本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體為一種治療結(jié)直腸癌的中藥組合物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

結(jié)直腸癌(Colorectal cancer，CRC)是常見的消化道腫瘤之一。2013年美國癌癥預(yù)測數(shù)據(jù)顯示，CRC新增病例和死亡人數(shù)分別為142820例和50830例，癌癥新發(fā)和死亡病例均列各類癌癥的第3名，約各占9％。近10年來，全球結(jié)直腸癌發(fā)病率和死亡率水平基本穩(wěn)定，但占全球惡性腫瘤發(fā)病、死亡的比例有所增加。結(jié)直腸癌發(fā)病的地域分布差異較大，其中發(fā)達(dá)地區(qū)結(jié)直腸癌發(fā)病率較高。我國是結(jié)直腸癌的低發(fā)區(qū)，但發(fā)病率呈逐年上升趨勢。截止2010年，我國結(jié)直腸癌新發(fā)病例數(shù)已超過27萬，死亡病例13萬以上。

CRC屬于中醫(yī)學(xué)伏梁、腸澼、腸覃范疇。中醫(yī)藥診治CRC有著悠久的歷史?！端貑枴吩弧安∶环骸?，“腸澼下膿血”，“寒氣客于腸外，與衛(wèi)氣相搏，氣不得榮，因有所系，癖而內(nèi)著，惡氣乃起，息肉乃生”，說明本病與飲食不節(jié)、外邪入侵，營衛(wèi)失調(diào)，傷及五臟有關(guān)。脾虛是腫瘤形成之本，張?jiān)亍痘罘C(jī)要》曰：“壯人無積，虛人則有之，脾胃虛弱，氣血兩衰，四時(shí)有感，皆能成積”，《景岳全書》曰：“脾腎不足及虛弱失調(diào)之人，多有積聚之病”；多位名老中醫(yī)均提出腫瘤防治應(yīng)以健脾為本。

因此，以傳統(tǒng)中醫(yī)藥結(jié)合現(xiàn)代制劑技術(shù)，研究開發(fā)一種治療CRC的中藥復(fù)方制劑，扶正調(diào)微方，具有重要的意義，同時(shí)也有巨大的市場開發(fā)潛力。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種治療直腸癌的中藥組合物，扶正調(diào)微方，其療效顯著。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種治療直腸癌的中藥組合物，由以下重量比的中藥材配制而成：五爪龍：白術(shù)：人參：重樓：火炭母：莪術(shù)：肉蓯蓉：薏苡仁＝(25-35):(50-70):(10-20):(10-20):(25-35):(10-20):(10-20):(25-35)。

優(yōu)選的，由以下重量比的中藥材配制而成：五爪龍：白術(shù)：人參：重樓：火炭母：莪術(shù)：肉蓯蓉：薏苡仁＝(25-30):(55-65):(15-20):(10-15):(25-30):(10-15):(10-15):(25-30)。

更優(yōu)選的，由以下重量比的中藥提取物及中藥材配制而成：五爪龍：白術(shù)：人參：重樓：火炭母：莪術(shù)：肉蓯蓉：薏苡仁＝30:60:15:12:30:12:15:30。

上述中藥組合物在制備治療直腸癌的藥物上的應(yīng)用。

所述的藥物的劑型為湯劑、片劑、膠囊劑或顆粒劑。

所述的藥物，湯劑是以所述中藥組合物配方中的中藥材通過水煎得到。

所述的藥物，片劑、膠囊劑、顆粒劑是以所述中藥組合物配方中組分的提取物為有效成分，添加藥用輔料制得的制劑。

所述的提取物為水提物。

本發(fā)明提供的中藥組合物具有治療CRC的功效，其治療效果好，安全可靠，而且采用中藥，原料易得。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例中對小鼠體重的影響；

