本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及紫草素在制備用于治療上下呼吸道變應(yīng)性疾病的藥物中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

紫草(Radix Arnebiae)為紫草科植物新疆紫草Arnebia educhroma(Royle)Johnst、紫草Lithospermum erythrorhizon Sieb.et Zucc.或內(nèi)蒙紫草ArnebiaguttataBunge的干燥根。紫草又稱紫草茸、山紫草、紫丹、紫草根、紅石根。主產(chǎn)于新疆、西藏、甘肅、黑龍江、吉林、遼寧、河北、河南、廣西等地。紫草性味甘、咸、寒，歸心、肝經(jīng)。功能涼血，活血，解毒透疹。主治血熱毒盛，斑疹紫黑，麻疹不透，瘡瘍，濕疹，水火燙傷等。紫草主要含有紫草素(shikonin)、乙酰紫草素(acetylshikonin)、β-羥基異戊酰紫草素(β-hydro-xyisovalerylshikonin)、β，β’-二甲基丙烯酰紫草素(β，β′-dimethylacrylshikonin)等。

其中，紫草素分子量為288.30，分子式C16H16O5，別名為5，8-二羥基-2-[(1R)-1-羥基-4-甲基戊-3-烯基]萘-1，4-二酮，結(jié)構(gòu)如式1所示，目前國內(nèi)研究紫草素應(yīng)用主要是腫瘤及自身免疫病的免疫干預(yù)，目前已知的紫草素效應(yīng)有包括抑制人乳腺癌、肝癌、前列腺癌、胰腺癌的細胞增殖，抗肝炎病毒、流感病毒、乳頭瘤病毒等多種病毒?？鼓[瘤主要是通過干擾蛋白質(zhì)與DNA間的關(guān)聯(lián)，誘導(dǎo)腫瘤細胞自噬、抑制腫瘤細胞基因表達等機制發(fā)揮作用，在抗病毒方面主要是通過調(diào)控細胞因子分泌、抑制病毒基因復(fù)制和蛋白表達等機制發(fā)揮作用。但是紫草素單體在制備用于治療上下呼吸道變應(yīng)性疾病的藥物中的應(yīng)用還未見報道。

并且目前國內(nèi)上下呼吸道變應(yīng)性疾病的治療主要是應(yīng)用糖皮質(zhì)激素類藥物、β2受體興奮藥、白三烯阻滯藥等霧化，因這些藥物本身具免疫抑制作用，長期使用，易使患者出現(xiàn)免疫降低，病情反復(fù)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供紫草素在制備用于治療上下呼吸道變應(yīng)性疾病的藥物中的應(yīng)用，以紫草素對上下呼吸道變應(yīng)性疾病進行免疫干預(yù)，從樹突狀細胞成熟及表型表達、TH細胞的激活和分化、細胞因子的分泌等方面進行調(diào)節(jié)，建立正常免疫秩序，避免造成類似激素類藥物所致的免疫抑制現(xiàn)象。

為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

1、紫草素在制備用于治療上下呼吸道變應(yīng)性疾病的藥物中的應(yīng)用。

優(yōu)選的，所述上下呼吸道變應(yīng)性疾病包括變應(yīng)性鼻炎及變應(yīng)性哮喘。

本發(fā)明的有益效果在于：紫草素可干預(yù)變應(yīng)性鼻炎和變應(yīng)性哮喘患者黏膜及黏膜相關(guān)淋巴組織中樹突狀細胞的成熟和表型表達，從而糾正變應(yīng)性鼻炎中TH細胞應(yīng)答的偏移，可干預(yù)上下呼吸道變應(yīng)性疾病患者樹突狀細胞及TH2細胞相關(guān)細胞因子的分泌，減少炎細胞局部浸潤，減少成熟漿細胞分泌超敏反應(yīng)相關(guān)IgE類抗體，誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫耐受，建立正常免疫調(diào)節(jié)，促進疾病緩解。

附圖說明

為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和有益效果更加清楚，本發(fā)明提供如下附圖：

圖1中A、B、C、D分別表示AR建模后模型組鼻黏膜、觀察組鼻黏膜、對照組鼻黏膜、紫草素干預(yù)后觀察組鼻黏膜的HE染色光鏡下情況；

圖2中A、B分別表示樹突細胞CD80、CD86表達情況；

圖3中A、B分別表示相關(guān)細胞因子IL-10、IL-12表達情況；

圖4表示紫草素治療上下呼吸道變應(yīng)性疾病的作用機理。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施例，對本發(fā)明做進一步說明。本發(fā)明所述紫草素可從紫草根中提取得來，也可應(yīng)用現(xiàn)有技術(shù)已公開的人工合成的方法獲得。本領(lǐng)域人員可知，運用從紫草根中提取得來的紫草素或者應(yīng)用現(xiàn)有技術(shù)已公開的人工合成的方法獲得的紫草素同樣具有用于治療上下呼吸道變應(yīng)性疾病的用途。

