老年癡呆癥(另譯阿爾茨海默癥)與抑郁癥，是神經(jīng)病變中較受社會關(guān)注的兩大類疾病。老年癡呆癥，是一種進(jìn)行性發(fā)展的致死性神經(jīng)退行性疾病，臨床表現(xiàn)為認(rèn)知和記憶功能不斷惡化，日常生活能力進(jìn)行性減退，并有各種神經(jīng)精神癥狀和行為障礙。全世界有2400萬病患，早期最顯著的癥狀為健忘，通常表現(xiàn)為逐漸增加的短期記憶缺失。隨著病情的加重，病人的語言能力、空間辨別能力、認(rèn)知能力會逐步衰退。調(diào)查顯示，80歲以后15％的人有罹患癡呆性疾患的危險(xiǎn)。親族中有阿茲海默病患者的場合患病的幾率也相對要高。其中，更有13歲的年輕小女孩罹患老人癡呆癥的紀(jì)錄。抑郁癥，是一種以顯著而持久的心境低落為主要臨床特征的病癥，同時(shí)伴有失眠，記憶缺失，飲食失調(diào)等癥狀，嚴(yán)重者可出現(xiàn)自殺念頭和行為。多數(shù)病例有反復(fù)發(fā)作的傾向，每次發(fā)作大多數(shù)可以緩解，部分可有殘留癥狀或轉(zhuǎn)為慢性。據(jù)報(bào)道，人群中有16％的人在一生的某個(gè)時(shí)期會出現(xiàn)抑郁癥癥狀。若患者出現(xiàn)這些癥狀持續(xù)兩周以上，并且沒有明顯改善，可確診為抑郁癥。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì),抑郁癥已成為世界第4大疾患，并且預(yù)計(jì)到2020年,可能成為僅次于冠心病的第二大疾病。最為嚴(yán)重的是，抑郁癥患者不能適應(yīng)社會，注意力下降，是自殺的高危人群。目前，臨床研究發(fā)現(xiàn)，在老年人患者中，經(jīng)常出現(xiàn)抑郁癥與老年癡呆癥并發(fā)的現(xiàn)象，多表現(xiàn)為發(fā)病初期以抑郁癥狀為主，隨著疾病的發(fā)展，出現(xiàn)記憶缺失等老年癡呆癥的癥狀。這兩種疾病，不僅嚴(yán)重影響了老年人的生活質(zhì)量，還給老齡化社會帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)與社會負(fù)擔(dān)

老年癡呆癥與抑郁癥的發(fā)病機(jī)理雖尚未完全明了，但對其發(fā)病機(jī)理的認(rèn)識趨于統(tǒng)一，即都可以歸結(jié)為神經(jīng)退行性疾病，均與神經(jīng)元退化死亡密切相關(guān)。具體可歸結(jié)為如下幾種假說：(1)神經(jīng)元突觸間隙內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)五羥色胺(serotonin)，去甲腎上腺素(norepinepherine)，多巴胺(dopamine)含量降低,導(dǎo)致記憶缺失與情緒低落；(2)下丘腦-垂體-腎上腺-海馬通路(Hypothalamus-pituitary-adrenal gland pathway，HPA axis)調(diào)控紊亂，致使主管情緒與記憶的下丘腦(hypothalamus)與海馬神經(jīng)元(Hippocampus)損傷，壞死；(3)神經(jīng)生長因子(NGF)與腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)分泌不足導(dǎo)致神經(jīng)元生長異常，最終壞死。(4)腦中出現(xiàn)類淀粉斑以及神經(jīng)纖維糾結(jié)，致使神經(jīng)元壞死。

