本發(fā)明涉及一種治療休克、冠心病、心絞痛、缺血性腦中風(fēng)的組合物及其制備方法，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
古方參冬飲源于明代秦景明《癥因脈治》，是由人參、麥冬二味中藥等量組方而成。主要功能為益氣固脫，滋陰生津，養(yǎng)心復(fù)脈；根據(jù)古方參冬飲開發(fā)的參麥制劑包括參麥顆粒、參麥散、參麥注射液等。參麥注射液(WS3－B－3428－98)收載于中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十八冊，具有益氣固脫，養(yǎng)陰生津，生脈等功效。用于治療氣陰兩虛之休克、冠心病、病毒性心肌炎、慢性肺心病、粒細(xì)胞減少癥等。在我國上市已近30年的歷史，作為國家基本藥物和醫(yī)保目錄藥品，是臨床上應(yīng)用廣泛的重要大品種，全年銷售總額達(dá)到8～10億元，且每年保持20％的增長，有著很好的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。現(xiàn)有參麥制劑原料的通常制備方法為將人參和麥冬用乙醇回流提取，提取液用活性炭除雜或未再進(jìn)一步純化，即得，工藝較為粗放，得到的原料有效成分人參皂甙和麥冬皂甙含量低，雜質(zhì)含量高，質(zhì)量相對難控，藥品的療效受到影響，不良反應(yīng)也大。
專利CN1283500A“一種注射用參麥無菌粉末及其制備方法”，及CN1283499A“一種注射用參麥凍干粉新的制備方法”，“采用水提加大孔樹脂方法”，大大提高了人參皂甙和麥冬皂甙的含量，但是水提法提取液中含糖量較高，對后續(xù)的大孔樹脂純化過程中的人參皂甙和麥冬皂甙的轉(zhuǎn)移率帶來不利影響。CN1843455A采用“醇溶液提取加大孔樹脂方法”，所得提取液內(nèi)含多糖的成分很少，有利于后續(xù)的大孔樹脂純化工藝，人參皂甙和麥冬皂甙的轉(zhuǎn)移率有所提高，但是該工藝仍有進(jìn)一步優(yōu)化的必要，以利于進(jìn)一步提升人參皂甙和麥冬皂甙的收率及轉(zhuǎn)移率。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本申請人對CN1843455A提供的“醇溶液提取加大孔樹脂方法”制備參麥提取物的工藝進(jìn)行了進(jìn)一步優(yōu)化，使得該人參皂甙和麥冬皂甙的收率及轉(zhuǎn)移率均有所提高，且出人意料的發(fā)現(xiàn)采用該法制備的參麥提取物具有更好的藥效。
本發(fā)明的首要目的在于提供一種新的參麥藥物組合物。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：一種治療休克、冠心病、心絞痛、缺血性腦中風(fēng)的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由下述重量份的原料藥制成的：紅參100份、麥冬100份；其制備方法包括紅參提取物的制備和麥冬提取物的制備；其中，(1)所述紅參提取物的制備方法包含如下步驟：稱取紅參藥材，用紅參6倍重量份的60％乙醇回流提取1次，提取半個小時，再用紅參4倍重量份的60％乙醇回流提取3次，每次半小時；合并提取液，冷藏，過濾，濃縮至60℃溫度下相對密度為1.05～1.10，將得到的濃縮液注入HPD100型大孔吸附樹脂柱，其中所述大孔吸附樹脂柱的徑高比控制在1:4～1:8之間，洗脫條件為：紅參與干樹脂的重量比為3:1，吸附流速3ml/min，洗脫流速3ml/min；洗脫時先用6倍量柱體積的純化水洗脫，再用8倍量柱體積20％乙醇洗脫，棄去洗脫液，再用6倍量柱體積60％乙醇洗脫，收集60％乙醇洗脫液；將得到的洗脫液濃縮至干得紅參提取物；(2)所述麥冬提取物的制備方法包含如下步驟：取麥冬藥材，加入麥冬6倍重量份的75％乙醇回流提取1次，提取1小時，再用麥冬4倍重量份的75％乙醇回流提取1次，提取1小時；合并提取液，冷藏，過濾，濃縮至60℃溫度下相對密度為1.25～1.30；將得到的濃縮液注入NKA型大孔吸附樹脂柱，其中所述大孔吸附樹脂柱的徑高比控制在1:4～1:8之間，洗脫條件為：麥冬與干樹脂的重量比為3～3.5:1，吸附流速3ml/min，洗脫流速4ml/min；洗脫時，先用2倍量柱體積的純化水洗脫，再用5倍量柱體積40％乙醇洗脫，棄去洗脫液，然后用2倍量柱體積的80％乙醇洗脫，收集80％乙醇洗脫液；將得到的洗脫液濃縮至干得麥冬提取物。
