本發(fā)明屬于傳統(tǒng)中醫(yī)藥用于腫瘤治療方面的領(lǐng)域，尤其是在改善乳腺癌內(nèi)分泌治療后引起的不良反應(yīng)方面。

背景技術(shù)：

乳腺癌是女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤,內(nèi)分泌治療是乳腺癌的重要治療手段之一，其目的在于降低雌激素水平或阻斷雌激素作用，從而抑制乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)，可以延長(zhǎng)生存，減少?gòu)?fù)發(fā)，在乳腺癌綜合治療中占有重要地位。但內(nèi)分泌治療后由于體內(nèi)雌激素水平的下降，導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)分泌失調(diào)、植物神經(jīng)功能紊亂，出現(xiàn)一系列類似于絕經(jīng)期綜合征的癥狀，主要表現(xiàn)為:①神經(jīng)心理癥候群：潮熱汗出、抑郁、煩躁易怒、月經(jīng)失調(diào)、頭暈耳鳴及心悸失眠等。②骨質(zhì)疏松：體內(nèi)雌激素水平下降，成骨細(xì)胞活性降低，破骨細(xì)胞重吸收功能增強(qiáng)，兩者之間的動(dòng)態(tài)平衡遭到破壞，導(dǎo)致骨量減少，骨密度降低。③肝臟損害及脂肪變性：抗雌激素治療使雌激素在肝臟表達(dá)減少，從而抑制雌激素對(duì)脂蛋白的分解作用，導(dǎo)致脂肪在肝細(xì)胞內(nèi)的大量堆積誘發(fā)脂肪肝。

乳腺癌采用西藥內(nèi)分泌治療后，由于其導(dǎo)致了體內(nèi)雌激素水平下降，而致機(jī)體內(nèi)分泌失調(diào)、植物神經(jīng)功能紊亂，出現(xiàn)一系列類似于絕經(jīng)期綜合征的癥狀，主要表現(xiàn)為①神經(jīng)心理癥候群：潮熱汗出、抑郁、煩躁易怒、月經(jīng)失調(diào)、頭暈耳鳴及心悸失眠等。②骨質(zhì)疏松：體內(nèi)雌激素水平下降，成骨細(xì)胞活性降低，破骨細(xì)胞重吸收功能增強(qiáng)，兩者之間的動(dòng)態(tài)平衡遭到破壞，導(dǎo)致骨量減少，骨密度降低。③肝臟損害及脂肪變性：抗雌激素治療使雌激素在肝臟表達(dá)減少，從而抑制雌激素對(duì)脂蛋白的分解作用，導(dǎo)致脂肪在肝細(xì)胞內(nèi)的大量堆積誘發(fā)脂肪肝。

現(xiàn)階段治療乳腺癌內(nèi)分泌治療后不良反應(yīng)的方法主要有：①神經(jīng)心理癥候群的防治：主要建議針灸治療或調(diào)整生活方式，嚴(yán)重者需停止內(nèi)分泌治療，停藥不利于乳腺癌的治療。②骨質(zhì)疏松的防治：補(bǔ)充鈣劑和維生素D；根據(jù)多項(xiàng)隨機(jī)、多中心、大型臨床研究結(jié)果顯示可應(yīng)用唑來(lái)磷酸治療或選用抑制破骨細(xì)胞活性的地諾單抗治療，這些治療有效，但在治療同時(shí)亦會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的副作用，如唑來(lái)磷酸治療會(huì)出現(xiàn)發(fā)熱、肌肉酸痛及腎臟損害等不良反應(yīng)，且價(jià)格昂貴，增加了患者經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

解決的技術(shù)問(wèn)題

本發(fā)明采用傳統(tǒng)的中醫(yī)藥治療乳腺癌內(nèi)分泌治療后的煩躁、潮熱、多汗、腰酸等腦內(nèi)缺乏單胺類神經(jīng)遞質(zhì)引起的神經(jīng)心理癥候群，根據(jù)此類癥候群主癥及舌苔脈象，辨證為肝腎陰虛、陰虛火旺型。

采用的技術(shù)方案

一種具有調(diào)整腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)功效的中藥組合物，具體由以下配比的中藥成分組成：生地黃400-600份，山茱萸100-300份，山藥100-300份，澤瀉150-250份，牡丹皮150-250份，茯苓150-250份，柴胡100-150份，白芍100-300份，山梔150-250份，酸棗仁100-300份，當(dāng)歸150-250份。

進(jìn)一步優(yōu)選，本發(fā)明的中藥組合物由以下配比的中藥成分組成：生地黃480份，山茱萸240份，山藥240份，澤瀉180份，牡丹皮180份，茯苓180份，柴胡120份，白芍240份，梔子180份，酸棗仁240份，當(dāng)歸180份。

有益效果

本發(fā)明針對(duì)內(nèi)分泌治療后擾亂了腎-天葵-沖任-胞宮生殖軸的平衡狀態(tài)，腎精不足、陰虛火旺是本病的主要病機(jī)，因此本發(fā)明的技術(shù)方案集中于清肝補(bǔ)腎、滋陰降火。