目前針對老年癡呆癥的藥物，臨床主要有(1)改善膽堿神經(jīng)傳遞藥物，如他克林，安理申，艾斯能，加蘭他敏等；(2)改善腦血液循環(huán)和腦細(xì)胞代謝的藥物，如腦復(fù)康等；(3)自由基清除劑和抗氧劑，如維生素E，維生素C等。這些藥物的靶標(biāo)主要是抑制膽堿酯酶以提高乙酰膽堿的在突觸中的相對含量，抑制自由基對神經(jīng)的傷害等。針對抑郁癥，現(xiàn)在普遍用于治療抑郁癥的藥物，均依據(jù)神經(jīng)遞質(zhì)假說，抑制神經(jīng)遞質(zhì)再攝取與抑制其在神經(jīng)元突觸間隙降解，以提高其在神經(jīng)突觸間隙的含量為靶標(biāo)，進(jìn)行藥物設(shè)計(jì)與開發(fā)。當(dāng)前臨床上常用的治療抑郁癥的藥物，包括：(1)三環(huán)類抗抑郁藥(TCAs)，如米帕明等(2)五羥色胺攝取抑制劑(SSRI)，如氟西汀等；(3)單胺氧化酶抑制劑(MAOI)。但是，用于治療老年癡呆癥與抑郁癥的藥物都存在許多副作用，如體重增加、性功能降礙、嗜睡、虛弱等，對心臟毒性較大，可引起心肌損害，并且需要長期用藥。同時(shí)，由于這兩種疾病發(fā)病機(jī)理復(fù)雜，現(xiàn)有的藥物往往效果較差。例如現(xiàn)有的用于抗抑郁的神經(jīng)遞質(zhì)攝取抑制劑，至少有30％的抑郁癥病人無效。更為嚴(yán)重的是，一些抗抑郁藥物，例如氟西汀，長期使用后病人易于產(chǎn)生自殺傾向。另外，由于兩種疾病多呈伴生狀態(tài)，病人往往同時(shí)需要服用兩種不同的藥物，不僅用藥不便，更帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。種種不便，使醫(yī)學(xué)界更為迫切的希望在傳統(tǒng)草藥中尋找可從多靶點(diǎn)，多環(huán)節(jié)起作用的有效治療方法與藥物，用于同時(shí)治療老年癡呆癥與抑郁癥。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明目的：本發(fā)明的目的在于提供一種增強(qiáng)記憶，改善抑郁情緒作用的中藥散劑。本發(fā)明的另一目的是提供上述中藥散劑的制備方法和應(yīng)用。

技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：

一種具有增強(qiáng)記憶，改善抑郁情緒作用的中藥散劑，它由麋鹿角粉碎制成。

一種具有增強(qiáng)記憶與改善抑郁情緒作用的中藥散劑，其特征在于，它由麋鹿角經(jīng)過水提取或有機(jī)溶劑提取得到。

作為優(yōu)選方案，所述的具有增強(qiáng)記憶與改善抑郁情緒作用的中藥散劑，其特征在于，所述的有機(jī)溶劑為乙醇，提取方法為回流、浸漬或滲漉。

本發(fā)明所述的具有增強(qiáng)記憶，改善抑郁情緒作用的中藥散劑的制備方法，它包括以下步驟：

(1)取麋鹿角藥材，洗凈烘干。

(2)取步驟(1)中洗凈烘干的麋鹿角藥材，以粉碎機(jī)粉碎，過篩，即得。

作為優(yōu)選方案，所述的烘干條件為：烘干溫度60℃，時(shí)間為8小時(shí)；步驟(2)所述的過篩條件為：100目。

本發(fā)明所述的具有增強(qiáng)記憶，改善抑郁情緒作用的中藥散劑的制備方法，它包括以下步驟：

(1)取麋鹿角藥材，加入6～15倍量的水或乙醇提取1～3次，每次2～8小時(shí)；

(2)取步驟(1)中提取物濃縮、干燥，即得。

本散劑來自麋鹿角藥材的新用途認(rèn)識，在動物模型上均可有效改善神經(jīng)退行性癡呆癥與抑郁癥的主要病理環(huán)節(jié)，增強(qiáng)動物記憶能力，改善抑郁情緒；降低血液中β淀粉樣蛋白含量，降低tau蛋白的磷酸化水平，增強(qiáng)皮層神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達(dá)，降低乙酰膽堿酯酶活性，提高腦組織SOD水平。在細(xì)胞模型上表現(xiàn)出增加神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達(dá)。上述研究表明本發(fā)明提供的中藥散劑對神經(jīng)退行性癡呆與抑郁癥有顯著的改善作用，可用于制備具有改善神經(jīng)退行性癡呆癥與抑郁癥的藥品或保健品，適合神經(jīng)退行性癡呆癥與抑郁癥的患者。

