本發(fā)明涉及中藥領(lǐng)域，特別涉及中藥源黃嘌呤氧化酶抑制劑。
背景技術(shù)：
：：體內(nèi)尿酸水平持續(xù)偏高達(dá)過(guò)飽和會(huì)使尿酸鈉晶體沉積在關(guān)節(jié)及周圍組織中，造成一種嘌呤類代謝性疾病——痛風(fēng)。高尿酸血癥是痛風(fēng)的重要標(biāo)志，大約有5％～12％的高尿酸血癥最終會(huì)發(fā)展成痛風(fēng)，80％～90％的痛風(fēng)患者伴隨有高尿酸血癥。此外，高尿酸血癥還與高血壓、糖尿病、心血管疾病、腎臟疾病、代謝綜合征等疾病的發(fā)生密切相關(guān)。痛風(fēng)的發(fā)病率地區(qū)間差異較大，尼日利亞其發(fā)病率只有0.03％，而臺(tái)灣的土著居民中其發(fā)病率高達(dá)15.2％。流行病學(xué)調(diào)查顯示，由于人們生活水平的提高，飲食的日益改善尤其是啤酒、動(dòng)物內(nèi)臟等高嘌呤性食物的攝入過(guò)多，導(dǎo)致痛風(fēng)的發(fā)病率呈日漸上升的趨勢(shì)。傳統(tǒng)的抗痛風(fēng)藥物主要包括促尿酸排泄藥(如丙磺舒、苯溴馬隆等)和尿酸生成抑制劑(如別嘌呤醇等)兩大類，而尿酸生成抑制劑主要為黃嘌呤氧化酶抑制劑。黃嘌呤氧化酶(XanthineOxidase，簡(jiǎn)稱XOD)是一種復(fù)合黃素蛋白酶，是人體內(nèi)產(chǎn)生尿酸過(guò)程中的一種極其重要的酶，它能夠催化體內(nèi)的黃嘌呤和次黃嘌呤生成尿酸和過(guò)氧化物自由基，因此通過(guò)抑制其活性可達(dá)到防止或減少尿酸產(chǎn)生的作用。近年來(lái)，黃嘌呤氧化酶抑制劑作為一種極有效的抗痛風(fēng)藥物而受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注，由于傳統(tǒng)的黃嘌呤氧化酶抑制劑別嘌呤醇的副作用如藥物超敏反應(yīng)綜合征、史蒂文生氏-強(qiáng)生癥候群等，從天然藥物中發(fā)掘黃嘌呤氧化酶抑制劑將成為研究熱點(diǎn)。現(xiàn)有的文獻(xiàn)記載了對(duì)17種中藥的黃嘌呤氧化酶抑制劑的篩選，以及花生四烯酸可以作為黃嘌呤氧化酶抑制劑(CN102133214)，節(jié)桿菌可以生產(chǎn)黃嘌呤氧化酶抑制劑(CN101402922)，中藥組方提取物作為黃嘌呤氧化酶抑制劑(CN102205083)，通過(guò)烘干、粉碎、超聲提取、過(guò)濾、濃縮、干燥得到蔬菜提取物也可以用作黃嘌呤氧化酶抑制劑(CN102106516)，以及以海參為原料制備黃嘌呤氧化酶抑制劑(CN102138938，CN102580063)。我們?cè)趯?duì)長(zhǎng)白山地區(qū)的近百種藥用植物活性篩選過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)了幾種具有較強(qiáng)黃嘌呤氧化酶抑制活性的植物，其中就包括花楸果?；ㄩ?，俗稱：馬加木(東北土名)，別名：臭槐樹(shù)、花楸、水桐、河楸、黃花楸，拉丁文名：Sorbuspohuashanensis，薔薇科、花楸屬喬木。復(fù)葉類槐葉，故又有別名臭槐樹(shù)。分布于我國(guó)黑龍江、吉林、遼寧、內(nèi)蒙古、河北、山西、甘肅、山東、長(zhǎng)江流域及以北地區(qū)；日本也有。嫩葉可食；葉或樹(shù)皮可作農(nóng)藥，可殺稻螟、稻飛虱；果實(shí)入藥，有顯著利尿作用，可作利尿劑，治腎臟病，腎氣膀胱炎、肝硬化，腹水。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明提供一種花楸果在制備黃嘌呤氧化酶抑制劑中的應(yīng)用，以解決高尿酸血癥、痛風(fēng)等相關(guān)疾病的血尿酸異常升高的問(wèn)題。本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：花楸果及其提取物作為活性組分在制備黃嘌呤氧化酶抑制劑中的用途，其中所述花楸果及其提取物包含所述花楸果原植物、及其溶劑提取物，其中所述溶劑提取物為水、乙醇、甲醇提取物。