本發(fā)明涉及制藥領(lǐng)域，具體涉及一種具有增效并保護(hù)心臟毒性的含有羅布麻葉總黃酮的抗腫瘤藥物組合物。
背景技術(shù)：
：腫瘤疾病目前屬于人類的多發(fā)病之一，給患者帶來(lái)了較大痛苦，目前腫瘤的治療多以化學(xué)治療為主，然而對(duì)患者進(jìn)行化學(xué)治療的同時(shí)，由于治療藥物的副作用，又給患者增加了疾病本身以外的痛苦，輕微的如頭痛、惡心、乏力，嚴(yán)重的如脫發(fā)、肝腎及心臟毒性等等。蒽環(huán)類藥物，如表柔比星、吡柔比星等已被廣泛地用于治療血液系統(tǒng)惡性腫瘤和實(shí)體腫瘤，如乳腺癌、淋巴瘤、急性白血病等。其在抗腫瘤方面具有良好的效果。2014年《nccn乳腺癌指南》推薦，乳腺癌首選輔助化療方案為ac×4→t(p)×4(阿霉素、表柔比星、吡柔比星/環(huán)磷酰胺-紫杉醇)。然而，該類藥物最突出的化療毒副反應(yīng)為心臟毒性(anthracycline-inducedcardiotoxicity，aic)，主要表現(xiàn)為嚴(yán)重的急性、慢性、遲發(fā)性心肌毒性，為劑量限制性。oeffingerkc等研究指出[2006年新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志]，經(jīng)化療后乳腺癌患者長(zhǎng)期存活者存在的問(wèn)題：心臟原因引起的死亡率較正常人增高8.2倍；發(fā)生心衰的風(fēng)險(xiǎn)性高15倍，心血管疾病發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)高10倍。鑒于蒽環(huán)類藥物的心臟毒性問(wèn)題，國(guó)內(nèi)外很多研究人員曾對(duì)心臟保護(hù)劑，包括輔酶q10、左卡尼汀、n-乙酰半胱氨酸、抗氧化劑(vc和ve等)以及其他的鐵螯合劑(如去鐵敏和edta)進(jìn)行了相關(guān)研究，這些研究認(rèn)為，這些保護(hù)劑或許具有一定的心臟保護(hù)效果。但是，van等[4]使用meta分析顯示，輔酶q10、左卡尼汀、n-乙酰半胱氨酸、vc和ve等對(duì)于蒽環(huán)類化療沒(méi)有明顯的心臟保護(hù)作用。右丙亞胺(dexrazoxane)是美國(guó)chiron公司開(kāi)發(fā)的心臟保護(hù)藥，其為雙內(nèi)酰亞胺類化合物，是乙二胺四乙酸(edta)的衍生物，1995年7月獲fda批準(zhǔn)專屬用于女性乳腺癌接受吡柔比星治療所產(chǎn)生的心臟毒性的保護(hù)藥。chakrabarti等研究表明，右丙亞胺在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)殚_(kāi)環(huán)螯合劑，干擾鐵離子中介的自由基的形成。van等認(rèn)為，只有右丙亞胺可使病人明顯獲益，心衰的發(fā)生率明顯降低。然而，該藥是否會(huì)干擾蒽環(huán)類藥物的抗癌藥效，是目前擔(dān)心的問(wèn)題，事實(shí)上己有證據(jù)提出該藥可能會(huì)降低蒽環(huán)類藥的抗癌藥效。因此，臨床腫瘤化療迫切需要兼有預(yù)防蒽環(huán)類心臟毒性和增效抗腫瘤的藥物。羅布麻(apocynumvenetuml.)，為夾竹桃科(apocynaceae)羅布麻屬植物。我國(guó)羅布麻資源非常豐富，分布范圍也很廣，主要分布在沿海及內(nèi)地半濕潤(rùn)及濕潤(rùn)地區(qū)，生長(zhǎng)于河岸、山溝、山坡的砂質(zhì)地，如遼寧、吉林、內(nèi)蒙古、甘肅、新疆、陜西、山西、山東、河南、河北、江蘇及安徽北部等地?，F(xiàn)已有引種栽培馴化。羅布麻生態(tài)適應(yīng)能力強(qiáng)，分布廣泛，生境差異較大，有效成分的積累與氣候、土壤和降雨量等生態(tài)環(huán)境因素有關(guān)，與采收期也密切相關(guān)。不同區(qū)域的地理氣候差異，造就了羅布麻的多種不同生態(tài)類型，從而不同產(chǎn)地羅布麻葉總黃酮含量不同，而且羅布麻葉總黃酮中各類黃酮類物質(zhì)種類及其含量也不盡相同(安徽全椒、天津武清及陜西高陵含量測(cè)定，其總黃酮的含量分別為1.25％、1.75％、1.34％，上述產(chǎn)地的羅布麻葉中均不含蘆丁)。李慶華等研究認(rèn)為，東北不同產(chǎn)地野生羅布麻葉總黃酮含量以遼河入?？诤退赡鄄菰吧_布麻葉總黃酮較高，并具有較強(qiáng)的抗氧化活性，可以作為提取用于藥品、食品領(lǐng)域高效能天然抗氧化劑的潛在資源。羅布麻葉中主要含有黃酮類、鞣質(zhì)、低分子有機(jī)酸、長(zhǎng)鏈脂肪酸酯、醇類、甾體類等成分，而總黃酮在羅布麻各器官的分布規(guī)律為花、葉、莖、根、果實(shí)。研究發(fā)現(xiàn)，目前對(duì)于同時(shí)兼有保護(hù)蒽環(huán)類藥物心臟毒性和增效蒽環(huán)類藥物化療療效尚缺乏有效治療藥物及干預(yù)手段，其系統(tǒng)治療尚屬空白。因此，尋找一種具有更好抗腫瘤效果、且能有效預(yù)防或治療抗腫瘤藥物的毒副作用的藥物組合物、一直是本領(lǐng)域技術(shù)人員研究的熱點(diǎn)。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對(duì)以上情況，本發(fā)明提供一種含有羅布麻葉總黃酮的抗腫瘤藥物組合物，所述藥物組合物由羅布麻葉總黃酮和蒽環(huán)類藥物組成，其中所述蒽環(huán)類藥物為表柔比星或吡柔比星。