作為進(jìn)一步的優(yōu)選方案：本發(fā)明組合物所述紅參提取物的制備方法中采用的HPD100型大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:6。
作為進(jìn)一步的優(yōu)選方案：本發(fā)明組合物所述麥冬提取物的制備方法中采用的NKA型大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:6。
作為進(jìn)一步的優(yōu)選方案：本發(fā)明組合物制備方法中所述麥冬提取物的制備方法中麥冬與干樹脂的重量比優(yōu)選為4:1。
本發(fā)明的第二個目的在于提供一種新的參麥藥物組合物的制備方法。
為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：一種本發(fā)明組合物的制備方法，包括紅參提取的制備和麥冬提取物的制備；其中，(1)所述紅參提取物的制備方法包含如下步驟：稱取紅參藥材，用紅參6倍重量份的60％乙醇回流提取1次，提取半個小時，再用紅參4倍重量份的60％乙醇回流提取3次，每次半小時；合并提取液，冷藏，過濾，濃縮至60℃溫度下相對密度為1.05～1.10，將得到的濃縮液注入HPD100型大孔吸附樹脂柱，其中所述大孔吸附樹脂柱的徑高比控制在1:4～1:8之間，洗脫條件為：紅參與干樹脂的重量比為3:1，吸附流速3ml/min，洗脫流速3ml/min；洗脫時先用6倍量柱體積的純化水洗脫，再用8倍量柱體積20％乙醇洗脫，棄去洗脫液，再用6倍量柱體積60％乙醇洗脫，收集60％乙醇洗脫液；將得到的洗脫液濃縮至干得紅參提取物；(2)所述麥冬提取物的制備方法包含如下步驟：取麥冬藥材，加入麥冬6倍重量份的75％乙醇回流提取1次，提取1小時，再用麥冬4倍重量份的75％乙醇回流提取1次，提取1小時；合并提取液，冷藏，過濾，濃縮至60℃溫度下相對密度為1.25～1.30；將得到的濃縮液注入NKA型大孔吸附樹脂柱，其中所述大孔吸附樹脂柱的徑高比控制在1:4～1:8之間，洗脫條件為：麥冬與干樹脂的重量比為3～5:1，吸附流速3ml/min，洗脫流速4ml/min；洗脫時，先用2倍量柱體積的純化水洗脫，再用5倍量柱體積40％乙醇洗脫，棄去洗脫液，然后用2倍量柱體積的80％乙醇洗脫，收集80％乙醇洗脫液；將得到的洗脫液濃縮至干得麥冬提取物。
作為進(jìn)一步的優(yōu)選方案：本發(fā)明組合物制備方法中所述紅參提取物的制備方法中采用的HPD100型大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:6。
作為進(jìn)一步的優(yōu)選方案：本發(fā)明組合物制備方法中所述麥冬提取物的制備方法中采用的NKA型大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:6。
作為進(jìn)一步的優(yōu)選方案：本發(fā)明組合物制備方法中所述麥冬提取物的制備方法中麥冬與干樹脂的重量比優(yōu)選為4:1。
本發(fā)明的第三個目的在于提供一種新治療休克、冠心病、心絞痛、缺血性腦中風(fēng)的制劑。采用的技術(shù)方案是，所述制劑是本發(fā)明上述組合物和藥用輔料一起混合，按常規(guī)方法制備而成，所述制劑優(yōu)選片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、注射劑。
本發(fā)明的第四個目的在于提供一種新治療休克、冠心病、心絞痛、缺血性腦中風(fēng)的注射劑。采用技術(shù)方案是所述注射液是本發(fā)明上述組合物和藥用輔料一起混合，按常規(guī)方法制備而成注射劑，藥用輔料優(yōu)選包含L-甲硫氨酸、聚乙二醇400。發(fā)明人在輔料篩選的過程中發(fā)現(xiàn)，采用L-甲硫氨酸作為抗氧化劑可以使得本發(fā)明組合物制備的注射液的pH值在貯存過程中保持穩(wěn)定；而采用聚乙二醇400作為增溶劑，主要是從安全性上考慮，例如市場上一些參麥注射液產(chǎn)品采用吐溫-80作為助溶劑，但是吐溫類物質(zhì)對人體血管系統(tǒng)有毒性反應(yīng)。