本發(fā)明所述的具有增強(qiáng)記憶，改善抑郁情緒作用的中藥散劑在制備神經(jīng)退行性癡呆癥與抑郁癥中的應(yīng)用，可結(jié)合藥學(xué)上可接受的載體制成散劑、片劑、丸劑、湯劑、顆粒劑、煎膏劑或浸膏劑劑型的藥物。

附圖說明

圖1為中藥散劑對多因素神經(jīng)損傷小鼠潛伏期的影響的柱狀圖。

圖2為中藥散劑對多因素神經(jīng)損傷小鼠腦內(nèi)膽堿酯酶活性測試結(jié)果的柱狀圖。

圖3為中藥散劑對多因素神經(jīng)損傷小鼠腦內(nèi)SOD活性測試結(jié)果的柱狀圖。

圖4為中藥散劑對多因素神經(jīng)損傷小鼠腦內(nèi)神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)影響的柱狀圖。

圖5為中藥散劑對血管癡呆大鼠潛伏期的影響的柱狀圖。

圖6為中藥散劑對血管癡呆大鼠腦內(nèi)神經(jīng)營養(yǎng)因子表達(dá)影響的柱狀圖。

圖7為中藥散劑對CUMS小鼠糖水消耗量的影響的柱狀圖。

圖8為中藥散劑對CUMS小鼠強(qiáng)迫游泳不動時(shí)間影響的柱狀圖。

圖9為中藥散劑對CUMS小鼠腦內(nèi)BDNF表達(dá)影響的柱狀圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對本發(fā)明的各種等價(jià)形式的修改均落于本申請所附權(quán)利要求所限定的范圍。

實(shí)施例1 一種具有增強(qiáng)記憶，改善抑郁情緒作用的中藥散劑的制備方法，包括如下步驟：

(1)取麋鹿角藥材，洗凈，于60℃烘干8小時(shí)；

(2)取步驟(1)中的麋鹿角藥材，以粉碎機(jī)粉碎，過100目篩即得。

實(shí)施例2 一種具有增強(qiáng)記憶，改善抑郁情緒作用的中藥散劑的制備方法，它包括以下步驟：

(1)取麋鹿角藥材，加入10倍量的水回流提取3次，每次2小時(shí)；

(2)取步驟(1)中提取物濃縮、干燥，即得。

實(shí)施例3 一種具有增強(qiáng)記憶，改善抑郁情緒作用的中藥散劑的制備方法，它包括以下步驟：

(1)取麋鹿角藥材，加入10倍量的乙醇回流提取2次，每次6小時(shí)；

(2)取步驟(1)中提取物濃縮、干燥，即得。

實(shí)施例4 抗神經(jīng)退行性癡呆癥實(shí)驗(yàn)研究

一、實(shí)驗(yàn)材料與藥物

1.藥物和試劑

氯化鋁、硫酸亞鐵、氫溴酸東莨菪堿、D-半乳糖酶，石杉堿甲，均購自阿拉丁試劑(上海)有限公司。小鼠膽堿酯酶(ChE)試劑盒(A023)、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(A001-3)，均購自南京建成生物工程研究所。

2.實(shí)驗(yàn)儀器

水迷宮行為測試儀(上海吉量儀器有限公司)；酶標(biāo)儀(美國Perkin-Elmer公司)；BT125型電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；KQ-250E型超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)；Anke GL-16GII型離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。

3.實(shí)驗(yàn)動物

SPF級雄性昆明種小鼠，體重18～22g。購自南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1.造模與給藥