本發(fā)明所述羅布麻葉總黃酮可以是本領(lǐng)域各種藥用羅布麻葉總黃酮，其制備方法和來(lái)源并不受限制，以符合藥用為基本前提，作為實(shí)施方案之一，可以選擇例如羅布麻葉總黃酮中有效成分含量應(yīng)大于或等于70％，例如包括不限于80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％以上。作為本發(fā)明實(shí)施方案之一，作為示例性的說(shuō)明，例如羅布麻葉總黃酮經(jīng)乙醇回流純化后紫外分光光度計(jì)法證實(shí)的主要成分含量為72.1％(以蘆丁計(jì))，并對(duì)其中黃酮類物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，金絲桃苷為4.59％、蘆丁9.86％、槲皮素0.12％。本發(fā)明組合物中所述表柔比星或吡柔比星均為已知上市的藥物，本領(lǐng)域技術(shù)人員無(wú)論市購(gòu)或按已有方法合成均能得到符合藥用標(biāo)準(zhǔn)的化合物。本發(fā)明中，本領(lǐng)域技術(shù)人員也可以將柔紅霉素、去甲氧柔紅霉素或阿克拉霉素與羅布麻葉總黃酮組合以用于受試者心臟毒性的保護(hù)和抗腫瘤藥物的增效，其體內(nèi)體外的使用劑量范圍可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員參考本發(fā)明所公開(kāi)的劑量范圍進(jìn)行確定。本發(fā)明由羅布麻葉總黃酮和蒽環(huán)類藥物組成的組合物中，當(dāng)將本發(fā)明藥物組合物向受試者施用時(shí)(例如包括但不限于口服施用)，所述組合物中羅布麻葉總黃酮與蒽環(huán)類藥物的質(zhì)量比為(50～200)∶(15～18)；作為另一實(shí)施方案之一、所述組合物中羅布麻葉總黃酮與蒽環(huán)類藥物的質(zhì)量比為(100～200)∶(15～18)；作為更進(jìn)一步實(shí)施方案之一、羅布麻葉總黃酮與蒽環(huán)類藥物優(yōu)選為200∶(15～18)。本發(fā)明藥物組合物中，作為實(shí)施方案之一、本發(fā)明組合物直接作用于癌細(xì)胞或心肌細(xì)胞時(shí)，所述羅布麻葉總黃酮與蒽環(huán)類藥物組合物的質(zhì)量/體積濃度比(30～90)∶(2.90-3.32)；作為進(jìn)一步實(shí)施方案之一，所述羅布麻葉總黃酮與蒽環(huán)類藥物的質(zhì)量/體積濃度比為(60～90)∶(2.90～3.32)。本發(fā)明中，作為實(shí)施方案之一，本發(fā)明羅布麻葉總黃酮與吡柔比星的組合物向受試者施用時(shí)(例如包括但不限于口服施用)，作為實(shí)施方案之一，所述藥物組合物中羅布麻葉總黃酮與吡柔比星的質(zhì)量比為(50～200)∶18；作為另一實(shí)施方案之一，所述組合物中羅布麻葉總黃酮與吡柔比星的質(zhì)量比為(100～200)∶18；作為進(jìn)一步實(shí)施方案之一，羅布麻葉總黃酮與吡柔比星的質(zhì)量比優(yōu)選為200∶18；作為示例性的說(shuō)明，羅布麻葉總黃酮與吡柔比星的質(zhì)量比包括但不限于50∶18、100∶18或200∶18等等。其中當(dāng)向受試者施用本發(fā)明藥物組合物時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員通常會(huì)針對(duì)不同的受試者進(jìn)行劑量的相應(yīng)變化和/或調(diào)整，例如當(dāng)向人類患者施用時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員通常會(huì)按照一定的比例關(guān)系換算成人用的相應(yīng)劑量，換算后組合物各組分之間質(zhì)量比例關(guān)系同樣在本發(fā)明的保護(hù)的比例范圍內(nèi)。同樣作為本發(fā)明示例性說(shuō)明，所述藥物組合物羅布麻葉總黃酮與吡柔比星的組合包括但不限于為50mg/kg和18mg/kg、100mg/kg和18mg/kg、或200mg/kg和18mg/kg的組合物。本發(fā)明中，作為實(shí)施方案之一，本發(fā)明羅布麻葉總黃酮與吡柔比星組合物直接作用于癌細(xì)胞或心肌細(xì)胞時(shí)，所述羅布麻葉總黃酮與吡柔比星的質(zhì)量體積濃度比為(30～90)∶3.32；作為進(jìn)一步實(shí)施方案之一，布麻葉總黃酮與吡柔比星的質(zhì)量體積濃度比為(60～90)∶3.32；作為更進(jìn)一步實(shí)施方案之一，布麻葉總黃酮與吡柔比星的質(zhì)量/體積濃度比為60∶3.32；作為示例性的說(shuō)明，羅布麻葉總黃酮與吡柔比星的質(zhì)量/體積濃度比包括但不限于30∶3.32、60∶3.32或90∶3.32等等。作為示例性的說(shuō)明，所述組合物中羅布麻葉總黃酮與吡柔比星的組合物包括但不限于為30μg/ml和3.32μg/ml、60ug/ml和3.32μg/ml、或60μg/ml和3.32μg/ml的組合物。本發(fā)明中，羅布麻葉總黃酮與表柔比星進(jìn)行組合并向受試者施用時(shí)(例如包括但不限于口服施用)，作為本發(fā)明實(shí)施方案之一，所述藥物組合物中羅布麻葉總黃酮與表柔比星的質(zhì)量比為(50～200)∶15；作為本發(fā)明進(jìn)一步實(shí)施方案之一，所述組合物中羅布麻葉總黃酮與表柔比星的質(zhì)量比為(100～200)∶15；作為本發(fā)明更進(jìn)一步實(shí)施方案之一，優(yōu)選為200∶15；其中當(dāng)向受試者施用本發(fā)明藥物組合物時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員通常會(huì)針對(duì)不同的受試者進(jìn)行劑量的相應(yīng)變化和/或調(diào)整，例如當(dāng)向人類患者施用時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員通常會(huì)按照一定的比例關(guān)系換算成人用的相應(yīng)劑量，換算后組合物各組分之間質(zhì)量比例關(guān)系同樣在本發(fā)明的保護(hù)的比例范圍內(nèi)。