本發(fā)明涉及一種翻白草總黃酮的制備方法，屬于中藥成分提取技術領域。

背景技術：

翻白草，為薔薇科委陵菜屬植物翻白草的帶根全草?！侗静菥V目》載其：氣味甘，微苦，性平，無毒；有清熱解毒、涼血止血功效，主治肺熱咳喘、瀉痢、咳血、癰腫瘡毒等。近年來民間流行用翻白草治療糖尿病并取得一定療效?，F(xiàn)有研究表明，翻白草具有降血糖作用，且主要是與其所含的黃酮類成分有關，而黃酮類成分也是翻白草中最為主要的一類成分之一。

然而，目前對于翻白草黃酮類成分的研究，尤其是對于翻白草總黃酮的提取純化方面的研究還少有報道，而對于其應用的研究也多局限于降血糖作用方面。

王琦等在其論文“翻白草中的黃酮類成分”中，采用70％乙醇提取，利用硅膠、Sephadex LH-20、ODS柱層析等方法分離并鑒定了9個黃酮類化合物。與其類似的還有洪凌等在其論文“翻白草黃酮類化學成分研究”中，也是利用硅膠、Sephadex LH-20、ODS柱層析等方法分離并鑒定了7個黃酮類化合物。上述的提取工藝都是運用乙醇提取之后通過反復運用硅膠柱、凝膠柱以及制備色譜的方法來進行分離并最終得到翻白草黃酮類成分，然而，該方法不僅操作復雜、填料及儀器設備昂貴、耗時耗財外，而且處理量非常小，只能適合于實驗室研究，無法運用于大生產(chǎn)之中。

而專利申請?zhí)枮?01210168098.2的發(fā)明專利“一種提取、純化翻白草總黃酮的工藝”則公開了一種提取、純化翻白草總黃酮的工藝，主要是采用翻白草為原料，以乙醇為溶劑提取，經(jīng)過大孔樹脂柱吸附、解吸工藝提取翻白草總黃酮。上述發(fā)明專利雖然采用了一種大孔吸附樹脂處理的方法，但是僅僅通過大孔樹脂柱處理幾乎不可能將脂溶性雜質等大多數(shù)雜質成分除去掉，難以達到預期的要求。

綜合上述文獻及專利的情況來看，以目前的研究水平不僅不足以提供一種適合于工業(yè)化大生產(chǎn)要求的，用于提取純化并最終得到含量高、外觀性狀良好的翻白草總黃酮的制備工藝，而且還拘泥于個別應用領域，阻礙了翻白草作為傳統(tǒng)中藥所應該發(fā)揮的應用價值。

技術實現(xiàn)要素：

為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種制備方法簡單、產(chǎn)物含量高的翻白草總黃酮的制備方法。

本發(fā)明的技術方案為：

一種翻白草總黃酮的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）提取液的制備：取翻白草原料，加入濃度為50-95%的乙醇提取劑，且乙醇提取劑的加入重量為翻白草原料質量的5-20倍，然后在60-80℃的溫度條件下回流提取2次，每次4小時，最后經(jīng)過濾、洗滌得到提取液；

（2）聚酰胺柱處理：將步驟（1）得到的提取液合并并濃縮至無醇味后加水稀釋至濃縮后物料的1-5倍體積，靜置冷卻后經(jīng)硅藻土過濾，濾液直接過聚酰胺柱，并依次用純化水和濃度為65%的乙醇洗脫液洗脫，收集乙醇洗脫液洗脫部分的流出液；

（3）大孔樹脂柱處理：將步驟（2）中得到的乙醇洗脫部分的流出液合并（上述聚酰胺柱在各濃度梯度下洗脫時，均洗脫了6-10個柱體積（BV），因此處理需要合并同一個洗脫濃度的流出液樣品）濃縮并加水稀釋至濃縮后物料的的1-5倍體積后通過大孔樹脂柱，依次用純化水、濃度為20%的乙醇洗脫液和濃度為95%的乙醇洗脫液洗脫（各濃度梯度下洗脫時，均洗脫了4-15個柱體積（BV）），收集乙醇洗脫液洗脫部分的流出液；

（4）制備翻白草總黃酮：向步驟（3）中得到的流出液中加入活性炭脫色后，抽濾，并將濾液濃縮至無醇味，再經(jīng)噴霧干燥后得到翻白草總黃酮。

進一步，步驟（1）中，所述的乙醇提取劑的加入重量優(yōu)選為翻白草原料質量的8倍。

且步驟（1）中，所述的乙醇提取劑的濃度優(yōu)選為60-80%。進一步優(yōu)選為所述的乙醇提取劑的濃度為60%。

此外，步驟（1）中，回流溫度優(yōu)選為65℃。

而在步驟（2）中，所述的聚酰胺柱中的聚酰胺的粒徑為100-200目，聚酰胺的使用重量為翻白草原料的重量的1-3倍，且聚酰胺柱的徑高比為1:12-1:5，而上樣流速和洗脫流速均為1-4 BV/h。