實施例1紫草素對大鼠變應(yīng)性鼻炎(AR)的防治作用

1.1建模與分組

選8-10周齡健康大鼠40只，大鼠體重性別差異無統(tǒng)計學意義。10只健康大鼠直接脫椎處死取鼻黏膜固定設(shè)為對照組1。采用卵清蛋白(ovalbumin，OVA)局部滴鼻法致敏建立大鼠AR模型30只，致敏量為10μgOVA+0.5㎎Al(OH)3+0.1ml生理鹽水每側(cè)鼻孔，兩側(cè)鼻孔各2次/天，持續(xù)刺激10天后根據(jù)癥狀及鼻分泌物涂片判定建模成功。10只為模型組，建模成功即脫椎處死取鼻黏膜迅速固定，20只為觀察組，建模成功后予以100μg/ml紫草素霧化吸入治療(100～200㎎紫草素+5毫升生理鹽水+1㎎糜蛋白酶霧化)，12小時后處死取鼻黏膜固定。

1.2方法

三組實驗標本均采用免疫組織化學技術(shù)，用兔抗多克隆抗體CD80、兔抗多克隆抗體CD86及兔抗多克隆抗體IL-10、兔抗多克隆抗體IL-12標記后，顯微鏡觀察計數(shù)結(jié)果，先在低倍鏡選取陽性細胞多的區(qū)域5個，再配上計數(shù)格在高倍鏡下進行計數(shù)。

1.3試劑及實驗器材

試驗用左旋紫草素由重慶三峽醫(yī)藥高等?？茖W校天然藥物工程技術(shù)中心自行提取。CD86多克隆兔抗體(貨號ANT-283)、CD80多克隆兔抗體(貨號ANT-133)購自北京鼎國昌盛生物科技有限公司，IL-10多克隆兔抗體(貨號A-AP52148)、IL-12多克隆兔抗體(貨號A-AP52181)購自武漢艾美捷科技有限公司。輪轉(zhuǎn)式切片機為徠卡2015(德國產(chǎn))，顯微鏡用奧林巴斯顯微鏡CX31-LV320，image Analysis Syste11.0軟件成像系統(tǒng)。

1.4數(shù)據(jù)處理

結(jié)果計量用均數(shù)±標準差，組間數(shù)據(jù)采用方差檢驗。SPSS18.0軟件處理數(shù)據(jù)。檢驗水準α＝0.05，P＜0.05表示有統(tǒng)計學意義。

1.5大鼠AR造模評定標準

大鼠AR造模評定依據(jù)確立為①癥狀：鼻紅，搔抓鼻周或者眼周，頻繁噴嚏，大量清涕，四項癥狀至少滿足三項；②檢查：鼻分泌物涂片顯示嗜酸性粒細胞陽性。排除鼻紅程度、喘息程度等難以具體計量的因素，大鼠AR模型紫草素干預(yù)效果評判標準如下表1。干預(yù)效果評估采取疊加計分，＜4分為顯效，4～6分為有效，＞6分為無效。

表1大鼠AR模型紫草素干預(yù)效果評判標準

1.6結(jié)果及分析

1.6.1大鼠AR模型紫草素干預(yù)情況比較

在OVA滴鼻造模十天左右，30只大鼠先后出現(xiàn)鼻紅，搔抓鼻周或者眼周，頻繁噴嚏，大量清涕癥狀，鼻分泌物涂片顯示嗜酸性粒細胞陽性。模型組大鼠取得的鼻黏膜蒼白、水腫。光鏡HE染色可見鼻黏膜增厚且厚度不均，基底結(jié)構(gòu)不清，固有層小血管、毛細血管擴張明顯，組織間隙擴大，大量炎細胞浸潤。經(jīng)紫草素干預(yù)后，觀察組大鼠癥狀明顯緩解，噴嚏、搔抓鼻周、眼周頻率降低，鼻分泌物涂片嗜酸性粒細胞陽性率減少，鏡下觀察鼻黏膜水腫減輕，炎細胞數(shù)量也有所減少。光鏡觀察情況如圖1所示，根據(jù)預(yù)設(shè)的干預(yù)效果評估標準，觀察組共計有顯效13例，有效7例，無效0例。根據(jù)癥狀觀察結(jié)果，紫草素對大鼠AR模型超敏反應(yīng)有治療作用。