作為示例性的說(shuō)明，本發(fā)明羅布麻葉總黃酮與表柔比星組合物的質(zhì)量比包括但不限于50∶15、100∶15或200∶15等等。同樣作為示例性的說(shuō)明，所述藥物組合物羅布麻葉總黃酮與表柔比星的組合為50mg/kg和15mg/kg、100mg/kg和15mg/kg、或200mg/kg和15mg/kg的組合物。本發(fā)明中，作為實(shí)施方案之一，本發(fā)明羅布麻葉總黃酮與表柔比星組合物直接作用于癌細(xì)胞或心肌細(xì)胞時(shí)，所述羅布麻葉總黃酮與表柔比星的質(zhì)量/體積濃度比為(30～90)∶2.90；作為進(jìn)一步實(shí)施方案之一，布麻葉總黃酮與表柔比星的質(zhì)量/體積濃度比為(60～90)∶2.90；作為更進(jìn)一步實(shí)施方案之一，布麻葉總黃酮與表柔比星的質(zhì)量/體積濃度比為60∶2.90；作為示例性的說(shuō)明，羅布麻葉總黃酮與吡柔比星的質(zhì)量/體積濃度比包括但不限于30∶2.90、60∶2.90或90∶2.90等等。同樣作為示例性的說(shuō)明，所述組合物中羅布麻葉總黃酮與表柔比星的組合物包括但不限于為30ug/ml和2.90μg/ml、60μg/ml和2.90μg/ml、或60μg/ml和2.90μg/ml的組合物等等。在用本發(fā)明藥物組合物治療各種腫瘤時(shí)，在將本發(fā)明組合物制成同時(shí)給藥的藥劑的方案中，羅布麻葉總黃酮與蒽環(huán)類藥物可以含在同一種藥物制劑如片劑或膠囊中，也可以將羅布麻葉總黃酮類藥物與蒽環(huán)類藥物分別做成制劑，如分別做成片劑或膠囊，并采用本領(lǐng)域常規(guī)的方式將它們包裝或結(jié)合在一起，患者然后按照藥品說(shuō)明書的指示同時(shí)服用；在將本發(fā)明組合物制成先后給藥的藥劑的方案中，可以將羅布麻葉總黃酮與蒽環(huán)類藥物分別做成不同的制劑，并采用本領(lǐng)域常規(guī)的方式將它們包裝或結(jié)合在一起，患者然后按照藥品說(shuō)明書指示的先后順序進(jìn)行服用，或?qū)⑸鲜鼋M合物成分制成一種控釋的制劑，先釋放組合物中的一種成分、再釋放組合物中的另一種成分、患者只需要服用該控釋組合物制劑；在將本發(fā)明組合物制備成交叉給藥的藥劑的方案中，可以將羅布麻葉總黃酮與蒽環(huán)類藥物分別做成不同的制劑，并采用本領(lǐng)域常規(guī)的方式將它們包裝或結(jié)合在一起，患者然后按照藥品說(shuō)明書指示的交叉順序服用，或者將該藥物組合物制備成交叉釋放的控釋制劑。本發(fā)明組合物制劑規(guī)格可以為本領(lǐng)域常用的規(guī)格，作為示例性的說(shuō)明，例如包括不限于單元制劑中含有200mg的羅布麻葉總黃酮和18mg吡柔比星；100mg的羅布麻葉總黃酮和18mg吡柔比星；或200mg的羅布麻葉總黃酮和18mg吡柔比星。本發(fā)明組合物在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用中，所述組合物可以同時(shí)使用或以任何先后的順序使用，如可以將羅布麻葉總黃酮與蒽環(huán)類藥物同時(shí)給患者服用；也可以先服用其中的一種，然后再服用另一種藥物，對(duì)于羅布麻葉總黃酮與蒽環(huán)類藥物的時(shí)間間隔沒(méi)有特別要求，但優(yōu)選服用兩種藥物的時(shí)間間隔不超過(guò)一天。本發(fā)明中，可將本發(fā)明藥物組合物采用本領(lǐng)域常規(guī)的方法制備成適于胃腸道給藥或非胃腸道給藥的藥物制劑，本發(fā)明優(yōu)選制成胃腸道給藥的藥物制劑，其制劑形式可以為常規(guī)片劑或膠囊、或控釋、緩釋制劑。在本發(fā)明組合物的藥物制劑中，根據(jù)不同的制劑形式和制劑規(guī)格，所述組合物在制劑中的含量可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明并結(jié)合并領(lǐng)域常識(shí)進(jìn)行確定；制劑使用的輔料可采用本領(lǐng)域常規(guī)的輔料，以不和本發(fā)明組合物發(fā)生反應(yīng)或不影響本發(fā)明藥物的療效為前提；所述制劑的制備方法可采用本領(lǐng)域常規(guī)的制備方法進(jìn)行制備。本發(fā)明中，組合物的制備方法沒(méi)有什么限制，可以將本發(fā)明藥物組合物進(jìn)行直接混合然后做成制劑，或分別和/或相應(yīng)的輔料混合分別做成制劑，然后再按照本領(lǐng)域常規(guī)的方式包裝在一起，或分別和相應(yīng)的輔料混合然后再混合做成制劑。本發(fā)明中的藥物組合物的給藥劑量根據(jù)給藥對(duì)象、給藥途徑或藥物的制劑形式不同可以進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兓员ＷC該藥物組合物在哺乳動(dòng)物體內(nèi)能夠達(dá)到有效的血藥濃度為前提。本發(fā)明還提供一種上述藥物組合物在制備預(yù)防或治療抗腫瘤藥物心臟毒性作用藥物中的應(yīng)用。