本發(fā)明涉及一種創(chuàng)傷敷料的制備方法，具體是一種納米銀顆粒蠶繭繭殼創(chuàng)傷敷料的制備方法。
背景技術(shù)：
皮膚作為人體最大的器官，當(dāng)外因造成皮膚的大面積損傷，如灼傷、潰瘍或急性創(chuàng)傷時(shí)，需盡快覆蓋皮膚創(chuàng)面以減少蛋白質(zhì)、血紅細(xì)胞等體液的流失。因此，開(kāi)發(fā)出防止受損皮膚感染和脫水的新材料迫在眉睫。傳統(tǒng)的干態(tài)敷料如脫脂棉、天然或合成的繃帶和紗布在傷口愈合的初始階段非常重要，但是這些敷料是干態(tài)的，不能為傷口愈合提供一個(gè)有利的濕潤(rùn)環(huán)境，而且這些干態(tài)的敷料也常常容易與傷口粘結(jié)在一起，容易造成二次創(chuàng)傷。受到濕潤(rùn)傷口愈合理念的激發(fā)，已經(jīng)開(kāi)發(fā)出各種各樣的濕態(tài)敷料。其中，水凝膠已經(jīng)被國(guó)內(nèi)外的研究機(jī)構(gòu)高度重視，因?yàn)樗z可以在傷口的界面維持濕潤(rùn)的愈合環(huán)境，可允許氣體交換，可作為微生物的障礙，可去除多余的滲出液，具有極好的生物相容性，促進(jìn)傷口快速愈合，很容易去除，不會(huì)造成二次創(chuàng)傷。
最近10多年來(lái)，組織工程的迅猛發(fā)展，使得研究開(kāi)發(fā)具有良好生物相容性的、在植入體內(nèi)后可自行生物降解的、可用于器官和軟、硬組織的重建與修復(fù)的組織工程材料成為可能。創(chuàng)面生物敷料分為動(dòng)物皮敷料和非動(dòng)物皮敷料。動(dòng)物皮敷料如自體皮、同種異體皮、異種皮；非動(dòng)物皮敷料主要包含膠原、甲殼素(殼聚糖)、海藻酸纖維生物、絲素、細(xì)菌纖維素類(lèi)醫(yī)用敷料以及蜂蜜生物敷料等，通常的做法是將上述材料的一種或者幾種進(jìn)行混合后，并適當(dāng)交聯(lián)后，成型得到的創(chuàng)傷敷料。這些方法，所得到的創(chuàng)傷敷料結(jié)構(gòu)單一，并且處理過(guò)程程序繁瑣，耗時(shí)，效果都不太理想，并且抗菌效果都不太好，使用這些抗菌效果不好的創(chuàng)傷敷料時(shí)，需要額外使用抗生素，這容易產(chǎn)生耐藥性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種操作簡(jiǎn)單，流程短，成本低，基本保留了蠶繭繭殼的天然結(jié)構(gòu)以保證敷效，并原位還原出銀納米顆粒負(fù)載在蠶繭敷料的表面，從而提高蠶繭敷料的抗菌性和促進(jìn)傷口愈合能力的納米銀顆粒蠶繭繭殼創(chuàng)傷敷料的制備方法。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案如下：一種納米銀顆粒蠶繭繭殼創(chuàng)傷敷料的制備方法，包括以下步驟：
S1、將蠶繭除去表面繭衣，切開(kāi)兩端，去除蠶蛹，而后在蠶繭中間縱向切開(kāi)，將其呈片狀展開(kāi)；
