本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體而言涉及檀香葉抗炎有效部位及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

檀香（Santalum album L.）為檀香科（Santalaceae）檀香屬（Santalum）植物，在廣東省有大量種植，木材有很高的應(yīng)用價(jià)值，被譽(yù)為“綠色黃金”。檀香心材中揮發(fā)油的形成要在10年以上，20年以上才可采伐，檀香種植業(yè)投入大，周期長(zhǎng)。檀香為常綠闊葉樹種，葉產(chǎn)量大?；瘜W(xué)成分研究顯示檀香葉含有多種黃酮類成分，目前該資源未得到有效利用。

炎癥是常見的基本病理過程，是機(jī)體對(duì)于刺激的一種防御反應(yīng)，表現(xiàn)為紅、腫、熱、痛和功能障礙。炎癥可以是感染引起的感染性炎癥，也可以不是由于感染引起的非感染性炎癥。體表的外傷感染和各器官的大部分常見病和多發(fā)病(如癤、癰、肺炎、肝炎、腎炎等）都屬于炎癥性疾病。根據(jù)持續(xù)時(shí)間不同分為急性和慢性炎癥。

有報(bào)道稱檀香具有抗炎作用，但尚未有研究將檀香的抗炎有效部位提取出來，并進(jìn)行藥效確證。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供了一種從檀香葉中提取的具有抗炎作用的檀香葉抗炎有效部位。

為解決上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：

一種檀香葉抗炎有效部位，其包含牡荊苷，異牡荊苷和葒草苷三種成分，所述三種成分在該有效部位中的含量不低于80%。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位，其中，所述三種成分在該有效部位中的含量不低于85%。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位，其中，所述三種成分在該有效部位中的含量不低于90%。

上述三種成分的拉丁名稱為：牡荊苷Vitexin，異牡荊苷isovitexin，葒草苷Orientin。

本發(fā)明所述的含量是指采用高效液相色譜法紫外檢測(cè)器采用面積歸一化法檢測(cè)，牡荊苷、異牡荊苷和葒草苷峰面積之和占所有出峰物質(zhì)峰面積總和的百分比，進(jìn)一步地，上述檢測(cè)的波長(zhǎng)為268nm。

進(jìn)一步地，本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位，其由以下步驟制備而成：

第一步，檀香葉干燥，碾碎，充分浸泡，用30~100%甲醇或乙醇回流提取，過濾，收集提取液；

第二步，第一步所得的提取液回收溶劑至無醇味后，通過大孔吸附樹脂，用0~70%乙醇洗脫，收集洗脫液；

第三步，第二步所得洗脫液回收乙醇成浸膏，加水打漿，用有機(jī)溶劑萃取，分離有機(jī)相即得萃取液，其中機(jī)溶劑為乙酸乙酯、正丁醇或其任意比例的混合液；

第四步，第三步所得的萃取液回收有機(jī)溶劑至原體積的20~60%，降溫至0~10℃，析出沉淀，過濾分離沉淀；

第五步，第四步所得沉淀用甲醇、乙醇或乙酸乙酯洗滌，即得檀香葉抗炎有效部位。

進(jìn)一步地，本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位，其中，第一步中，所述檀香葉與30~100%甲醇或乙醇的重量體積比為1：（5~15），單位為Kg：L。

進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位，其中，第一步中，所述回流提取1~3次，每次1小時(shí)。

進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位，其中，第一步中，所述干燥溫度為50~60℃。

進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位，其中，第一步中，所述浸泡時(shí)間為4~12h。

進(jìn)一步地，本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位，其中，第二步中，所述大孔吸附樹脂為D101或AB-8型。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位，其中，第二步中，所述洗脫溶劑為50~70%的乙醇。

進(jìn)一步地，本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位，其中，第三步中，所述萃取為1~5次，合并有機(jī)相為萃取液。

進(jìn)一步地，本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位，其中，第四步中，所述降溫析出沉淀的時(shí)間為6~18h。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供了一種檀香葉抗炎有效部位的制備方法。