且所述的大孔樹脂柱中的大孔樹脂的使用重量為翻白草原料的重量的1-5倍，且大孔樹脂柱的徑高比為1:12-1:5，而上樣流速和洗脫流速均為1-4 BV/h。

更進一步，步驟（3）中，所述的大孔樹脂柱中的大孔樹脂為D101、DM130、HPD-100、HPD-400、HPD-600、AB-8中的任一種。進一步優(yōu)選為HPD-400。

本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明制備方法簡單，其致使最終得到的翻白草總黃酮具有含量高、外觀性狀良好的優(yōu)勢，適宜工業(yè)化大生產(chǎn)，促進了翻白草在傳統(tǒng)中藥中的應用價值。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發(fā)明進行詳細的說明。

在以下實施例中，所使用的聚酰胺柱中的聚酰胺的粒徑為100-200目，聚酰胺的使用重量為翻白草原料的重量的1倍，且聚酰胺柱的徑高比為1:7，而上樣流速和洗脫流速均為2 BV/h。 而所使用的大孔樹脂柱中的大孔樹脂的使用重量為翻白草原料的重量的2倍，且大孔樹脂柱的徑高比為1:7，而上樣流速和洗脫流速均為2 BV/h。

實施例1：

首先將原料翻白草2kg加入到16kg濃度為60%的乙醇提取劑中，在65℃的溫度條件下回流4小時，然后經(jīng)過濾、洗滌得到提取液；濾渣再次加入上述等量等濃度的乙醇提取液中繼續(xù)回流4小時，過濾，合并兩次提取液。將得到的提取液首先濃縮至無醇味，然后加水稀釋后（加水體積為濃縮液體積的2倍，）靜置冷卻，再經(jīng)硅藻土過濾后，濾液經(jīng)過聚酰胺柱，依次用純化水和濃度為65%的乙醇洗脫液洗脫，收集乙醇洗脫部分的流出液。將流出液加水稀釋后（加水體積為濃縮液體積的2倍，）過HPD-400大孔樹脂柱，再次用純化水、濃度分別為20%的乙醇洗脫液和95%的乙醇洗脫液洗脫，并收集濃度為95%的乙醇洗脫液洗脫部分的流出液。最后將流出液加入活性炭脫色后，趁熱抽濾，并將濾液濃縮至無醇味，經(jīng)噴霧干燥后得到黃色粉末狀的物質62.5g，以蘆丁為對照品，運用紫外分光光度法檢測，翻白草總黃酮含量達到95.3%。

實施例2：

首先將原料翻白草2kg加入到10kg濃度為50%的乙醇提取劑中，在60℃的溫度條件下回流4小時，然后經(jīng)過濾、洗滌得到提取液；濾渣再次加入上述等量等濃度的乙醇提取液中繼續(xù)回流4小時，過濾，合并兩次提取液。將得到的提取液首先濃縮至無醇味，然后加水稀釋后（加水體積為濃縮液體積的3倍，）靜置冷卻，再經(jīng)硅藻土過濾后，濾液經(jīng)過聚酰胺柱，依次用純化水和濃度為65%的乙醇洗脫液洗脫，收集乙醇洗脫部分的流出液。將流出液加水稀釋后（加水體積為濃縮液體積的3倍）過D101大孔樹脂柱，再次用純化水、濃度分別為20%的乙醇洗脫液和95%的乙醇洗脫液洗脫，并收集濃度為95%的乙醇洗脫部分的流出液。最后將流出液加入活性炭脫色后，趁熱抽濾，并將濾液濃縮至無醇味，經(jīng)噴霧干燥后得到黃色粉末狀的物質56.5g，以蘆丁為對照品，運用紫外分光光度法檢測，總黃酮含量達到84.2%。

實施例3：

首先將原料翻白草2kg加入到40kg濃度為95%的乙醇中，在80℃的溫度條件下回流4小時，然后經(jīng)過濾、洗滌得到提取液；濾渣再次加入上述等量等濃度的乙醇提取液中繼續(xù)回流4小時，過濾，合并兩次提取液。將得到的提取液首先濃縮至無醇味，然后加水稀釋后（加水體積為濃縮液體積的5倍）靜置冷卻，再經(jīng)硅藻土過濾后，濾液經(jīng)過聚酰胺柱，依次用純化水和濃度為65%的乙醇洗脫液洗脫，收集乙醇洗脫部分的流出液。將流出液加水稀釋后（加水體積為濃縮液體積的5倍）過HPD-600大孔樹脂柱，再次用純化水、濃度分別為20%的乙醇洗脫液和95%的乙醇洗脫液洗脫，并收集濃度為95%的乙醇洗脫部分的流出液。最后將流出液加入活性炭脫色后，趁熱抽濾，并將濾液濃縮至無醇味，經(jīng)噴霧干燥后得到黃色粉末狀的物質65.0g，以蘆丁為對照品，運用紫外分光光度法檢測，總黃酮含量達到88.6%。

以上具體實施方式不以任何形式限制本發(fā)明，凡是以等同替換或等效變換的方式所獲得的技術方案，均落在本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。