本發(fā)明的第五個目的在于提供一種新治療休克、冠心病、心絞痛、缺血性腦中風(fēng)的注射劑的制備方法。采用的技術(shù)方案為：所述注射劑的制備方法包括如下步驟：將本發(fā)明上述組合物混合均勻，加注射用水，調(diào)pH值至7.3-7.9，加熱煮沸，冷卻，冷藏，超濾，加入L-甲硫氨酸、聚乙二醇400等輔料，定容，調(diào)節(jié)pH值至8.0，過濾，灌封，滅菌。本方法采用的是“超濾”除去熱源的方法。申請人在研究中發(fā)現(xiàn)，采用活性炭吸附法除去熱源，即使活性炭的加入量僅為溶液體積的0.02％，仍有較大量的主成分損失，因而不宜采用該法去除熱原。另外的研究結(jié)果也表明阻隔分子量＞10000的超濾膜會造成本發(fā)明注射液主成分較大的損失，而阻隔分子量為10000的超濾膜處理樣品后，人參皂甙Rg1和Re的損失量僅為1％，麥冬皂甙D的損失量約為8％。因此確定選用阻隔分子量為10000的超濾膜去除熱原，作為進(jìn)一步的優(yōu)選技術(shù)方案。
與現(xiàn)有技術(shù)CN1843455A相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點：
1、動物試驗表明，本發(fā)明組合物具有更好的藥效。這可能是與本發(fā)明組合物主要藥物有效成分人參皂甙Rg1和Re、麥冬皂甙D含量較高有關(guān)，同時可能也與其他非主要有效成分得以保留，且各成分配比能更好的發(fā)揮協(xié)同作用有關(guān)。
2、CN1843455A沒有對其組合物的關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)進(jìn)行研究，有可能造成批次之間組合物主要或非主要有效成分得率及各成分之間的配比差異巨大，通過該法制備的藥物組合物藥效不穩(wěn)定，不能滿足藥物安全性及有效性要求。本發(fā)明組合物的制備方法是在進(jìn)一步細(xì)化CN1843455A公開的技術(shù)的基礎(chǔ)上而獲得，對參麥組合物制備方法關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)進(jìn)行了控制，從而保證了藥品質(zhì)量、藥品藥效穩(wěn)定的要求。
具體實施方案
下述是結(jié)合具體實施例和實驗例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。但這些實施例和實驗例僅限于說明本發(fā)明而不是用于限制本發(fā)明的范圍。
第一部分：生產(chǎn)工藝研究
1、紅參提取工藝
紅參藥材中主要含有原人參二醇和人參三醇類皂苷、多糖以及部分揮發(fā)性成分、有機(jī)酸等。根據(jù)文獻(xiàn)報道，紅參大補元氣，復(fù)脈固脫的主要有效成分為人參皂苷類成分，其中最主要成分為人參皂苷Rg1及Re。人參皂苷類成分易溶于水，不同濃度的乙醇、甲醇、正丁醇等，不溶于低極性有機(jī)溶劑。因此，為了得到紅參中的有效部位---紅參總皂苷，申請人對其提取工藝進(jìn)行了考察和優(yōu)化，使總皂苷盡可能提出，又利用大孔吸附樹脂純化技術(shù)，使總皂苷達(dá)到了最大程度的富集，以達(dá)到有效部位投料的中藥注射劑的技術(shù)要求。
具體試驗方法為：取紅參飲片100g，采用不同濃度乙醇溶液回流條件下提取，合并提取液放置至室溫后，過濾，濾液減壓濃縮并蒸干，用水溶解并轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取該溶液5ml，用水飽和的正丁醇萃取4次，用量分別為20ml、10ml、10ml、10ml，合并正丁醇萃取部分，減壓蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，測定人參皂苷Rg1的含量。表1列出了具有代表性的部分試驗的結(jié)果。