健康小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)5d后，隨機(jī)分為空白組、模型組、陽性對照組和實(shí)施例1制備得到的中藥散劑低、高濃度劑量組，每組8只，經(jīng)稱重顯示各組間體重差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。除空白組外，其余各組用多因素?fù)p傷造成記憶損傷，具體方式為小鼠每天腹腔注射D-半乳糖(120mg/kg)與東莨菪堿(1.0mg/kg)，口服灌胃氯化鋁(10mg/kg)與硫酸亞鐵(150mg/kg)，連續(xù)4周。模型組給以等體積生理鹽水。陽性組給以石杉堿甲(4mg/kg)。中藥散劑低劑量組為2g·kg^-1，高劑量組給藥劑量為4g·kg^-1，10d，給藥10天后，利用水迷宮實(shí)驗(yàn)進(jìn)行行為學(xué)測試。

2.藥效評價(jià)方法

(1)行為學(xué)測試方法

30d多因素復(fù)合損傷造模結(jié)束后，進(jìn)行連續(xù)4天的Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)，以測試其空間記憶能力。將水迷宮內(nèi)水溫調(diào)到25±℃，水深約20cm，保持學(xué)習(xí)、訓(xùn)練和測試時(shí)水迷宮平臺和周圍物體位置固定不變。讓小鼠在水迷宮內(nèi)自由游120s,然后引導(dǎo)其找到水下平臺，讓其處于平臺上10s。此操作一天進(jìn)行2次，時(shí)間間隔2h以上。每天訓(xùn)練2個(gè)象限，訓(xùn)練共4天。第5天開始正式測試。讓小鼠從平臺所在象限對側(cè)象限的最遠(yuǎn)點(diǎn)背對平臺入睡，拍攝記錄小鼠找到平臺的全過程。共測試2天，每天測試2次。以各組小鼠自水迷宮起點(diǎn)游至平臺終點(diǎn)所需的時(shí)間(潛伏期)與上臺次數(shù)為衡量小鼠學(xué)習(xí)獲得與記憶鞏固能力的指標(biāo)。

(2)生化指標(biāo)測試

水迷宮測試結(jié)束后，取小鼠腦組織勻漿測定膽堿酯酶(ChE)和超氧化物歧化酶(SOD)活性，另用ELISA法測定皮層神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達(dá)。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)處理軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果以x±s表示，組間差異采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.行為學(xué)測試結(jié)果

多因素復(fù)合損傷30d，給予本發(fā)明實(shí)施例1制備得到的中藥散劑10天后，進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)測試。由圖1可以看出小鼠經(jīng)多重因素神經(jīng)損傷后，潛伏期顯著延長(P<0.01)，經(jīng)服用中藥散劑后，潛伏期顯著縮短(見圖1)。表明本發(fā)明實(shí)施例1制備得到的中藥散劑具有很好的對抗神經(jīng)損傷，增強(qiáng)記憶的作用。

2.膽堿酯酶活性測試結(jié)果

小鼠進(jìn)行完行為學(xué)測試后，處死取腦，制得勻漿，依據(jù)膽堿酯酶試劑盒的操作方法，測量小鼠腦內(nèi)膽堿酯酶活性。由圖2可以看出，模型組小鼠經(jīng)多重因素?fù)p傷后，腦內(nèi)膽堿酯酶活性顯著增高(P<0.01)。給以本發(fā)明提供的中藥散劑后，膽堿酯酶活性顯著降低(P<0.01)，其作用趨勢與陽性藥石杉堿甲作用相當(dāng)。表明本發(fā)明所提供的中藥散劑具有很好的降低膽堿酯酶活性，改善受損膽堿能神經(jīng)功能的作用。

3.SOD活性測試結(jié)果

小鼠進(jìn)行完行為學(xué)測試后，處死取腦，制得勻漿，依據(jù)SOD試劑盒的操作方法，測量小鼠腦內(nèi)SOD活性。由圖3可以看出，模型組小鼠經(jīng)多重因素?fù)p傷后，腦內(nèi)SOD活性顯著降低(P<0.01)。給以本發(fā)明中藥散劑后，SOD活性顯著增加(P<0.01)，其作用趨勢與陽性藥石杉堿甲作用相當(dāng)。表明本發(fā)明所提供的中藥散劑具有很好的抗氧化作用。

