本發(fā)明屬于食品、保健品、藥品及醫(yī)療領(lǐng)域，具體涉及地黃與地靈配伍治療口腔潰瘍的組合物及其制備方法。

技術(shù)背景

復(fù)發(fā)性口腔潰瘍(recurrent oral ulcer,ROU)又稱為復(fù)發(fā)性阿弗他潰瘍(recurrent aphthous ulcer,RAU)或復(fù)發(fā)性阿弗他口炎(recurrent aphthous stomatitis,RAS)，民間又稱為“口瘡”“上火”，是最常見的口腔黏膜病，其患病率居口腔黏膜病之首，各國流行病學(xué)調(diào)查顯示每5人中至少有1人發(fā)生過口腔潰瘍。該病以口腔黏膜各部位反復(fù)發(fā)作的潰瘍局限性潰瘍損傷為特征，好發(fā)于唇、舌、頰、軟腭等角化差的部位。大小可從米粒至黃豆大小、表面覆蓋灰白或藍色假膜潰瘍，邊界清楚，周圍粘膜紅而微腫，局部灼痛，流口水，一般一至兩個星期可以自愈。常伴口臭、口干、尿黃、大便干結(jié)等癥狀為主要特征，不伴有其他疾病體征，具有周期性、復(fù)發(fā)性、自限性特征，潰瘍灼痛明顯，重的口瘡可擴展到整個口腔，甚至引起發(fā)燒和全身不適。

西醫(yī)認為其病因主要為：一是內(nèi)因：內(nèi)分泌失調(diào)，自身免疫力降低等。二是外因：遺傳因素、精神壓力及刺激、工作疲勞、失眠，大部分女性患者月經(jīng)來潮前后而誘發(fā)此病，或使病情加重，或潛伏著機體內(nèi)嚴重疾病。多數(shù)醫(yī)生認為，口腔潰瘍與以下因素有關(guān)：(1)消化系統(tǒng)疾病及功能紊亂：如腹脹、腹瀉或便秘等情況。(2)內(nèi)分泌變化：有些女性患者往往在月經(jīng)期發(fā)生，可能與體內(nèi)雌激素量下降有關(guān)。(3)精神因素：有的患者在精神緊張、情緒波動、睡眠狀況不佳的情況下發(fā)病，可能與植物神經(jīng)功能失調(diào)有關(guān)。(4)遺傳因素：如父母雙方均患有復(fù)發(fā)性口腔潰瘍時，其子女約有80—90％患病，若雙親之一患此病時其子女約有50—60％患病。(5)其他因素：如缺乏微量元素鋅、鐵、葉酸、維生素B12等，可降低免疫功能，增加復(fù)發(fā)性口腔潰瘍發(fā)病的可能性?？傊?復(fù)發(fā)性口腔潰瘍的發(fā)病常常和病毒感染、細菌感染、消化系統(tǒng)疾病及功能紊亂、內(nèi)分泌變化、精神神經(jīng)因素、遺傳因素及免疫功能的變化等密切相關(guān)。

