本發(fā)明涉及一種中藥組合物，具體涉及一種具有防治慢性腎衰功效的中藥組合物及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

慢性腎功能衰竭是多種腎臟疾病發(fā)展的最終結(jié)果，它是由于腎車位受損，腎功能下降進(jìn)而產(chǎn)生代謝產(chǎn)物和毒素堆積，水電解質(zhì)和酸堿平衡紊亂的緩慢而不可逆的病理過程，是一組常見的臨床綜合癥。腎衰竭患者由于功能腎單位減少，不能充分排泄體內(nèi)代謝廢物而在體內(nèi)蓄積導(dǎo)致機(jī)體病理生理改變從而引起各種癥狀和體征的毒性物質(zhì)，稱為尿毒癥毒素。

人們最初將尿素、肌酐等小分子溶質(zhì)主要的尿毒癥毒素，后來發(fā)現(xiàn)終末期腎臟病患者循環(huán)中有相對分子量為500～5000的物質(zhì)潴留，這類物質(zhì)與周圍神經(jīng)病變等尿毒癥癥狀有關(guān)。目前通常根據(jù)分子量和蛋白結(jié)合情況將尿毒癥毒素分為三大類：(1)小分子水溶性毒素，分子量一般不超過500D，如尿素和肌酐；(2)中分子類毒素，分子量大于500D；(3)與蛋白結(jié)合的毒素，該物質(zhì)本身分子量小于500D，但易于蛋白結(jié)合，形成中大分子，如硫酸吲哚酚、硫酸對甲酚等。

2003年歐洲尿毒癥毒素工作組提出25種蛋白結(jié)合型毒素，蛋白結(jié)合類毒素作為重要的尿毒癥毒素，越來越受到重視。蛋白結(jié)合毒素一旦與血漿蛋白結(jié)合就難以自動解離。硫酸吲哚酚、硫酸對甲酚是兩類蛋白結(jié)合類毒素的重要代表，除了對腎臟本身的毒性，還能損害其他器官和組織，如心臟、血管內(nèi)皮、腦組織等，與透析患者死亡率密切相關(guān)。研究證明隨著腎功能下降，體內(nèi)硫酸吲哚酚、硫酸對甲酚的血清總濃度會增加。

目前對于尿毒素的清除主要以透析治療來清除血液中的水溶性小分子尿毒素，然而這些方法皆無法有效清除血液中的蛋白結(jié)合型尿毒素；研究顯示，透析對水溶性小分子尿毒素清除效果很好，但對于蛋白結(jié)合型尿毒素清除率很低。因此如何高效清除蛋白結(jié)合類尿毒癥毒素成為研究人員關(guān)注的熱點(diǎn)，從中藥方劑中發(fā)現(xiàn)有效清除蛋白結(jié)合尿毒素體內(nèi)堆積的創(chuàng)新藥物具有重要意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

發(fā)明目的：本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種療效可靠，不良反應(yīng)低，能有效減輕慢性腎衰患者體內(nèi)尿毒素堆積，改善臨床癥狀的中藥組合物。本發(fā)明另一個目的是提供該中藥組合物的制備方法與應(yīng)用。

技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：

一種具有防治慢性腎衰功效的中藥組合物，其特征在于，它由下列重量份數(shù)的原料制成：黃蜀葵花10份，黃芪3-30份，虎杖3-15份，姜黃0.3-3份。

作為優(yōu)選方案，以上所述的具有防治慢性腎衰功效的中藥組合物，它由下列重量份數(shù)的原料制成：黃蜀葵花10份，黃芪3-10份，虎杖5-10份，姜黃1-3份。

作為優(yōu)選方案，以上所述的具有防治慢性腎衰功效的中藥組合物，它由下列重量份數(shù)的原料制成：黃蜀葵花10份，黃芪3份，虎杖5份，姜黃2份。

一種具有防治慢性腎衰功效的中藥組合物制劑，按重量份數(shù)取黃蜀葵花，黃芪，虎杖和姜黃的提取物和藥學(xué)上可接受的載體制成口服制劑。

作為優(yōu)選方案，所述的口服制劑為顆粒劑、片劑、膠囊劑、粉針劑或注射劑等。

本發(fā)明所述的具有防治慢性腎衰功效的中藥組合物的制備方法，其包括以下步驟：

取黃蜀葵花，黃芪，虎杖和姜黃藥材倒入回流提取灌，加入藥材10～20倍量水浸漬，待全部藥材充分濕潤后開始加熱，加熱至完全沸騰時，保沸提取1～3小時，過濾，濾渣再加入10～20倍量的85％～95％乙醇，繼續(xù)加熱，待完全沸騰后，保沸提取1～3小時，過濾，合并濾液，濃縮，得濃縮液。

