本發(fā)明屬于生物材料領(lǐng)域，具體涉及一種止血材料及其制備方法與應(yīng)用，進(jìn)一步具體涉及一種止血材料及其制備方法以及一種用于制備該止血材料的止血試劑盒。

背景技術(shù)：

止血材料經(jīng)過幾段發(fā)展，由天然棉麻制品到人工高分子材料再到天然高分子材料?，F(xiàn)在越來越多的研究者將眼光投在對天然高分子的改性上，通過改性在保留原有無毒、環(huán)境友好、生物相容性好、易降解等優(yōu)點(diǎn)的基礎(chǔ)上，增強(qiáng)其對于傷口止血的能力。

現(xiàn)有的止血材料凝血速度低、力學(xué)性能差、透析純化時(shí)間長，使用后傷口愈合速度慢。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足提供了一種止血材料及其制備方法。該止血材料凝血速度高、力學(xué)性能好、透析純化時(shí)間短，使用后傷口愈合速度較快。

為此，本發(fā)明第一方面提供了一種止血材料，其由醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉形成的醛改性混合物與胺改性聚天冬酰肼進(jìn)行希夫堿反應(yīng)得到。

本發(fā)明中，所述醛改性海藻酸鈉如式(I)所示；所述醛改性透明質(zhì)酸鈉如式(II)所示；所述胺改性聚天冬酰肼如式(III)所示：

在本發(fā)明一些實(shí)施例中，所述醛改性混合物中醛改性海藻酸鈉與醛改性透明質(zhì)酸鈉的重量比為1∶1。

在本發(fā)明一些實(shí)施例中，所述醛改性混合物與胺改性聚天冬酰肼的重量比為1∶1。

本發(fā)明中，醛改性海藻酸鈉的接枝率30-50％。

本發(fā)明中，醛改性透明質(zhì)酸鈉的接枝率在30-50％。

本發(fā)明中，胺改性聚天冬酰肼的接枝率為80-92％。

在本發(fā)明一些實(shí)施例中，醛改性海藻酸鈉分子量為5100-24700Da。

在本發(fā)明一些實(shí)施例中，醛改性透明質(zhì)酸鈉分子量為150000-480000Da。

在本發(fā)明一些實(shí)施例中，胺改性聚天冬酰肼分子量為20000-100000Da，優(yōu)選胺改性聚天冬酰肼分子量為60000-100000Da，進(jìn)一步優(yōu)選胺改性聚天冬酰肼分子量為60000Da。

本發(fā)明中，所述止血材料成凝膠態(tài)，凝膠強(qiáng)度為1000-6000Pa。

本發(fā)明第二方面提供了一種本發(fā)明第一方面所述止血材料的制備方法，其包括將醛改性海藻酸鈉水溶液和醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混合形成的醛改性混合物水溶液與胺改性聚天冬酰肼水溶液混合后進(jìn)行希夫堿反應(yīng)制得凝膠態(tài)止血材料的步驟。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述醛改性混合物中醛改性海藻酸鈉與醛改性透明質(zhì)酸鈉的重量比為1∶1。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述醛改性混合物與胺改性聚天冬酰肼的重量比為1∶1。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，醛改性海藻酸鈉水溶液的濃度為0.05-0.25g/mL，優(yōu)選醛改性海藻酸鈉水溶液的濃度為0.10-0.25g/mL。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液的濃度為0.05-0.25g/mL，優(yōu)選醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液的濃度為0.10-0.25g/mL。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，胺改性聚天冬酰肼水溶液的濃度為0.1-0.5g/mL，優(yōu)選胺改性聚天冬酰肼水溶液的濃度0.2-0.5g/mL。

本發(fā)明中，所述希夫堿反應(yīng)的溫度為室溫。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述希夫堿反應(yīng)的時(shí)間低于170s，優(yōu)選所述希夫堿反應(yīng)的時(shí)間低于15s，進(jìn)一步優(yōu)選所述希夫堿反應(yīng)的時(shí)間為5-10s。