4.NGF測試結(jié)果

小鼠進(jìn)行完行為學(xué)測試后，處死取腦，分取大腦皮層，制得勻漿，利用western blotting技術(shù)，測量小鼠大腦皮層神經(jīng)營養(yǎng)因子(NGF)表達(dá)。由圖4可以看出，模型組小鼠經(jīng)多重因素?fù)p傷后，大腦皮層NGF表達(dá)顯著降低(P<0.01)。給以本發(fā)明提供的中藥散劑后，NGF表達(dá)顯著增加(P<0.01)，其作用趨勢與陽性藥石杉堿甲作用相當(dāng)。表明本發(fā)明所提供的中藥散劑具有很好的增強(qiáng)NGF表達(dá)，營養(yǎng)膽堿能神經(jīng)元，對抗神經(jīng)退行性癡呆的作用。

實(shí)施例5抗神經(jīng)退行性癡呆癥實(shí)驗(yàn)研究

一、實(shí)驗(yàn)材料與藥物

1.藥物和試劑

氯化鋁、硫酸亞鐵、氫溴酸東莨菪堿、D-半乳糖酶，石杉堿甲，均購自阿拉丁試劑(上海)有限公司。大鼠NGF ELISA試劑盒(LF-EK50289)購自Abfrontier公司。

2.實(shí)驗(yàn)儀器

動物行為測試系統(tǒng)，購自上海吉量軟件科技有限公司。Western blotting蛋白印跡分析系統(tǒng)購自Bio-RAD公司。酶標(biāo)儀購自美國Perkin-Elmer公司)。BT125型電子天平購自賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)。KQ-250E型超聲波清洗器購自昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)。Anke GL-16GII型離心機(jī)購自上海安亭科學(xué)儀器廠。

3.實(shí)驗(yàn)動物

SPF級雄性SD大鼠，體重180～220g。購自南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1.造模與給藥

健康大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)5d后，隨機(jī)分為空白組、模型組、陽性對照組和實(shí)施例1制備得到的中藥散劑低、高濃度劑量組，每組8只，經(jīng)稱重顯示各組間體重差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。除空白組外，其余各組均用雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎模型造成記憶，具體方式為將大鼠用10％水合氯醛腹腔注射麻醉后，仰臥位，頸部正中切口，分離雙側(cè)頸總動脈并結(jié)扎。術(shù)后1周為恢復(fù)期。而后，模型組給以等體積生理鹽水。陽性組給以石杉堿甲(0.6mg/kg)。中藥散劑低劑量組為2g·kg^-1，高劑量組給藥劑量為4g·kg^-1，10d。給藥10天后，利用水迷宮實(shí)驗(yàn)進(jìn)行行為學(xué)測試。

2.藥效評價(jià)方法

(1)行為學(xué)測試方法

大鼠血管性癡呆造模結(jié)束后，進(jìn)行連續(xù)4天的Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)，以測試其空間記憶能力。將水迷宮內(nèi)水溫調(diào)到25±℃，水深約20cm，保持學(xué)習(xí)、訓(xùn)練和測試時(shí)水迷宮平臺和周圍物體位置固定不變。讓大鼠在水迷宮內(nèi)自由游120s,然后引導(dǎo)其找到水下平臺，讓其處于平臺上10s。此操作一天進(jìn)行2次，時(shí)間間隔2h以上。每天訓(xùn)練2個(gè)象限，訓(xùn)練共4天。第5天開始正式測試。讓大鼠從平臺所在象限對側(cè)象限的最遠(yuǎn)點(diǎn)背對平臺入睡，拍攝記錄大鼠找到平臺的全過程。共測試2天，每天測試2次。以各組小鼠自水迷宮起點(diǎn)游至平臺終點(diǎn)所需的時(shí)間(潛伏期)與上臺次數(shù)為衡量大鼠學(xué)習(xí)與記憶鞏固能力的指標(biāo)。