在相關(guān)的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，10～120μg/ml羅布麻葉總黃酮對(duì)乳腺癌mda-mb-231細(xì)胞具有不同程度的抑制作用，10～100μg/ml羅布麻葉總黃酮的抑制作用具有顯著性差異，其中以60μg/ml抑制作用最佳。而120μg/ml羅布麻葉總黃酮對(duì)乳腺癌mda-mb-231細(xì)胞具有促進(jìn)其增殖作用。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明以3.32μg/ml吡柔比星、右丙亞胺組聯(lián)合吡柔比星、單純羅布麻葉總黃酮(60μg/ml)及羅布麻葉總黃酮(羅布麻葉總黃酮提前1h處理細(xì)胞)聯(lián)合吡柔比星(共4組)作用于乳腺癌mda-mb-231細(xì)胞，處理細(xì)胞24h后的結(jié)果顯示，單純應(yīng)用吡柔比星、單純應(yīng)用右丙亞胺及單純羅布麻葉總黃酮對(duì)mda-mb-231細(xì)胞均有顯著抑制增殖作用(癌細(xì)胞抑制率分別為32.91％、10.85％、21.16％)；羅布麻葉總黃酮聯(lián)合吡柔比星較右丙亞胺聯(lián)合吡柔比星效果更強(qiáng)(癌細(xì)胞抑制率為67.55％及86.87％)，說(shuō)明羅布麻葉總黃酮聯(lián)合吡柔比星較右丙亞胺聯(lián)合應(yīng)用吡柔比星時(shí)具有較強(qiáng)的抗腫瘤增殖效應(yīng)(p＜0.05)。同時(shí)，在另一體外實(shí)驗(yàn)中，予以吡柔比星處理h9c2心肌細(xì)胞，復(fù)制心臟毒性(心肌細(xì)胞損傷)模型，給予右丙亞胺及羅布麻葉總黃酮(羅布麻葉總黃酮提前1h處理細(xì)胞)，以觀察二者對(duì)心肌細(xì)胞的保護(hù)作用。處理細(xì)胞24h后的結(jié)果顯示，吡柔比星可顯著提高心肌細(xì)胞抑制率；右丙亞胺及90μg/ml羅布麻葉總黃酮可減輕吡柔比星所致心肌細(xì)胞損傷作用，降低細(xì)胞抑制率；而60μg/ml羅布麻葉總黃酮對(duì)心肌細(xì)胞抑制率顯著降低，且優(yōu)于右丙亞胺陽(yáng)性藥對(duì)照組(p＜0.05)。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，預(yù)先予以大鼠不同的羅布麻葉總黃酮(50、100及200mg/kg)灌胃7天，第7天以尾靜脈注射吡柔比星(18mg/kg)復(fù)制wistar大鼠急性心臟毒性模型，結(jié)果顯示，吡柔比星可致大鼠心率增快、qrs波畸形或倒置、房顫、室上性心動(dòng)過(guò)速等心電圖改變；心臟收縮及舒張功能降低；外周血心肌酶譜升高、sod活力下降及mda升高。應(yīng)用右丙亞胺及50、100及200mg/kg羅布麻葉總黃酮組均可改善吡柔比星所致心臟毒性，其中以中、高劑量羅布麻葉總黃酮組改善作用最好，絕大多數(shù)指標(biāo)優(yōu)于右丙亞胺，體現(xiàn)在具有降低外周血心肌酶、抗氧化損傷相關(guān)酶活力及改善心臟收縮與舒張功能障礙。形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果顯示，尾靜脈注射吡柔比星后，大鼠心肌組織內(nèi)可見(jiàn)數(shù)量不等的灶狀、小灶狀性或涉及幾個(gè)心肌細(xì)胞的病變。表現(xiàn)為肌漿紅染，部分細(xì)胞的細(xì)胞核濃染，不規(guī)則，部分細(xì)胞核消失；也可見(jiàn)部分細(xì)胞空泡變性及脂肪變性。未見(jiàn)肌間水腫及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。病變主要分布于中膜。右丙亞胺組及羅布麻葉總黃酮各劑量組均能減輕上述心肌病變程度及病變數(shù)量，以羅布麻葉總黃酮中、高劑量療效最佳。研究成果，羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星所致心臟毒性具有保護(hù)作用。本發(fā)明藥物組合物不僅提高了藥物的抗腫瘤活性，而且對(duì)吡柔比星所致心臟毒性具有保護(hù)作用，減輕或避免了毒副作用的發(fā)生。附圖說(shuō)明圖1：實(shí)施例1中羅布麻葉總黃酮高效液相色譜圖；圖2：實(shí)驗(yàn)例1中1.1.1部分的羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星誘導(dǎo)h9c2細(xì)胞毒性的保護(hù)作用()；圖3：實(shí)驗(yàn)例1中1.1.2部分的0～160μg/ml羅布麻葉總黃酮對(duì)人乳腺癌mda-mb-231細(xì)胞抑制作用篩選散點(diǎn)圖；圖4：實(shí)驗(yàn)例1中1.1.3部分的羅布麻葉總黃酮聯(lián)合吡柔比星對(duì)人乳腺癌細(xì)胞md-mba-231抑制作用()；圖5：實(shí)驗(yàn)例1中1.2.1部分的羅布麻葉總黃酮對(duì)表柔比星誘導(dǎo)h9c2細(xì)胞毒性的保護(hù)作用()；圖6：實(shí)驗(yàn)例1中1.2.2部分的羅布麻葉總黃酮聯(lián)合表柔比星對(duì)人乳腺癌細(xì)胞md-mba-231抑制作用()；圖7：實(shí)驗(yàn)例2中a)部分的羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星致急性心臟毒性大鼠24h心電圖的影響，其中x軸：時(shí)間ms；y軸：電壓mv；a：正