本發(fā)明第三方面提供了一種止血試劑盒，其包括單獨(dú)或并列設(shè)置的料倉A和料倉B，其中，料倉A中含有醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉形成的醛改性混合物或含有醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉的醛改性混合物水溶液，料倉B含有胺改性聚天冬酰肼或胺改性聚天冬酰肼水溶液。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述醛改性混合物中醛改性海藻酸鈉與醛改性透明質(zhì)酸鈉的重量比為1∶1。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述醛改性混合物與胺改性聚天冬酰肼的重量比為1∶1。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，醛改性海藻酸鈉水溶液的濃度為0.05-0.25g/mL，優(yōu)選醛改性海藻酸鈉水溶液的濃度為0.10-0.25g/mL。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液的濃度為0.05-0.25g/mL，優(yōu)選醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液的濃度為0.10-0.25g/mL。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，胺改性聚天冬酰肼水溶液的濃度為0.1-0.5g/mL，優(yōu)選胺改性聚天冬酰肼水溶液的濃度0.2-0.5g/mL。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述試劑盒還包括與料倉A相連通用于輸出醛改性混合物水溶液的注射頭A′和與料倉B相連通用于輸出胺改性聚天冬酰肼水溶液的注射頭B′。

在本發(fā)明的另一些實(shí)施例中，所述試劑盒還包括同時(shí)與料倉A和料倉B相連通用于輸出醛改性混合物水溶液和胺改性聚天冬酰肼水溶液的注射頭M。

本發(fā)明的有益效果是：

(1)本發(fā)明所提供的止血材料由醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉形成的醛改性混合物與胺改性聚天冬酰肼進(jìn)行希夫堿反應(yīng)制得，其凝血速度高、力學(xué)性能好，最高能達(dá)到6000Pa、透析純化時(shí)間短，使用后傷口愈合速度較快，最快5s凝血，小鼠活體實(shí)驗(yàn)肉眼傷口面積觀察比紗布快3天比市售海藻酸鈉敷料快1天。

(2)本發(fā)明所提供的止血試劑盒，操作和使用簡便，凝血速度高、使用后傷口愈合速度較快。

附圖說明

下面將結(jié)合附圖來說明本發(fā)明。

圖1為醛改性海藻酸鈉制備原理圖。

圖2為醛改性透明質(zhì)酸鈉制備原理圖。

圖3為胺基改姓的聚天冬酰肼制備原理圖。

圖4為本發(fā)明醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉中的醛基與胺改性聚天冬酰肼中的酰肼基團(tuán)反應(yīng)原理圖。

圖5為含兩個(gè)注射頭的止血試劑盒的示意圖：

圖6為含一個(gè)注射頭的止血試劑盒的示意圖；

圖5和圖6中的附圖標(biāo)記的含義為：A料倉A；B料倉B；A′與料倉A相連通的注射頭A′；B′與料倉B相連通的注射頭B′；M同時(shí)與料倉A和料倉B相連通的注射頭M。

圖7顯示出市售與實(shí)驗(yàn)組傷口初期對比結(jié)果。

圖8顯示出市售與實(shí)驗(yàn)組傷口處期對比結(jié)果。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明容易理解，下面將結(jié)合附圖來詳細(xì)說明本發(fā)明。

如前所述，現(xiàn)有的止血材料凝血速度低、力學(xué)性能差、透析純化時(shí)間長，使用后傷口愈合速度慢。鑒于此，本發(fā)明人針對止血材料進(jìn)行了大量實(shí)驗(yàn)研究，本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，將醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉混合后與胺改性聚天冬酰肼進(jìn)行希夫堿反應(yīng)，可以在極短的時(shí)間內(nèi)凝結(jié)成膠，由此使血液發(fā)生凝固，產(chǎn)生快速止血作用，且所得到的凝膠的凝膠強(qiáng)度高，力學(xué)性能好，促傷口愈合性優(yōu)良。本發(fā)明正是基于上述發(fā)現(xiàn)做出的。

本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明所提供止血材料可以在需要止血的部位通過醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉混合后與胺改性聚天冬酰肼進(jìn)行希夫堿快速反應(yīng)得到，從而起到快速止血的作用。

本發(fā)明中所述醛改性海藻酸鈉(ALG-CHO)的結(jié)構(gòu)式如式(I)所示，其由海藻酸鈉(ALG)水溶液與高碘酸鈉水溶液進(jìn)行避光攪拌反應(yīng)，并以乙二醇終止反應(yīng)，再經(jīng)超濾和凍干獲得。上述反應(yīng)的原理如圖1所示。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，例如，30℃下，向質(zhì)量濃度5％海藻酸鈉水溶液中加入等摩爾的高碘酸鈉水溶液，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到醛改性海藻酸鈉。