試驗結(jié)果表明，60％濃度乙醇的提取效果較好。申請人在試驗中發(fā)現(xiàn)，提取溶劑的用量對紅參皂苷的溶出沒有顯著性影響，考慮到節(jié)約溶劑和成本以及隨著提取次數(shù)的增多，人參皂苷Rg1的溶出有提高的趨勢的原因，申請人最終確定的是先采用6倍重量份的60％乙醇回流提取1次，提取半個小時，再用4倍重量份的60％乙醇回流提取3次，每次半小時。
表1 紅參總皂苷提取工藝考察試驗結(jié)果
2、紅參純化工藝
紅參經(jīng)提取后，考慮到醇沉工藝會將皂苷類成分包裹在其中而損失，故不考慮用醇沉工藝。根據(jù)多年來對紅參的研究以及文獻(xiàn)報道，我們選擇了大孔吸附樹脂法對總皂苷類成分進(jìn)行分離純化。采用大孔吸附樹脂柱層析法除雜，糖類、氨基酸、多肽等水溶性雜質(zhì)都可以被水洗脫除去，再用一定濃度的乙醇將總皂苷洗脫下來，故提取液減壓回收乙醇至一定相對密度，直接注入大孔吸附樹脂柱，用不同濃度乙醇進(jìn)行梯度洗脫，就可以起到除雜精制紅參總皂苷的作用。申請人經(jīng)過大量的試驗篩選，發(fā)現(xiàn)HPD100型大孔吸附樹脂對紅參總皂苷的吸附容量和解吸附的綜合效果最好，因此本發(fā)明采用HPD100型大孔吸附樹脂對紅參提取物進(jìn)行純化。
試驗方法：取不同直徑的樹脂柱(Φ＝3cm，4cm，5cm)，將紅參提取物濃縮液分別用按照徑高比加入不同重量的已處理好的HPD100型大孔吸附樹脂純化，先用6倍柱體積水洗脫，再用8倍柱床體積20％乙醇洗脫，然后用8倍柱床體積60％乙醇洗脫。收集60％乙醇洗脫液，減壓回收乙醇至干，用60％乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，并用60％乙醇稀釋至刻度，搖勻。測定人參皂苷Rg1和Re的含量。表2列出了具有代表性的部分試驗的結(jié)果。
表2 紅參總皂苷純化工藝考察試驗結(jié)果
試驗結(jié)果表明，在紅參提取物純化過程中大孔吸附樹脂柱的徑高比控制在1:4～1:8之間，洗脫條件為：紅參與干樹脂的重量比為3:1，吸附流速3ml/min，洗脫流速3ml/min時，樹脂的出膏率及Rg1和Re的轉(zhuǎn)移率等比較理想。
3、麥冬提取工藝
麥冬藥材中主要含有甾體皂苷、高異黃酮、β-谷甾醇、大量的單糖和寡糖等成分。根據(jù)文獻(xiàn)報道，麥冬心血管方面活性成分主要為麥冬皂苷類，而大量的單糖和寡糖則沒有顯著的活性。麥冬皂苷屬甾體皂苷類，主要成分為麥冬皂苷D以及其它皂苷類成分，而且大多數(shù)皂苷都連有3～4個甚至更多的糖，易溶于水、熱甲醇、乙醇，不溶于非極性有機(jī)溶劑，因此我們對提取工藝進(jìn)行了考察和優(yōu)化，使皂苷類成分盡可能溶出，而其他雜質(zhì)較少溶出，又利用大孔吸附樹脂純化技術(shù)，使皂苷類成分達(dá)到了最大程度富集，滿足有效部位投料的中藥注射劑的技術(shù)要求。
具體試驗方法為：取麥冬藥材100g，采用不同濃度乙醇溶液回流條件下提取，合并提取液放置至室溫后，過濾，濾液減壓濃縮并蒸干，測定麥冬皂苷D的相對含量(以峰面積計)。表3列出了具有代表性的部分試驗的結(jié)果。
表3 麥冬皂苷D提取工藝考察試驗結(jié)果
試驗結(jié)果表明，75％濃度乙醇的提取效果較好。申請人在試驗中發(fā)現(xiàn)，在第一次用6倍重量份75％濃度乙醇提取過程中已經(jīng)提取到了大部分麥冬皂苷D，因此從節(jié)約成本考慮，本發(fā)明第二次提取時用4倍重量份75％濃度乙醇提取，提取收率影響可以忽略。
4、麥冬純化工藝
提取溶劑采用75％的乙醇，溶出的多糖量不太多，將提取液直接放在5℃冷庫中靜置一夜，只有少量多糖被沉淀下來，調(diào)乙醇濃度到85％醇沉一次又有部分多糖沉淀下來，由于考慮到醇沉?xí)⒃碥疹惓煞职谄渲卸鴵p失，而且工藝較為繁瑣，成本也高，并不是最好的純化方法。另外，經(jīng)提取后的提取液中有少量糖類、氨基酸和多肽等成分，純化過程中要盡可能的除去這些雜質(zhì)，從而提高麥冬總皂苷的含量。根據(jù)這些化合物的性質(zhì)，申請人選擇了大孔樹脂吸附法對皂苷類成分進(jìn)行分離純化。采用大孔吸附樹脂法除雜，糖類、氨基酸等雜質(zhì)可被水洗脫除去，再用一定濃度的乙醇將總皂苷洗脫下來，故提取液減壓回收乙醇至一定相對密度，不必醇沉，直接注入大孔吸附樹脂柱處理，就可以起到除雜精制麥冬總皂苷的作用。