本發(fā)明的中藥組合物由生地黃、山茱萸、山藥、澤瀉、牡丹皮、茯苓、柴胡、白芍、梔子、酸棗仁、當(dāng)歸組成。方中生地黃、山茱萸、山藥、澤瀉、茯苓滋陰補(bǔ)腎，牡丹皮、柴胡、梔子疏肝降火，酸棗仁、白芍、當(dāng)歸滋陰養(yǎng)血安神。諸藥合用，使腎陰充養(yǎng)，肝氣暢達(dá)，虛火得降。

附圖說(shuō)明

圖1 ER、PR熒光免疫測(cè)定陽(yáng)性證實(shí)小鼠乳腺癌4T1細(xì)胞為激素依賴性乳腺癌細(xì)胞株。

圖2小鼠陰道細(xì)胞涂片出現(xiàn)外底層細(xì)胞提示去卵巢手術(shù)成功。

圖3絕經(jīng)后乳腺癌移植小鼠下丘腦5-HT1AR與5-HT2AR蛋白表達(dá)水平成對(duì)應(yīng)反比關(guān)系。

具體實(shí)施方式

實(shí)施方式一：本發(fā)明中藥組合物對(duì)去卵巢的乳腺癌移植小鼠單胺類神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)的影響

1.制備本發(fā)明中藥組合物湯劑

稱取本發(fā)明中藥組合物中各組分的生藥材，生地黃24g，山茱萸12g，山藥12g，澤瀉9g，牡丹皮9g，茯苓9g，柴胡6g，白芍12g，山梔9g，酸棗仁12g，當(dāng)歸9g，將上述11味中藥加適量蒸餾水浸泡2h，大火加熱煮沸，之后小火煎煮30min，過(guò)濾，再用雙蒸水按前法重復(fù)煎煮一次，過(guò)濾，將2次煎煮的濾液混合后按所需濃度進(jìn)行濃縮(含生藥1.88g/mL)，制成本發(fā)明中藥組合物濃縮液，置-80℃冰箱保存?zhèn)洹?/p>

2.建立絕經(jīng)后的乳腺癌小鼠模型

1)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的小鼠乳腺癌4T1細(xì)胞株，1.0×10⁴個(gè)/孔接種于96孔培養(yǎng)板，37℃，5％CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h，免疫熒光測(cè)定ER、PR表達(dá)，證實(shí)為激素依賴性乳腺癌細(xì)胞株(圖1)。選用4～6周的雌性BALB/c小鼠，體重18～22g，共50只，腹部脫毛，用異氟烷吸入式麻醉，仰臥固定，在小鼠右側(cè)倒數(shù)第二對(duì)乳腺脂肪墊下接種5×10⁵個(gè)4T1細(xì)胞，建立小鼠乳腺癌移植模型。接種48h后，觀察腫瘤生長(zhǎng)狀況。

2)乳腺癌移植小鼠去卵巢手術(shù)：小鼠接種2周后行去卵巢手術(shù)，1％戊巴比妥鈉(40ml/kg)腹腔注射麻醉后，仰臥固定，剪去腹部長(zhǎng)毛，碘伏、70％乙醇消毒腹部皮膚。腹部正中做2～3cm長(zhǎng)切口，鈍性分離腹部肌肉。進(jìn)入腹腔后輕輕將乳白色脂肪組織提出腹腔。分離后找到Y(jié)型子宮。在兩側(cè)子宮末端可見(jiàn)卵巢。鉗夾、細(xì)線結(jié)扎子宮，剪去卵巢，同法處理對(duì)側(cè)卵巢，檢查無(wú)滲血后將脂肪組織和子宮送回腹腔內(nèi)。用3/0線間斷二次縫合，關(guān)閉腹腔，縫合皮膚，消毒創(chuàng)面。所有小鼠術(shù)后第3天開(kāi)始行陰道細(xì)胞涂片觀察手術(shù)效果。連續(xù)5d出現(xiàn)外底層細(xì)胞證明小鼠體內(nèi)雌激素水平降低，卵巢摘除手術(shù)成功(圖2)。

3.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)療效觀察

1)藥物處理：40只去卵巢的乳腺模型小鼠隨機(jī)分為4組：實(shí)驗(yàn)組1(來(lái)曲唑+中藥組合物低劑量組)、實(shí)驗(yàn)組2(來(lái)曲唑+中藥組合物高劑量組)、模型組(蒸餾水)、陽(yáng)性對(duì)照組(來(lái)曲唑組)，共4組，每組10只。來(lái)曲唑組劑量0.379mg/kg/d，本發(fā)明中藥組合物低劑量組為11.28g/Kg/d，高劑量為45.1g/Kg/d，模型組予以等劑量蒸餾水灌胃，1次/日。