本發(fā)明中所述醛改性透明質(zhì)酸鈉(HA-CHO^+，或HAALD)的結(jié)構(gòu)式如式(II)所示，其由透明質(zhì)酸(HA)水溶液與高碘酸鈉水溶液進(jìn)行避光攪拌反應(yīng)，并以乙二醇終止反應(yīng)，再經(jīng)超濾和凍干獲得。上述反應(yīng)的原理如圖2所示。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，例如，30℃下，向質(zhì)量濃度5％透明質(zhì)酸水溶液中加入等摩爾的高碘酸鈉水溶液，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到醛改性透明質(zhì)酸鈉。

本發(fā)明中所述胺改性聚天冬氨酸(PAHy)的結(jié)構(gòu)式如式(III)所示，其通過將聚琥珀酰亞胺(PSI)的N，N-二甲基甲酰胺溶液與水合肼(NH₂-NH₂·H₂O)進(jìn)行接觸反應(yīng)，反應(yīng)物抽慮后再經(jīng)超濾和干燥制得。上述反應(yīng)的原理如圖3所示。

本發(fā)明中醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉中的醛基與胺改性聚天冬酰肼中的酰肼基團(tuán)的希夫堿反應(yīng)原理如圖4所示。由于酰肼基團(tuán)與醛基的反應(yīng)速度快，產(chǎn)物化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，并且機(jī)體表面的蛋白質(zhì)也可以參與水凝膠周圍未反應(yīng)基團(tuán)的希夫堿反應(yīng)，這能更有助于材料與表皮作用不易脫落。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，例如，將4g聚琥珀酰亞胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺(DMF)，加入4mL水合肼，40℃反應(yīng)4小時(shí)，抽濾保留固體溶解于水中超濾，冷凍干燥，得到胺改性聚天冬氨酸。

本法中參與希夫堿反應(yīng)的各反應(yīng)物以水溶液的方式進(jìn)行反應(yīng)得到止血材料，具體包括將醛改性海藻酸鈉水溶液和醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混合形成的醛改性混合物水溶液與胺改性聚天冬酰肼水溶液混合后進(jìn)行希夫堿反應(yīng)制得凝膠態(tài)止血材料的步驟。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，所述醛改性混合物中醛改性海藻酸鈉與醛改性透明質(zhì)酸鈉的重量比為1∶1，所述醛改性混合物與胺改性聚天冬酰肼的重量比為1∶1。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，醛改性海藻酸鈉水溶液的濃度為0.05-0.25g/mL，優(yōu)選醛改性海藻酸鈉水溶液的濃度為0.10-0.25g/mL，進(jìn)一步優(yōu)選醛改性海藻酸鈉水溶液的濃度為0.25g/mL。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液的濃度為0.05-0.25g/mL，優(yōu)選醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液的濃度為0.10-0.25g/mL，進(jìn)一步優(yōu)選醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液的濃度為0.25g/mL。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，胺改性聚天冬酰肼水溶液的濃度為0.1-0.5g/mL，優(yōu)選胺改性聚天冬酰肼水溶液的濃度為0.2-0.5g/mL，進(jìn)一步優(yōu)選胺改性聚天冬酰肼水溶液的濃度為0.5g/mL。

本發(fā)明中對希夫堿反應(yīng)的溫度沒有特別的限制，通常所述希夫堿反應(yīng)的溫度為室溫。

本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該了解上述希夫堿反應(yīng)的溫度可以為20-25℃。

本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)中，上述希夫堿反應(yīng)速度很快，醛改性海藻酸鈉水溶液和醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混合形成的醛改性混合物水溶液與胺改性聚天冬酰肼水溶液混合后在不超過170s的時(shí)間內(nèi)就可以完成希夫堿反應(yīng)得到凝膠態(tài)止血材料。在一些優(yōu)選的實(shí)施例中，醛改性海藻酸鈉水溶液和醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混合形成的醛改性混合物水溶液與胺改性聚天冬酰肼水溶液混合后在10s以內(nèi)，甚至5s以內(nèi)就可以完成希夫堿反應(yīng)得到凝膠態(tài)止血材料。

由于本發(fā)明止血材料止血的機(jī)理是醛改性海藻酸鈉水溶液和醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混合形成的醛改性混合物水溶液與胺改性聚天冬酰肼水溶液進(jìn)行希夫堿快速反應(yīng)，能夠在極短的時(shí)間內(nèi)凝結(jié)成膠，由此使血液發(fā)生凝固。因此，容易理解，醛改性海藻酸鈉水溶液和醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混合形成的醛改性混合物水溶液與胺改性聚天冬酰肼水溶液進(jìn)行希夫堿快速反應(yīng)成膠的時(shí)間就是凝血、止血的時(shí)間。

