本發(fā)明公開(kāi)了一種無(wú)刺激人造皮膚的制備方法，涉及人造皮膚制備技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

人造皮膚(亦稱人工皮)，早有問(wèn)世，60年代，國(guó)內(nèi)外曾興起一股″人工皮熱″，其品種繁多，歸納起來(lái)，目前全世界已研究應(yīng)用過(guò)的人造皮膚，有以下三類：(1)高分子塑料，合成多肽，人造纖維等合成材料制成的薄膜狀，海棉狀人造皮膚；(2)再生蛋白和動(dòng)物組織羊膜，腹膜，胎膜等生物材料制成的人造皮膚；(3)全聚薄膜制成的薄片狀人造皮膚。上述各類人造皮膚，在臨床應(yīng)用中，比如篩狀植皮法是將擬植皮的人造皮膚切開(kāi)許多小口，在一定的張力條件下，固定于創(chuàng)面，即可增加皮片的面積，同時(shí)也便于滲出液引流。

最新醫(yī)學(xué)研究表明，在臨床治療中，為加快傷口愈合，促進(jìn)肌體細(xì)胞生長(zhǎng)，皮膚傷處需保持一定的潤(rùn)濕狀態(tài)，即要求傷口處既不能過(guò)分干燥，又不能過(guò)度潮濕。以上幾種工藝方案制成的人造皮膚在治療過(guò)程中，由于其本身結(jié)構(gòu)的限制，往往不能給皮膚傷處營(yíng)造一個(gè)適合皮膚、肌體生長(zhǎng)的環(huán)境，從而影響療效。皮片生長(zhǎng)后，這些小孔即自行愈合，遺留的斑狀疤痕也可逐漸消退。但是，在植皮的過(guò)程中常會(huì)出現(xiàn)在植皮時(shí)，人造皮膚從切開(kāi)的小口處被撕裂，從而使植皮失敗。而其他的方法都存在不同方面和不同程度的缺點(diǎn)，或因粘附不牢，強(qiáng)度太差；或因抗原性太強(qiáng)，刺激性大；或因通透性能不好，易感染，或因阻礙自生體皮生長(zhǎng)，疤痕累累；或因原料來(lái)源不易，成本太高；或因工藝繁什，制造困難，又難于貯存等，均先后被淘汰?！迦斯て帷逯饾u冷卻，因此，現(xiàn)在臨床單位在治療燒傷實(shí)踐中，仍采用一些傳統(tǒng)方法，造成了患者疼痛，疤痕過(guò)大，治療期長(zhǎng)等現(xiàn)象。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問(wèn)題：針對(duì)現(xiàn)今人造皮膚抗原性強(qiáng)，刺激性大，與人體皮膚相容性不高的問(wèn)題，提出了一種無(wú)刺激人造皮膚的制備方法，本發(fā)明利用混合酶酶解豆蟲肉中豐富的蛋白質(zhì)，再提取酶解后的氨基酸及多肽，通過(guò)提取的氨基酸中的羧基所構(gòu)成的肽鏈，能消化溶解變性蛋質(zhì)，對(duì)未變性的蛋白質(zhì)分解、變稀，易于引流排除，促進(jìn)肉芽組織新生，促進(jìn)皮膚愈合，減少對(duì)皮膚的刺激，同時(shí)以天然提取物殼聚糖作為抗菌物，添加蒲黃炭降低抗原抗體反應(yīng)，提高了人造皮膚與人體皮膚相容性，隨后添加海藻酸鈉、海藻纖維作等物質(zhì)，制備得無(wú)刺激人造皮膚。本發(fā)明有效解決了人造皮膚抗原性強(qiáng)，刺激性大，與人體皮膚相容性不高的問(wèn)題，取得了人造皮膚柔軟度、隨形性好，有強(qiáng)韌性，不易撕裂，潤(rùn)濕強(qiáng)度高的效果。