中醫(yī)認為：陰虛火旺，熱毒燔灼，內(nèi)夾濕熱，上蒸于口以及情志不遂而損及心脾，均可致上述諸癥。中醫(yī)分析復(fù)發(fā)性口腔潰瘍有如下幾種情況：(1)血虛性口腔潰瘍：此病多發(fā)生在口唇、舌根、兩頰部，潰瘍面常呈灰白色，周圍輕微紅腫，此愈彼起，綿延不斷，愈后無痕跡，伴潰瘍處疼痛難忍及頭部疼痛，并頭痛牽拉眉棱骨疼痛，月經(jīng)量增多，神疲乏力，心悸、夜寢不安等癥狀，系由于身體血虛，加之月經(jīng)周期血更虛甚，是因血不能濡養(yǎng)頭腦產(chǎn)生頭痛。通過中藥辯證施治可達到治愈目的。(2)肝火旺型口腔潰瘍：此型常好發(fā)生口唇、牙齦、舌尖及兩頰部，潰瘍呈黃白色，周圍紅腫，數(shù)量多時甚至融合成片，疼痛劇烈，同時可出現(xiàn)頭頂部痛、頭暈、目眩、易怒、口苦等癥。屬人體素質(zhì)肝陽偏亢，經(jīng)行陰血下注沖住，使陰血虧虛而不能上抑肝陽而致頭痛及口腔潰瘍，平時注意加強降肝火，服龍膽瀉肝湯治療有痹益之效。(3)血瘀型口腔潰瘍：潰瘍面色澤呈淡灰白色，有發(fā)展快、愈合慢之特點。女性往往在月經(jīng)前及月經(jīng)期間，口腔粘膜中突然發(fā)生數(shù)枚潰瘍，局部劇烈疼痛，頭痛位置固定不變，月經(jīng)色呈紫黯，有瘀斑，如長期不治，易導(dǎo)致病情加重。在防治女性月經(jīng)期口腔潰瘍過程中，還需要保持心情愉快，注意勞逸結(jié)合，堅持按療程服藥，避免過度疲勞，飲食要清淡，多吃水果、新鮮飯菜，多飲水。治療過程中，以不吃辛、辣、發(fā)味類食品為上策。有些復(fù)發(fā)性潰瘍與胃腸功能紊亂、某些營養(yǎng)缺乏、機體免疫力降低、口腔衛(wèi)生不良或精神因素有關(guān)，治療可采取綜合性措施。除外敷、內(nèi)服藥物外，還需要注意口腔衛(wèi)生，保持心情愉快，避免過度勞累，多喝開水，多吃新鮮蔬菜、水果，飲食宜清淡，易消化，不要食用辛辣、刺激性食物。

地黃為玄參科植物地黃(Rehm anniaglutinasa Liboschde.)的新鮮塊莖。鮮地黃味甘苦，性微寒，無毒。歸心；肝；腎經(jīng)(《本草再新》)。入足少陰及足太陰(《本草新編》)。功能清熱涼血；生津潤燥。主急性熱?。桓邿嵘窕?；斑疹；津傷煩渴；血熱妄行之吐血；衄血；崩漏；便血；口舌生瘡；咽喉腫痛；勞熱咳嗽；跌打傷痛；癰腫。臨床常用六味地黃丸、六味地黃湯加減、桂附地黃湯、知柏地黃湯加減治療口腔潰瘍。上述中藥復(fù)方制劑中篩選出都含有地黃，說明地黃為治療口腔潰瘍的主要藥物。梓醇為地黃滋陰作用的主要成分，機制為雙向調(diào)控陰虛(模型)機體β腎上腺受體C-AMP系統(tǒng)功能相對偏亢和M膽堿受體C-GMP系統(tǒng)功能相對偏衰，可以重現(xiàn)地黃的滋陰作用。

地靈，學(xué)名銀苗，銀條菜等，在西北地區(qū)俗稱”地靈”。屬唇形科水蘇屬多年生草本植物，為草石蠶類以地下莖作為食用部分的一種蔬菜。地靈味苦；性寒。功能清熱利尿；消食健胃。主濕熱尿淋；肝炎；消化不良(《中華本草》)。地靈又稱地環(huán)，地下莖白色，肉質(zhì)脆嫩，無纖維，含水分較多，營養(yǎng)豐富，可炒食、煮食、涼拌,水煮等。對人體有多種保健效果，延年益壽作用明顯，在《中國蔬菜品種志》中已有詳細的記載。河南偃師地區(qū)的“偃師銀條”最為有名，具有悠久的食用歷史。它富含一種被世界食品醫(yī)藥界譽為“健康寶貝”和“超強雙歧因子”的物質(zhì)——“水蘇糖”。作為天然四糖之一的水蘇糖，簡單的結(jié)構(gòu)表示為半乳糖–半乳糖-葡萄糖-果糖。是目前發(fā)現(xiàn)功效最優(yōu)越的益生元，是已獲得美國FDA認證的寡糖產(chǎn)品。