1.6.2樹突狀細胞CD80、CD86表達情況

在實驗標本中，CD80及CD86陽性細胞為棕黃色，主要集中在鼻黏膜上皮及固有層，如圖2所示，觀察組標本中CD80值為13.52±3.53、CD86值為24.01±13.12，模型組CD80值為17.19±4.42、CD86值為38.89±9.77，數(shù)據(jù)及檢驗情況如下表2。

表2三組AR大鼠模型中樹突細胞CD80、CD86表達的檢測情況

1.6.3細胞因子IL-10、IL-12表達情況

在實驗標本中，IL-10、IL-12陽性細胞為黃色，主要集中在鼻黏膜上皮層，少數(shù)在鼻黏膜固有層，如圖3所示，觀察組IL-10值為6.69±1.12，IL-12值為44.3±9.7；(模型組IL-10值為3.61±0.23，IL-12值為28.8±8.2)，數(shù)據(jù)及檢驗情況如下表3。

表3三組AR大鼠模型相關(guān)細胞因子IL-10、IL-12表達的檢測情況

由上述結(jié)果可得知，在對觀察組AR大鼠模型進行紫草素干預(yù)后，觀察組大鼠癥狀明顯緩解，噴嚏、搔抓鼻周、眼周頻率降低或不再出現(xiàn)，鼻分泌物涂片嗜酸性粒細胞陽性率減少，鏡下觀察鼻黏膜水腫減輕，炎細胞數(shù)量也有所減少。根據(jù)預(yù)設(shè)的干預(yù)效果評估標準，觀察組共計有顯效13例，有效7例，無效0例。證實紫草素在AR模型中的免疫干預(yù)對疾病發(fā)展有正面影響。

在實驗標本檢測中，觀察組DCs表面CD80、CD86等協(xié)同刺激分子表達與健康大鼠檢測狀態(tài)接近，此外觀察組相關(guān)細胞因子IL-10、IL-12檢測也接近健康狀態(tài)，與模型組DCs表面CD80、CD86的異常表達相對比，結(jié)果經(jīng)方差檢驗具統(tǒng)計學意義，因為紫草素干預(yù)了DCs表面CD80、CD86的表型表達，這個效果可以減少TH2類細胞的過度活化，糾正AR中TH應(yīng)答的偏移，減少TH細胞相關(guān)促炎因子的分泌，建立正常的免疫調(diào)節(jié)，促進疾病緩解。此外在AR病程中，DCs相關(guān)細胞因子IL-10、IL-12分泌減少，而在觀察組中，經(jīng)紫草素干預(yù)，IL-10、IL-12分泌基本正常，這一效果可以抑制多種促炎細胞因子的合成,抑制肥大細胞等釋放炎癥介質(zhì)，減少炎細胞局部浸潤，誘導(dǎo)動物模型產(chǎn)生免疫耐受，從而起到治療AR的作用。

實施例2紫草素對大鼠變應(yīng)性哮喘(AS)的防治作用

上下呼吸道變應(yīng)性疾病AR、AS具有一致性，通過如實施例1所述的建模、分組以及實驗方式同時得出了紫草素對大鼠變應(yīng)性哮喘(AS)的防治作用的相關(guān)實驗數(shù)據(jù)，具體如下：

表4四組AS大鼠模型中樹突細胞CD80、CD86表達的檢測情況

表5四組AS大鼠模型相關(guān)細胞因子IL-4、IL-10、IL-12表達的檢測情況

由表4、5可證實紫草素在AS模型中的免疫干預(yù)對疾病發(fā)展也有正面影響，紫草素可以起到治療As的作用。

通過實施例1及2可論證，紫草素可干預(yù)變應(yīng)性鼻炎和變應(yīng)性哮喘患者黏膜及黏膜相關(guān)淋巴組織中樹突狀細胞的成熟和表型表達，從而糾正變應(yīng)性鼻炎中TH細胞應(yīng)答的偏移，可干預(yù)上下呼吸道變應(yīng)性疾病患者樹突狀細胞及TH2細胞相關(guān)細胞因子的分泌，減少炎細胞局部浸潤，減少成熟漿細胞分泌超敏反應(yīng)相關(guān)IgE類抗體，誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫耐受，建立正常免疫調(diào)節(jié)，促進疾病緩解，其作用機理如圖4所示。

最后說明的是，以上優(yōu)選實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管通過上述優(yōu)選實施例已經(jīng)對本發(fā)明進行了詳細的描述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當理解，可以在形式上和細節(jié)上對其作出各種各樣的改變，而不偏離本發(fā)明權(quán)利要求書所限定的范圍。