S2、取一內(nèi)置有CaCl2∶乙醇∶H2O摩爾比為1∶2∶8的絲膠溶解液的容器，將片狀的蠶繭按1∶50～1∶200的浴比放入所述絲膠溶解液中，而后將所述容器置于水浴鍋中進(jìn)行50℃～75℃的熱處理，待片狀的蠶繭變成透明狀態(tài)的一層繭膜后將其取出，并立即放入15℃～25℃常溫的超純水中清洗，洗去所述繭膜上附著的所述絲膠溶解液的溶質(zhì)CaCl2和乙醇；
S3、取0.005～0.03g/mL的硝酸銀溶液400～1200μL加入裝有20mL去離子水的培養(yǎng)皿中，將所述繭膜浸潤(rùn)在培養(yǎng)皿的溶液里，并在室溫光照下反應(yīng)2～4h，利用所述繭膜表面的絲膠蛋白將所述硝酸銀溶液中的銀離子原位還原生成銀納米顆粒并負(fù)載在所述繭膜表面，而后將表面負(fù)載有銀納米顆粒的所述繭膜取出，用去離子水沖洗洗去其表面的硝酸銀溶液；
S4、將表面負(fù)載有銀納米顆粒的所述繭膜經(jīng)過(guò)真空冷凍干燥得到納米銀顆粒蠶繭繭殼創(chuàng)傷敷料。
本發(fā)明的有益效果是：操作簡(jiǎn)單，流程短，成本低，基本保留了蠶繭繭殼的天然結(jié)構(gòu)以保證敷效，并原位還原出銀納米顆粒負(fù)載在蠶繭敷料的表面，從而提高蠶繭敷料的抗菌性和促進(jìn)傷口愈合能力。
優(yōu)選地，S2中所述容器置于水浴鍋中進(jìn)行至少20～80min的50～75℃的熱處理，確保片狀的蠶繭能夠變成透明狀態(tài)的一層繭膜。
優(yōu)選地，S2中熱處理完成的繭膜在超純水中清洗至少5min，確保繭膜上附著的所述絲膠溶解液的溶質(zhì)被清洗徹底，保證敷料的敷效。
優(yōu)選地，S2中所述容器為燒杯，確保片狀的蠶繭在所述容器內(nèi)被所述水浴鍋進(jìn)行熱處理的可靠性。優(yōu)選地，S3中的室溫為20～25℃，確保所述繭膜表面的絲膠蛋白與硝酸銀溶液中的銀離子原位還原反應(yīng)穩(wěn)定可靠。
優(yōu)選地，S3中用去離子水沖洗1～2次洗去表面負(fù)載有納米銀顆粒的所述繭膜表面的硝酸銀溶液，確保表面負(fù)載有納米銀顆粒的所述繭膜純凈，不影響其敷效。
附圖說(shuō)明
圖1為本發(fā)明實(shí)施例2獲得的納米銀顆粒蠶繭繭殼創(chuàng)傷敷料的電鏡圖(圖中黑塊為納米銀顆粒)。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。
實(shí)施例1，一種納米銀顆粒蠶繭繭殼創(chuàng)傷敷料的制備方法，包括以下步驟：
S1、將蠶繭除去表面繭衣，切開(kāi)兩端，去除蠶蛹，而后在蠶繭中間縱向切開(kāi)，將其呈片狀展開(kāi)；
S2、取一內(nèi)置有CaCl2∶乙醇∶H2O摩爾比為1∶2∶8的絲膠溶解液的燒杯，將片狀的蠶繭按1∶50的浴比放入所述絲膠溶解液中，而后將所述燒杯置于水浴鍋中進(jìn)行80min的50℃的熱處理，待片狀的蠶繭變成透明狀態(tài)的一層繭膜后將其取出，并立即放入20℃常溫的超純水中清洗5min，洗去所述繭膜上附著的所述絲膠溶解液的溶質(zhì)CaCl2和乙醇；
