本發(fā)明屬于化學制劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
硫酸軟骨素(Chondroitin Sulfate，CS)是從動物軟骨組織中提取的一種糖胺聚糖，化學結(jié)構(gòu)復雜，糖鏈中編碼著大量的生物信息。硫酸軟骨素通過與許多功能蛋白質(zhì)相互作用，參與細胞分裂、分化、組織器官形成和中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育等許多細胞事件和生理過程，在醫(yī)藥領(lǐng)域中具廣闊應(yīng)用前景。
上世紀90年代中期開始，硫酸軟骨素類處方藥和膳食補充劑，在歐洲和北美被廣泛用于骨關(guān)節(jié)炎的治療。受國際市場對硫酸軟骨素原料藥強勁需求的拉動，我國硫酸軟骨素產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展。中國已是全球硫酸軟骨素原料的主要生產(chǎn)供應(yīng)國，產(chǎn)品出口亞、歐、美、南美和大洋洲幾十個國家，年出口量高達近4000噸。
目前市售硫酸軟骨素以鈉鹽形式存在。國內(nèi)外有些保健食品中，同時含有硫酸軟骨素鈉與某種鈣鹽，一般是碳酸鈣，由于碳酸鈣的微溶性，導致這種混合物無論在體外還是在體內(nèi)消化道內(nèi)都與硫酸軟骨素鈣這種單一化合物有著本質(zhì)區(qū)別。尚無硫酸軟骨素鈣鹽功效及產(chǎn)品的報道。
硫酸軟骨素與鈣結(jié)合對硫酸軟骨素的生物功能有著重要作用，有研究顯示，軟骨中蛋白多糖結(jié)合的鈣，釋放后用于骨鈣化，因此硫酸軟骨素鈣是骨骼鈣化的直接鈣載體。美國專利“Composition containing readily absorbable calcium and process for producing the same(USP：6203827)”中提到鈣在硫酸軟骨素的存在下，更有利于鈣吸收。硫酸軟骨素鈣屬于有機酸鈣的一種，由于硫酸軟骨素可以促進鈣的吸收，所以這種鈣鹽可能會有比普通鈣鹽更優(yōu)越的功效。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
我們通過實驗嘗試發(fā)現(xiàn)，硫酸軟骨素鈣可制備用于預防和治療骨質(zhì)疏松藥物或制備用于增加骨密度保健食品。與普通的“硫酸軟骨素鈉+某種鈣鹽”的混合物組合形式相比，本化合物因為不含有硫酸軟骨素鈉中的鈉離子和鈣鹽中的酸根，在同樣鈣攝入量的情況下，可以減少服用量。盡管目前無法闡明其藥理藥效學機制，但是這種化合物在預防和治療骨質(zhì)疏松領(lǐng)域的實驗結(jié)果令人滿意。
硫酸軟骨素鈣中鈣含量大于6％，硫酸軟骨素含量大于90％。鈣含量測定采用歐洲藥典“那屈肝素鈣”的絡(luò)合滴定法檢測。硫酸軟骨素含量測定采用美國藥典“Chondroitin Sulfate Sodium”的氯化十六烷基吡啶(Hexadecylpyridinium chloride，CPC)滴定法檢測，或者中國藥典“硫酸軟骨素鈉”的酶解高效液相法檢測。
硫酸軟骨素鈣的服用量為0.2-2.0克/天，可用于任何劑型的口服制劑或注射劑。
具體實施方式：
實施例所使用硫酸軟骨素鈣的制備方法采用中國專利“一種硫酸軟骨素鈣生產(chǎn)工藝(申請?zhí)朇N201510785845.0)”中所用方法制備，產(chǎn)品質(zhì)量指標：鈣含量6.8％，硫酸軟骨素含量92.0％。
實施例1，硫酸軟骨素鈣片劑的制備
原輔料分別粉碎過80目篩，80℃烘干2h備用。稱取處方量的硫酸軟骨素鈣、微晶纖維素、乳糖、二氧化硅和硬脂酸鎂，置于三維混合機中混合15min。混合均勻的藥物粉末置于粉末直壓型旋轉(zhuǎn)式壓片機中壓片，控制片重1.00g，硬度30-40N。
實施例2，硫酸軟骨素鈣膠囊劑的制備
原輔料分別粉碎過80目篩，80℃烘干2h備用。稱取處方量的硫酸軟骨素鈣、乳糖、預膠化淀粉、二氧化硅和硬脂酸鎂，置于三維混合機中混合15min。混合均勻的藥物粉末填充于0#胃溶型膠囊殼中，控制填充量0.49g/粒。
實施例3，硫酸軟骨素鈣口服液體制劑的制備
稱取處方量純化水，依次加入蔗糖、山梨醇、山梨酸鉀、檸檬酸和蘋果酸溶解，形成澄清溶液，加入硫酸軟骨素鈣溶解，形成10％的硫酸軟骨素鈣溶液。過濾后灌裝于中硼硅口服液瓶中，每瓶10ml。
實施例4，硫酸軟骨素鈣注射劑的制備
稱取處方量硫酸軟骨素鈣，加入注射用水溶解，加入適量HCl/NaOH調(diào)節(jié)pH5-8，便用0.22微米聚酰胺濾膜過濾除菌，灌裝至安瓿瓶，規(guī)格2ml/支。
實施例5，硫酸軟骨素鈣對骨質(zhì)疏松大鼠的影響