申請人經(jīng)過大量的試驗篩選，發(fā)現(xiàn)NKA型大孔吸附樹脂對麥冬總皂苷的吸附容量和解吸附的綜合效果最好，因此本發(fā)明采用NKA型大孔吸附樹脂對麥冬提取物進(jìn)行純化。
試驗方法：取不同直徑的樹脂柱(Φ＝3cm，4cm，5cm)，將麥冬提取物濃縮液分別用按照徑高比加入不同重量的已處理好的NKA型大孔吸附樹脂純化，先用水洗脫至無糖反應(yīng)，再用40％乙醇洗脫5倍柱床體積，再用80％乙醇洗脫6倍柱床體積。收集80％乙醇洗脫液，回收乙醇并濃縮至干，再用80％乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，用80％乙醇稀釋至刻度，搖勻，測定麥冬皂苷D的量。表4列出了具有代表性的部分試驗的結(jié)果。
表4 麥冬總皂苷純化工藝考察試驗結(jié)果
試驗結(jié)果表明，在麥冬提取物純化過程中大孔吸附樹脂柱的徑高比控制在1:4～1:8之間，洗脫條件為：麥冬與干樹脂的重量比為3～5:1，吸附流速3ml/min，洗脫流速4ml/min時，樹脂的出膏率及麥冬皂苷D的轉(zhuǎn)移率等比較理想。
二、組合物及制劑的制備
實施例1
組方：
紅參 100g 麥冬 100g
制備方法：
稱取紅參藥材，用600g濃度為60％乙醇回流提取1次，提取半個小時，再用400g的60％乙醇回流提取3次，每次半小時；合并提取液，冷藏，過濾，濃縮至60℃溫度下相對密度為1.05～1.10，將得到的濃縮液注入HPD100型大孔吸附樹脂柱，其中所述大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:4，洗脫條件為：紅參與干樹脂的重量比為3:1，吸附流速3ml/min，洗脫流速3ml/min；洗脫時先用6倍量柱體積的純化水洗脫，再用8倍量柱體積20％乙醇洗脫，棄去洗脫液，再用6倍量柱體積60％乙醇洗脫，收集60％乙醇洗脫液；將得到的洗脫液濃縮至干得紅參提取物，人參皂苷Rg1和Re含量之和為15.59％，人參皂苷Rg1和Re的轉(zhuǎn)移率為81.63％，紅參總皂苷含量96.14％。
取麥冬藥材，加入600g的75％乙醇回流提取1次，提取1小時，再用400g的75％乙醇回流提取1次，提取1小時；合并提取液，冷藏，過濾，濃縮至60℃溫度下相對密度為1.25～1.30；將得到的濃縮液注入NKA型大孔吸附樹脂柱，其中所述大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:4，洗脫條件為：麥冬與干樹脂的重量比為3:1，吸附流速3ml/min，洗脫流速4ml/min；洗脫時，先用2倍量柱體積的純化水洗脫，再用5倍量柱體積40％乙醇洗脫，棄去洗脫液，然后用2倍量柱體積的80％乙醇洗脫，收集80％乙醇洗脫液；將得到的洗脫液濃縮至干得麥冬提取物，其中麥冬皂苷D含量為3.81％，麥冬皂苷D轉(zhuǎn)移率74.67％，麥冬總皂苷含量為95.13％。
將紅參提取物和麥冬提取物混合均勻即得本發(fā)明組合物。
實施例2
組方：
紅參 100g 麥冬 100g
制備方法：
稱取紅參藥材，用600g濃度為60％乙醇回流提取1次，提取半個小時，再用400g的60％乙醇回流提取3次，每次半小時；合并提取液，冷藏，過濾，濃縮至60℃溫度下相對密度為1.05～1.10，將得到的濃縮液注入HPD100型大孔吸附樹脂柱，其中所述大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:6，洗脫條件為：紅參與干樹脂的重量比為3:1，吸附流速3ml/min，洗脫流速3ml/min；洗脫時先用6倍量柱體積的純化水洗脫，再用8倍量柱體積20％乙醇洗脫，棄去洗脫液，再用6倍量柱體積60％乙醇洗脫，收集60％乙醇洗脫液；將得到的洗脫液濃縮至干得紅參提取物，人參皂苷Rg1和Re含量之和為15.42％，人參皂苷Rg1和Re的轉(zhuǎn)移率為87.51％，紅參總皂苷含量96.16％。