本發(fā)明所述的具有防治慢性腎衰功效的中藥組合物在制備治療慢性腎衰藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明所述的具有防治慢性腎衰功效的中藥組合物在制備減輕慢性腎衰患者尿毒素體內(nèi)堆積或蛋白結(jié)合型尿毒素體內(nèi)堆積藥物中的應(yīng)用。所述尿毒素為蛋白結(jié)合型尿毒素。

本發(fā)明所述的具有防治慢性腎衰功效的中藥組合物在制備減輕慢性腎衰患者蛋白結(jié)合型尿毒素硫酸對甲酚體內(nèi)堆積藥物中的應(yīng)用。所述蛋白結(jié)合型尿毒素為硫酸對甲酚。

本發(fā)明所述的具有防治慢性腎衰功效的中藥組合物在制備減輕慢性腎衰患者腸道內(nèi)蛋白結(jié)合型尿毒素前體生成藥物中的應(yīng)用。蛋白結(jié)合型尿毒素前體為對甲酚。

本發(fā)明所述的具有防治慢性腎衰功效的中藥組合物在制備減輕慢性腎衰患者腸道內(nèi)蛋白結(jié)合型尿毒素前體對甲酚生成藥物中的應(yīng)用。

如把本發(fā)明提供的中藥組合物制成注射液時，按上述重量份數(shù)比取黃蜀葵花，黃芪，虎杖和姜黃加水煎煮兩次，每次1小時，濾過，濾液合并濃縮為相對密度1.20-1.30(65℃)的清膏，加乙醇至含醇量75-80％，冷藏，取上清液，回收乙醇并濃縮為相對密度1.20-1.30的清膏，加乙醇至含醇量80-85％，冷藏，取上清液，加入約為投料量1％的活性炭，攪拌30分鐘，靜置，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，加水至配制量，攪勻，加熱煮沸40-50分鐘，冷藏，濾過，濾液濃縮至配制量的1/3，冷藏，濾過，濾液用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH值至6.5-7.5，加熱煮沸40-50分鐘，加入約為藥液量0.5％的活性炭，攪勻，藥液溫度降至50-60℃，靜置，濾過，濾液經(jīng)超濾后，加入約為藥液量0.5％的活性炭，煮沸，濾過，濾液加注射用水至1000ml，調(diào)節(jié)pH值至6.5-7.5，濾過，灌封，滅菌。

有益效果：本發(fā)明提供的具有防治慢性腎衰功效的中藥組合物和現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)：

目前對于尿毒素的清除主要以透析治療來清除血液中的水溶性小分子尿毒素，然而這些方法皆無法有效清除血液中的蛋白結(jié)合型尿毒素；研究顯示，透析對水溶性小分子尿毒素清除效果很好，但對于蛋白結(jié)合型尿毒素清除率很低。目前也有口服吸附劑(AST120)，口服吸附劑雖然能吸附腸道尿毒素前體從而減少體內(nèi)尿毒素含量，但其服用劑量大(6-9克/天)，容易造成便秘等不良反應(yīng)，且尚在臨床試驗(yàn)階段。同時也有用含有大黃等泄下中藥的中醫(yī)方劑通過灌腸減少體內(nèi)尿毒素，然而，長期使用會導(dǎo)致反復(fù)腹瀉及腸道電解質(zhì)紊亂等不良反應(yīng)。本發(fā)明所提供的中藥組合物，可以減少腸道內(nèi)蛋白結(jié)合型尿毒素前體的生成，從而減少體內(nèi)多個組織器官中蛋白結(jié)合型尿毒素的含量。目前透析及其他清除方式，只能被動清除體內(nèi)源源不斷生成的尿毒素，不能從根源解決問題。與之相比，本發(fā)明所述中藥組合物可以從源頭減少尿毒素前體的生成，從根本減少尿毒素的生成，且具有顯著的腎臟損傷保護(hù)作用，具有更優(yōu)的治療策略。

