬立方液晶納米粒的粒徑未發(fā)生明顯增大，但當(dāng)載藥量超過一定比例時(2.5:10)，粒徑驟然增大。同時，隨著布洛芬與植烷三醇的質(zhì)量比增大，布洛芬立方液晶納米粒的包封率也稍有增加，當(dāng)布洛芬與植烷三醇的質(zhì)量比為16:100時，包封率略有下降，當(dāng)比例增加至25:100時，包封率的下降已經(jīng)較為明顯，這表明已經(jīng)達(dá)到了納米粒載藥的上限。綜合考慮，布洛芬與植烷三醇的優(yōu)選質(zhì)量比為12:100。

實施例2

以表2所示原料處方，按實施例1的制備方法制備穩(wěn)定劑種類和用量不同的布洛芬立方液晶納米粒溶液。

測定本實施例制備的布洛芬立方液晶納米粒的粒徑，測定方法同實施例1，并通過對比第1天和第3天布洛芬立方液晶納米粒的粒徑以及PDI判斷其穩(wěn)定性。結(jié)果見圖5、表2和表3。由結(jié)果可知，在缺乏穩(wěn)定劑的情況下，納米粒容易發(fā)生聚集，粒徑增大；不同用量的F68(泊洛薩姆188)制備的布洛芬立方液晶粗分散溶液效果欠佳，易團(tuán)聚；而不同用量的F127制備的布洛芬立方液晶粗分散溶液無團(tuán)聚、易于分散，當(dāng)PYT:F127為10:1時，制備的布洛芬立方液晶納米粒的粒徑小、分布均勻而且穩(wěn)定，放置3天后，均未出現(xiàn)聚集現(xiàn)象，PYT:F127的比例過小難以起到穩(wěn)定劑的作用，過大則自身容易破壞立方液晶中不連續(xù)的雙水通道以及封閉的脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)。由于立方液晶納米粒的粒徑大小是影響口服吸收的重要參數(shù)，它影響著粒子在腸上皮細(xì)胞的攝取，從而會導(dǎo)致不同的口服吸收效果，主要因為粒徑小的粒子能被腸上皮細(xì)胞內(nèi)吞轉(zhuǎn)運到細(xì)胞內(nèi)，而粒徑大的粒子不易被細(xì)胞內(nèi)吞，因此優(yōu)選F127為最佳穩(wěn)定劑，最佳比例為F127：PYT＝1:10。

表2穩(wěn)定劑對布洛芬立方液晶粗分散溶液的影響

表3穩(wěn)定劑對立方液晶納米粒的影響

實施例3

按質(zhì)量比12:100:10稱取布洛芬、植烷三醇和F127，按實施例1的方法制備布洛芬立方液晶納米粒，區(qū)別在于所采用均質(zhì)壓力分別為670bar,800bar，1200bar和1500bar；均質(zhì)次數(shù)分別為3,5和9次。

測定本實施例制備的布洛芬立方液晶納米粒，測定方法同實施例1。結(jié)果見表4。結(jié)果表明，不同的均質(zhì)壓力和次數(shù)的條件下，布洛芬立方液晶納米粒都具有較小的粒徑和PDI，其中，當(dāng)均質(zhì)壓力為1200bar，均質(zhì)次數(shù)為9次時，粒徑最小。因此，制備布洛芬立方液晶納米粒的高壓均質(zhì)的最佳條件為：均質(zhì)壓力1200bar，均質(zhì)循環(huán)次數(shù)9次。

表4布洛芬立方液晶納米粒的粒徑(n＝3)

實施例4:布洛芬立方液晶納米粒凍干粉的制備

按質(zhì)量比12:100:10稱取布洛芬、植烷三醇和F127，按實施例1的方法制備布洛芬立方液晶納米粒溶液，取立方液晶納米粒溶液2mL，加入0.1g凍干保護(hù)劑(甘露醇)，充分溶解后，放入-20℃冰箱預(yù)凍12h，然后放置冷凍干燥機中-50℃冷阱溫度，真空度為0.1Mbar條件下凍干24h，即得布洛芬立方液晶納米粒凍干粉末。所得粉末表面光滑，色澤均勻，無花斑，重分散性好。