在本發(fā)明的一些具體實(shí)施例中，將0.5mL濃度為0.25g/mL的醛改性海藻酸鈉水溶液與0.5mL濃度0.25g/mL的醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混勻后加入1mL濃度0.5g/mL的胺改性聚天冬氨酸水溶液中混合，可以在10s以內(nèi)反應(yīng)成膠，產(chǎn)生凝血、止血作用。

本領(lǐng)域技術(shù)人還應(yīng)該了解的是，本發(fā)明所提供的止血試劑盒是為方便施用本發(fā)明止血材料而設(shè)計(jì)的，其所提供的兩個(gè)料倉中所含的試劑為可以在待處理創(chuàng)面或傷口進(jìn)行原位希夫堿反應(yīng)而成膠的兩種物質(zhì)，其中的一個(gè)料倉中裝的是含有醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉形成的醛改性混合物或含有醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉的醛改性混合物水溶液，另一個(gè)料倉中裝的是胺改性聚天冬酰肼或胺改性聚天冬酰肼水溶液。因此，本發(fā)明所提供的止血試劑盒也可以理解為一種可以用于原位成膠止血的施藥裝置。

容易理解，當(dāng)料倉中裝的是含有醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉形成的醛改性混合物或胺改性聚天冬酰肼時(shí)，可以在使用時(shí)，加入作為醫(yī)藥可接受載體的蒸餾水配制而成相應(yīng)的含有醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉的醛改性混合物水溶液或胺改性聚天冬酰肼水溶液。

需要了解的是，上述試劑盒中的醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉或醛改性海藻酸鈉水溶液和醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液可以單獨(dú)存在，可以在施用前配制成醛改性混合物或醛改性混合物水溶液，裝入試劑盒中的一個(gè)料倉中使用。

在本發(fā)明的一些具體實(shí)施例中，本發(fā)明所提供的止血試劑盒，包括單獨(dú)或并列設(shè)置的料倉A和料倉B，其中，料倉A中含有醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉形成的醛改性混合物或含有醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉的醛改性混合物水溶液，料倉B含有胺改性聚天冬酰肼或胺改性聚天冬酰肼水溶液。所述試劑盒還包括與料倉A相連通用于輸出醛改性混合物水溶液的注射頭A′和與料倉B相連通用于輸出胺改性聚天冬酰肼水溶液的注射頭B′。

在本發(fā)明的一些進(jìn)一步具體的實(shí)施例中，本發(fā)明所提供的試劑盒的使用方法是，采用兩個(gè)注射頭A′和B′同時(shí)或分別將含有醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉的醛改性混合物水溶液胺改性聚天冬酰肼水溶液注射到在待處理創(chuàng)面或傷口位置，通過二者快速反應(yīng)成膠而使血液發(fā)生凝固，從而產(chǎn)生止血作用。

在本發(fā)明的一些實(shí)施例中，本發(fā)明所提供的止血試劑盒包括并列設(shè)置的料倉A和料倉B，其中，料倉A中含有醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉形成的醛改性混合物或含有醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉的醛改性混合物水溶液，料倉B含有胺改性聚天冬酰肼或胺改性聚天冬酰肼水溶液。所述試劑盒還包括同時(shí)與料倉A和料倉B相連通用于輸出醛改性混合物水溶液與胺改性聚天冬酰肼水溶液的注射頭M。

在本發(fā)明的一些進(jìn)一步具體的實(shí)施例中，本發(fā)明所提供的試劑盒的使用方法是，采用一個(gè)注射頭M同時(shí)將含有醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉的醛改性混合物水溶液和胺改性聚天冬酰肼水溶液注射到在待處理創(chuàng)面或傷口位置，通過二者快速反應(yīng)成膠而使血液發(fā)生凝固，從而產(chǎn)生止血作用。

本發(fā)明中，含有醛改性海藻酸鈉和醛改性透明質(zhì)酸鈉的醛改性混合物水溶液與胺改性聚天冬酰肼水溶液混合后為液態(tài)，反應(yīng)成膠是在一瞬間完成。因此，本發(fā)明所述用語“成膠時(shí)間”是指開始混合到成膠這瞬間的時(shí)間。

本發(fā)明中采用凝膠色譜法測定各物質(zhì)的分子量：采用凝膠色譜儀(E2695，沃特世公司)，色譜柱選用watersGPC凝膠色譜柱，標(biāo)準(zhǔn)品為葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品。在25℃室溫條件下檢測。

