本發(fā)明屬于獸藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種防治雞大腸桿菌病的中藥組合物及其提取物。
背景技術(shù)：
禽大腸桿菌病(avian colibacillosios)是由致病性大腸桿菌引起的。其主要的病型有胚胎和幼雛的死亡、急性敗血癥、氣囊炎、心包炎、輸卵管炎、腸炎、腹膜炎、全眼球炎和大腸桿菌性肉芽腫等。由于常和霉形體病合并感染，又常繼發(fā)于其他傳染病(如新城疫、禽流感惑、傳染性支氣管炎、巴氏桿菌病等)，使治療十分困難。大腸桿菌感染雞后，雞只主要表現(xiàn)為精神萎靡不振、采食減少或不食、離群呆立或蹲伏不動(dòng)、冠髯呈青紫色、眼虹膜呈灰白色、視力減退或失明、羽毛松亂、肛門周圍羽毛粘有糞便、綠色或黃白色稀糞、關(guān)節(jié)腫大、不愿動(dòng)或跛行、肝腫大并在表面形成一層易剝落的白色薄膜，腸道粘膜出血和潰瘍、心包發(fā)炎，產(chǎn)蛋雞感染后，表現(xiàn)為腹腔積有腹水和卵黃。
近年來抗生素作為飼料添加劑已屢見不鮮，多年來的研究和應(yīng)用表明，抗生素在一定程度上可以有效的預(yù)防和治療腹瀉、痢疾，促進(jìn)畜禽的生長，這給畜牧業(yè)生產(chǎn)者帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)利益，但是也存在相當(dāng)多的問題，比如耐藥性的產(chǎn)生，畜禽產(chǎn)品中的藥物殘留，引起畜禽體內(nèi)正常菌群失調(diào)等?，F(xiàn)代養(yǎng)殖大多是集約化養(yǎng)殖，上述問題無論哪一種都會(huì)給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的危害。
中藥是在中獸醫(yī)基礎(chǔ)理論指導(dǎo)下，用于預(yù)防和治療各種動(dòng)物疾病。中藥有許多無可比擬的優(yōu)勢，如穩(wěn)定、高效、毒副作用小、多靶點(diǎn)作用等，并且我國中草藥資源豐富，成本低?，F(xiàn)代研究表明中藥中抑菌或抗菌的成分很多，可以作用于細(xì)菌繁殖的不同階段和多個(gè)代謝環(huán)節(jié)，且不容易產(chǎn)生耐藥性，具有改變、抑制，甚至消除細(xì)菌的耐藥性的作用，中藥制劑極大可能用于高效、低毒的耐藥抑制劑的研制。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
有鑒于此，本發(fā)明的目的在于：(1)提供一種防治雞大腸桿菌病的中藥組合物；(2)提供一種防治雞大腸桿菌病的中藥組合物的提取物。
為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
1、一種防治雞大腸桿菌病的中藥組合物，按重量份計(jì)由以下組分組成：大黃0-8份、黃芩5-8份、十大功勞5-8份、鬼針草5-8份、地錦草5-8份、馬齒莧5-8份、白術(shù)3份、生地黃1份。
優(yōu)選的，按重量份計(jì)由以下組分組成：大黃5份、黃芩8份、十大功勞8份、鬼針草5份、地錦草5份、馬齒莧5份、白術(shù)3份、生地黃1份。
優(yōu)選的，按重量份計(jì)由以下組分組成：大黃0份、黃芩5份、十大功勞5份、鬼針草8份、地錦草8份、馬齒莧8份、白術(shù)3份、生地黃1份。
優(yōu)選的，按重量份計(jì)由以下組分組成：大黃5份、黃芩5份、十大功勞8份、鬼針草8份、地錦草8份、馬齒莧8份、白術(shù)3份、生地黃1份。
優(yōu)選的，按重量份計(jì)由以下組分組成：大黃5份、黃芩5份、十大功勞5份、鬼針草5份、地錦草5份、馬齒莧5份、白術(shù)3份、生地黃1份。
優(yōu)選的，按重量份計(jì)由以下組分組成：大黃8份、黃芩8份、十大功勞8份、鬼針草8份、地錦草8份、馬齒莧8份、白術(shù)3份、生地黃1份。
2、由所述的防治雞大腸桿菌病的中藥組合物制得的提取物。
優(yōu)選的，所述提取物采用以下方法制得：按照中藥組合物的組成稱取各味藥材，加水煎煮3次，合并煎煮液，95～100℃下蒸發(fā)濃縮至濃度為0.5-1.0g/ml，即制得提取物。
優(yōu)選的，所述提取物采用以下方法制得：按照中藥組合物的組成稱取各味藥材，加入相當(dāng)于8味藥材總重量20倍量的水，浸泡25-30min，煎煮1.5h，過濾，收集濾液，藥渣再加入相當(dāng)于8味藥材總重量20倍量的水，煎煮40min，過濾，收集濾液，藥渣再加入相當(dāng)于8味藥材總重量20倍量的水，煎煮30min，過濾，收集濾液，合并三次濾液，100℃下蒸發(fā)濃縮至濃度為1.0g/ml，即制得提取物。