在其他實施例中，凍干保護(hù)劑還可以是蔗糖、葡糖糖或乳糖。

實施例5:布洛芬立方液晶納米粒的形態(tài)與粒徑表征

按質(zhì)量比12:100:10稱取布洛芬、植烷三醇和F127，按實施例1的方法制備布洛芬立方液晶納米粒溶液，采用Zetasizer Nano ZS90測制備的布洛芬立方液晶納米粒的粒徑，并采用原子力學(xué)顯微鏡(Atomic force microscopy，AFM)和冷凍透射電鏡(Cryo-TEM)表征其形態(tài)和粒子大小。

粒徑測量方法同實施例1。結(jié)果(見圖6)表明，其粒徑為238.1±2.8nm，PDI為0.056±0.007。

原子力學(xué)顯微鏡表征方法:將布洛芬立方液晶納米粒滴在干凈的云母片上，孵化5min，然后用去離子水沖洗沒有被吸附的納米粒，自然晾干后用原子力學(xué)顯微鏡掃描成像、觀察。結(jié)果(見圖7A)表明，布洛芬立方液晶納米粒呈球形或類球形，粒徑大小分布均勻，與所測粒徑分布基本一致。

冷凍透射電鏡(Cryo-TEM)表征方法:將布洛芬立方液晶納米粒溶液滴加到銅網(wǎng)上，直至立方晶納米粒完全吸附在銅網(wǎng)上形成薄膜，用磷鎢酸負(fù)染色，迅速放到液態(tài)乙烷中速凍，速凍后的銅網(wǎng)放置在冷阱，-172℃下透射電鏡觀察立方液晶納米粒形態(tài)，CCD攝像機(Gatan 832)拍攝照片。結(jié)果(見圖7B)表明，布洛芬立方液晶納米粒平均粒徑在230nm左右，與Zetasizer Nano ZS90測得粒徑大小基本一致。大量有序的立方液晶納米粒，呈現(xiàn)圓整的形狀，顯示納米粒子具有典型的立方液晶結(jié)構(gòu)。

實施例6:布洛芬在立方液晶納米粒體系中的晶型測定

采用DSC表征布洛芬在立方液晶納米粒中的存在狀態(tài),分別取適量(3-5mg)布洛芬原料藥、空白立方液晶納米粒凍干粉、空白立方液晶納米粒凍干粉和藥物的物理混合物及布洛芬立方液晶納米粒凍干粉(實施例4)進(jìn)行DSC分析，升溫速度10℃/min，測量范圍30-150℃，空鋁盤為空白對照，爐內(nèi)氣體為氮氣。

DSC結(jié)果見圖8，布洛芬原料藥在77.8℃有一個明顯的熔融吸熱峰；布洛芬原料藥和空白立方液晶納米粒物理混合物在77.8℃有一個明顯的熔融吸熱峰；而布洛芬立方液晶納米粒在77.8℃的熔融吸熱峰基本上消失，與空白立方液晶納米粒圖譜一樣只顯示載體熔融峰。DSC結(jié)果顯示布洛芬在立方液晶納米粒中可能以分子狀態(tài)或無定形狀態(tài)存在，也由此說明藥物包封在立方液晶納米粒中。由Noyes-Whitney方程可知，藥物與溶出介質(zhì)的接觸面積是影響難溶性藥物溶出速率的關(guān)鍵參數(shù)。藥物包載進(jìn)液晶結(jié)構(gòu)中后，藥物由晶體顆粒轉(zhuǎn)變成無定型的分子態(tài)，均勻分布于親脂域中，雙連續(xù)水通道與脂質(zhì)雙分子層的巨大交界面積顯著增加了藥物的溶出表面積。因此，布洛芬以無定形態(tài)存在有利于其均勻分布于親脂域中，增加與溶出介質(zhì)的接觸面積，提高生物利用度。

實施例7:布洛芬立方液晶納米粒的穩(wěn)定性

考察實施例5中所制備的布洛芬立方液晶納米粒的穩(wěn)定性。將布洛芬立方液晶納米粒溶液在室溫下放置2個月，每月取樣一次，測定布洛芬立方液晶納米粒的粒徑和包封率。粒徑測定方法同實施例1，包封率測定方法同實施例1。