常對(duì)照組；b：吡柔比星組；c：右丙亞胺組；d：羅布麻葉總黃酮低濃度組；e：羅布麻葉總黃酮中濃度組；f：羅布麻葉總黃酮高濃度組；圖8：實(shí)驗(yàn)例2中a)部分的羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星致大鼠急性心臟毒性48h心電圖的影響；x軸：時(shí)間ms；y軸：電壓mv；a：正常對(duì)照組；b：吡柔比星組；c：右丙亞胺組；d：羅布麻葉總黃酮低濃度組；e：羅布麻葉總黃酮中濃度組；f：羅布麻葉總黃酮高濃度組；圖9：實(shí)驗(yàn)例2中a)部分的羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星致大鼠急性心臟毒性72h心電圖的影響；x軸：時(shí)間ms；y軸：電壓mv；a：正常對(duì)照組；b：吡柔比星組；c：右丙亞胺組；d：羅布麻葉總黃酮低濃度組；e：羅布麻葉總黃酮中濃度組；f：羅布麻葉總黃酮高濃度組；圖10：實(shí)驗(yàn)例2中b)部分的羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星致大鼠急性心臟毒性24h左心功能的影響；x軸：時(shí)間ms；y軸：電壓mv；a：正常對(duì)照組；b：吡柔比星組；c：右丙亞胺組；d：羅布麻葉總黃酮低濃度組；e：羅布麻葉總黃酮中濃度組；f：羅布麻葉總黃酮高濃度組；圖11：實(shí)驗(yàn)例2中b)部分的羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星致大鼠急性心臟毒性48h左心功能的影響；x軸：時(shí)間ms；y軸：電壓mv；a：正常對(duì)照組；b：吡柔比星組；c：右丙亞胺組；d：羅布麻葉總黃酮低濃度組；e：羅布麻葉總黃酮中濃度組；f：羅布麻葉總黃酮高濃度組；圖12：實(shí)驗(yàn)例2中b)部分的羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星致大鼠急性心臟毒性72h左心功能的影響；x軸：時(shí)間ms；y軸：電壓mv；a：正常對(duì)照組；b：吡柔比星組；c：右丙亞胺組；d：羅布麻葉總黃酮低濃度組；e：羅布麻葉總黃酮中濃度組；f：羅布麻葉總黃酮高濃度組；圖13：實(shí)驗(yàn)例2中e)部分的羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星致大鼠急性心臟毒性心臟組織形態(tài)學(xué)變化(he染色，×200)。具體實(shí)施方式本發(fā)明通過(guò)以下實(shí)施例和實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步闡述本發(fā)明，但不以任何的方式限制本發(fā)明的有效范圍。實(shí)施例1羅布麻葉總黃酮的制備制備方法：a)將干燥的羅布麻葉粉碎過(guò)20-50目篩成藥粉，用10倍量的濃度為75％的乙醇加熱回流2h，提取2次，合并提取液，濾過(guò)，回收乙醇，濃縮，得到濃縮液；b)將步驟a濃縮液用d101大孔樹(shù)脂進(jìn)行純化，先用水洗，再用50％乙醇洗脫，濾液合并、濃縮即得。檢測(cè)方法：用分光光度法測(cè)定提取液中總黃酮的含量；c)精密稱取蘆丁樣品，用30％乙醇溶解，準(zhǔn)確量取不同體積的溶液，在506nm處測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。d)精密稱取0.0193g羅布麻葉總黃酮置于50ml容量瓶中，分別精密移取1、2、3ml置于10ml容量瓶中，按藥典方法在506nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度，并計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表1。表1羅布麻葉總黃酮純化后含量測(cè)定取樣體積(ml)吸光度含量(％)10.32773.720.65072.130.98072.1e)應(yīng)用hplc方法檢測(cè)羅布麻葉總黃酮其中主要黃酮的含量色譜條件：安捷倫1260四元低壓泵，dad檢測(cè)器，手動(dòng)進(jìn)樣(10μl定量環(huán))，色譜柱：platisilodsc18(5μm，250mm×4.6mm)，檢測(cè)波長(zhǎng)：256nm，360nm，370nm，254nm，346nm，368nm，參比波長(zhǎng)：500nm。柱溫：55℃，流速：1.0ml·min-1，流動(dòng)相：b(乙腈)-d(0.4％磷酸-水)，梯度條件：0-25min，15％b；25-33min，15％-17％b；33-37min，17％～19％；37～40min，19％b；40～45min，19％～25％b；45～50min，25％～30％；50～55min，30％～90％b，結(jié)果見(jiàn)圖1。實(shí)施例2～13含有羅布麻葉總黃酮的抗腫瘤藥物組合物實(shí)施例及實(shí)驗(yàn)例各組合物的制備按以下表2中的比例進(jìn)行制備。對(duì)于實(shí)施例2～13中的液體組合物的制備，可以將對(duì)應(yīng)濃度的本發(fā)明組合物制備成同一種溶液中，然后施用時(shí)直接使用；也可以將它們分別制成相應(yīng)濃度的溶液，然后進(jìn)行混合并在施用時(shí)直接使用；也可以在使用時(shí)進(jìn)行混合后在進(jìn)行施用，或分別向受試者施用，它們施用的先后順序并不受限制。