機體中的鈣絕大部分儲存于骨骼及牙齒中，若攝入鈣量不足會影響機體和骨骼的生長發(fā)育。生長期大鼠在攝食低鈣飼料的基礎(chǔ)上補充受試含鈣產(chǎn)品，與低鈣對照組比較在促進機體及骨骼的生長發(fā)育，增加骨礦物質(zhì)含量和增加骨密度功能上的作用，可對受試物增加骨密度功效進行評價。
實驗動物：出生4周左右的斷乳SD大鼠，雌性，每組10只。
基礎(chǔ)飼料配方：鈣含量150mg/100g的低鈣飼料。
實驗分組：對照組，高劑量碳酸鈣組和3個劑量實驗組：34mg/kg.bw組，100mg/kg.bw組和340mg/kg.bw組(硫酸軟骨素鈣推薦用量為0.2-2.0克/天，折合人體攝入量3.4-34mg/kg.bw，大鼠使用這個標準的10倍量)，5組動物均用低鈣飼料和蒸餾水喂飼。
灌胃液的配制：分別取硫酸軟骨素鈣0.34g、1.00g、3.40g，加蒸餾水定容至100ml，配制成34mg/kg.bw、100mg/kg.bw、340mg/kg.bw組的灌胃液，含鈣分別為2.4mg/kg.bw、6.8mg/kg.bw、24mg/kg.bw；高劑量碳酸鈣組經(jīng)口灌入24mg/kg.bw的鈣，與高劑量硫酸軟骨素鈣組鈣含量水平一致，灌胃液的配制：取碳酸鈣0.60g加蒸餾水定容至100ml。所有動物灌胃量均為1ml/100g.bw，每天1次，每周稱體重并按體重調(diào)整灌胃量，對照組以蒸餾水灌胃。
動物處理：實驗時間為4周。試驗結(jié)束，放血處死大鼠，取雙側(cè)股骨，于105℃烤箱中烤至恒重，稱量骨干重。取左側(cè)股骨進行骨密度測定，雙能X線骨密度儀掃描，測定整根股骨的BMD值(g/cm2)。右側(cè)股骨用原子吸收法測定鈣含量。
*與對照組比較P＜0.05
*與對照組比較P＜0.05
#與碳酸鈣比較P＜0.05
大鼠左股骨骨密度與右股骨鈣含量兩項指標顯示，各劑量實驗組顯著高于對照組(P＜0.05)，中高劑量實驗組顯著高于高劑量碳酸鈣組(P＜0.05)；從體重指標看，對動物生長無不良影響。
實施例6，硫酸軟骨素鈣對切除卵巢大鼠骨密度的影響
雌激素減少會導致骨量減少和骨組織微結(jié)構(gòu)破壞，最終導致骨密度降低、骨骼脆性增加。模型建立之后給模型實驗組大鼠補充受試樣品，通過受試物抑制破骨或促進成骨等骨代謝調(diào)節(jié)作用，觀察其在增加骨密度的效果，從而對受試樣品增加骨密度的功能進行評價。
動物分組：選擇SPF級雌性大鼠60只，體重280-320g，隨機分為6組，即空白對照組、模型對照組、高劑量碳酸鈣組、硫酸軟骨素鈣34mg/kg.bw組、硫酸軟骨素鈣100mg/kg.bw組、硫酸軟骨素鈣340mg/kg.bw組(硫酸軟骨素鈣臨床推薦用量為0.2-2.0克/天，折合人體攝入量3.4-34mg/kg.bw，大鼠使用這個標準的10倍量)，6組動物均用低鈣飼料和蒸餾水喂飼。
制備動物模型：腹腔注射10％的水合氯醛麻醉各組大鼠，注射體積為0.3ml/kg，由腹部正中切口，鈍性分離腹肌肌膜后進腹，找到卵巢，絲線結(jié)扎將之摘除，縫合切口，術(shù)后肌肉注射2萬單位的青霉素，連續(xù)3天，術(shù)后1周拆線。空白對照組大鼠行類似手術(shù)但不切除雙側(cè)卵巢，僅摘除部分脂肪。
動物給藥：分別取硫酸軟骨素鈣0.34g、1.00g、3.40g，加蒸餾水定容至100ml，配制成34mg/kg.bw、100mg/kg.bw、340mg/kg.bw組的灌胃液，含鈣分別為2.4mg/kg.bw、6.8mg/kg.bw、24mg/kg.bw；高劑量碳酸鈣組經(jīng)口灌入24mg/kg.bw的鈣，與高劑量硫酸軟骨素鈣組鈣含量水平一致，灌胃液的配制：取碳酸鈣0.60g加蒸餾水定容至100ml。所有動物于手術(shù)后1周開始灌胃給予相對應(yīng)的藥液，灌胃體積均為1ml/100g.bw，每天1次，連續(xù)灌胃12周，空白對照組、模型對照組分別給予等體積蒸餾水。各組大鼠每周稱體重并按體重調(diào)整灌胃量。
動物處理：試驗結(jié)束后，頸椎脫臼處死大鼠，剝離右側(cè)股骨，經(jīng)105℃烘烤8h至恒重，冷卻至室溫后，測量股骨中點處和遠心端的骨密度值(BMD)。
△：與空白對照組比較，P＜0.01；
▲：與模型對照組比較，P＜0.05，▲▲：與模型對照組比較，P＜0.01；
#：與高劑量碳酸鈣組比較，P＜0.05。
各硫酸軟骨素鈣組及碳酸鈣組大鼠右側(cè)股骨中心骨密度與股骨遠心端骨密度顯著高于模型對照組大鼠右側(cè)股骨中心骨與遠心端骨密度，P＜0.05或P＜0.01；硫酸軟骨素鈣340mg/kg組大鼠右側(cè)股骨中心骨密度與股骨遠心端骨密度顯著高于碳酸鈣高劑量組，P＜0.05。