布洛芬立方液晶納米粒粒徑和包封率結(jié)果見圖9。布洛芬立方液晶納米粒溶液在室溫下放置2個月，外觀觀察呈乳白均勻溶液，未出現(xiàn)聚集、絮凝、結(jié)塊，布洛芬立方液晶納米粒的粒徑和包封率基本沒有變化。結(jié)果表明，本發(fā)明的布洛芬立方液晶納米粒溶液具有良好的物理穩(wěn)定性。

實施例8:布洛芬立方液晶納米粒的釋放行為

采用人工模擬胃液(pH1.2，不含酶)和腸液(pH7.4，不含酶)作為釋放介質(zhì)，研究布洛芬立方液晶納米粒的釋藥行為。分別取實施例1處方3、實施例1處方5(投藥量過大)、實施例2處方6(過量穩(wěn)定劑)所制備的布洛芬立方液晶納米粒溶液和布洛芬原料藥溶液(藥物溶于0.3％CMC-Na溶液中)置于透析袋(截留相對分子質(zhì)量14000Da)中，分別編號為實驗組1、對照組1、2和3，扎緊透析袋兩端，浸入盛有250mL pH1.2模擬胃液(不含酶)中釋放2h，pH7.4腸液(不含酶)中釋放24h，釋放條件為37±0.5℃，100rpm，于0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、12.0和24.0h定時取樣2mL，并補充等量等溫釋放介質(zhì)。所取樣品經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，采用HPLC(條件同實施例1)測定釋放液中布洛芬的含量，計算不同時間藥物的累積釋放百分率，繪制累積釋放曲線。

體外釋放結(jié)果見圖10，布洛芬立方液晶納米粒相對布洛芬原料藥具有明顯的緩釋作用。在人工模擬胃液(pH1.2，不含酶)中布洛芬原料藥2h內(nèi)釋放了34.24％，而實驗組1的布洛芬立方液晶納米粒釋放了3.22％(見圖10A)。在人工模擬腸液(pH7.4，不含酶)中布洛芬原料藥6h內(nèi)釋放了95％，而實驗組1的布洛芬立方液晶納米粒釋放了56.46％，24h內(nèi)實驗組1的布洛芬立方液晶納米粒釋放了大約85％(見圖10)。對照組2和3由于投藥量過大、穩(wěn)定劑含量過高，使得液晶納米粒的結(jié)構(gòu)有一定程度的破壞，釋放效果沒有實驗組1的理想，前期有一定程度的突釋，后期釋放不完全，24小時釋放小于70％。結(jié)果表明，本發(fā)明的布洛芬立方液晶納米粒具有良好的緩釋效果，具有良好的24h緩釋作用，這是由布洛芬立方液晶納米粒的獨特脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)決定的。藥物的釋放是從脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)擴散到內(nèi)水道層，這是藥物釋放的限速步驟，再從內(nèi)水道層結(jié)構(gòu)擴散到釋放介質(zhì)。

布洛芬立方液晶納米粒的釋放機制。分別以零級動力學(xué)方程、一級動力學(xué)方程和Higuchi方程(擴散方程)對實驗組1的布洛芬立方液晶納米粒溶液體外釋放數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，得到回歸方程見表5。按Higuchi方程擬合，相關(guān)系數(shù)(R2＞0.99)大，擬合效果較好，表明布洛芬立方液晶納米粒釋放是以擴散為主的釋藥方式，藥物分子從立方液晶納米粒的獨特脂質(zhì)雙層部位慢慢地擴散到立方液晶內(nèi)水道層，再到釋放介質(zhì)。可能由于布洛芬脂溶性和脂質(zhì)材料之間相容性好，導(dǎo)致藥物釋放更加緩慢。結(jié)果表明，相對于布洛芬原料藥，布洛芬立方液晶納米粒呈現(xiàn)明顯的緩釋效果，可顯著延長藥物在體內(nèi)的滯留時間，提高布洛芬口服生物利用度。

表5布洛芬立方液晶納米粒體外釋放模型(n＝3)

縮寫:y,累積釋放百分比；t,釋放時間；R,相關(guān)系數(shù).