取麥冬藥材，加入600g的75％乙醇回流提取1次，提取1小時，再用400g的75％乙醇回流提取1次，提取1小時；合并提取液，冷藏，過濾，濃縮至60℃溫度下相對密度為1.25～1.30；將得到的濃縮液注入NKA型大孔吸附樹脂柱，其中所述大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:6，洗脫條件為：麥冬與干樹脂的重量比為4:1，吸附流速3ml/min，洗脫流速4ml/min；洗脫時，先用2倍量柱體積的純化水洗脫，再用5倍量柱體積40％乙醇洗脫，棄去洗脫液，然后用2倍量柱體積的80％乙醇洗脫，收集80％乙醇洗脫液；將得到的洗脫液濃縮至干得麥冬提取物，其中麥冬皂苷D含量為3.67％，麥冬皂苷D轉(zhuǎn)移率81.29％，麥冬總皂苷含量為97.53％。
將紅參提取物和麥冬提取物混合均勻即得本發(fā)明組合物。
實施例3
組方：
紅參 100g 麥冬 100g
制備方法：
稱取紅參藥材，用600g濃度為60％乙醇回流提取1次，提取半個小時，再用400g的60％乙醇回流提取3次，每次半小時；合并提取液，冷藏，過濾，濃縮至60℃溫度下相對密度為1.05～1.10，將得到的濃縮液注入HPD100型大孔吸附樹脂柱，其中所述大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:8，洗脫條件為：紅參與干樹脂的重量比為3:1，吸附流速3ml/min，洗脫流速3ml/min；洗脫時先用6倍量柱體積的純化水洗脫，再用8倍量柱體積20％乙醇洗脫，棄去洗脫液，再用6倍量柱體積60％乙醇洗脫，收集60％乙醇洗脫液；將得到的洗脫液濃縮至干得紅參提取物，人參皂苷Rg1和Re含量之和為16.07％，人參皂苷Rg1和Re的轉(zhuǎn)移率為88.14％，紅參總皂苷含量92.26％。
取麥冬藥材，加入600g的75％乙醇回流提取1次，提取1小時，再用400g的75％乙醇回流提取1次，提取1小時；合并提取液，冷藏，過濾，濃縮至60℃溫度下相對密度為1.25～1.30；將得到的濃縮液注入NKA型大孔吸附樹脂柱，其中所述大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:8，洗脫條件為：麥冬與干樹脂的重量比為5:1，吸附流速3ml/min，洗脫流速4ml/min；洗脫時，先用2倍量柱體積的純化水洗脫，再用5倍量柱體積40％乙醇洗脫，棄去洗脫液，然后用2倍量柱體積的80％乙醇洗脫收集80％乙醇洗脫液；將得到的洗脫液濃縮至干得麥冬提取物，其中麥冬皂苷D含量為3.81％，麥冬皂苷D轉(zhuǎn)移率83.49％，麥冬總皂苷含量為95.03％。
將紅參提取物和麥冬提取物混合均勻即得本發(fā)明組合物。
實施例4
將實施例1組合物，溶于2L注射用水，調(diào)pH值至7.5，加熱煮沸，冷卻，冷藏，用阻隔分子量為10000的超濾膜超濾，加入8.5g L-甲硫氨酸、10mL聚乙二醇400等輔料，定容，調(diào)節(jié)pH值至8.0，過濾，灌封，滅菌
實施例5
將實施例2組合物，溶于2L注射用水，調(diào)pH值至7.3，加熱煮沸，冷卻，冷藏，用阻隔分子量為10000的超濾膜超濾，加入8.5g L-甲硫氨酸、10mL聚乙二醇400等輔料，定容，調(diào)節(jié)pH值至8.0，過濾，灌封，滅菌。
實施例6
將實施例3組合物，溶于2L注射用水，調(diào)pH值至7.9，加熱煮沸，冷卻，冷藏，用阻隔分子量為10000的超濾膜超濾，加入8.5g L-甲硫氨酸、10mL聚乙二醇400等輔料，定容，調(diào)節(jié)pH值至8.0，過濾，灌封，滅菌。
對比例1
組方：
紅參 100g 麥冬 100g
制備方法：
按CN1843455A實施例1方法制備紅參提取物，其中所述大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:6，洗脫條件為：紅參與干樹脂的重量比為3:1，吸附流速3ml/min，洗脫流速3ml/min；采用該法制備紅參提取物，人參皂苷Rg1和Re含量之和為12.71％，人參皂苷Rg1和Re的轉(zhuǎn)移率為61.28％，紅參總皂苷含量76.64％。
按CN1843455A實施例1方法制備麥冬提取物，所述大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:6，洗脫條件為：紅參與干樹脂的重量比為4:1，吸附流速3ml/min，洗脫流速4ml/min；采用該法制備麥冬提取物，其中麥冬皂苷D含量為2.41％，麥冬皂苷D轉(zhuǎn)移率54.27％，麥冬總皂苷含量為61.43％。