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

（1）取豆蟲放入擠肉機(jī)中擠出豆蟲肉，按質(zhì)量比1:3，取豆蟲肉和質(zhì)量分?jǐn)?shù)30％乙醇溶液放入酶解罐中，使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)25％鹽酸調(diào)節(jié)pH至4.5～5.5，再向酶解罐中加入豆蟲肉質(zhì)量7～9％的混合酶，設(shè)定溫度為36～40℃，以130r/min攪拌酶解7～9h；所述混合酶為胃蛋白酶和胰蛋白酶按質(zhì)量比2:3混合而成；

（2）在上述酶解結(jié)束后，對(duì)酶解罐中的酶解混合物進(jìn)行減壓過(guò)濾，收集過(guò)濾液，并放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，收集剩余液，放入真空濃縮罐中，濃縮至原體積的50～60％，收集濃縮液，使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至5.7～6.5，得無(wú)刺激人造皮膚基液；

（3）按重量份數(shù)計(jì)，取40～45份上述無(wú)刺激人造皮膚基液、22～24份蒸餾水

、19～21份殼聚糖、6～8份蒲黃炭、7～9份海藻酸鈉、9～11份海藻纖維及4～6份丁二醇，首先將上述無(wú)刺激人造皮膚基液、蒸餾水、殼聚糖、海藻酸鈉及海藻纖維放入容器中，設(shè)定溫度50～60℃，以130r/min攪拌溶解6～8h；

（4）在上述溶解結(jié)束后，再加入上述重量份數(shù)中蒲黃炭及丁二醇，繼續(xù)攪拌4～6h，隨后靜置2～3h，去除上層清液，將剩余物倒入水平玻璃板上自行流延，并在30～40℃干燥22～26h后揭膜，得人造皮膚，再進(jìn)行殺菌消毒，即可得無(wú)刺激人造皮膚。

本發(fā)明的應(yīng)用方法：選取15位表皮受傷直徑3～5cm的病人分3～5批進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將本發(fā)明制得的無(wú)刺激性人造皮膚從-5～0℃的冰柜中取出，放置在20～25℃下自然解凍，消毒浸泡，同時(shí)在無(wú)菌環(huán)境下，移除病人傷口周圍的死亡或非健康皮膚，用無(wú)菌鹽溶液清洗，保持清潔，剪取傷口大小的本發(fā)明制得的無(wú)刺激性人造皮膚貼在病人創(chuàng)口上用敷料覆蓋保證清潔，15～20天后，病人表皮痊愈率達(dá)90％以上，無(wú)疤痕遺留，檢查無(wú)撕裂過(guò)敏、疤痕等癥狀。

本發(fā)明的有益效果：

（1）本發(fā)明制得的人造皮膚可以防止水分與體液流失，可消毒、滅菌，有與皮膚相似的透氣透水性，對(duì)滲出液有吸收性，有接近正常皮膚的柔軟性與伸縮性，即柔軟度、隨形性好，有強(qiáng)韌性，不易撕裂，潤(rùn)濕強(qiáng)度高；

（2）本發(fā)明制得的無(wú)全身或局部的毒性，無(wú)抗原性，與局部刺激組織相容性好，微生物不能在它上面生長(zhǎng)、繁殖或穿透，生物分解性可控制，使用保存方便,來(lái)源廣，制作工藝簡(jiǎn)單，價(jià)格低廉。

具體實(shí)施方式

取豆蟲放入擠肉機(jī)中擠出豆蟲肉，按質(zhì)量比1:3，取豆蟲肉和質(zhì)量分?jǐn)?shù)30％乙醇溶液放入酶解罐中，使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)25％鹽酸調(diào)節(jié)pH至4.5～5.5，再向酶解罐中加入豆蟲肉質(zhì)量7～9％的混合酶，設(shè)定溫度為36～40℃，以130r/min攪拌酶解7～9h；所述混合酶為胃蛋白酶和胰蛋白酶按質(zhì)量比2:3混合而成，在上述酶解結(jié)束后，對(duì)酶解罐中的酶解混合物進(jìn)行減壓過(guò)濾，收集過(guò)濾液，并放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，收集剩余液，放入真空濃縮罐中，濃縮至原體積的50～60％，收集濃縮液，使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至5.7～6.5，得無(wú)刺激人造皮膚基液，按重量份數(shù)計(jì)，取40～45份上述無(wú)刺激人造皮膚基液、22～24份蒸餾水、19～21份殼聚糖、6～8份蒲黃炭、7～9份海藻酸鈉、9～11份海藻纖維及4～6份丁二醇，首先將上述無(wú)刺激人造皮膚基液、蒸餾水、殼聚糖、海藻酸鈉及海藻纖維放入容器中，設(shè)定溫度50～60℃，以130r/min攪拌溶解6～8h，在上述溶解結(jié)束后，再加入上述重量份數(shù)中蒲黃炭及丁二醇，繼續(xù)攪拌4～6h，隨后靜置2～3h，去除上層清液，將剩余物倒入水平玻璃板上自行流延，并在30～40℃干燥22～26h后揭膜，得人造皮膚，再進(jìn)行殺菌消毒，即可得無(wú)刺激人造皮膚。