實施例9:布洛芬立方液晶納米粒的藥代動力學(xué)實驗

本實施例考察布洛芬立方液晶納米粒的藥代動力學(xué)。取健康的比格犬12只，給藥前禁食12h，自由飲水。12只比格犬隨機平均分成4組:第一組以15mg/kg劑量的布洛芬立方液晶納米粒(處方組成和制備方法同實施例5)給予比格犬灌胃；第二組以15mg/kg劑量的布洛芬溶液(布洛芬溶于0.3％CMC-Na溶液中)給予比格犬灌胃作為對照組1；第三組給予實施例1處方5制備的布洛芬立方液晶納米粒給予比格犬灌胃作為對照組2；第四組給予實施例2處方1制備的布洛芬立方液晶納米粒給予比格犬灌胃作為對照組3。

分別在給藥0.17、0.33、0.67、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、8.0、12.0和24.0h后從比格犬后肢靜脈血管取血約3mL，全血置于涂有肝素的管中，5000rpm離心l0min分離血漿，-20℃保存；精密吸取空白血漿0.1mL于1.5mL離心管中，加入甲醇0.3mL，渦旋混合2min，12000rpm離心10min,取上清液20μL進(jìn)樣，HPLC測定。

HPLC條件，色譜柱:Odyssil C18(250×4.6mm，5μm)；流動相:甲醇:0.01mol·L-1；磷酸二氫鉀:磷酸＝400:100:0.05,(v/v)；柱溫:35℃；檢測波長:263nm；流速:1.0mL·min-1；進(jìn)樣量:20μL。

血藥濃度數(shù)據(jù)采用3P87藥代動力學(xué)軟件包進(jìn)行處理。布洛芬立方液晶納米粒(IBU-NPs)的相對生物利用度按下式計算:

F＝AUC_IBU-NPs/AUC_IBU×100％。

AUC_IBU-NPs為布洛芬立方液晶納米粒的藥時曲線下面積；AUC_IBU為布洛芬溶液的藥時曲線下面積。

兩種制劑均是以單室模型和權(quán)重為1/C²時擬合后與實際曲線最相符。模型的藥物動力學(xué)參數(shù)和相對生物利用度結(jié)果見表6。其中，C_max(血漿峰濃度)和T_max(血漿濃度達(dá)峰時間)采用實測值，AUC(藥時曲線下面積)由梯形法計算而得，其他參數(shù)由3p87軟件計算而得。

兩種制劑灌胃給藥后的平均藥時曲線見圖11。根據(jù)血藥濃度，計算出布洛芬口服后的C_max、T_max、t_1/2(半衰期)、AUC_0–∞等動力學(xué)參數(shù)，見表6。比格犬體內(nèi)血藥濃度結(jié)果顯示布洛芬立方液晶納米粒實驗組口服給藥后與同劑量的布洛芬溶液對照組相比，相對生物利用度為222％。布洛芬立方液晶納米粒實驗組血藥中布洛芬的達(dá)峰時間由布洛芬溶液對照組口服給藥后的0.84±0.19h提高到布洛芬立方液晶納米?？诜o藥后的1.82±0.31h。布洛芬血藥檢測時間由布洛芬溶液對照組口服給藥后的8h延長到布洛芬立方液晶納米粒口服給藥后的24h，布洛芬立方液晶納米粒的半衰期和滯留時間分別是布洛芬原料藥的3.09倍和5.39倍，顯示布洛芬立方液晶納米粒在體內(nèi)具有良好的緩釋作用，能明顯改變藥物在比格犬體內(nèi)的吸收過程，促進(jìn)藥物的吸收，可顯著提高布洛芬口服吸收的生物利用度。而對照組2和3雖然也可以一定程度上起到增大生物利用度的作用，但是由于沒有添加穩(wěn)定劑或者投藥量過高，造成了液晶結(jié)構(gòu)的不穩(wěn)定以及藥物的泄露，因此其提高程度比實驗組的低很多。

表6布洛芬口服后的藥代動力學(xué)參數(shù)(n＝3)

縮寫:AUC，藥時曲線下面積；T_1/2，消除半衰期；C_max，血漿峰濃度；T_max，血漿濃度達(dá)峰時間；MRT，平均駐留時間。

以上所述實施例的各技術(shù)特征可以進(jìn)行任意的組合，為使描述簡潔，未對上述實施例中的各個技術(shù)特征所有可能的組合都進(jìn)行描述，然而，只要這些技術(shù)特征的組合不存在矛盾，都應(yīng)當(dāng)認(rèn)為是本說明書記載的范圍。

以上所述實施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。