本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物分離技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提取白花杜鵑中活性成分的方法。
背景技術(shù)：
杜鵑屬植物化學(xué)主要成分為土荊芥油素、異土荊芥油素、槲皮素、山奈素、金絲桃甙、紅色素、谷甾醇等。杜鵑花科植物活性成分有良好的抗菌消炎作用,如秀麗杜鵑、汶川杜鵑、矮枇杷的抗菌作用就強于或相當(dāng)于黃蓮。但近年來，其作為神經(jīng)藥理學(xué)基質(zhì)而更受重視。
James A.Klock等從黃杜鵑提取到的化學(xué)成分作為心血管藥的治療；Yoshiki等從興安杜鵑中提取出2種新的色原烷衍生物1和色原烷衍生物2，另一種化合物色原烯3 具有潛在的抗艾滋病病毒活性；鐘國華等以黃杜鵑作為麻醉劑，治療溫瘧，有顯著的減慢心率和降低血壓作用。從華麗杜鵑葉分離的杜鵑素和Matleucinal能影響視覺。映山紅的嫩葉是“紅桃合劑”的主要成分，對慢性支氣管炎有良好療效，滿山紅、紫花杜鵑都有止咳化痰的功效。從大白花杜鵑葉中分離得到的木藜蘆毒素在低劑量(1～100μg/kg)時有明顯降壓作用，還能誘發(fā)動物的傳入神經(jīng)、迷走神經(jīng)、肌神經(jīng)、頸神經(jīng)、頸動脈神經(jīng)和皮質(zhì)神經(jīng)產(chǎn)生強烈的突發(fā)效應(yīng)，證明是一種高強度的肌興奮劑。
另外，杜鵑花科植物中的黃杜鵑藥液噴霧防治桑蟥、灌施防治地下害蟲、浸漬處理蚜蟲效果良好，熏蒸家蠅，致死時間與除蟲菊粉相同，蘇醒時間比除蟲菊粉長，蘇醒百分率比除蟲菊粉低。據(jù)不完全統(tǒng)計，黃杜鵑對豆平蝽、甘蔗綿蚜、苧麻黃蛺蝶、菜粉蝶、稻癭蚊、稻蝗、稻苞蟲、負泥蟲、葉蟬、甘薯金花蟲、紅蜘蛛等10科50余種重要經(jīng)濟害蟲毒殺效果良好，因此，曾作為土農(nóng)藥在黃杜鵑產(chǎn)區(qū)廣泛應(yīng)用。
杜鵑花屬中很多種類的活性成分已被研究，如黃毛杜鵑、日本杜鵑等。目前已從黃杜鵑中分離并鑒定出結(jié)構(gòu)的活性成分有8種：分別是鬧羊花素-Ⅱ、Ⅲ、Ⅴ， Rhodomollein-Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，Kalmanol和Grayanotoxin-Ⅲ。此外，還含有浸木毒素、石楠素、杜鵑花毒素、司帕拉沙酚、馬醉木毒素等。
杜鵑花科植物分布廣，品種多，其活性成分種類多，活性高，用途廣，具有廣闊的開發(fā)前景，我國杜鵑花科植物資源豐富，我們應(yīng)加強研究并加以開發(fā)應(yīng)用。
目前，尚未見采用超臨界CO2萃取開花期白花杜鵑活性成分的報道，也未見有相關(guān)專利。
本發(fā)明以開花期白花杜鵑為提取原料，利用超臨界CO2萃取方法進行生物活性成分的提取分離，其操作簡便、方法簡單、提取效率高等特點。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有的缺陷，提供了一種提取率高、能耗低、操作簡便的白花杜鵑中生物活性成分的新提取方法。
為了解決上述技術(shù)方案，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案：
一種提取白花杜鵑中生物活性成分的方法，將開花期采摘的白花杜鵑粉碎后放入萃取釜中，以CO2流體為萃取劑，萃取溫度為35-45℃、萃取壓力15-25MPa、萃取時間為1.5-2.5h，得到淡黃色的活性成分的提取物。
作為優(yōu)選，將開花期采摘的白花杜鵑在自然條件下戶外晾干。
在自然條件下戶外晾干的好處是：目的是讓白花杜鵑的水分在自然環(huán)境溫度下緩慢蒸發(fā)掉所含水分，而不破壞其組織結(jié)構(gòu)或丟失其它所含化學(xué)成分。
作為優(yōu)選，將開花期采摘的白花杜鵑粉碎后過200目篩。
選擇該粉碎粒徑的目的是：一方面是盡量不破壞白花杜鵑的組織結(jié)構(gòu)，另一方面是在這個粒度條件下更加便于萃取。
作為優(yōu)選，所述萃取壓力為25MPa、萃取溫度為40℃。
作為優(yōu)選，所述萃取時的反應(yīng)時間為2.5h。
本發(fā)明具有以下有益效果：
超臨界CO2萃取法是用無毒、無殘留的超臨界CO2代替水或有機溶劑作提取溶劑，不僅可以在接近室溫的條件下萃取，而且可以實現(xiàn)高選擇性提取和分離，從而獲得高質(zhì)量的產(chǎn)品。并且超臨界CO2提取不會產(chǎn)生三廢，對環(huán)境保護極為有利，提取材料CO2價廉易得，可循環(huán)使用，生產(chǎn)成本較低。
在本發(fā)明提供的工藝參數(shù)范圍內(nèi)，針對開花期采摘的白花杜鵑花中生物活性成分提取效率高，提取速度快，工藝簡單，節(jié)省試劑，耗能少，成本低，污染少，優(yōu)于其它采用傳統(tǒng)提取技術(shù)的提取方法。
附圖說明
附圖用來提供對本發(fā)明的進一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與本發(fā)明的實施例一起用于解釋本發(fā)明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。在附圖中：