本發(fā)明采用旋轉(zhuǎn)式流變儀(AR2000ex，美國TA儀器公司)在25℃室溫環(huán)境下測定止血材料產(chǎn)品的凝膠強(qiáng)度。

本發(fā)明采用旋轉(zhuǎn)式流變儀(AR2000ex，美國TA儀器公司)在25℃室溫環(huán)境下測定止血材料產(chǎn)品的成膠時(shí)間。

實(shí)施例

為使本發(fā)明更加容易理解，下面將結(jié)合附圖和實(shí)施例來進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明，這些實(shí)施例僅起說明性作用，并不局限于本發(fā)明的應(yīng)用范圍。本發(fā)明中所使用的原料或組分若無特殊說明均可以通過商業(yè)途徑或常規(guī)方法制得。

實(shí)施例1：利用醛改性透明質(zhì)酸鈉和醛改性海藻酸鈉與胺改性聚天冬酰肼制備一種止血材料。

(1)30℃下，向質(zhì)量濃度5％海藻酸鈉水溶液中加入6.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為30％的醛改性海藻酸鈉，分子量為24700Da；

(2)30℃下，向質(zhì)量濃度5％透明質(zhì)酸水溶液中加入7.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為30％的醛改性透明質(zhì)酸鈉，分子量為480000Da；

(3)將4g聚琥珀酰亞胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反應(yīng)4小時(shí)，抽濾保留固體溶解于水中超濾，冷凍干燥，得到接枝率為80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量為60000Da；

(4)將1mL濃度為0.05g/mL的醛改性海藻酸鈉水溶液與1mL濃度0.05g/mL的醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混勻后加入1mL濃度0.1g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反應(yīng)成膠時(shí)間為170s。

實(shí)施例2：利用醛改性透明質(zhì)酸鈉和的醛改性海藻酸鈉與胺改性聚天冬酰肼制備一種止血材料。

(1)30℃下，向質(zhì)量濃度5％海藻酸鈉水溶液中加入7.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為36％的醛改性海藻酸鈉，分子量為18200Da；

(2)30℃下，向質(zhì)量濃度5％透明質(zhì)酸水溶液中加入8.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為36％的醛改性透明質(zhì)酸鈉，分子量為320000Da；

(3)將4g聚琥珀酰亞胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反應(yīng)4小時(shí)，抽濾保留固體溶解于水中超濾，冷凍干燥，得到接枝率為80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量為60000Da；

(4)將1mL濃度為0.05g/mL的醛改性海藻酸鈉水溶液與1mL濃度0.05g/mL的醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混勻后加入1mL濃度0.1g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反應(yīng)成膠時(shí)間為145s。

實(shí)施例3：利用醛改性透明質(zhì)酸鈉和醛改性海藻酸鈉與胺改性聚天冬酰肼制備一種止血材料。

(1)30℃下，向質(zhì)量濃度5％海藻酸鈉水溶液中加入8.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到醛改性海藻酸鈉，分子量為9800Da；

(2)30℃下，向質(zhì)量濃度5％透明質(zhì)酸水溶液中加入9.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為42％的醛改性透明質(zhì)酸鈉，分子量為230000Da；

(3)將4g聚琥珀酰亞胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反應(yīng)4小時(shí)，抽濾保留固體溶解于水中超濾，冷凍干燥，得到接枝率為42％的胺改性聚天冬酰肼，分子量為60000Da；

(4)將1mL濃度為0.05g/mL的醛改性海藻酸鈉水溶液與1mL濃度0.05g/mL的醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混勻后加入1mL濃度0.1g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反應(yīng)成膠時(shí)間為125s。

實(shí)施例4：利用醛改性透明質(zhì)酸鈉和醛改性海藻酸鈉與胺改性聚天冬酰肼制備一種止血材料。

(1)30℃下，向質(zhì)量濃度5％海藻酸鈉水溶液中加入9.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為50％的醛改性海藻酸鈉，分子量為5100Da；

(2)30℃下，向質(zhì)量濃度5％透明質(zhì)酸水溶液中加入10.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為50％的醛改性透明質(zhì)酸鈉，分子量為150000Da；

(3)將4g聚琥珀酰亞胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反應(yīng)4小時(shí)，抽濾保留固體溶解于水中超濾，冷凍干燥，得到接枝率為36％的胺改性聚天冬酰肼，分子量為60000Da；