本發(fā)明還提供花楸果及其提取物的另一種應(yīng)用，該應(yīng)用為治療高尿酸血癥、痛風(fēng)等相關(guān)疾病提供一種新的食品、食品添加劑、保健食品、藥品。所述的花楸果及其提取物用于制備治療高尿酸血癥、痛風(fēng)相關(guān)疾病的食品、食品添加劑、保健食品、藥品的應(yīng)用，通過(guò)下述方法制備：1.取花楸果，干燥，粉碎，附加藥學(xué)可以接受的輔料，制成片劑、膠囊劑、散劑、丸劑等藥學(xué)上可以接受的劑型。2.取花楸果，以水、乙醇或甲醇等溶劑提取，濃縮至干，得到花楸果提取物，以該提取物為原料，附加藥學(xué)可以接受的輔料，制成片劑、膠囊劑、散劑、丸劑、軟膠囊等藥學(xué)上可以接受的劑型。3.取花楸果，以水、乙醇或甲醇等溶劑提取，濃縮至干，得到花楸果提取物，以該提取物為原料制成液體飲料、固體飲料、壓片糖果等食品、保健食品可以接受的形式。本發(fā)明的有益效果是：解決了高尿酸血癥、痛風(fēng)等相關(guān)疾病的血尿酸異常升高的問(wèn)題，并間接的解決、緩解了高尿酸血癥、痛風(fēng)等疾病所導(dǎo)致的關(guān)節(jié)疼痛、腫脹變形及高血壓、糖尿病、心血管疾病、腎臟疾病、代謝綜合征等疾病的相關(guān)癥狀。附圖說(shuō)明圖1是SPC對(duì)黃嘌呤氧化酶動(dòng)力學(xué)考察Linewaver-Burk雙倒數(shù)曲線圖；圖2是SPT對(duì)黃嘌呤氧化酶動(dòng)力學(xué)考察Linewaver-Burk雙倒數(shù)曲線圖；圖3是SPOL對(duì)黃嘌呤氧化酶動(dòng)力學(xué)考察Linewaver-Burk雙倒數(shù)曲線圖。具體實(shí)施方式實(shí)施例1：花楸果制備降尿酸產(chǎn)品的應(yīng)用1.花楸果降尿酸膠囊(Sorbuspohuashanensiscapsule,SPC)：收取花楸果，陰干，粉碎，制成硬膠囊制劑。2.花楸果降尿酸片(Sorbuspohuashanensistablet,SPT)：收取花楸果，陰干，粉碎，以10倍量75％乙醇超聲提取三次，每次30分鐘，過(guò)濾，合并濾液，蒸干，粉碎，加淀粉適量，壓片。3.花楸果降尿酸口服液(Sorbuspohuashanensisoralliquid,SPOL)：取花楸果，10倍量水煎煮40分鐘，過(guò)濾，濾液濃縮得流浸膏，加輔料，制成口服液。實(shí)施例2：花楸果降尿酸產(chǎn)品活性研究1材料1.1藥材與試劑花楸果，薔薇科花楸屬植物花楸樹(shù)Sorbuspohuashanensis的果實(shí)，采自長(zhǎng)白山脈臨江地區(qū)。黃嘌呤(xanthine，XA)、黃嘌呤氧化酶(xanthineoxidase，XOD)，購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；別嘌醇，購(gòu)自上海阿拉丁試劑公司；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。1.2儀器ThermoMultiskanGO型全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀(賽默飛世爾科技)；ABS320-4N型分析天平(上海島韓實(shí)業(yè)有限公司)；KQ-250B型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)；DZF6020真空干燥器(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)。2方法對(duì)文獻(xiàn)[李英，陳君，李萍.金銀花中酚酸類和黃酮類成分的黃嘌呤氧化酶抑制活性.中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2011,42(5):407]中的黃嘌呤氧化酶抑制劑篩選方法進(jìn)行了改良。2.1溶液配制磷酸鹽緩沖液配制(0.2mol·L-1pH＝7.5)：A液(0.2mol·L-1磷酸二氫鉀)：取磷酸二氫鉀(KH2PO4，MW136.09)1.361g，加雙蒸水使溶解并定容至100ml。