圖1為白花杜鵑GC/MS化學(xué)成分分析圖譜。
具體實施方式
以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為市售。
1、材料及方法
1.1儀器與試劑材料
安捷倫氣相質(zhì)譜儀(Agilent 6890-5973 GC/MS);開花期白花杜鵑花采摘自西藏自治區(qū)；氯仿等化學(xué)試劑均為色譜純。
1.2提取方法
1.2.1開花期白花杜鵑原料處理
將開花期白花杜鵑花自然條件下戶外晾干，粉碎后過200目篩，備用。
1.2.2活性成分提取
精密稱取3g-3.8g粉碎后的開花期白花杜鵑于萃取釜中，以CO2流體為萃取劑，進行提取，從接樣口收集到0.00561g-0.02934g淡黃色提取物，用氯仿溶解備用。
1.2.3樣品檢測條件
進樣口溫度：270 ℃，升溫程序：60 ℃，以10℃/min速率升至280℃，保持5min，以5℃/min速率升至290℃，保持3min，分流進樣，分流比：20:1，載氣：高純氦氣，純度≥99.999%，流速1.0 mL/min。進樣量：1μL。
2.試驗結(jié)果
2.1提取率影響條件的優(yōu)化結(jié)果
選用了對總提取率有主要影響的3個因素（萃取壓力Mpa、萃取溫度℃、萃取時間h）考慮三個水平，以L9(33)正交表進行試驗影響因素優(yōu)化。優(yōu)化結(jié)果見表1、表2、表3。
表1 L9(33)正交試驗影響因素水平表
表2 L9(33)正交試驗結(jié)果
表3L9(33)正交試驗方差分析
在實驗范圍內(nèi)，考慮提取生產(chǎn)成本，最佳提取條件是A3B2C1，即開花期白花杜鵑粉碎為200目、萃取壓力25MPa、萃取溫度為40℃、反應(yīng)時間2.5h為最佳提取條件。
2.2 GC/MS檢測結(jié)果分析
將應(yīng)用上述最優(yōu)提取條件（即開花期白花杜鵑粉碎為200目、萃取壓力25MPa、萃取溫度為40℃、反應(yīng)時間2.5h）提取的白花杜鵑活性成分采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)進行測定，具體參見圖1，共檢測分離出24種含量較高的化合物；經(jīng)與質(zhì)譜譜圖數(shù)據(jù)庫比對，初步鑒定主要為烷烴及其含氧衍生物（62.32%）、烯和醇（8.09%）、酯（4.87%）等化合物，其中包含有提高機體免疫力和抗腫瘤作用的角鯊烯（含量達4.79%）等活性成分。
實施例1
本發(fā)明的提取白花杜鵑中生物活性成分的方法如下：
（1）將開花期采摘的白花杜鵑在自然條件下戶外晾干，粉碎后過200目篩；
（2）稱取3 g白花杜鵑粉體放入萃取釜中，以CO2流體為萃取劑，萃取壓力15MPa、萃取溫度為35℃、萃取時間為2h，得到0.01034g淡黃色的活性成分提取物。
實施例2
本發(fā)明的提取白花杜鵑中生物活性成分的方法如下：
（1）將開花期采摘的白花杜鵑在自然條件下戶外晾干，粉碎后過200目篩；
（2）稱取3.5g白花杜鵑粉體放入萃取釜中，以CO2流體為萃取劑，萃取壓力20MPa、萃取溫度為45℃、萃取時間為1.5h，得到0.01229g淡黃色的活性成分提取物。
實施例3
本發(fā)明的提取白花杜鵑中生物活性成分的方法如下：
（1）將開花期采摘的白花杜鵑在自然條件下戶外晾干，粉碎后過200目篩；
（2）稱取3.7g白花杜鵑粉體放入萃取釜中，以CO2流體為萃取劑，萃取壓力25MPa、萃取溫度為40℃、萃取時間為2.5h，得到0.02934g淡黃色的活性成分提取物。
實施例4
本發(fā)明的提取白花杜鵑中生物活性成分的方法如下：
（1）將開花期采摘的白花杜鵑在自然條件下戶外晾干，粉碎后過200目篩；
（2）稱取3.5g白花杜鵑粉體放入萃取釜中，以CO2流體為萃取劑，萃取壓力25MPa、萃取溫度為35℃、萃取時間為1.5h，得到0.01876g淡黃色的活性成分提取物。
實施例5
本發(fā)明的提取白花杜鵑中生物活性成分的方法如下：
（1）將開花期采摘的白花杜鵑在自然條件下戶外晾干，粉碎后過200目篩；
（2）稱取3.4g白花杜鵑粉體放入萃取釜中，以CO2流體為萃取劑，萃取壓力25MPa、萃取溫度為45℃、萃取時間為2h，得到0.01808g淡黃色的活性成分提取物。
實施例6
本發(fā)明的提取白花杜鵑中生物活性成分的方法如下：
（1）將開花期采摘的白花杜鵑在自然條件下戶外晾干，粉碎后過200目篩；
（2）稱取3.8g白花杜鵑粉體放入萃取釜中，以CO2流體為萃取劑，萃取壓力15MPa、萃取溫度為45℃、萃取時間為2.5h，得到0.00561g淡黃色的活性成分提取物。
最后應(yīng)說明的是：以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實施例對本發(fā)明進行了詳細的說明，對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說，其依然可以對前述各實施例所記載的技術(shù)方案進行修改，或者對其中部分技術(shù)特征進行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。