圖2是本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例中各組小鼠結(jié)腸直觀圖；

圖3是本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例中小鼠結(jié)腸腫瘤數(shù)目；

圖4是IHC檢測本發(fā)明扶正調(diào)微方對致癌相關(guān)蛋白表達(dá)的影響；

圖5是WB檢測本發(fā)明扶正調(diào)微方對致癌相關(guān)蛋白表達(dá)的影響；

圖6是本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例中各組小鼠外周血中的CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞比例；

圖7是本發(fā)明實(shí)驗(yàn)例中各組小鼠的脾的CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞比例；

圖8是WB檢測扶正調(diào)微方對Foxp3蛋白的影響。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明為治療CRC的中藥組合物(又稱為扶正調(diào)微方)，由以下重量比的中藥材配制而成：五爪龍：白術(shù)：人參：重樓：火炭母：莪術(shù)：肉蓯蓉：薏苡仁＝(25-35):(50-70):(10-20):(10-20):(25-35):(10-20):(10-20):(25-35)。

優(yōu)選的，由以下重量比的中藥材配制而成：五爪龍：白術(shù)：人參：重樓：火炭母：莪術(shù)：肉蓯蓉：薏苡仁＝(25-30):(55-65):(15-20):(10-15):(25-30):(10-15):(10-15):(25-30)。

更優(yōu)選的，由以下重量比的中藥材配制而成：五爪龍：白術(shù)：人參：重樓：火炭母：莪術(shù)：肉蓯蓉：薏苡仁＝30:60:15:12:30:12:15:30。

本方以五爪龍、白術(shù)為君藥，健脾益氣厚腸胃；以人參輔助君藥補(bǔ)氣健脾，以重樓清熱解毒消瘤，共為臣藥；以火炭母、莪術(shù)、薏苡仁解毒活血祛濕，以肉蓯蓉補(bǔ)腎溫陽，共為佐使。諸藥合而共奏健脾消瘤之功。

本發(fā)明所使用的中藥中：

五爪龍為?？浦参锪颜崎臚icus simplicissima Lour.[F.hirta Vahl var.palmatiloba(Merr.)Chun]的根。味甘，性平，歸脾、肺、肝經(jīng)。具有健脾補(bǔ)肺，行氣利濕，舒筋活絡(luò)的作用。用于脾虛浮腫，食少無力，肺癆咳嗽，盜汗，帶下，產(chǎn)后無乳，風(fēng)濕痹痛，水腫，跌打損傷等。五爪龍主要含補(bǔ)骨脂素、3β-羥基豆甾-5-烯-7-酮、β-谷甾醇、十六酸、十八酸、芹菜素、α-香樹素乙酸酯等。具有抗菌、抗病毒、抗凝血、抑制腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等作用。

白術(shù)為菊科多年生草本白術(shù)Atractylodes macrocephala Koidz.的干燥根莖。味苦、甘，性溫，歸脾、胃經(jīng)。具有補(bǔ)氣健脾，燥濕利水，固表止汗，安胎的作用。用于食少便溏，脘腹脹滿，肢軟神疲，痰飲，水腫，小便不利，自汗及胎動(dòng)不安。白術(shù)主要含揮發(fā)油，主要成分為蒼術(shù)醇、蒼術(shù)酮、白術(shù)內(nèi)酯等。尚含炔類、維生素A等。具有強(qiáng)壯、利尿、降血糖、保肝、抗凝、擴(kuò)張血管、降壓、抑制細(xì)菌和真菌等作用。

人參為五加科多年生草本人參Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根。味甘、微苦，性微溫，歸心、肺、脾經(jīng)。具有大補(bǔ)元?dú)?、補(bǔ)脾益肺、生津止渴、安神益智的作用。用于氣虛欲脫、脈微欲絕的危重癥候，短氣喘促，懶言聲微，脈虛自汗，倦怠乏力，食少便溏，消渴，心悸，失眠，健忘等。人參主要含人參皂苷，α-人參烯等揮發(fā)油，人參酸等有機(jī)酸，人參黃酮苷等黃酮以及木脂素、甾醇、氨基酸、多糖等。具有調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)、增強(qiáng)記憶、興奮垂體性腺系統(tǒng)、調(diào)節(jié)血壓、血糖等作用。