實(shí)例1

取豆蟲放入擠肉機(jī)中擠出豆蟲肉，按質(zhì)量比1:3，取豆蟲肉和質(zhì)量分?jǐn)?shù)30％乙醇溶液放入酶解罐中，使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)25％鹽酸調(diào)節(jié)pH至4.5，再向酶解罐中加入豆蟲肉質(zhì)量7％的混合酶，設(shè)定溫度為36℃，以130r/min攪拌酶解7h；所述混合酶為胃蛋白酶和胰蛋白酶按質(zhì)量比2:3混合而成，在上述酶解結(jié)束后，對(duì)酶解罐中的酶解混合物進(jìn)行減壓過(guò)濾，收集過(guò)濾液，并放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，收集剩余液，放入真空濃縮罐中，濃縮至原體積的50％，收集濃縮液，使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至5.7，得無(wú)刺激人造皮膚基液，按重量份數(shù)計(jì)，取40份上述無(wú)刺激人造皮膚基液、22份蒸餾水、19份殼聚糖、6份蒲黃炭、7份海藻酸鈉、9份海藻纖維及4份丁二醇，首先將上述無(wú)刺激人造皮膚基液、蒸餾水、殼聚糖、海藻酸鈉及海藻纖維放入容器中，設(shè)定溫度50℃，以130r/min攪拌溶解6h，在上述溶解結(jié)束后，再加入上述重量份數(shù)中蒲黃炭及丁二醇，繼續(xù)攪拌4h，隨后靜置2h，去除上層清液，將剩余物倒入水平玻璃板上自行流延，并在30℃干燥22h后揭膜，得人造皮膚，再進(jìn)行殺菌消毒，即可得無(wú)刺激人造皮膚。

選取15位表皮受傷直徑3cm的病人分3批進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將本發(fā)明制得的無(wú)刺激性人造皮膚從-5℃的冰柜中取出，放置在20℃下自然解凍，消毒浸泡，同時(shí)在無(wú)菌環(huán)境下，移除病人傷口周圍的死亡或非健康皮膚，用無(wú)菌鹽溶液清洗，保持清潔，剪取傷口大小的本發(fā)明制得的無(wú)刺激性人造皮膚貼在病人創(chuàng)口上用敷料覆蓋保證清潔，15天后，病人表皮痊愈率達(dá)91％，無(wú)疤痕遺留，檢查無(wú)撕裂過(guò)敏、疤痕等癥狀。