本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明主要以清熱解毒、涼血止痢中藥為主，輔以燥濕健脾，養(yǎng)陰涼血中藥組成一種防治雞大腸桿菌病的中藥組合物，并制得其提取物。該中藥組合物配伍獨(dú)特、療效確切、毒副作用低、成本低廉。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，能夠有效防止雞大腸桿菌病，從而為目前治療雞大腸桿菌病提供了更好的備選藥物。
具體實(shí)施方式
下面將對本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的描述。
實(shí)施例1
單味中藥提取液抑菌效果測試
1、試驗(yàn)方法
(1)培養(yǎng)基的制備
用電子天平精確稱取需要制備的培養(yǎng)基，按照說明書加入一定量的蒸餾水溶解于錐形瓶中，121℃條件下滅菌15min。若制備液體培養(yǎng)基，則待冷卻后放置于37℃生化培養(yǎng)箱中過夜，檢查確認(rèn)無雜菌后方可放置在4℃冰箱中備用；若制備固體培養(yǎng)基，則待冷卻至大約50～60℃時(shí)，倒入直徑為10cm的培養(yǎng)平皿中，厚度約4mm，冷卻后再放入于37℃生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)18～24h，檢查確認(rèn)無雜菌后方可放置在4℃冰箱中備用。
(2)單味中藥提取液的制備
將十大功勞、黃芩、大黃、馬齒莧、地錦草、鬼針草等6味中藥各準(zhǔn)備50g。分別加入1L水，浸泡30min，煎煮1.5h，過濾，收集濾液，藥渣再加入1L水，煎煮40min，過濾，收集濾液，藥渣再加入1L水，煎煮30min，過濾，收集濾液，合并3次濾液，100℃下蒸發(fā)濃縮至100ml(0.5g/ml)，再取50ml第一次的濃縮液濃縮至25ml(1.0g/ml)，即分別制得單味藥材的提取液，提取液以1000r/min離心15min，取上清液，調(diào)pH值為7.5，最后在105℃下滅菌后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
(3)菌液的制備
將菌株用劃線法接種到普通瓊脂平板上，37℃生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)18～24h，勾取單個(gè)菌落，用滅菌的生理鹽水稀釋校正菌液濁度至0.5麥?zhǔn)蠁挝唬淳簼舛葹?.5×108CPU/mL，現(xiàn)配現(xiàn)用。
(4)藥敏試驗(yàn)
采用牛津杯法及藥敏紙片法對大腸桿菌進(jìn)行6味中藥的藥敏試驗(yàn)，觀察并記錄試驗(yàn)結(jié)果。
牛津杯法：采取無菌操作將滅菌的不銹鋼小管(內(nèi)徑6nm、外徑8nm、高10nm的圓形小管)，放在培養(yǎng)基上，輕輕地加壓，使其與培養(yǎng)基的之間零空隙。每個(gè)平板可以放4個(gè)。待放好后，分別向各牛津杯中滴加一定數(shù)量的各種藥液，勿使其外溢，并在小管處標(biāo)記各種中藥的名稱。
藥敏紙片法：自制直徑6mm的濾紙片藥敏紙片，高壓滅菌烘干并浸泡于濃縮液中過夜，60℃烘干，無菌保存。
2、試驗(yàn)結(jié)果
表1 單味中藥提取液的抗菌效果
由表1可知，本發(fā)明所選中藥均有一定的抑菌效果，采用牛津杯法抑菌效果優(yōu)于藥敏紙片法，且濃度為1.0g/ml的提取液抗菌效果較0.5g/ml的提取液抗菌效果好。大腸桿菌對大黃、地錦草高度敏感，對黃芩、十大功勞中度敏感。
實(shí)施例2
防治雞大腸桿菌病的中藥組合物提取液抑菌效果測試
1、試驗(yàn)方法
(1)培養(yǎng)基的制備同實(shí)施例1。
(2)培養(yǎng)基的制備同實(shí)施例1。
(3)中藥組合物提取液的制備
按照表2中各中藥組合物的配方，即分別按照各組方中各藥材的質(zhì)量份比稱取各味藥材，使中藥組合物總重量為120g，然后加入2.4L水，浸泡30min，煎煮1.5h，過濾，收集濾液，藥渣再加入2.4L水，煎煮40min，過濾，收集濾液，藥渣再加入2.4L水，煎煮30min，過濾，收集濾液，合并三次濾液，100℃下蒸發(fā)濃縮至240ml(0.5g/ml)，再取120ml第一次的濃縮液濃縮至60ml(1.0g/ml)，分別制得五種配方的中藥組合物的提取液，提取液以1000r/min離心15min，取上清液，調(diào)pH值為7.5，最后在105℃下滅菌后4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