重樓為百合科多年生草本植物云南重樓Paris polyphylla smith var.Yunnanensis(Franch.)Hara的根莖。味苦，性微寒，歸肝經(jīng)。具有清熱解毒，消腫止痛，息風(fēng)定驚的作用。用于癰腫瘡毒，蟲蛇咬傷，外傷出血，瘀腫疼痛，肝熱生風(fēng)，驚風(fēng)，癲癇。重樓主要含蚤休苷、薯蕷皂苷等。具有抗菌、解蛇毒、止咳平喘、抗炎、止血、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫等作用。

火炭母為蓼科蓼屬植物火炭母Polygonum chinense Linn.的干燥全草。味酸、甘，性寒。歸肝、脾經(jīng)。具有清熱利濕，涼血解毒的作用。用于濕熱泄瀉、痢疾、黃疸、咽喉腫痛?；鹛磕负侥畏印㈤纹に亍⑸侥畏?7葡萄糖苷、山奈酚-3-葡萄糖醛酸苷，β-谷甾醇、逆沒食子酸、沒食子酸、3-O-甲基并沒食子酸。具有抑菌、收縮腸平滑肌作用。

莪術(shù)為姜科植物蓬莪術(shù)Curcuma phaeocaulis Val.、廣西莪術(shù)Curcuma kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang或溫郁金Curcuma wenyujin Y.H.Chen et C.Ling的干燥根莖。味辛、苦，性溫，歸肝、脾經(jīng)。具有破血行氣，消積止痛的作用。用于癥瘕積聚，閉經(jīng)，心腹刺痛，食積氣滯，脘腹脹痛，跌打損傷，瘀腫疼痛等。莪術(shù)主要含有揮發(fā)油，主要成分為莪術(shù)呋喃酮、莪術(shù)烯醇、姜黃烯等20多種倍半萜。尚含棕櫚酸、姜黃素等。具有抗癌、增強(qiáng)免疫、抑菌、抗血栓等作用。

肉蓯蓉為列當(dāng)科多年生肉質(zhì)寄生草本肉蓯蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma的干燥帶鱗葉的肉質(zhì)莖。味甘、咸，性溫，歸腎、大腸經(jīng)。具有補(bǔ)腎陽，益精血，潤腸通便的作用。用于陽痿，不孕，腰膝酸軟，筋骨無力，腸燥便秘等。肉蓯蓉主要含甜菜堿，β-谷甾醇，胡蘿卜苷，三十烷醇，咖啡酸糖酯，甘露醇，硬脂酸，柳得洛苷等。具有降血壓、抗動(dòng)脈粥樣硬化、調(diào)整內(nèi)分泌、促進(jìn)代謝、增強(qiáng)記憶、強(qiáng)壯等作用。

薏苡仁為禾本科多年生本薏苡Coix lacryma-jobi L.var.Ma-yuen(Roman.)Stapf的干燥成熟種仁。味甘、淡，性微寒，歸脾、胃、肺經(jīng)。具有利水滲濕，健脾止瀉，清熱排膿，除痹的作用。用于水腫、小便不利，脾虛泄瀉，肺癰，腸癰，濕痹筋脈拘攣。薏苡仁只要含薏苡仁油、薏苡仁脂、蛋白質(zhì)、脂肪油、碳水化合物、維生素B1、薏苡素、甾醇、薏苡仁多糖A、B、C等。具有抗癌、抗菌、解痙攣、降血糖、解熱、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛等作用。

上述中藥組合物在制備治療直腸癌的藥物上的應(yīng)用。藥物的劑型可以為湯劑、片劑、膠囊劑或顆粒劑等口服劑型。湯劑是以所述中藥組合物配方中的中藥材通過水煎得到。片劑、膠囊劑、顆粒劑是以所述中藥組合物配方中組分的提取物為有效成分，添加藥用輔料制得的制劑，優(yōu)選的，所述的提取物為水提物，按常規(guī)水提工藝即可。