(4)將1mL濃度為0.05g/mL的醛改性海藻酸鈉水溶液與1mL濃度0.05g/mL的醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混勻后加入1mL濃度0.1g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反應(yīng)成膠時(shí)間為110s。

實(shí)施例5：利用醛改性透明質(zhì)酸鈉和醛改性海藻酸鈉與胺改性聚天冬酰肼制備一種止血材料。

(1)30℃下，向質(zhì)量濃度5％海藻酸鈉水溶液中加入6.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為30％的醛改性海藻酸鈉，分子量為24700Da；

(2)30℃下，向質(zhì)量濃度5％透明質(zhì)酸水溶液中加入7.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為30％的醛改性透明質(zhì)酸鈉，分子量為480000Da；

(3)將4g聚琥珀酰亞胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反應(yīng)4小時(shí)，抽濾保留固體溶解于水中超濾，冷凍干燥，得到接枝率為80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量為60000Da；

(4)將1mL濃度為0.1g/mL的醛改性海藻酸鈉水溶液與1mL濃度0.1g/mL的醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混勻后加入1mL濃度0.2g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反應(yīng)成膠時(shí)間為54s。

實(shí)施例6：利用醛改性透明質(zhì)酸鈉和醛改性海藻酸鈉與胺改性聚天冬酰肼制備一種止血材料。

(1)30℃下，向質(zhì)量濃度5％海藻酸鈉水溶液中加入7.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為36％的醛改性海藻酸鈉分子量為18200Da；

(2)30℃下，向質(zhì)量濃度5％透明質(zhì)酸水溶液中加入8.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為36％的醛改性透明質(zhì)酸鈉，分子量為320000Da；

(3)將4g聚琥珀酰亞胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反應(yīng)4小時(shí)，抽濾保留固體溶解于水中超濾，冷凍干燥，得到接枝率為80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量為60000Da；

(4)將1mL濃度為0.1g/mL的醛改性海藻酸鈉水溶液與1mL濃度0.1g/mL的醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混勻后加入1mL濃度0.2g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反應(yīng)成膠時(shí)間為40s。

實(shí)施例7：利用醛改性透明質(zhì)酸鈉和醛改性海藻酸鈉與胺改性聚天冬酰肼制備一種止血材料。

(1)30℃下，向質(zhì)量濃度5％海藻酸鈉水溶液中加入8.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為42％的醛改性海藻酸鈉，分子量為9800Da；

(2)30℃下，向質(zhì)量濃度5％透明質(zhì)酸水溶液中加入9.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為42％的醛改性透明質(zhì)酸鈉，分子量為230000Da；

(3)將4g聚琥珀酰亞胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反應(yīng)4小時(shí)，抽濾保留固體溶解于水中超濾，冷凍干燥，得到接枝率為80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量為60000Da；

(4)將1mL濃度為0.1g/mL的醛改性海藻酸鈉水溶液與1mL濃度0.1g/mL的醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混勻后加入1mL濃度0.2g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反應(yīng)成膠時(shí)間為35s。

實(shí)施例8：利用醛改性透明質(zhì)酸鈉和醛改性海藻酸鈉與胺改性聚天冬酰肼制備一種止血材料。

(1)30℃下，向質(zhì)量濃度5％海藻酸鈉水溶液中加入9.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為50％的醛改性海藻酸鈉，分子量為5100Da；

(2)30℃下，向質(zhì)量濃度5％透明質(zhì)酸水溶液中加入10.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為50％的醛改性透明質(zhì)酸鈉，分子量為150000Da；

(3)將4g聚琥珀酰亞胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反應(yīng)4小時(shí)，抽濾保留固體溶解于水中超濾，冷凍干燥，得到接枝率為80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量為60000Da；

(4)將1mL濃度為0.1g/mL的醛改性海藻酸鈉水溶液與1mL濃度0.1g/mL的醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混勻后加入1mL濃度0.2g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反應(yīng)成膠時(shí)間為30s。

實(shí)施例9：利用醛改性透明質(zhì)酸鈉和醛改性海藻酸鈉與胺改性聚天冬酰肼制備一種止血材料。

(1)30℃下，向質(zhì)量濃度5％海藻酸鈉水溶液中加入6.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為30％的醛改性海藻酸鈉，分子量為24700Da；

(2)30℃下，向質(zhì)量濃度5％透明質(zhì)酸水溶液中加入7.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為30％的醛改性透明質(zhì)酸鈉，分子量為480000Da；