將上述紅參提取物和麥冬提取物混合均勻即得對比例1組合物。
對比例2
組方：
紅參 100g 麥冬 100g
制備方法：
按CN1843455A實施例2方法制備紅參提取物，其中所述大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:6，洗脫條件為：紅參與干樹脂的重量比為3:1，吸附流速3ml/min，洗脫流速3ml/min；采用該法制備紅參提取物，人參皂苷Rg1和Re含量之和為10.58％，人參皂苷Rg1和Re的轉(zhuǎn)移率為65.14％，紅參總皂苷含量70.29％。
按CN1843455A實施例2方法制備麥冬提取物，所述大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:6，洗脫條件為：紅參與干樹脂的重量比為4:1，吸附流速3ml/min，洗脫流速4ml/min；采用該法制備麥冬提取物，其中麥冬皂苷D含量為2.62％，麥冬皂苷D轉(zhuǎn)移率67.17％，麥冬總皂苷含量為66.73％。
將上述紅參提取物和麥冬提取物混合均勻即得對比例2組合物。
對比例3
組方：
紅參 100g 麥冬 100g
制備方法：
按CN1843455A實施例3方法制備紅參提取物，其中所述大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:6，洗脫條件為：紅參與干樹脂的重量比為3:1，吸附流速3ml/min，洗脫流速3ml/min；采用該法制備紅參提取物，人參皂苷Rg1和Re含量之和為13.64％，人參皂苷Rg1和Re的轉(zhuǎn)移率為71.67％，紅參總皂苷含量78.59％。
按CN1843455A實施例3方法制備麥冬提取物，所述大孔吸附樹脂柱的徑高比為1:6，洗脫條件為：紅參與干樹脂的重量比為4:1，吸附流速3ml/min，洗脫流速4ml/min；采用該法制備麥冬提取物，其中麥冬皂苷D含量為3.42％，麥冬皂苷D轉(zhuǎn)移率70.14％，麥冬總皂苷含量為74.82％。
將上述紅參提取物和麥冬提取物混合均勻即得對比例3組合物。
對比例1
將對比例1組合物，溶于2L注射用水，調(diào)pH值至7.5，加熱煮沸，冷卻，冷藏，用阻隔分子量為10000的超濾膜超濾，加入8.5g L-甲硫氨酸、10mL聚乙二醇400等輔料，定容，調(diào)節(jié)pH值至8.0，過濾，灌封，滅菌
對比例2
將對比例2組合物，溶于2L注射用水，調(diào)pH值至7.3，加熱煮沸，冷卻，冷藏，用阻隔分子量為10000的超濾膜超濾，加入8.5g L-甲硫氨酸、10mL聚乙二醇400等輔料，定容，調(diào)節(jié)pH值至8.0，過濾，灌封，滅菌。
對比例3
將對比例3組合物，溶于2L注射用水，調(diào)pH值至7.9，加熱煮沸，冷卻，冷藏，用阻隔分子量為10000的超濾膜超濾，加入8.5g L-甲硫氨酸、10mL聚乙二醇400等輔料，定容，調(diào)節(jié)pH值至8.0，過濾，灌封，滅菌。
第三部分：藥效學(xué)試驗
試驗例1、對麻醉開胸犬結(jié)扎冠脈引起的心源性休克的影響
雜種犬，分為8組，每組6只。對照組給予等容量生理水對照，實驗組分為實施例1組、實施例2組、實施例3組、對比例1組、對比例2組、對比例3組，每組藥物用生理水溶解，按3mg/kg劑量緩慢滴注。以戊巴比妥鈉30mg/kg i.v.麻醉，背位固定，頸部皮膚切開，氣管插管，連接電動呼吸機(jī)，分離右頸動脈，連接AP-601G放大器，測定血壓。實驗結(jié)束后，取下心臟，稱全心重，沿冠狀溝剪去大血管根部和心房，稱左心室重。將左心室均勻地橫斷切成5片，置于硝基四氮唑蘭(N-BT)染液中，在37℃恒溫水浴箱中染色15min。梗死區(qū)不著色，非梗死區(qū)被NBT染為藍(lán)色。剪去各心肌片被染色非梗死區(qū)心肌，把未染色的梗死心肌稱重，除以全心重和心室重分別得到梗死范圍占全心重和心室重的百分比。所有實驗數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，應(yīng)用t檢驗判斷組間均數(shù)差異顯著性。結(jié)果見表5.