表2 中藥組合物配方
(4)藥敏試驗(yàn)
采用牛津杯法進(jìn)行中藥復(fù)方的藥敏試驗(yàn)，步驟同實(shí)施例1中牛津杯法，觀察并記錄試驗(yàn)結(jié)果。
2、試驗(yàn)結(jié)果
表3 防治雞大腸桿菌病的中藥組合物提取液的抗菌效果
由表3可知，當(dāng)提取液濃度為0.5g/ml時(shí)，大腸桿菌對組方III、IV高度敏感，對組方I、II、V中度敏感；當(dāng)提取液濃度為1.0g/ml時(shí)，大腸桿菌對組方I、II、III、IV、V中度敏感。根據(jù)抑菌圈大小綜合考慮，當(dāng)提取液濃度為1.0g/ml時(shí)，對大腸桿菌的抑制效果更好。
實(shí)施例3
自擬防治雞大腸桿菌病的中藥組合物對人工感染雞大腸桿菌病的防治作用
1、試驗(yàn)方法
(1)模型建立
試驗(yàn)雞胸肌注射大腸桿菌菌液0.3ml/只(菌液濃度為109個(gè)/ml)，若雞出現(xiàn)精神遲鈍、垂翅、呆立、食欲減少、拉稀和呼吸困難；雞尸體剖檢后，心包膜和肝臟有淡黃色纖維素薄膜，很容易從臟器表面剝離，心臟壁變薄，心包液增多，有纖維素滲出，氣囊混濁等典型的特行性病變，并分離出相應(yīng)的大腸桿菌，即證明造模成功。
(2)試驗(yàn)分組與處理
試驗(yàn)雞飼養(yǎng)到18日齡，檢查體況無異?，F(xiàn)象后，將其隨機(jī)分為模型組、空白對照組、中藥復(fù)方I、II、III、IV、V組、陽性藥物(氨芐西林鈉)對照組，每組各10只。除空白對照組外，其余各組雞胸肌注射菌液0.3ml/只。待造模雞只出現(xiàn)大腸桿菌病的典型癥狀以后，模型組、空白組灌服生理鹽水、陽性藥物組肌肉注射氨芐西林鈉，各中藥復(fù)方組灌服相應(yīng)中藥組合物提取液0.5ml/只，每天上、下午各1次，連用7d，具體見表4。每天定時(shí)觀察并記錄雞只的精神狀況、飲食、糞便、死亡等臨床表現(xiàn)等。
表4 試驗(yàn)分組及處理
(3)療效判定標(biāo)準(zhǔn)
表5 中藥組合物提取液療效判定標(biāo)準(zhǔn)
2、試驗(yàn)結(jié)果
(1)造模結(jié)果
造模5d后試驗(yàn)雞出現(xiàn)精神遲鈍、垂翅、呆立、食欲減少、拉稀和呼吸困難；雞尸體剖檢后，心包膜和肝臟有淡黃色纖維素薄膜，很容易從臟器表面剝離，心臟壁變薄，心包液增多，有纖維素滲出，肝臟質(zhì)地變脆，易碎，氣囊混濁增厚有淡黃色滲出物等病變；革蘭氏染色鏡檢觀察到大腸桿菌，并從肝臟、心臟分離出大腸桿菌，證明試驗(yàn)造模成功。
(2)治療結(jié)果
表6 各試驗(yàn)組治療結(jié)果
由表6可知，中藥復(fù)方III組治療雞大腸桿菌病效果較好，經(jīng)治療后治愈率為71.4％，死亡率為14.3％，有效率為14.3％。
中草藥具有殘毒低，能夠調(diào)節(jié)機(jī)體的免疫機(jī)能和不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)，在畜禽傳染病防治中，可解決抗生素藥物殘留和耐藥性的問題，生產(chǎn)無公害的綠色產(chǎn)品，在畜牧業(yè)生產(chǎn)中發(fā)揮著越來越重要的作用。本發(fā)明基于以上試驗(yàn)結(jié)果，可以得出結(jié)論：按組方III(即中藥組合物按重量份計(jì)：大黃5份、黃芩5份、十大功勞8份、鬼針草8份、地錦草8份、馬齒莧8份、白術(shù)3份、生地黃1份)制得的中藥組合物對雞大腸桿菌病具有較好的防治效果。
最后說明的是，以上優(yōu)選實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管通過上述優(yōu)選實(shí)施例已經(jīng)對本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的描述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以在形式上和細(xì)節(jié)上對其作出各種各樣的改變，而不偏離本發(fā)明權(quán)利要求書所限定的范圍。