對(duì)于實(shí)施例2～13中的固體組合物的制備，可以將對(duì)應(yīng)質(zhì)量的藥物直接進(jìn)行混合，使用同時(shí)服用；也可以將它們分別制成單元制劑，在施用時(shí)同時(shí)向受試者服用，或先后服用，但它們之間使用先后順序并不受限制。各實(shí)驗(yàn)例的方法包括如下試劑和方法：試劑：大鼠血清腦鈉素bnp(mexn-r0119)、血清心肌肌鈣蛋白t(mexn-r0994)及肌酸激酶同工酶mb(mexn-r0995)試劑盒均購(gòu)于上海美軒生物科技有限公司。丙二醛(a003-1)、乳酸脫氫酶ldh(a020-2)及超氧化物歧化酶sod(a001-3)等試劑盒均購(gòu)買于南京建成生物工程研究所。動(dòng)物：清潔級(jí)wistar大鼠購(gòu)自吉林大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。常規(guī)飼養(yǎng)，房間恒溫在20～28℃，自動(dòng)人工光照明暗各12h，標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)細(xì)胞：人乳腺癌mda-mb-231細(xì)胞和大鼠心肌細(xì)胞h9c2由吉林大學(xué)再生醫(yī)學(xué)研究所孫非教授惠贈(zèng)。藥品：羅布麻葉總黃酮：由實(shí)施例1制備；表柔比星：浙江海正藥業(yè)股份有限公司；吡柔比星：深圳萬(wàn)樂(lè)藥業(yè)有限公司；藥物來(lái)源。體外實(shí)驗(yàn)方法：細(xì)胞培養(yǎng)，mtt實(shí)驗(yàn)篩選羅布麻葉總黃酮對(duì)心肌細(xì)胞及乳腺癌細(xì)胞最佳的給藥濃度，分別聯(lián)合表柔比星、吡柔比星作用心肌細(xì)胞及乳腺癌細(xì)胞最佳的給藥濃度。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)方法：分別預(yù)先給予羅布麻葉總黃酮后，應(yīng)用表柔比星、吡柔比星分別復(fù)制大鼠急性心臟毒性模型，觀察不同給藥組合對(duì)大鼠心電圖、左心室收縮壓(lvsp，mmhg)、左心室舒張壓(lvdp，mmhg)、左心室終末舒張壓(lvedp，mmhg)、左心室內(nèi)壓最大上升速率(dp/dtmax，mmhg/s)、左心室內(nèi)壓最大下降速率(-dp/dtmax，mmhg/s)、心率(hr)等數(shù)據(jù)；分析心肌酶譜、抗氧化指標(biāo)及心臟組織形態(tài)學(xué)變化。表2羅布麻葉總黃酮與吡柔比星、表柔比星的組合物實(shí)驗(yàn)例1體外試驗(yàn)1.1.1不同比例的羅布麻葉總黃酮和吡柔比星組合物對(duì)h9c2細(xì)胞抑制率的影響(mtt法)試驗(yàn)方法：h9c2心肌細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板中，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到培養(yǎng)孔面積大約80％時(shí)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行不同的處理：(1)分別給予及30、60及90μg/ml不同濃度的羅布麻葉總黃酮(tff)預(yù)處理1h后棄去，pbs洗2次，再用3.32μg/ml吡柔比星培養(yǎng)24h；(2)tff預(yù)處理的24后棄去，pbs洗2次，再用3.32μg/ml吡柔比星培養(yǎng)24h；每個(gè)處理因素設(shè)8個(gè)復(fù)孔。終止培養(yǎng)后，每孔加入10μlmtt，輕搖，37℃孵育。然后測(cè)量細(xì)胞抑制率，測(cè)量結(jié)果參見(jiàn)表3和圖2。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)使用spss17.0軟件進(jìn)行組間單因素方差分析，p＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表3羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星誘導(dǎo)h9c2細(xì)胞毒性的保護(hù)作用(n＝8)注：與正常對(duì)照組比較，ap＜0.05；與模型組比較，bp＜0.05；與右丙亞胺組比較，cp＜0.05結(jié)論：通過(guò)予以吡柔比星處理h9c2心肌細(xì)胞，復(fù)制心臟毒性(心肌細(xì)胞損傷)模型，結(jié)果顯示，吡柔比星顯著提高心肌細(xì)胞抑制率；右丙亞胺及各組羅布麻葉總黃酮均可減輕吡柔比星所致心肌細(xì)胞損傷作用，顯著降低細(xì)胞抑制率；30μg/ml、90μg/ml羅布麻葉總黃酮對(duì)心肌損傷有改善作用但不顯著，而60μg/ml羅布麻葉總黃酮組可顯著降低心肌細(xì)胞抑制率，且明顯低于右丙亞胺陽(yáng)性藥對(duì)照組。1.1.2不同比例的羅布麻葉總黃酮和吡柔比星組合物對(duì)人乳腺癌mda-mb-231細(xì)胞活性的影響試驗(yàn)方法：培養(yǎng)在dmem+10％胎牛血清(fbs)完全培養(yǎng)基中進(jìn)行；在37℃，5％濃度的co2，飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞系狀態(tài)穩(wěn)定后，將細(xì)胞鋪于96孔板中，每孔5000個(gè)細(xì)胞，每孔含完全培養(yǎng)基90μl。