S3、取0.005g/mL的硝酸銀溶液1200μL加入裝有20mL去離子水的培養(yǎng)皿中，將所述繭膜浸潤(rùn)在培養(yǎng)皿的溶液里，并在室溫光照下反應(yīng)2h，利用所述繭膜表面的絲膠蛋白將所述硝酸銀溶液中的銀離子原位還原生成銀納米顆粒并負(fù)載在所述繭膜表面，而后將表面負(fù)載有銀納米顆粒的所述繭膜取出，用去離子水沖洗2次洗去其表面的硝酸銀溶液；
S4、將表面負(fù)載有銀納米顆粒的所述繭膜經(jīng)過(guò)真空冷凍干燥得到納米銀顆粒蠶繭繭殼創(chuàng)傷敷料。
實(shí)施例2，一種納米銀顆粒蠶繭繭殼創(chuàng)傷敷料的制備方法，包括以下步驟：
S1、將蠶繭除去表面繭衣，切開(kāi)兩端，去除蠶蛹，而后在蠶繭中間縱向切開(kāi)，將其呈片狀展開(kāi)；
S2、取一內(nèi)置有CaCl2∶乙醇∶H2O摩爾比為1∶2∶8的絲膠溶解液的燒杯，將片狀的蠶繭按1∶120的浴比放入所述絲膠溶解液中，而后將所述燒杯置于水浴鍋中進(jìn)行50min的60℃的熱處理，待片狀的蠶繭變成透明狀態(tài)的一層繭膜后將其取出，并立即放入20℃常溫的超純水中清洗6min，洗去所述繭膜上附著的所述絲膠溶解液的溶質(zhì)CaCl2和乙醇。
S3、取0.01g/mL的硝酸銀溶液800μL加入裝有20mL去離子水的培養(yǎng)皿中，將所述繭膜浸潤(rùn)在培養(yǎng)皿的溶液里，并在室溫光照下反應(yīng)3h，利用所述繭膜表面的絲膠蛋白將所述硝酸銀溶液中的銀離子原位還原生成銀納米顆粒并負(fù)載在所述繭膜表面，而后將表面負(fù)載有銀納米顆粒的所述繭膜取出，用去離子水沖洗2次洗去其表面的硝酸銀溶液。
S4、將表面負(fù)載有銀納米顆粒的所述繭膜經(jīng)過(guò)真空冷凍干燥得到納米銀顆粒蠶繭繭殼創(chuàng)傷敷料。
實(shí)施例3，一種納米銀顆粒蠶繭繭殼創(chuàng)傷敷料的制備方法，包括以下步驟：
S1、將蠶繭除去表面繭衣，切開(kāi)兩端，去除蠶蛹，而后在蠶繭中間縱向切開(kāi)，將其呈片狀展開(kāi)；
S2、取一內(nèi)置有CaCl2∶乙醇∶H2O摩爾比為1∶2∶8的絲膠溶解液的燒杯，將片狀的蠶繭按1∶200的浴比放入所述絲膠溶解液中，而后將所述燒杯置于水浴鍋中進(jìn)行20min的75℃的熱處理，待片狀的蠶繭變成透明狀態(tài)的一層繭膜后將其取出，并立即放入20℃常溫的超純水中清洗7min，洗去所述繭膜上附著的所述絲膠溶解液的溶質(zhì)CaCl2和乙醇；
S3、取0.03g/mL的硝酸銀溶液400μL加入裝有20mL去離子水的培養(yǎng)皿中，將所述繭膜浸潤(rùn)在培養(yǎng)皿的溶液里，并在室溫光照下反應(yīng)4h，利用所述繭膜表面的絲膠蛋白將所述硝酸銀溶液中的銀離子原位還原生成銀納米顆粒并負(fù)載在所述繭膜表面，而后將表面負(fù)載有銀納米顆粒的所述繭膜取出，用去離子水沖洗1次洗去其表面的硝酸銀溶液；
S4、將表面負(fù)載有銀納米顆粒的所述繭膜經(jīng)過(guò)真空冷凍干燥得到納米銀顆粒蠶繭繭殼創(chuàng)傷敷料。
實(shí)驗(yàn)案例1