綜上文獻記載結(jié)合現(xiàn)代研究成果，采用先進提取工藝，對地黃與地靈配伍中的有效成分加以最大程度提取與保留，以梓醇和水蘇糖為指標性成分，對地黃與地靈配伍提取物進行了質(zhì)量評價，以保證地黃與地靈配伍的制劑質(zhì)量與療效。

本發(fā)明的目的就是為了提供一種標本兼治、整體調(diào)節(jié)且毒副作用低的治療口腔潰瘍的地黃與地靈配伍處方及其制劑。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供一種治療口腔潰瘍的組合物，所述組合物以地黃與地靈作為原料藥制備而成：兩者的重量比例為1-2:1-2。

本發(fā)明所述的組合物，所述組合物以地黃與地靈作為原料藥制備而成：兩者的重量比例為1:1。

本發(fā)明所述的組合物，為適合服用的任何劑型。

所述劑型選自：液體制劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸劑、丸劑、散劑、膏劑。

本發(fā)明所述的組合物，所述劑型中，必要時含有輔料，所述輔料選自：微晶纖維素、淀粉、糊精、蔗糖、水蘇糖、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、滑石粉、硬脂酸鎂、山梨醇酐單油酸酯、甘氨酸、明膠、甘油、水、對羥基苯甲酸乙酯。

本發(fā)明還包括所述的組合物的制備方法，包括將地黃與地靈進行提取得到藥物提取物再與輔料混合的步驟，其中所述地黃與地靈提取方法如下：

取鮮地黃與鮮地靈各等分，粉碎，加5～10倍量水,超聲提取2～3次，每次0.5～2小時，合并提取液，濾過，低溫減壓濃縮至相對密度為1.25～1.30(60℃)的稠膏，加3倍體積95％乙醇沉淀，取上清液，減壓濃縮至相對密度為1.30～1.35(60℃)的稠膏，真空干燥，粉碎，得水提醇沉提取物。

或

取鮮地黃與鮮地靈各等分，粉碎，加2～4倍量70～95％乙醇超聲提取2～3次，每次0.5～2小時，合并提取液，濾過，減壓濃縮，真空干燥，粉碎，得乙醇提取物。

本發(fā)明還包括所述的組合物在制備治療口腔潰瘍或相關(guān)性疾病的藥物中的應(yīng)用。所述口腔潰瘍或相關(guān)性疾病為：牙齦腫痛、牙齦出血、口腔癌、口腔粘膜病口腔黏膜白斑、口腔念珠菌病。

本發(fā)明中，有效成分梓醇為地黃滋陰作用的主要成分，機制為雙向調(diào)控陰虛(模型)機體β腎上腺受體C-AMP系統(tǒng)功能相對偏亢和M膽堿受體C-GMP系統(tǒng)功能相對偏衰，可以重現(xiàn)地黃的滋陰作用。有效成分水蘇糖對人體胃腸道內(nèi)的雙歧桿菌、乳酸桿菌等有益菌群有著極明顯的增殖作用，能迅速改善人體消化道內(nèi)環(huán)境，調(diào)節(jié)微生態(tài)平衡，控制產(chǎn)氣、產(chǎn)酸梭狀桿菌等腐敗菌的生產(chǎn)，分解衍生出多重免疫功能因子，提高機體免疫力。梓醇與水蘇糖功能相加，具有協(xié)同增效作用，對治療陰虛火熱、消化系統(tǒng)疾病及功能紊亂、內(nèi)分泌變化等引起的口腔潰瘍效果顯著。