下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明并不限于此特定例子。

實(shí)施例1

取五爪龍30g、白術(shù)60g、人參15g、重樓12g、火炭母30g、莪術(shù)12g、肉蓯蓉12g、薏苡仁30g，放入藥鍋中，加入涼的飲用水，浸泡20-30分鐘，再加水沒過藥物，將藥鍋放在爐火上用中火煎煮。第一次煎煮后，把藥液倒出(約150～200毫升)，再加溫水適量(若藥渣放涼再煎煮時(shí)應(yīng)放涼水)，進(jìn)行第二次煎煮，把藥液倒出(約150～200毫升)，把兩次藥液混勻分2次服用。

實(shí)施例2

取五爪龍660.0g、白術(shù)1320.0g、人參330.0g、重樓264.0g、火炭母660.0g、莪術(shù)264.0g、肉蓯蓉264.0g、薏苡仁660.0g，加10倍量水，浸泡45min，提取2次，每次90min，濾過，合并濾液，濃縮至膏(1.05～1.10,70℃)，帶式干燥，再過14目篩進(jìn)行整粒，然后加入適量的硬脂酸鎂，混勻，壓制成1000片，即得片劑。每片重0.45g。

實(shí)施例3

取五爪龍660.0g、白術(shù)1320.0g、人參330.0g、重樓264.0g、火炭母660.0g、莪術(shù)264.0g、肉蓯蓉264.0g、薏苡仁660.0g，加10倍量水，浸泡45min，提取2次，每次90min，濾過，合并濾液，濃縮至膏(1.05～1.10,70℃)，帶式干燥，粉碎，加入2％硬脂酸鎂，裝入膠囊，制成1000粒，即得硬膠囊。每粒含內(nèi)容物0.45g。

實(shí)施例4

取五爪龍660.0g、白術(shù)1320.0g、人參330.0g、重樓264.0g、火炭母660.0g、莪術(shù)264.0g、肉蓯蓉264.0g、薏苡仁660.0g，加10倍量水，浸泡45min，提取2次，每次90min，濾過，合并濾液，濃縮至膏(1.05～1.10,70℃)，帶式干燥，研成細(xì)粉，加入適量的糊精和乳糖，混勻，制粒，65℃干燥，過14目篩進(jìn)行整粒，分裝，制得1000包，即得顆粒劑。每包重5g。

實(shí)施例5

取五爪龍550.0g、白術(shù)1210.0g、人參330.0g、重樓220.0g、火炭母550.0g、莪術(shù)220.0g、肉蓯蓉220.0g、薏苡仁550.0g，按實(shí)施例2制備方法制得片劑。

實(shí)施例6

取五爪龍660.0g、白術(shù)1430.0g、人參440.0g、重樓330.0g、火炭母660.0g、莪術(shù)330.0g、肉蓯蓉330.0g、薏苡仁660.0g，按實(shí)施例2制備方法制得片劑。

實(shí)施例7

取五爪龍616.0g、白術(shù)1320.0g、人參396.0g、重樓286.0g、火炭母616.0g、莪術(shù)286.0g、肉蓯蓉286.0g、薏苡仁616.0g，按實(shí)施例2制備方法制得片劑。

實(shí)施例8

取五爪龍550.0g、白術(shù)1100.0g、人參220.0g、重樓220.0g、火炭母550.0g、莪術(shù)220.0g、肉蓯蓉220.0g、薏苡仁550.0g，按實(shí)施例2制備方法制得片劑。

實(shí)施例9

取五爪龍770.0g、白術(shù)1540.0g、人參440.0g、重樓440.0g、火炭母770.0g、莪術(shù)440.0g、肉蓯蓉440.0g、薏苡仁770.0g，按實(shí)施例2制備方法制得片劑。

實(shí)驗(yàn)例(扶正調(diào)微方對CRC的治療作用研究)