取健康成年新西蘭白兔12只，雌雄不限，體重2.5kg。動(dòng)物術(shù)前2h禁飲食，用速眠新(0.1ml/kg)肌注麻醉。10min后麻醉起效。動(dòng)物俯臥固定于手術(shù)臺(tái)上，背部備皮消毒鋪無(wú)菌巾，術(shù)前畫(huà)線(xiàn)。沿畫(huà)線(xiàn)切除全厚皮膚(保留筋膜)，無(wú)菌條件下別于白兔脊柱兩側(cè)各2.5cm直徑的背部皮膚全層環(huán)形切除，形成直徑1.5cm的圓形皮膚缺損創(chuàng)面2個(gè)，徹底止血，一組取實(shí)施例1制得的納米銀顆粒蠶繭繭殼創(chuàng)傷敷料平鋪于創(chuàng)面上，輕壓，使得材料與創(chuàng)面充分接觸，注意與創(chuàng)面間不能產(chǎn)生氣泡，邊緣與周邊皮膚間重合，其上分別覆蓋單層油紗布、生理鹽水紗布、無(wú)菌干紗布，每層厚度約為3～5mm，最后再以彈性繃帶加壓包扎?？瞻讓?duì)照組以凡士林紗布代替，然后獨(dú)籠飼養(yǎng)。并分別于術(shù)后3天，7天，14天處死實(shí)驗(yàn)兔，觀(guān)察創(chuàng)面的愈合情況，并計(jì)算愈合面積率，覆蓋有納米銀顆粒蠶繭繭殼創(chuàng)傷敷料的傷口愈合效果平均比空白在3天，7天，14天的分別要快19％，42％，250％。由此可知，實(shí)施例1制得的納米銀顆粒蠶繭繭殼創(chuàng)傷敷料具有明顯的加速傷口愈合能力。
實(shí)驗(yàn)案例2
取健康成年新西蘭白兔12只，雌雄不限，體重2.5kg。動(dòng)物術(shù)前2h禁飲食，用速眠新(0.1ml/kg)肌注麻醉。10min后麻醉起效。動(dòng)物俯臥固定于手術(shù)臺(tái)上，背部備皮消毒鋪無(wú)菌巾，術(shù)前畫(huà)線(xiàn)。沿畫(huà)線(xiàn)切除全厚皮膚(保留筋膜)，無(wú)菌條件下別于白兔脊柱兩側(cè)各2.5cm直徑的背部皮膚全層環(huán)形切除，形成直徑1.5cm的圓形皮膚缺損創(chuàng)面2個(gè)，徹底止血，并人為制造傷口感染，所切的每個(gè)傷口均涂抹濃度為1.0×108CFU mL-1的金黃葡萄球菌溶液1ml，24小時(shí)后，所以感染的傷口分成兩組，一組取實(shí)施例1制得的納米銀顆粒蠶繭繭殼創(chuàng)傷敷料平鋪于創(chuàng)面上，輕壓，使得材料與創(chuàng)面充分接觸，注意與創(chuàng)面間不能產(chǎn)生氣泡，邊緣與周邊皮膚間重合，其上分別覆蓋單層油紗布、生理鹽水紗布、無(wú)菌干紗布，每層厚度約為3～5mm，最后再以彈性繃帶加壓包扎。另一組作為空白對(duì)照組以凡士林紗布代替，然后獨(dú)籠飼養(yǎng)。并分別于術(shù)后3天，7天，14天處死實(shí)驗(yàn)兔，觀(guān)察創(chuàng)面的愈合情況，并計(jì)算愈合面積率，覆蓋有納米銀顆粒蠶繭繭殼創(chuàng)傷敷料的傷口愈合效果平均比空白在3天，7天，14天的分別要快14％，47％，270％。由此可知，實(shí)施例1制得的納米銀顆粒蠶繭繭殼創(chuàng)傷敷料對(duì)于感染傷口也具有明顯的加速傷口愈合能力，且抗菌效果好。
以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。