(3)將4g聚琥珀酰亞胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反應(yīng)4小時(shí)，抽濾保留固體溶解于水中超濾，冷凍干燥，得到接枝率為80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量為60000Da；

(4)將1mL濃度為0.2g/mL的醛改性海藻酸鈉水溶液與1mL濃度0.2g/mL的醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混勻后加入1mL濃度0.4g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反應(yīng)成膠時(shí)間為20s。

實(shí)施例10：利用醛改性透明質(zhì)酸鈉和醛改性海藻酸鈉與胺改性聚天冬酰肼制備一種止血材料。

(1)30℃下，向質(zhì)量濃度5％海藻酸鈉水溶液中加入7.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為36％的醛改性海藻酸鈉分子量為18200Da；

(2)30℃下，向質(zhì)量濃度5％透明質(zhì)酸水溶液中加入8.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為36％的醛改性透明質(zhì)酸鈉，分子量為320000Da；

(3)將4g聚琥珀酰亞胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反應(yīng)4小時(shí)，抽濾保留固體溶解于水中超濾，冷凍干燥，得到接枝率為80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量為60000Da；

(4)將1mL濃度為0.2g/mL的醛改性海藻酸鈉水溶液與1mL濃度0.2g/mL的醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混勻后加入1mL濃度0.4g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反應(yīng)成膠時(shí)間為18s。

實(shí)施例11：利用醛改性透明質(zhì)酸鈉和醛改性海藻酸鈉與胺改性聚天冬酰肼制備一種止血材料。

(1)30℃下，向質(zhì)量濃度5％海藻酸鈉水溶液中加入8.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為42％的醛改性海藻酸鈉，分子量為9800Da；

(2)30℃下，向質(zhì)量濃度5％透明質(zhì)酸水溶液中加入9.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為42％的醛改性透明質(zhì)酸鈉，分子量為230000Da；

(3)將4g聚琥珀酰亞胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反應(yīng)4小時(shí)，抽濾保留固體溶解于水中超濾，冷凍干燥，得到接枝率為80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量為60000Da；

(4)將1mL濃度為0.2g/mL的醛改性海藻酸鈉水溶液與1mL濃度0.2g/mL的醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混勻后加入1mL濃度0.4g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反應(yīng)成膠時(shí)間為15s。

實(shí)施例12：利用醛改性透明質(zhì)酸鈉和醛改性海藻酸鈉與胺改性聚天冬酰肼制備一種止血材料。

(1)30℃下，向質(zhì)量濃度5％海藻酸鈉水溶液中加入9.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為50％的醛改性海藻酸鈉，分子量為5100Da；

(2)30℃下，向質(zhì)量濃度5％透明質(zhì)酸水溶液中加入10.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為50％的醛改性透明質(zhì)酸鈉，分子量為150000Da；

(3)將4g聚琥珀酰亞胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反應(yīng)4小時(shí)，抽濾保留固體溶解于水中超濾，冷凍干燥，得到接枝率為80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量為60000Da；

(4)將1mL濃度為0.2g/mL的醛改性海藻酸鈉水溶液與1mL濃度0.2g/mL的醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混勻后加入1mL濃度0.4g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反應(yīng)成膠時(shí)間為10s。

實(shí)施例13：利用醛改性透明質(zhì)酸鈉和醛改性海藻酸鈉與胺改性聚天冬酰肼制備一種止血材料。

(1)30℃下，向質(zhì)量濃度5％海藻酸鈉水溶液中加入9.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為50％的醛改性海藻酸鈉，分子量為5100Da；

(2)30℃下，向質(zhì)量濃度5％透明質(zhì)酸水溶液中加入10.5g高碘酸鈉，避光攪拌反應(yīng)3小時(shí)后加入乙二醇終止反應(yīng)，用超濾杯進(jìn)行超濾，冷凍干燥得到接枝率為50％的醛改性透明質(zhì)酸鈉，分子量為150000Da；

(3)將4g聚琥珀酰亞胺溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入4mL水合肼，40℃反應(yīng)4小時(shí)，抽濾保留固體溶解于水中超濾，冷凍干燥，得到接枝率為80-92％的胺改性聚天冬酰肼，分子量為60000Da；

(4)將1mL濃度為0.25g/mL的醛改性海藻酸鈉水溶液與1mL濃度0.25g/mL的醛改性透明質(zhì)酸鈉水溶液混勻后加入1mL濃度0.5g/mL的胺改性聚天冬酰肼水溶液中混合。反應(yīng)成膠時(shí)間為5s。