(2)生化指標(biāo)測試

水迷宮測試結(jié)束后，取大鼠腦組織勻漿測定皮層神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達(dá)。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)處理軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果以x±s表示，組間差異采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.行為學(xué)測試結(jié)果

頸動脈結(jié)扎造模后，給予中藥散劑10天后，進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)測試。由圖1與圖2可以看大鼠雙側(cè)頸總動脈結(jié)扎后，與正常組動物比較，潛伏期顯著延長(P<0.01)，提示模型組動物記憶力受損。經(jīng)服用中藥散劑后，潛伏期顯著縮短(見圖5)。表明本中藥散劑具有很好的對抗神經(jīng)損傷與血供減少，增強(qiáng)記憶的作用。

2.NGF測試結(jié)果

大鼠進(jìn)行完行為學(xué)測試后，處死取腦，分取大腦皮層，制得勻漿，利用ELISA測量大鼠大腦皮層神經(jīng)營養(yǎng)因子(NGF)表達(dá)。由圖6可以看出，模型大鼠大腦皮層NGF表達(dá)顯著降低(P<0.01)。給以實(shí)施例中中藥散劑后，NGF表達(dá)顯著增加(P<0.01)，其作用趨勢與陽性藥石杉堿甲作用相當(dāng)。表明本發(fā)明所提供的中藥散劑具有很好的增強(qiáng)NGF表達(dá)，營養(yǎng)膽堿能神經(jīng)元，對抗神經(jīng)退行性癡呆的作用。

實(shí)施例6 抗抑郁癥實(shí)驗(yàn)研究

一、實(shí)驗(yàn)材料與藥物

1.藥物和試劑

蔗糖、氟西汀均購自阿拉丁試劑(上海)有限公司。小鼠BDNF ELISA試劑盒(LF-EK50009)購自Abfrontier公司。

2.實(shí)驗(yàn)儀器

動物行為測試系統(tǒng)，購自上海吉量軟件科技有限公司。Western blotting蛋白印跡分析系統(tǒng)購自Bio-RAD公司。酶標(biāo)儀購自美國Perkin-Elmer公司)。BT125型電子天平購自賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)。KQ-250E型超聲波清洗器購自昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)。Anke GL-16GII型離心機(jī)購自上海安亭科學(xué)儀器廠。

3.動物

ICR小鼠(全雄，20-22g)，購自南京青龍山動物繁殖場。動物飼養(yǎng)于SPF級環(huán)境中，自由飲食進(jìn)水。

二、實(shí)驗(yàn)方法

1.慢性應(yīng)激壓力抑郁小鼠模型構(gòu)建

所有小鼠適應(yīng)環(huán)境5d后，綜合體重、曠場和糖水基礎(chǔ)測試評分，選取評分相近的60只小鼠，隨機(jī)選取10只作為正常組，每籠5只飼養(yǎng)，其余50只小鼠均單籠孤養(yǎng)。

正常組小鼠不給予任何刺激。孤養(yǎng)的小鼠每天隨機(jī)給予兩種刺激，刺激因素包括：禁食24h，禁水24h，傾斜12h，束縛2h，230-240r.min^-1震蕩30min，光照24h，足部電擊(5次，每次2mA)。造模過程中，每周進(jìn)行糖水消耗量測試1次，監(jiān)測抑郁表型。待4周抑郁表型出現(xiàn)后，將50只刺激后的孤養(yǎng)小鼠隨機(jī)分為5組，即模型組、陽性藥組、中藥散劑低劑量組與高劑量組。正常組和模型組小鼠每天灌胃20mL·g^-1的蒸餾水，陽性組給予氟西汀(7.2mg·kg^-1)，中藥散劑低劑量組為2g·kg^-1，高劑量組給藥劑量為4g·kg^-1。按上述方法給藥7d后，用糖水消耗實(shí)驗(yàn)與強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)評價(jià)各組小鼠行為學(xué)得分，評價(jià)抗抑郁效果。