2)檢測(cè)指標(biāo)

a)給藥第4周，各組小鼠用10％的水合氯醛(0.35ml/100g)腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈取血2ml，離心機(jī)3000r/min，離心20分鐘取上清液，-20℃冰箱貯存，檢測(cè)E₂、FSH、LH水平。

b)第4周，各組小鼠腹主動(dòng)脈采血后，用1％戊巴比妥鈉(40mL/kg)麻醉小鼠，開(kāi)胸暴露心臟，剪開(kāi)右心耳，經(jīng)左心室插管至升主動(dòng)脈，200mL生理鹽水沖洗血液，然后用含4％多聚甲醛的0.1mol/L的磷酸鹽緩沖液(phosp-hate buffer solution，PBS，pH7.4，4℃，300mL灌注固定，先快后慢，灌畢，立即取腦，在冰冷的金屬平臺(tái)上迅速分離出海馬區(qū)，保存于-86℃的冰箱備測(cè)。Elisa法測(cè)定小鼠5-HT、NE水平。Western Blot方法檢測(cè)小鼠下丘腦組織中5-HT1AR、5-HT2AR蛋白的表達(dá)。

4.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1)高劑量本發(fā)明中藥組合物聯(lián)合來(lái)曲唑治療絕經(jīng)后的乳腺癌移植小鼠，能增加小鼠腦內(nèi)5-HT、NE的表達(dá)，且不增加E2水平，與陽(yáng)性對(duì)照組(來(lái)曲唑組)比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，低劑量本發(fā)明中藥組合物組和來(lái)曲唑組比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。表明本發(fā)明中藥組合物能通過(guò)調(diào)整腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)從而發(fā)揮作用(表1、表2)

表1本發(fā)明中藥組合物對(duì)E₂、FSH、LH的影響()

*與陽(yáng)性對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05。**與陽(yáng)性對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05；#與模型組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05；

表2本發(fā)明中藥組合物乳腺癌移植小鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響()

注：*與陽(yáng)性對(duì)照組組比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05；**與陽(yáng)性對(duì)照組比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05.

2)本發(fā)明中藥組合物不論低劑量還是高劑量均能提高絕經(jīng)后乳腺癌移植小鼠下丘腦5-HT1AR蛋白表達(dá)水平、降低絕經(jīng)后乳腺癌移植小鼠下丘腦5-HT2AR蛋白表達(dá)水平。(表3)

表3本發(fā)明中藥組合物對(duì)5-HT1AR、5-HT2AR蛋白表達(dá)的影響()

*與陽(yáng)性對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05。**與陽(yáng)性對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05；#與模型組

相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05；

3)Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示：絕經(jīng)后乳腺癌移植小鼠下丘腦5-HT1AR與5-HT2AR蛋白表達(dá)水平成對(duì)應(yīng)反比關(guān)系，結(jié)果見(jiàn)圖3。

4)以上動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本發(fā)明中藥組合物確實(shí)存在提高5-HT1AR蛋白表達(dá)水平、降低絕5-HT2AR蛋白表達(dá)水平的功效，從而具有改善乳腺癌內(nèi)分泌治療后引起的不良反應(yīng)的效果。

實(shí)施方式二：本發(fā)明中藥組合物的臨床療效觀察

1.一般資料：

45例乳腺癌內(nèi)分泌治療后出現(xiàn)潮熱盜汗、腰膝酸軟及煩躁易怒等類絕經(jīng)期綜合征的患者，年齡34～78歲，平均48.6歲；乳腺癌病程最短13月，最長(zhǎng)121月，平均56.6月；發(fā)生不良反應(yīng)最短時(shí)間為內(nèi)分泌治療后6月，最長(zhǎng)時(shí)間為內(nèi)分泌治療后15月，平均8.2月；乳腺癌根治術(shù),后13例，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移32例；絕經(jīng)前18例，絕經(jīng)后27例；8例接受非藥物內(nèi)分泌治療。予以本發(fā)明中藥組合物滋腎清肝、滋陰降火治療。

2.治療方法

取本發(fā)明中藥組合物生地黃15g，山茱萸7.5g，山藥7.5g，澤瀉5.5g，牡丹皮5.5g，茯苓5.5g，柴胡3.5g，白芍7.5g，梔子5.5g，酸棗仁7.5g，當(dāng)歸5.5g水煎服，日1劑，水煎2次，早晚分服。

3.療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

參照《中醫(yī)病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》，治愈：癥狀消失，停藥半年后隨訪無(wú)復(fù)發(fā)；好轉(zhuǎn)：癥狀減輕，或部分癥狀消失，或停藥半年后隨訪偶有復(fù)發(fā)；無(wú)效：癥狀均無(wú)改善，或停藥半年后諸癥又復(fù)發(fā)。

4.治療結(jié)果

治愈l5例(癥狀消失，占33.3％)；好轉(zhuǎn)26例(癥狀減輕，占57.8％)；無(wú)效4例(癥狀無(wú)減輕，占8.9％)，總有效率為91.1％。以上臨床療效觀察結(jié)果顯示，本發(fā)明中藥組合物確實(shí)存在提高5-HT1AR蛋白表達(dá)水平、降低絕5-HT2AR蛋白表達(dá)水平的功效，從而得以用來(lái)治療由于乳腺癌內(nèi)分泌治療引起的不良反應(yīng)如類絕經(jīng)期綜合征。