實(shí)施例14：

大鼠麻醉后置于無菌操作板上，于背后兩側(cè)切割直徑為8mm的圓形傷口(深度大約達(dá)到切到筋膜的程度)。大鼠分為2組AB，每組4只大鼠不同天數(shù)。A組為對照組采用市售止血材料，B組為實(shí)驗(yàn)組，PAHy以及ALG-CHO粉末，需配制成0.2g/mL溶液混合后迅速涂抹至傷口上使用。

實(shí)驗(yàn)過程中無需更換材料，可適當(dāng)采取紗布包扎防止材料被破壞，照相記錄時(shí)需去掉紗布以便觀察。傷口愈合率使用以下公式計(jì)算

計(jì)算公式：創(chuàng)面愈合率＝[(第0天創(chuàng)面面積-第n天創(chuàng)面面積)/第0天創(chuàng)面面積]*100％(n＝0，3，7，14)

活體實(shí)驗(yàn)過程及結(jié)果：

由于在傷口愈合時(shí)創(chuàng)面暴露在環(huán)境中，干燥失水，通常臨時(shí)細(xì)胞外環(huán)境很難建立，因此許多促進(jìn)愈合的生長因子不易在惡略環(huán)境下發(fā)揮應(yīng)有的促愈合功能，因此在傷口處產(chǎn)生臨時(shí)的細(xì)胞外環(huán)境，對傷口起到基本的物理保護(hù)有利于傷口的愈合。

將小鼠麻醉后將背部相應(yīng)位置表皮毛除去后，切除筋膜層以上全部表皮組織，最終形成直徑為8mm的圓孔性傷口，在一只老鼠背上有兩個(gè)對照，總攻一個(gè)材料進(jìn)行4只對照，一共8個(gè)平行傷口。

市售與實(shí)驗(yàn)組傷口初期對比結(jié)果如圖7所示，圖7中上部的為醫(yī)院常用的市售海藻酸鈉凝膠類敷料的實(shí)驗(yàn)情況，下部為本實(shí)驗(yàn)室制備的原料在傷口上進(jìn)行原位交聯(lián)后的情況?？梢钥闯鍪惺鄣牟牧喜⒉荒芷鸬胶芎玫闹寡饔茫瑐跁?huì)持續(xù)滲血，而止血凝膠則能夠快速在傷口上交聯(lián)起到止血作用。并且第三天時(shí)實(shí)驗(yàn)組傷口外側(cè)有凝膠作為保護(hù)，沒有發(fā)生惡性壞死，而市售材料則發(fā)生了變黑的情況。同時(shí)材料不需要其他換藥處理，小鼠可自由活動(dòng)。

市售與實(shí)驗(yàn)組傷口中期對比結(jié)果如圖8所示，圖8中上部的為醫(yī)院常用的市售海藻酸鈉凝膠類敷料的實(shí)驗(yàn)情況，下布為本實(shí)驗(yàn)室制備的原料在傷口上進(jìn)行原位交聯(lián)后的情況?？梢钥闯鍪惺鄣牟牧虾笃谟锨闆r與實(shí)驗(yàn)組相似，實(shí)驗(yàn)組稍快于市售組，能夠起到正常的促愈合作用。

采用旋轉(zhuǎn)式流變儀25℃室溫環(huán)境測定上述實(shí)施例中所制備的止血材料的凝膠強(qiáng)度，結(jié)果表明上述實(shí)施例中所制備的止血材料的凝膠強(qiáng)度為1000-6000Pa；而小鼠活體實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，采用上述實(shí)施例中所制備的止血材料處理創(chuàng)面或傷口，本發(fā)明肉眼傷口面積觀察比采用紗布處理快3天，比采用市售海藻酸鈉敷料處理快1天。

應(yīng)當(dāng)注意的是，以上所述的實(shí)施例僅用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制。通過參照典型實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行了描述，但應(yīng)當(dāng)理解為其中所用的詞語為描述性和解釋性詞匯，而不是限定性詞匯。可以按規(guī)定在本發(fā)明權(quán)利要求的范圍內(nèi)對本發(fā)明作出修改，以及在不背離本發(fā)明的范圍和精神內(nèi)對本發(fā)明進(jìn)行修訂。盡管其中描述的本發(fā)明涉及特定的方法、材料和實(shí)施例，但是并不意味著本發(fā)明限于其中公開的特定例，相反，本發(fā)明可擴(kuò)展至其他所有具有相同功能的方法和應(yīng)用。