2.藥效評價(jià)方法

(1)行為學(xué)測試方法

a.糖水偏嗜實(shí)驗(yàn)

糖水消耗實(shí)驗(yàn)于慢性壓力應(yīng)激后4周進(jìn)行。正式測試前72小時(shí)，首先給以小鼠1％的蔗糖水兩瓶各200ml。24小時(shí)后，將其中1瓶1％的蔗糖水替換為白開水。然后將各籠小鼠禁食禁水24小時(shí)。正式實(shí)驗(yàn)開始，同時(shí)給予各籠小鼠1％蔗糖水與白開水各200ml，并稱取蔗糖水與白開水重量。3小時(shí)后，統(tǒng)計(jì)各籠小鼠的飲水量。糖水偏嗜度＝糖水消耗量/(白開水消耗量+糖水消耗量)x 100％。

b.強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)

糖水偏好實(shí)驗(yàn)結(jié)束24小時(shí)后，將小鼠放入高20cm、直徑14cm的圓柱型玻璃缸中，每缸1只，缸中水深10cm，水溫25℃。強(qiáng)迫游泳時(shí)間共計(jì)6min，待小鼠游泳2min后，統(tǒng)計(jì)后4min內(nèi)的不動時(shí)間(小鼠在水中停止掙扎，或呈漂浮狀態(tài)時(shí)間)。

3.生化指標(biāo)測試

水迷宮測試結(jié)束后，取小鼠大腦海馬勻漿測定皮層腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)的表達(dá)。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.行為學(xué)測試結(jié)果

由圖7所示，經(jīng)過4周的慢性應(yīng)激刺激后，模型組小鼠體重與正常組比較，顯著下降，糖水偏嗜度明顯低于正常組(p<0.01)，提示出現(xiàn)抑郁樣行為。給予陽性藥氟西汀與中藥散劑7天后，四組小鼠體重與模型組比較，均有增加，糖水?dāng)z入量均明顯高于模型組(p<0.01)，表現(xiàn)出抗抑郁作用。由圖8所示，統(tǒng)計(jì)強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中動物不動時(shí)間，模型組與正常組比較，漂浮時(shí)間顯著增加(p<0.01)，提示出現(xiàn)了明顯的抑郁行為。而給予氟西汀的治療組與中藥散劑組，漂浮時(shí)間均顯著縮短(p<0.01)，顯示出明顯的改善抑郁作用。

2.BDNF測試結(jié)果

大鼠進(jìn)行完行為學(xué)測試后，處死取腦，分取大腦皮層，制得勻漿，利用ELISA測量小鼠大腦海馬腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)表達(dá)。由圖9可以看出，模型小鼠大腦海馬BDNF表達(dá)顯著降低(P<0.01)。給以實(shí)施例中中藥散劑后，BDNF表達(dá)顯著增加(P<0.01)，其作用趨勢與陽性藥氟西汀作用相當(dāng)。表明本發(fā)明所提供的中藥散劑具有很好的增強(qiáng)BDNF表達(dá)，對抗抑郁癥的作用。

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明提供的中藥散劑具有顯著的對抗多因素所致的記憶損傷、改善抑郁情緒等功能，表明本發(fā)明提供的中藥散劑具有很好的對抗神經(jīng)退行性癡呆癥與抑郁癥的作用。與現(xiàn)有的對抗神經(jīng)退行性癡呆癥與抑郁癥的化學(xué)藥物相比，該散劑具有多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn)，可改變現(xiàn)有技術(shù)藥物僅作用于膽堿酯酶或氧化損傷等單一靶點(diǎn)，尤其還具有顯著的神經(jīng)營養(yǎng)功能，取得了很好的預(yù)料不到的技術(shù)效果。麋鹿角增強(qiáng)記憶，緩解抑郁情緒的功效未見報(bào)道。因此，該中藥散劑具有較高的創(chuàng)新性與藥物開發(fā)價(jià)值。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。