本發(fā)明立足祖國醫(yī)藥學(xué)方劑配伍理論，在大量實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)上，篩選出由黃蜀葵花、黃芪、虎杖和姜黃等中藥組成的組合物，具有很好的減輕蛋白結(jié)合型尿毒素前體在腸道內(nèi)的生成，以及減輕蛋白結(jié)合型尿毒素的體內(nèi)堆積作用，對慢性腎衰具有很好的保護(hù)和改善作用，可以緩解慢性腎衰的臨床癥狀，本發(fā)明對于慢性腎衰的臨床治療具有重要的應(yīng)用前景。

腎虛是慢性腎臟病的基礎(chǔ)，而維護(hù)腎氣是慢性腎臟病的基本治療方法之一。黃蜀葵花具有清熱利濕、利尿通淋、活血止血、消腫解毒等功效。但其作用偏向清熱利濕，益氣作用稍弱。黃芪作為補(bǔ)氣之圣藥，在治療腎臟病中具有重要的作用。慢性腎炎患者常出現(xiàn)水腫癥狀，方中黃芪、黃蜀葵花、虎杖均具利水消腫、利尿通淋的功效。慢性腎炎病程較長,符合“久病入絡(luò)”、“久病必瘀”的傳統(tǒng)理論,而瘀血既成之后，又常使蛋白尿頑固難消，非活血化瘀不可取效。加入姜黃取其破血行氣的功效，達(dá)到去瘀行氣的作用。

附圖說明

圖1各實(shí)驗(yàn)組24小時尿蛋白排泄量。

圖2各組腎臟HE染色

圖3各組腸道HE染色

圖4各組腎臟PAS染色

圖5為各實(shí)驗(yàn)組的血中尿毒素硫酸對甲酚濃度。

圖6為各實(shí)驗(yàn)組的腎臟中尿毒素硫酸對甲酚濃度。

圖7為各實(shí)驗(yàn)組的肝臟中尿毒素硫酸對甲酚濃度。

圖8為各實(shí)驗(yàn)組的糞便中尿毒素前體對甲酚的濃度。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對本發(fā)明的各種等價形式的修改均落于本申請所附權(quán)利要求所限定的范圍。

實(shí)施例1

1、一種具有防治慢性腎衰功效的中藥組合物，它由下列重量份數(shù)的原料制成：黃蜀葵花10份，黃芪3份，虎杖5份，姜黃2份。

2、具有防治慢性腎衰功效的中藥組合物的制備方法，其包括以下步驟：

取黃蜀葵花10份，黃芪3份，虎杖5份，姜黃2份藥材倒入回流提取灌，加入藥材20倍量水浸漬，待全部藥材充分濕潤后開始加熱，加熱至完全沸騰時，保沸提取2小時，過濾，濾渣再加入15倍量的體積濃度95％乙醇，繼續(xù)加熱，待完全沸騰后，保沸提取2小時，過濾，合并濾液，濃縮，得濃縮液。

實(shí)施例2

1、一種具有防治慢性腎衰功效的中藥組合物，它由下列重量份數(shù)的原料制成：黃蜀葵花10份，黃芪10份，虎杖10份，姜黃3份。

2、具有防治慢性腎衰功效的中藥組合物的制備方法，其包括以下步驟：

取黃蜀葵花10份，黃芪10份，虎杖10份，姜黃3份藥材倒入回流提取灌，加入藥材20倍量水浸漬，待全部藥材充分濕潤后開始加熱，加熱至完全沸騰時，保沸提取2小時，過濾，濾渣再加入15倍量的體積濃度95％乙醇，繼續(xù)加熱，待完全沸騰后，保沸提取2小時，過濾，合并濾液，濃縮，得濃縮液。

實(shí)施例3

1、一種具有防治慢性腎衰功效的中藥組合物，其特征在于，它由下列重量份數(shù)的原料制成：黃蜀葵花10份，黃芪3份，虎杖3份，姜黃0.3份。

2、具有防治慢性腎衰功效的中藥組合物的制備方法，其包括以下步驟：

取黃蜀葵花10份，黃芪30份，虎杖15份，姜黃3份藥材倒入回流提取灌，加入藥材15倍量水浸漬，待全部藥材充分濕潤后開始加熱，加熱至完全沸騰時，保沸提取3小時，過濾，濾渣再加入10倍量的體積濃度95％乙醇，繼續(xù)加熱，待完全沸騰后，保沸提取2小時，過濾，合并濾液，濃縮，得濃縮液。