以下通過實驗數(shù)據(jù)說明本發(fā)明的有益效果：

按如下方法制備地黃與地靈配伍水提醇沉提取物、乙醇提取物；并進行藥理實驗研究，其藥理實驗研究結(jié)果如下：

1.試驗用藥的制備：

(1)水提醇沉提取物：取鮮地黃與地靈各等分，粉碎，加水超聲提取3次，第1、2次每次1小時，第3次超聲0.5小時。第1次加5倍量水,第2、3次加6倍量水，合并提取液，濾過，低溫減壓濃縮至相對密度為1.25～1.30(60℃)的稠膏，加3倍體積95％乙醇沉淀，取上清液，減壓濃縮至相對密度為1.25～1.30(60℃)的稠膏，真空干燥，粉碎，得水提醇沉提取物。

(2)乙醇提取物：取鮮地黃與地靈各等分，粉碎，加乙醇超聲提取2次，每次1小時，第1次加2倍量95％乙醇，第2次加3倍量70％乙醇，合并提取液，濾過，減壓濃縮，真空干燥，粉碎，得乙醇提取物。

2.藥理實驗研究：

研究選用Wistar大鼠40只，雌雄各半，，每只體重180—200g，先進行口腔潰瘍造模：用一根6cm長滴管，下端內(nèi)徑2mm，內(nèi)置小棉球，使小棉球底部與滴管下口平，繼而在管內(nèi)滴入90％苯酚溶液至剛浸透小棉球，然后將滴管下端平置于大鼠右側(cè)口角約3mm處30％左右，即見該區(qū)有直徑約2mm的白色損傷。最后將大鼠分模型對照組(生理鹽水)、左旋咪唑?qū)φ战M(0.01g/kg)、水提醇沉提取物組(0.5g/kg)和乙醇提取物組(0.5g/kg)，分別灌胃給藥1次/天，連續(xù)7天。實驗中每日觀察并記錄大鼠潰瘍愈合情況和進食量，第8天將大鼠脫頸處死，取右側(cè)口角組織用10％甲醛溶液固定，進行病理學(xué)檢查，根據(jù)病理形態(tài)改變程度進行分級。

重度病變：切緣見潰瘍面，上皮缺損，潰瘍達肌層深部，固有膜大量炎細胞浸潤，肌層水腫，肌層組織變性壞死；輕度病變：固有膜水腫，血管擴張充血，肌層水腫，炎細胞浸潤，結(jié)締組織增生，肌層組織輕度變性壞死；正常：未見病理病變。結(jié)果見表1，表2。

采用Student’s t檢驗進行兩組間均數(shù)的差異顯著性檢驗。當(dāng)P＜0.05時，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1、各組給藥后口腔潰瘍組織病理改變比較

*與模型對照組組比較：*P＜0.05

表2、各組給藥后對大鼠口腔潰瘍的影響比較

*與模型對照組組比較：*P＜0.05

結(jié)論：在本實驗條件下，左旋咪唑、水提醇沉提取物、乙醇提取物對大鼠口腔潰瘍模型均有較好的治療作用，水提醇沉提取物作用最佳，與模型對照組比較有顯著性差異。說明地黃與地靈配伍提取物能改善口腔潰瘍癥狀，促進組織再生，縮短潰瘍愈合時間，為實際應(yīng)用提供了依據(jù)。

具體實施方式

[實施例1]梓醇的含量測定方法

照高效液相色譜法(《中國藥典》2015年版四部0512法)測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(1.2:98.8)為流動相；檢測波長為210nm。理論板數(shù)按梓醇峰計算應(yīng)不低于5000。

對照品溶液的制備 精密稱取梓醇對照品適量，加流動相制成每1ml含180ug的溶液，搖勻，即得。

供試品溶液的制備 取地黃提取物約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得。

測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

表3樣品中梓醇含量測定結(jié)果

[實施例2]水蘇糖的含量測定方法

本檢測方法采用《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》(2003年版)方法測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 反相氨基柱，粒徑5μm。柱溫45℃，檢測室40℃。乙腈:水(76:24)為流動相，流量為1.5mL/min，靈敏度為64。