表5 本發(fā)明組合物對心肌梗死犬心肌梗死面積的影響(x±s，n＝6)
注：與對照組比較：##p＜0.01，#p＜0.05，
試驗表明，本發(fā)明參麥組合物對縮小心肌梗死面積的作用好于對比例組合物。
試驗例2、對戊巴比妥鈉所致大鼠心力衰竭模型的影響
健康SD大鼠，體重250～350g，雄性50只。隨機(jī)分為8組：對照組(給等體積溶媒對照)、實施例4組、實施例5組、實施例6組、對比例4組、對比例5組、對比例6組，每組10只。大鼠稱重后，用3％的戊巴比妥鈉麻醉，反背固定，分離右頸總動脈和左股動脈靜脈，做動脈插管，接八道生理儀壓力傳感器，靜脈插管待給戊巴比妥鈉，連接心電II導(dǎo)聯(lián)。記錄以下指標(biāo)正常值：左室內(nèi)收縮壓(LVSP)、左室內(nèi)壓最大上升+dP/dt、動脈收縮壓(SBP)、動脈舒張壓(DBP)。用微量進(jìn)樣器0.15ml/min滴注3％的戊巴比妥鈉0.5ml，再改換為0.2％的戊巴比妥鈉0.15ml/min滴注3～5ml致動脈壓下降到50％，dP/dt下降到30％左右，維持10min，即為心衰，記錄心衰時各項指標(biāo)。經(jīng)尾靜脈按3mg/kg劑量給藥，給藥5min，在給藥結(jié)束后及結(jié)束后5、10、15、20、30min記錄各項指標(biāo)。計算各指標(biāo)平均值標(biāo)準(zhǔn)差，在各時間點與對照組進(jìn)行組間t檢驗，判斷顯著性差異。結(jié)果見表6、表7、表8。
表6 本發(fā)明組合物對戊巴比妥鈉所致大鼠心力衰竭模型LVSP的影響(x±s，n＝10)
注：與對照組比較：**p＜0.01，*p＜0.05；與模型組比較：#p＜0.05，##p＜0.01
表6結(jié)果表明，本發(fā)明組合物制備的注射液和對比例組合物制備的注射液對心衰動物L(fēng)VSP均有影響，具有增強(qiáng)左室的收縮力，增強(qiáng)射血作用，且本發(fā)明組合物注射液的效果明顯優(yōu)于對比例組合物注射液。
表7 本發(fā)明組合物對戊巴比妥鈉所致大鼠心力衰竭模型+dP/dt的作用
注：與對照組比較：**p＜0.01，*p＜0.05；與模型組比較：#p＜0.05，##p＜0.01
表7結(jié)果表明，本發(fā)明組合物制備的注射液和對比例組合物制備的注射液對心衰動物+dP/dt均有影響，且本發(fā)明組合物注射液的效果明顯優(yōu)于對比例組合物注射液。
表8 本發(fā)明組合物對戊巴比妥鈉所致大鼠血小板聚集的影響
表8結(jié)果表明，本發(fā)明組合物制備的注射液和對比例組合物制備的注射液對心衰動物血小板聚集均有影響，且本發(fā)明組合物注射液的效果明顯優(yōu)于對比例組合物注射液。
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