B液(0.2mol·L-1磷酸氫二鈉)：取磷酸氫二鈉(Na2HPO4·2H2O，MW177.99)1.78g，加雙蒸水溶解并定容至100ml。使用時(shí)分別取等量A液和B液混合即可得到pH為7.5的磷酸鹽緩沖溶液，現(xiàn)用現(xiàn)配。底物配制：取黃嘌呤適量，精密稱定，加磷酸鹽緩沖溶液配成1.5mmol·L-1的黃嘌呤底物溶液。底物溶液需新鮮配制，現(xiàn)用現(xiàn)配。酶液配制：精密稱取黃嘌呤氧化酶1mg，加磷酸鹽緩沖溶液配成0.05U·mL-1的黃嘌呤氧化酶溶液。2.2花楸果降尿酸產(chǎn)品的樣品溶液的配制花楸果降尿酸產(chǎn)品見(jiàn)“實(shí)施例1”。取相應(yīng)產(chǎn)品，膠囊取內(nèi)容物、片劑研為細(xì)粉、口服液直接吸取，分別加磷酸鹽緩沖溶液配成相應(yīng)濃度的樣品溶液。2.3產(chǎn)品對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的影響按表1順序分別將相應(yīng)溶液加入96孔板中加入完畢后震蕩2min，于37℃條件下反應(yīng)10min，用酶標(biāo)儀測(cè)定290nm處的吸光度值，每個(gè)樣品均作3次重復(fù)，取平均值。同時(shí)測(cè)定相應(yīng)濃度樣品自身的吸光度以扣除干擾，并測(cè)無(wú)樣品時(shí)酶與底物反應(yīng)的吸光度作為空白對(duì)照。按照公式計(jì)算抑制率。式中：A1為反應(yīng)體系中加入樣品后的吸光度值，A2為樣品溶液自身的吸光度值，A0為空白對(duì)照的吸光度值。本實(shí)驗(yàn)以別嘌醇為陽(yáng)性對(duì)照，將高活性(抑制率大于60％)的樣品稀釋成6個(gè)濃度，進(jìn)行梯度復(fù)篩。根據(jù)抑制劑的濃度及其平均抑制率，經(jīng)非線性回歸方法計(jì)算得各樣品的IC50。表1花楸果降尿酸產(chǎn)品對(duì)黃嘌呤氧化酶抑制作用反應(yīng)體系(μL)2.4產(chǎn)品對(duì)黃嘌呤氧化酶抑制類型的判斷分別吸取不同濃度的產(chǎn)品溶液，再加入不同濃度的底物黃嘌呤(濃度分別為0.012、0.024、0.036、0.048、0.060mmol·L-1)，在25℃條件下反應(yīng)30min，測(cè)定反應(yīng)速度，通過(guò)Linewaver-Burk雙倒數(shù)作圖法判斷各產(chǎn)品的抑制作用類型。3結(jié)果與分析3.1產(chǎn)品對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制作用各產(chǎn)品在2mg·mL-1濃度時(shí)對(duì)黃嘌呤氧化酶的抑制率均大于60％，繼續(xù)稀釋成6個(gè)濃度，進(jìn)行梯度復(fù)篩，結(jié)果表明呈明顯的量-效關(guān)系。根據(jù)抑制劑濃度及其平均抑制率，經(jīng)SPSS計(jì)算得樣品SPC、SPT、SPOL的IC50分別為：1.83mg·mL-1、0.85mg·mL-1、0.97mg·mL-1。別嘌呤醇的IC50為：3.8μM。3.2各產(chǎn)品對(duì)黃嘌呤氧化酶的動(dòng)力學(xué)特征根據(jù)Linewaver-Burk雙倒數(shù)作圖法，得到圖1-圖3，從圖1-圖3可以得到花楸果產(chǎn)品均為競(jìng)爭(zhēng)性抑制(三條線交叉于Y軸)，對(duì)于競(jìng)爭(zhēng)性抑制而言，隨著底物濃度的增加，抑制劑的影響隨之減弱。實(shí)施例3：花楸果降尿酸食品的制備1花楸果袋泡茶：收取新鮮花楸果，陰干，粉碎、過(guò)40目篩，24目篩篩選，紫外線燈殺菌，機(jī)械裝袋，包裝，噴印日期，塑封，入庫(kù)。2花楸果飲料：取花楸果，10倍量超聲處理20分鐘，過(guò)濾，濾液加苯甲酸、苯甲酸鈉等防腐劑，加香味劑調(diào)味，滅菌，灌裝，噴印日期，包裝入庫(kù)。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3 當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3