具體技術(shù)方案為：

一種本發(fā)明所述檀香葉抗炎有效部位的制備方法，其包括以下步驟：

第一步，檀香葉干燥，碾碎，充分浸泡，用30~100%甲醇或乙醇回流提取，過濾，收集提取液；

第二步，第一步所得的提取液回收溶劑至無醇味后，通過大孔吸附樹脂，用0~70%乙醇洗脫，收集洗脫液；

第三步，第二步所得洗脫液回收乙醇成浸膏，加水打漿，用有機(jī)溶劑萃取，分離有機(jī)相即得萃取液，其中機(jī)溶劑為乙酸乙酯、正丁醇或其任意比例的混合液；

第四步，第三步所得的萃取液回收有機(jī)溶劑至原體積的20~60%，降溫至0~10℃，析出沉淀，過濾分離沉淀；

第五步，第四步所得沉淀用甲醇、乙醇或乙酸乙酯洗滌，即得檀香葉抗炎有效部位。

需要說明，第五步中沉淀的洗滌溶劑中，甲醇或乙醇可以是含甲醇或乙醇80%以上的水溶液。

進(jìn)一步地，本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位的制備方法，其中，第一步中，所述檀香葉與30~100%甲醇或乙醇的重量體積比為1：（5~15），單位為Kg：L。

進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位的制備方法，其中，第一步中，所述回流提取1~3次，每次1小時(shí)。

進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位的制備方法，其中，第一步中，所述干燥溫度為50~60℃。

進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位的制備方法，其中，第一步中，所述浸泡時(shí)間為4~12h。

進(jìn)一步地，本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位的制備方法，其中，第二步中，所述大孔吸附樹脂為D101或AB-8型。

優(yōu)選地，本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位的制備方法，其中，第二步中，所述洗脫溶劑為50~70%的乙醇。

進(jìn)一步地，本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位的制備方法，其中，第三步中，所述萃取為1~5次，合并有機(jī)相為萃取液。

進(jìn)一步地，本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位的制備方法，其中，第四步中，所述降溫析出沉淀的時(shí)間為6~18h。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供所述檀香葉抗炎有效部位在制備抗炎藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供一種藥物制劑。

一種藥物制劑，其包含本發(fā)明所述的檀香葉抗炎有效部位以及藥學(xué)上可接受的輔料。

本發(fā)明提供的技術(shù)方案能實(shí)現(xiàn)的技術(shù)效果為：

1、本發(fā)明所獲得的有效部位化學(xué)成分清晰，已知成分的含量超過80%；對(duì)該有效部位進(jìn)行了系統(tǒng)的抗炎實(shí)驗(yàn)，證實(shí)對(duì)急性炎癥具有良好治療效果。

2、本發(fā)明通過簡(jiǎn)單的步驟，獲得成分清晰，已知成分含量高的有效部位，具有良好的工業(yè)化開發(fā)前景。

附圖說明

圖1本發(fā)明檀香葉抗炎有效部位中各成分的液相圖，

其中，1葒草苷，2牡荊苷，3異牡荊苷。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明并不限于以下實(shí)施例。

實(shí)施例1

將檀香葉1kg于60℃干燥，碾壓至碎片，加入90%乙醇8L，浸泡12小時(shí)，加熱回流1次，每次1小時(shí)，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，回收液通過AB-8大孔吸附樹脂，50%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇，浸膏用水打漿分散，再用乙酸乙酯萃取2次，乙酸乙酯液回收溶劑至原體積的20%，4℃放置12小時(shí)，過濾得到沉淀，沉淀用95%乙醇洗滌2次，即得，用液相色譜法紫外檢測(cè)器268nm面積歸一化法檢測(cè)，牡荊苷、異牡荊苷和葒草苷占有效部位重量含量97.3%，見附圖1。