對照品標準曲線的制備 精密稱取水蘇糖0.0600g，用去離子水溶解并定容至4.0mL。將此液逐級稀釋成3.0、6.0、9.0、12.0、15.0mg/mL，將各標準系列注入高效液相色譜儀進行測定，繪制標準工作曲線。

供試品溶液的制備 稱取2.000g地黃提取物，放入200mL燒杯中，加去離子水15.0mL溶解，再加45.0mL無水乙醇，攪勻，放置5min，離心，取上清液30.0mL在沸水浴上揮發(fā)近干，殘液用去離子水溶解并定容至一定體積，溶液過0.45μm濾膜，濾液用于HPLC測定。

測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

表4樣品中水蘇糖含量測定結(jié)果

[實施例3]乙醇提取方法

乙醇提取物：取鮮地黃與地靈各等分，粉碎，加乙醇超聲提取2次，每次1小時，第1次加2倍量95％乙醇，第2次加3倍量70％乙醇，合并提取液，濾過，減壓濃縮，真空干燥，粉碎，得乙醇提取物。出膏率為20-25％，其中梓醇含量為6.77％，水蘇糖含量為50.28％。

[實施例4]水提醇沉提取方法

水提醇沉提取物：取鮮地黃與地靈各等分，粉碎，加水超聲提取3次，第1、2次每次1小時，第3次超聲0.5小時。第1次加5倍量水,第2、3次加6倍量水，合并提取液，濾過，低溫減壓濃縮至相對密度為1.25～1.30(60℃)的稠膏，加3倍體積95％乙醇沉淀，取上清液，減壓濃縮至相對密度為1.25～1.30(60℃)的稠膏，真空干燥，粉碎，得地黃水提醇沉提取物。出膏率為15-20％，其中梓醇含量為16.58％，水蘇糖含量為56.32％。

[實施例5]液體制劑的制備

取地黃與地靈配伍提取物10㎏，用1000升純化水溶解，加蜂蜜2㎏，混勻，濾過，即得口服液體制劑。

[實施例6]固體飲料制備

取地黃與地靈配伍提取物10㎏，加微晶纖維素0.2㎏，甜蜜素適量，混勻，過30目篩，即固體飲料制劑。

[實施例7]顆粒劑制備

取地黃與地靈配伍提取物，加入適量糊精、蔗糖，混勻，用90％乙醇適量制成顆粒，干燥，整粒，即得顆粒劑。

[實施例8]片劑的制備

取地黃與地靈配伍提取物，加入適量淀粉，糊精，糖粉，制備顆粒，壓片即得片劑。

[實施例9]膠囊劑的制備

取地黃與地靈配伍提取物，加入適量淀粉，糊精，聚乙烯吡咯烷酮，制備顆粒，裝膠囊即得膠囊劑。

[實施例10]乙醇提取方法

乙醇提取物：取鮮地黃1份與地靈2份，粉碎，加乙醇超聲提取2次，每次1小時，第1次加2倍量95％乙醇，第2次加3倍量70％乙醇，合并提取液，濾過，減壓濃縮，真空干燥，粉碎，得乙醇提取物。

[實施例11]水提醇沉提取方法

水提醇沉提取物：取鮮地黃2份與地靈1份，粉碎，加水超聲提取3次，第1、2次每次1小時，第3次超聲0.5小時。第1次加5倍量水,第2、3次加6倍量水，合并提取液，濾過，低溫減壓濃縮至相對密度為1.25～1.30(60℃)的稠膏，加3倍體積95％乙醇沉淀，取上清液，減壓濃縮至相對密度為1.25～1.30(60℃)的稠膏，真空干燥，粉碎，得地黃水提醇沉提取物。