實(shí)例2

取豆蟲放入擠肉機(jī)中擠出豆蟲肉，按質(zhì)量比1:3，取豆蟲肉和質(zhì)量分?jǐn)?shù)30％乙醇溶液放入酶解罐中，使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)25％鹽酸調(diào)節(jié)pH至5，再向酶解罐中加入豆蟲肉質(zhì)量8％的混合酶，設(shè)定溫度為38℃，以130r/min攪拌酶解8h；所述混合酶為胃蛋白酶和胰蛋白酶按質(zhì)量比2:3混合而成，在上述酶解結(jié)束后，對(duì)酶解罐中的酶解混合物進(jìn)行減壓過(guò)濾，收集過(guò)濾液，并放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，收集剩余液，放入真空濃縮罐中，濃縮至原體積的55％，收集濃縮液，使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6.1，得無(wú)刺激人造皮膚基液，按重量份數(shù)計(jì)，取43份上述無(wú)刺激人造皮膚基液、23份蒸餾水、20份殼聚糖、7份蒲黃炭、8份海藻酸鈉、10份海藻纖維及5份丁二醇，首先將上述無(wú)刺激人造皮膚基液、蒸餾水、殼聚糖、海藻酸鈉及海藻纖維放入容器中，設(shè)定溫度55℃，以130r/min攪拌溶解7h，在上述溶解結(jié)束后，再加入上述重量份數(shù)中蒲黃炭及丁二醇，繼續(xù)攪拌5h，隨后靜置2.5h，去除上層清液，將剩余物倒入水平玻璃板上自行流延，并在35℃干燥24h后揭膜，得人造皮膚，再進(jìn)行殺菌消毒，即可得無(wú)刺激人造皮膚。

選取15位表皮受傷直徑5cm的病人分5批進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將本發(fā)明制得的無(wú)刺激性人造皮膚從0℃的冰柜中取出，放置在25℃下自然解凍，消毒浸泡，同時(shí)在無(wú)菌環(huán)境下，移除病人傷口周圍的死亡或非健康皮膚，用無(wú)菌鹽溶液清洗，保持清潔，剪取傷口大小的本發(fā)明制得的無(wú)刺激性人造皮膚貼在病人創(chuàng)口上用敷料覆蓋保證清潔，20天后，病人表皮痊愈率達(dá)97％，無(wú)疤痕遺留，檢查無(wú)撕裂過(guò)敏、疤痕等癥狀。

實(shí)例3

取豆蟲放入擠肉機(jī)中擠出豆蟲肉，按質(zhì)量比1:3，取豆蟲肉和質(zhì)量分?jǐn)?shù)30％乙醇溶液放入酶解罐中，使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)25％鹽酸調(diào)節(jié)pH至5.5，再向酶解罐中加入豆蟲肉質(zhì)量9％的混合酶，設(shè)定溫度為40℃，以130r/min攪拌酶解9h；所述混合酶為胃蛋白酶和胰蛋白酶按質(zhì)量比2:3混合而成，在上述酶解結(jié)束后，對(duì)酶解罐中的酶解混合物進(jìn)行減壓過(guò)濾，收集過(guò)濾液，并放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除乙醇，收集剩余液，放入真空濃縮罐中，濃縮至原體積的60％，收集濃縮液，使用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15％氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至6.5，得無(wú)刺激人造皮膚基液，按重量份數(shù)計(jì)，取45份上述無(wú)刺激人造皮膚基液、24份蒸餾水、21份殼聚糖、8份蒲黃炭、9份海藻酸鈉、11份海藻纖維及6份丁二醇，首先將上述無(wú)刺激人造皮膚基液、蒸餾水、殼聚糖、海藻酸鈉及海藻纖維放入容器中，設(shè)定溫度60℃，以130r/min攪拌溶解8h，在上述溶解結(jié)束后，再加入上述重量份數(shù)中蒲黃炭及丁二醇，繼續(xù)攪拌6h，隨后靜置3h，去除上層清液，將剩余物倒入水平玻璃板上自行流延，并在40℃干燥26h后揭膜，得人造皮膚，再進(jìn)行殺菌消毒，即可得無(wú)刺激人造皮膚。

選取15位表皮受傷直徑4cm的病人分4批進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將本發(fā)明制得的無(wú)刺激性人造皮膚從-3℃的冰柜中取出，放置在22℃下自然解凍，消毒浸泡，同時(shí)在無(wú)菌環(huán)境下，移除病人傷口周圍的死亡或非健康皮膚，用無(wú)菌鹽溶液清洗，保持清潔，剪取傷口大小的本發(fā)明制得的無(wú)刺激性人造皮膚貼在病人創(chuàng)口上用敷料覆蓋保證清潔，18天后，病人表皮痊愈率達(dá)94％，無(wú)疤痕遺留，檢查無(wú)撕裂過(guò)敏、疤痕等癥狀。