實(shí)施例2

將檀香葉1kg于60℃干燥，碾壓至碎片，加入90%甲醇8L，浸泡8小時(shí)，加熱回流2次，每次1小時(shí)，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，回收液通過D101大孔吸附樹脂，50%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收甲醇，浸膏用水打漿分散，再用乙酸乙酯萃取3次，乙酸乙酯液回收溶劑至原體積的40%，10℃放置12小時(shí)，過濾得到沉淀，沉淀用95%甲醇洗滌2次，即得，用液相色譜法紫外檢測(cè)器268nm面積歸一化法檢測(cè)，牡荊苷、異牡荊苷和葒草苷占有效部位重量含量95.6%。

實(shí)施例3

將檀香葉1kg于50℃干燥，碾壓至碎片，加入30%乙醇8L，浸泡4小時(shí)，加熱回流3次，每次1小時(shí)，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，回收液通過D101大孔吸附樹脂，70%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇，浸膏用水打漿分散，再用正丁醇與乙酸乙酯混合液（1:1）萃取4次，回收有機(jī)溶劑至原體積的60%，0℃放置12小時(shí)，過濾得到沉淀，沉淀用乙酸乙酯洗滌2次，即得，用液相色譜法紫外檢測(cè)器268nm面積歸一化法檢測(cè)，牡荊苷、異牡荊苷和葒草苷占有效部位重量含量95.9%以上。

實(shí)施例4

將檀香葉1kg于50℃干燥，碾壓至碎片，加入60%乙醇8L，浸泡8小時(shí)，加熱回流3次，每次1小時(shí)，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，回收液通過AB-8大孔吸附樹脂，50%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇，浸膏用水打漿分散，再用正丁醇萃取3次，回收有機(jī)溶劑至原體積的60%，5℃放置6小時(shí)，過濾得到沉淀，沉淀用甲醇洗滌2次，即得，用液相色譜法紫外檢測(cè)器268nm面積歸一化法檢測(cè)，牡荊苷、異牡荊苷和葒草苷占有效部位重量含量96.3%以上。

實(shí)施例5

將檀香葉1kg于50℃干燥，碾壓至碎片，加入60%乙醇5L，浸泡4小時(shí)，加熱回流2次，每次1小時(shí)，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，回收液通過AB-8大孔吸附樹脂，50%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇，浸膏用水打漿分散，再用正丁醇萃取3次，回收有機(jī)溶劑至原體積的40%，5℃放置18小時(shí)，過濾得到沉淀，沉淀用甲醇洗滌2次，即得，用液相色譜法紫外檢測(cè)器268nm面積歸一化法檢測(cè)，牡荊苷、異牡荊苷和葒草苷占有效部位重量含量94.7%以上。

實(shí)施例6

將檀香葉1kg于60℃干燥，碾壓至碎片，加入60%乙醇15L，浸泡18小時(shí)，加熱回流2次，每次1小時(shí)，過濾，濾液回收乙醇至無醇味，回收液通過AB-8大孔吸附樹脂，50%乙醇洗脫，收集洗脫液減壓回收乙醇，浸膏用水打漿分散，再用乙酸乙酯萃取2次，回收有機(jī)溶劑至原體積的40%，10℃放置18小時(shí)，過濾得到沉淀，沉淀用乙酸乙酯洗滌2次，即得，用液相色譜法紫外檢測(cè)器268nm面積歸一化法檢測(cè)，牡荊苷、異牡荊苷和葒草苷占有效部位重量含量96.5%以上。

以下為檀香葉抗炎有效部位體內(nèi)抗炎活性藥效實(shí)施例。

實(shí)施例7

試驗(yàn)?zāi)康模嚎疾焖幬飳?duì)巴豆油致小鼠耳腫脹的急性炎癥的抑制作用

受試物：實(shí)施例1所得檀香葉抗炎有效部位、吲哚美辛

試驗(yàn)動(dòng)物：昆明種小鼠，體重20±2g，雄性，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（粵）2011-0015

試驗(yàn)步驟：

取上述小鼠40只，隨機(jī)平均分為4組，分別為模型組、檀香葉抗炎有效部位高劑量組、檀香葉抗炎有效部位低劑量組、吲哚美辛對(duì)照組，各給藥組按照表1劑量灌胃給藥，模型組給以與給藥組同體積生理鹽水，各分組均灌胃給藥3天，末次給藥30 min后，右耳涂抹巴豆油20μL， 6小時(shí)后用數(shù)顯千分尺測(cè)量?jī)啥穸?，以右耳厚度（TR）減去左耳厚度（TL）為耳腫脹度SW= TR- TL。