人乳腺癌mda-mb-231細(xì)胞按以下方式分組并處理：(1)對(duì)照組：完全培養(yǎng)基溶液8孔處理；(2)羅布麻葉總黃酮各劑量組：用完全培養(yǎng)基配制濃度為0、10、20、40、60、80、100、120、140及160μg/ml的羅布麻葉總黃酮溶液，每組設(shè)8個(gè)復(fù)孔。以上分組及加藥處理24h后，每孔中加入20μl磷酸鹽緩沖溶液(pbs溶液)配制的5mg/ml的噻唑藍(lán)(mtt)溶液繼續(xù)培養(yǎng)4h。吸走上層培養(yǎng)基(人乳腺癌細(xì)胞用平板離心機(jī)先將懸浮的細(xì)胞離心至孔底)，每孔中加入150μl二甲亞颯(dmso)進(jìn)行溶解，振蕩器上溶解10min后，用酶標(biāo)儀于495nm檢測(cè)吸光度(od值)。結(jié)果見(jiàn)表4及圖3。表4羅布麻葉總黃酮總黃酮對(duì)人乳腺癌mda-mb-231細(xì)胞的影響(n＝8)注：與正常對(duì)照組比較ap＜0.05，bp＜0.01根據(jù)上述10、20、40、60、80、100及120μg/ml羅布麻葉總黃酮對(duì)人乳腺癌mda-mb-231細(xì)胞抑制率，提示10～100μg/ml羅布麻葉總黃酮對(duì)乳腺癌mda-mb-231細(xì)胞具有顯著抑制作用，其中以60μg/ml抑制作用最佳。而大于120μg/ml羅布麻葉總黃酮對(duì)乳腺癌mda-mb-231細(xì)胞具有促進(jìn)其增殖作用。1.1.3不同比例的羅布麻葉總黃酮和吡柔比星組合物對(duì)人乳腺癌mda-mb-231細(xì)胞活性的影響試驗(yàn)方法：培養(yǎng)在dmem+10％胎牛血清(fbs)完全培養(yǎng)基中進(jìn)行；在37℃，5％濃度的co2，飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞系狀態(tài)穩(wěn)定后，將細(xì)胞鋪于96孔板中，每孔5000個(gè)細(xì)胞，每孔含完全培養(yǎng)基90μl。人乳腺癌mda-mb-231細(xì)胞按以下方式分組并處理：(1)對(duì)照組：完全培養(yǎng)基溶液8孔處理；(2)吡柔比星組：用完全培養(yǎng)基配制濃度為3.32μg/ml的吡柔比星溶液，每孔中處理；(3)羅布麻葉總黃酮組：用完全培養(yǎng)基配制濃度為30、60、90μg/ml的羅布麻葉總黃酮溶液，每組做8個(gè)復(fù)孔；(4)吡柔比星和羅布麻葉總黃酮組合藥物組：用完全培養(yǎng)基配制濃度為3.32μg/ml的吡柔比星溶液及30、60、90μg/ml的羅布麻葉總黃酮混合藥液，每組做8個(gè)復(fù)孔；(5)吡柔比星和右丙亞胺組合藥物組：用完全培養(yǎng)基配制濃度為3.32μg/ml的吡柔比星溶液及60μg/ml的羅布麻葉總黃酮混合藥液，每組做8個(gè)復(fù)孔。以上分組及加藥處理24h后，每孔中加入20μl磷酸鹽緩沖溶液(pbs溶液)配制的5mg/ml的噻唑藍(lán)(mtt)溶液繼續(xù)培養(yǎng)4h。吸走上層培養(yǎng)基(人乳腺癌細(xì)胞用平板離心機(jī)先將懸浮的細(xì)胞離心至孔底)，每孔中加入150μl二甲亞颯(dmso)進(jìn)行溶解，振蕩器上溶解10min后，用酶標(biāo)儀在495nm檢測(cè)吸光度od值。最后測(cè)量各組細(xì)胞抑制率，結(jié)果參見(jiàn)表5和圖4。表5羅布麻葉總黃酮聯(lián)合吡柔比星對(duì)人乳腺癌細(xì)胞md-mba-231抑制作用(n＝8)注：與正常對(duì)照組比較，ap＜0.05；與模型組比較，bp＜0.05；與右丙亞胺聯(lián)合吡柔比星組比較，cp＜0.05結(jié)論：本發(fā)明以3.32μg/ml吡柔比星、右丙亞胺組聯(lián)合吡柔比星組、羅布麻葉總黃酮及單純羅布麻葉總黃酮(羅布麻葉總黃酮提前1h處理細(xì)胞)聯(lián)合吡柔比星抑制乳腺癌mda-mb-231細(xì)胞，處理細(xì)胞24h后的結(jié)果顯示，單純應(yīng)用吡柔比星、單純應(yīng)用右丙亞胺及單純羅布麻葉總黃酮對(duì)均有顯著抑制增殖作用(癌細(xì)胞抑制率分別為32.91％、10.85％、21.12％)；各組羅布麻葉總黃酮聯(lián)合吡柔比星(癌細(xì)胞抑制率為23.59％、32.44％、27.33％)較右丙亞胺聯(lián)合吡柔比星(抑制率13.14％)效果更強(qiáng)，(p＜0.05)，以60μg/ml羅布麻葉總黃酮作用最佳。說(shuō)明羅布麻葉總黃酮聯(lián)合吡柔比星組較右丙亞胺聯(lián)合應(yīng)用吡柔比星具有更強(qiáng)的抗腫瘤增殖效應(yīng)，其中60μg/ml抗腫瘤增殖效應(yīng)最佳。1.2.1不同比例的羅布麻葉總黃酮和表柔比星組合物對(duì)h9c2細(xì)胞抑制率的影響(mtt法)試驗(yàn)方法：h9c2心肌細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板中，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到培養(yǎng)孔面積大約80％時(shí)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行不同的處理：(1)分別給予及30、60及90μg/ml不同濃度的羅布麻葉總黃酮(tff)預(yù)處理1h后棄去，pbs洗2次，再用2.90μg/ml表柔比星培養(yǎng)24h；(2)tff預(yù)處理的24后棄去，pbs洗2次，再用2.90μg/ml表柔比星培養(yǎng)24h；每個(gè)處理因素設(shè)8個(gè)復(fù)孔。終止培養(yǎng)后，每孔加入10μlmtt，輕搖，37℃孵育。