1.材料

1.1動(dòng)物：C57BL/6J-Apc^Min/J(簡稱Apc^min/+)品系高度易自發(fā)形成腸道腺瘤。純合子小鼠不能存活。Apc^min/+小鼠自南京大學(xué)模式動(dòng)物研究所購買并在南方醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院SPF動(dòng)物房繁殖飼養(yǎng)，繁殖30只8周齡Apc^min/+小鼠。另自南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中購買15只8周SPF級雄性C57BL/6J小鼠，飼養(yǎng)于南方醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院SPF級動(dòng)物房。實(shí)驗(yàn)開始前記錄小鼠體重及編號。

1.2試藥：按實(shí)施例1，扶正調(diào)微方由五爪龍30g、白術(shù)60g、人參15g、重樓12g、火炭母30g、莪術(shù)12g、肉蓯蓉12g、薏苡仁30g組成，全部購自南方醫(yī)科大學(xué)附屬南方醫(yī)院。扶正調(diào)微方采用傳統(tǒng)水煎方法，煎煮兩次。把藥物放入藥鍋中，加入涼飲用水，浸泡20-30分鐘，加水沒過藥物，將藥鍋放在電爐上煎煮。第一次煎煮后，把藥液倒出(約150～200毫升)，再加溫水適量(若藥渣放涼再煎煮時(shí)應(yīng)放涼水)，進(jìn)行第二次煎煮，把藥液倒出(約150～200毫升)，把兩次藥液混勻，分裝4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3儀器：

2.方法

2.1分組與給藥：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為3組，野生對照組(Wild Type)15只，30只Apc^min/+小鼠隨機(jī)分為兩組，Apc^min/+組15只，Apc^min/++扶正調(diào)微方組15只。其中，野生對照組(Wild Type)小鼠和Apc^min/+組小鼠按組分籠后，按照常規(guī)方式喂養(yǎng)。Apc^min/++扶正調(diào)微方組小鼠按照10ml/kg/d標(biāo)準(zhǔn)以灌胃方式給予配好備用的藥液。

2.2取樣：

實(shí)驗(yàn)小鼠分組后正常飼養(yǎng)一周適應(yīng)環(huán)境，給予自由進(jìn)食及飲水，第二周開始給藥。Apc^min/++扶正調(diào)微方組給予扶正調(diào)微方(10ml/kg/d)灌胃。實(shí)驗(yàn)期間每周監(jiān)測小鼠體重及進(jìn)食量變化，觀察小鼠一般狀態(tài)如毛發(fā)、活動(dòng)及便血、脫肚等癥狀，并記錄小鼠死亡情況。

給藥8周后結(jié)束實(shí)驗(yàn)，小鼠禁食24h后，稱量體重并記錄，采用眼球取血，血液靜置2h后，3000r/min離心15min，取上清，分裝于EP管中-80℃保存用于后續(xù)細(xì)胞因子的檢測。然后采用頸椎脫臼法處死小鼠，將小鼠固定于冰上，剪開其腹腔，由肛口處至盲腸末端分離取下整段結(jié)直腸，沿著腸管縱軸剖開結(jié)腸，用預(yù)冷的生理鹽水清洗腸內(nèi)容物。將清洗干凈的結(jié)腸黏膜面朝上平鋪于干凈的濾紙上，觀察并記錄有無腫瘤的發(fā)生及其數(shù)目、大小和位置，計(jì)算腫瘤發(fā)生率。用干凈的濾紙吸干結(jié)腸組織上殘留的生理鹽水，將結(jié)腸組織均等分成幾等份，其中用于病理研究的結(jié)腸組織立即投入10％中性福爾馬林溶液中固定，其余組織分裝于凍存管中-80℃保存，用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)研究。

2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用spss22.0軟件進(jìn)行分析，當(dāng)P<0.05時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3結(jié)果