實(shí)施例4中藥組合物減輕5/6腎切致慢性腎衰模型大鼠體內(nèi)尿毒素堆積，改善慢性腎衰模型的腎臟損傷實(shí)驗(yàn)

1.實(shí)驗(yàn)方法

1.1實(shí)驗(yàn)方案

將大鼠隨機(jī)分為N正常組,M模型組,HK陽性藥組,實(shí)施例1組，實(shí)施例2組，實(shí)施例3組，每組8只。模型及給藥組均采用5/6腎臟切除法復(fù)制慢性腎衰大鼠模型。根據(jù)大鼠體重每天在固定時間給藥(9:00am-12:00am)，造模成功后連續(xù)給藥8周。第一次給藥前禁食12小時，自由飲水。N組(正常組)大鼠每天規(guī)律給水喂食；M組(模型組)大鼠每天灌胃水溶液；HK組(陽性藥組)大鼠每天灌胃給予黃葵膠囊內(nèi)容物混懸液(750mg/kg)；實(shí)施例1組大鼠每天灌胃給予本發(fā)明按照實(shí)施例1制備的組合物混懸液(400mg/kg)；實(shí)施例2組大鼠每天灌胃給予本發(fā)明按照實(shí)施例2制備的組合物混懸液(400mg/kg)；實(shí)施例3組大鼠每天灌胃給予本發(fā)明按照實(shí)施例3制備的組合物混懸液(400mg/kg)；給藥8周后將所有的大鼠處死，取血、肝臟、腎臟、糞便。

1.2腎臟損傷評分

采用過碘酸雪夫染色(PAS染色)方法，HE染色方法評價腎臟損傷程度。用Image-Pro Plus V6.0(For windows)計(jì)算陽性染色的面積和累積光密度值(IOD)，用陽性染色面積和累積光密度值表示腎臟損傷。

在光學(xué)顯微鏡下觀察胃黏膜的病理部分，并判斷：黏膜上皮細(xì)胞有無變性、壞死，細(xì)胞固縮；黏膜固有層有無充血、水腫，炎細(xì)胞浸潤；黏膜下層有無充血、水腫、炎細(xì)胞浸潤。根據(jù)病變程度記分：0分(無明顯病變)，0.5分(輕微)，1分(輕度)，2分(中度)，3分(重度)。最后將黏膜上皮、黏膜固有層和黏膜下層的病變得分相加，得到每只動物的胃黏膜損傷評分。

1.3模型大鼠血漿、腎臟、肝臟中硫酸吲哚酚，硫酸對甲酚含量分析

采用UPLC-TQ/MS方法分析大鼠血漿、腎臟、肝臟中硫酸吲哚酚，硫酸對甲酚含量。血漿與乙腈以體積比1:3混合，在13000rpm/min條件下離心10min沉淀蛋白，上清進(jìn)樣分析。腎臟、肝臟低溫勻漿后，離心取上清，以體積比1:3混合，在13000rpm/min條件下離心10min沉淀蛋白，上清進(jìn)樣分析。

1.4模型大鼠糞便中對甲酚，吲哚酚的含量分析

樣品處理：大鼠糞便按1:4比例加水，勻漿90s后13000rpm離心取上清，上清100ul+10ul內(nèi)標(biāo)PE(200ug/ml)與300ul乙腈混勻，13000rpm離心取上清進(jìn)樣，進(jìn)樣體積5ul，熒光檢測器檢測，激發(fā)波長260nm，發(fā)射波長300nm。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±S.D表示。組間差異采用Student T檢驗(yàn)。顯著性差異設(shè)定為P<0.05。2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1本發(fā)明中藥組合物對模型大鼠24h尿蛋白排泄量的影響

與正常大鼠相比，模型大鼠24h尿蛋白排泄量顯著增加，本發(fā)明中藥組合物給藥8周后可顯著降低模型大鼠24h尿蛋白排泄量。

圖2本發(fā)明中藥組合物對模型大鼠腎臟炎癥的保護(hù)作用(HE染色評分)