試驗(yàn)結(jié)果：

與模型組相比，各給藥組均明顯抑制耳腫脹，差異顯著，顯示檀香葉抗炎有效部位高、低劑量均對(duì)巴豆油誘導(dǎo)的小鼠耳腫脹有抑制作用，結(jié)果見表1：

表1 檀香葉提取物對(duì)巴豆油誘導(dǎo)小鼠耳腫脹的作用（）

注：均值±標(biāo)準(zhǔn)差，與模型組比較 *p<0.05， **p<0.01。

實(shí)施例8

試驗(yàn)?zāi)康模嚎疾焯聪闳~抗炎提取物對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹的抑制作用，考察檀香葉抗炎有效部位對(duì)動(dòng)物急性炎癥的作用。

試驗(yàn)儀器與試劑：大鼠足趾腫脹儀、角叉菜膠、吲哚美辛、生理鹽水

受試物：實(shí)施例3檀香葉抗炎有效部位、吲哚美辛

試驗(yàn)動(dòng)物：wistar大鼠，體重180±10g，雌雄各半，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（粵）2011-0015

試驗(yàn)步驟：

取大鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，分別為模型組，受試高劑量組、受試低劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組，各給藥組按照表2劑量灌胃給藥，模型組給以生理鹽水，各處理組連續(xù)灌胃5天，末次給藥前，測(cè)定各組大鼠足趾體積，末次給藥30 min后，各組大鼠右后足趾注射1%的角叉菜膠溶液0.1 ml，分別于1h，2h,3h,4h測(cè)量足趾溶劑，計(jì)算腫脹度。

足腫脹度=致炎后足趾體積-致炎前足趾體積

試驗(yàn)結(jié)果：

與模型組相比，高劑量給藥組對(duì)致炎后3h，低劑量給藥組對(duì)致炎后2h、3h、4h，具有明顯抑制其足腫脹，差異顯著（p<0.05）。提示受試物對(duì)角叉菜膠致足腫脹具有不同程度的治療作用。提示兩種劑量對(duì)角叉菜膠致足腫脹具有不同程度的抑制作用。

表2檀香葉提取物對(duì)角叉菜膠致大鼠足腫脹的作用（）

注：均值±標(biāo)準(zhǔn)差，與模型組比較 *p<0.05。

實(shí)施例9

試驗(yàn)?zāi)康模嚎疾焯聪闳~抗炎有效部位對(duì)醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性的影響

受試物：實(shí)施例5檀香葉抗炎有效部位、吲哚美辛

試驗(yàn)動(dòng)物：昆明種小鼠，體重20±2g，雄性，由南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（粵）2011-0015

試驗(yàn)步驟：

取上述小鼠32只，隨機(jī)平均分為4組，分別為空白對(duì)照組、檀香葉抗炎有效部位高劑量組、檀香葉抗炎有效部位低劑量組、吲哚美辛對(duì)照組，各給藥組均按照表3劑量灌胃給藥3天，空白對(duì)照組給以生理鹽水，末次給藥后1h，尾靜脈注射0 5%伊文思藍(lán)生理鹽水溶液0.1mL/10g, 同時(shí)腹腔注射0.6%醋酸溶液0.1mL/10g，20min 后處死，用5mL生理鹽水沖洗腹腔，洗液以1500 r/ min離心5 min，取上清液于 590 nm 處, 測(cè)定吸光度 ( A ) 值。

試驗(yàn)結(jié)果：

與模型組相比，低劑量給藥組與空白對(duì)照組相比，依文思藍(lán)滲出量顯著下降，提示檀香葉抗炎有效部位能顯著抑制醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增加。

表3 檀香葉抗炎有效部位對(duì)醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性的作用（）

注：均值±標(biāo)準(zhǔn)差，與模型組比較 *p<0.05， **p<0.01。