3.1扶正調(diào)微方對CRC小鼠體重的影響：

三組8周齡小鼠按照給藥方案處理8周后，野生對照組(Wild Type)余15只，Apc^min/+組余8只，Apc^min/++扶正調(diào)微方組余12只。Apc^min/+組小鼠8周齡時(shí)與C57BL/6J小鼠體重有明顯差異，且差異隨著周齡增加而加大。Apc^min/++扶正調(diào)微方組給藥3周后，體重與Apc^min/+組小鼠存在顯著差異，結(jié)果見圖1。因此，扶正調(diào)微方能明顯改善Apc^min/+腸癌小鼠的體重。

3.2扶正調(diào)微方對CRC小鼠結(jié)腸的影響：

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取出小鼠結(jié)腸，Wild Type組小鼠的結(jié)腸未發(fā)現(xiàn)腫瘤，Apc^min/+組和Apc^min/++扶正調(diào)微方組小鼠均產(chǎn)生腫瘤，見圖2。相比起Apc^min/+組小鼠，Apc^min/++扶正調(diào)微方組小鼠的腫瘤數(shù)目較少，結(jié)果見圖3。因此，扶正調(diào)微方能顯著減少Apc^min/++小鼠的結(jié)腸腫瘤。

3.3扶正調(diào)微方降低CRC小鼠的致癌相關(guān)蛋白的表達(dá)

β-catenin、Cox-2、p53、PCNA均為有代表性的致癌相關(guān)蛋白。免疫組織化學(xué)法(IHC)結(jié)果顯示：Apc^min/+組小鼠腸組織中的的β-catenin、Cox-2、p53、PCNA表達(dá)相對Wild Type組顯著增加(P<0.01)，而Apc^min/++扶正調(diào)微方組小鼠腸組織中的的β-catenin、Cox-2、p53、PCNA表達(dá)相比起Apc^min/+組顯著降低(P<0.01)，結(jié)果見圖4。蛋白質(zhì)印跡法(WB)結(jié)果與免疫組織化學(xué)法(IHC)結(jié)果類似，結(jié)果見圖5。因此，扶正調(diào)微方能下調(diào)CRC小鼠的致癌相關(guān)蛋白的表達(dá)。

3.4扶正調(diào)微方通過免疫調(diào)節(jié)發(fā)揮抗癌作用

nTrey細(xì)胞(CD4+CD25+Foxp3+)是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)，具有維持腫瘤患者免疫耐受的作用，在抗腫瘤治療中具有十分重要的意義。Foxp3主要表達(dá)于胸腺、脾臟和淋巴結(jié)等淋巴器官和組織。在小鼠特異性表達(dá)于CD4+CD25+T細(xì)胞，而不表達(dá)于CD8+T細(xì)胞。在人類Foxp3不僅可表達(dá)于CD4+CD25+T細(xì)胞，還可表達(dá)于CD8+CD28-T細(xì)胞。但在CD4+T細(xì)胞中的表達(dá)明顯高于CD8+T細(xì)胞。目前，F(xiàn)oxp3(forkhead box P3，Scurfin)是目前公認(rèn)的Treg細(xì)胞的最敏感的標(biāo)志。

檢測小鼠外周血和脾臟的CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞發(fā)現(xiàn)，相比Wild Type組小鼠，Apc^min/+組小鼠腸組織中的CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞比例顯著增加(P<0.01)，而Apc^min/++扶正調(diào)微方組小鼠腸組織中的的CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞比例相對Apc^min/+組顯著降低(P<0.01)，結(jié)果見圖6、圖7。使用蛋白質(zhì)印跡法(WB)檢測小鼠腸組織的Foxp3蛋白發(fā)現(xiàn)相似的結(jié)果，結(jié)果見圖8。證明扶正調(diào)微方通過nTrey細(xì)胞，影響免疫調(diào)節(jié)，從而發(fā)揮抗癌作用。

4.結(jié)論

扶正調(diào)微方通過nTrey細(xì)胞，調(diào)節(jié)免疫，下調(diào)致癌相關(guān)蛋白的表達(dá)，從而發(fā)揮改善腸癌小鼠體質(zhì)和抗癌作用。