HE染色評分結(jié)果顯示，模型大鼠腎臟炎癥程度增加，本發(fā)明中藥組合物可顯著改善模型大鼠的腎臟炎癥程度。

圖3本發(fā)明中藥組合物對模型大鼠腸道損傷的保護(hù)作用(HE染色評分)

HE染色評分結(jié)果顯示，模型大鼠在腎臟損傷的同時，出現(xiàn)腸道炎癥。與文獻(xiàn)報(bào)道一致，慢性腎病模型大鼠體內(nèi)由于尿毒素?zé)o法排泄，在體內(nèi)堆積，導(dǎo)致腸道內(nèi)毒素增加，破壞腸道上皮。本發(fā)明中藥組合物各劑量可顯著改善模型大鼠的腸道炎癥程度。

圖4本發(fā)明中藥組合物對模型大鼠腎臟基底膜沉積的影響(PAS染色及病理評分)

從腎小球的染色圖片及細(xì)胞外基質(zhì)的評分可以看到，相比空白對照組大鼠的腎小球，模型組大鼠腎小球表現(xiàn)為明顯的細(xì)胞外基質(zhì)積累(p<0.01)，說明造模成功；陽性藥組大鼠腎小球細(xì)胞外基質(zhì)積累明顯少于模型組(p<0.01)，但多于空白對照組；給藥組大鼠的腎小球細(xì)胞外基質(zhì)積聚都少于模型組(p<0.01)，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，和陽性藥組相比，實(shí)施例1,2組腎小球細(xì)胞外基質(zhì)積聚顯著減少(p<0.05)，實(shí)施例3組和陽性藥組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

這些結(jié)果表明本發(fā)明中藥組合物能夠改善腎纖維化的狀況，對5/6腎切除導(dǎo)致的慢性腎衰具有治療作用，且治療效果優(yōu)于黃葵膠囊。

圖5本發(fā)明中藥組合物對模型大鼠血漿PCS堆積的影響(UPLC-TQ/MS分析)

從大鼠血漿中硫酸對甲酚(PCS)分析結(jié)果可以看出，模型組大鼠血漿中PCS含量顯著增加，本發(fā)明中藥組合物給藥后可顯著降低血中PCS的含量。提示本發(fā)明中藥組合物可顯著降低血中PCS蓄積。

圖6本發(fā)明中藥組合物對模型大鼠腎臟PCS轉(zhuǎn)運(yùn)的影響(UPLC-TQ/MS分析)

從大鼠腎臟中硫酸對甲酚(PCS)分析結(jié)果可以看出，模型組大鼠腎臟中PCS含量顯著增加，本發(fā)明中藥組合物給藥后可顯著降低腎臟中PCS的含量。提示本發(fā)明中藥組合物可顯著降低腎臟中PCS轉(zhuǎn)運(yùn)及蓄積。

圖7本發(fā)明中藥組合物對模型大鼠肝臟中PCS合成的影響(UPLC-TQ/MS分析)

從大鼠肝臟中硫酸對甲酚(PCS)分析結(jié)果可以看出，模型組大鼠肝臟中PCS含量顯著增加，本發(fā)明中藥組合物給藥后可顯著降低肝臟中PCS的含量。提示本發(fā)明中藥組合物可顯著降低肝臟中PCS合成及蓄積。

圖8本發(fā)明中藥組合物對模型大鼠糞便中PC生成的影響(HPLC-熒光法分析)

從大鼠糞便中硫酸對甲酚的前體對甲酚(PC)分析結(jié)果可以看出，模型組大鼠糞便中PC含量顯著增加，本發(fā)明中藥組合物低劑量給藥后可顯著降低糞便中PC含量。結(jié)合本發(fā)明中藥組合物給藥后可降低血、肝臟、腎臟中PCS的含量，提示本發(fā)明中藥組合物可通過降低腸道內(nèi)PC合成，減少了PCS的前體，從而減輕PCS的體內(nèi)堆積。

并且從以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果對比表明，采用本發(fā)明最優(yōu)重量比(黃蜀葵花10份，黃芪3份，虎杖5份，姜黃2份)時具有最優(yōu)的防治腎衰的功效，取得了非常好的技術(shù)效果。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理和構(gòu)思的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。