然后測(cè)量細(xì)胞抑制率，測(cè)量結(jié)果參見(jiàn)表6和圖5。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)使用spss17.0軟件進(jìn)行組間單因素方差分析，p＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表6羅布麻葉總黃酮對(duì)表柔比星誘導(dǎo)h9c2細(xì)胞毒性的保護(hù)作用(n＝8)注：與正常對(duì)照組比較，ap＜0.05；與模型組比較，bp＜0.05；與右丙亞胺組比較，cp＜0.05結(jié)論：通過(guò)予以表柔比星處理h9c2心肌細(xì)胞，復(fù)制心臟毒性(心肌細(xì)胞損傷)模型，結(jié)果顯示，表柔比星可顯著提高心肌細(xì)胞抑制率；右丙亞胺及各組羅布麻葉總黃酮可減輕表柔比星所致心肌細(xì)胞損傷作用，顯著降低細(xì)胞抑制率；30μg/ml、90μg/ml羅布麻葉總黃酮對(duì)心肌損傷有改善作用但不顯著，而60μg/ml羅布麻葉總黃酮組可顯著降低心肌細(xì)胞抑制率，且明顯優(yōu)于右丙亞胺陽(yáng)性藥對(duì)照組。1.2.2不同比例的羅布麻葉總黃酮和表柔比星組合物對(duì)人乳腺癌mda-mb-231細(xì)胞活性的影響試驗(yàn)方法：培養(yǎng)在dmem+10％胎牛血清(fbs)完全培養(yǎng)基中進(jìn)行；在37℃，5％濃度的co2，飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞系狀態(tài)穩(wěn)定后，將細(xì)胞鋪于96孔板中，每孔5000個(gè)細(xì)胞，每孔含完全培養(yǎng)基90μl。人乳腺癌mda-mb-231細(xì)胞按以下方式分組并處理：(1)對(duì)照組：完全培養(yǎng)基溶液10孔處理；(2)表柔比星組：用完全培養(yǎng)基配制濃度為2.90μg/ml的表柔比星溶液，每孔中處理；(3)羅布麻葉總黃酮組：用完全培養(yǎng)基配制濃度為30、60、90μg/ml的羅布麻葉總黃酮溶液，每組做8個(gè)復(fù)孔；(4)表柔比星和羅布麻葉總黃酮組合藥物組：用完全培養(yǎng)基配制濃度為2.90μg/ml的表柔比星溶液及30、60、90μg/ml的羅布麻葉總黃酮混合藥液，每組做8個(gè)復(fù)孔；(5)表柔比星和右丙亞胺組合藥物組：用完全培養(yǎng)基配制濃度為2.90μg/ml的吡柔比星溶液及60μg/ml的羅布麻葉總黃酮混合藥液，每組做8個(gè)復(fù)孔。以上分組及加藥處理24h后，每孔中加入20μl磷酸鹽緩沖溶液(pbs溶液)配制的5mg/ml的噻唑藍(lán)(mtt)溶液繼續(xù)培養(yǎng)4h。吸走上層培養(yǎng)基(人乳腺癌細(xì)胞用平板離心機(jī)先將懸浮的細(xì)胞離心至孔底)，每孔中加入150μl二甲亞颯(dmso)進(jìn)行溶解，振蕩器上溶解10min后，用酶標(biāo)儀在495nm檢測(cè)吸光度od值。最后測(cè)量各組細(xì)胞抑制率，結(jié)果參見(jiàn)表7和圖6。表7羅布麻葉總黃酮聯(lián)合表柔比星對(duì)人乳腺癌細(xì)胞md-mba-231抑制作用(n＝8)注：與正常對(duì)照組比較，ap＜0.05；與模型組比較，bp＜0.05；與右丙亞胺聯(lián)合表柔比星組比較，cp＜0.05結(jié)論：本發(fā)明以2.90μg/ml表柔比星、右丙亞胺組聯(lián)合表柔比星組、羅布麻葉總黃酮及單純羅布麻葉總黃酮(羅布麻葉總黃酮提前1h處理細(xì)胞)聯(lián)合表柔比星抑制乳腺癌mda-mb-231細(xì)胞，處理細(xì)胞24h后的結(jié)果顯示，單純應(yīng)用表柔比星、單純應(yīng)用右丙亞胺及單純羅布麻葉總黃酮對(duì)均有顯著抑制增殖作用(癌細(xì)胞抑制率分別為49.91％、30.72％、36.67％)；各組羅布麻葉總黃酮聯(lián)合表柔比星(癌細(xì)胞抑制率分別為36.45％、43.28％、36.12％)較右丙亞胺聯(lián)合表柔比星(癌細(xì)胞抑制率31.25％)效果更強(qiáng)，(p＜0.05)，以60μg/ml羅布麻葉總黃酮作用最佳。說(shuō)明羅布麻葉總黃酮聯(lián)合表柔比星組較右丙亞胺聯(lián)合應(yīng)用表柔比星具有更強(qiáng)的抗腫瘤增殖效應(yīng)，其中60μg/ml抗腫瘤增殖效應(yīng)最佳。實(shí)驗(yàn)例2體內(nèi)試驗(yàn)不同比例組合的羅布麻葉總黃酮和吡柔比星組合物對(duì)吡柔比星誘導(dǎo)wistar大鼠急性心臟毒性的保護(hù)作用蒽環(huán)類藥物急性心臟毒性模型制備：按照人類疾病動(dòng)物模型復(fù)制方法及《五味子乙素和右丙亞胺對(duì)阿霉素誘導(dǎo)心臟毒性的保護(hù)作用》文章中方法進(jìn)行制備。藥品、試劑及動(dòng)物：藥品：鹽酸吡柔比星(thp，深圳萬(wàn)樂(lè)股份有限公司)、注射用右丙亞胺(dzr，江蘇奧賽康藥業(yè)股份有限公司)、羅布麻葉總黃酮(tff，按照實(shí)施1制備)。試劑：大鼠血清腦鈉素bnp(mexn-r0119)、血清心肌肌鈣蛋白t(mexn-r0994)及肌酸激酶同工酶mb(mexn-r0995)試劑盒均購(gòu)于上海美軒生物科技有限公司。丙二醛(a003-1)、乳酸脫氫酶ldh(a020-2)及超氧化物歧化酶sod(a001-3)等試劑盒均購(gòu)買于南京建成生物工程研究所。動(dòng)物：清潔級(jí)wistar大鼠購(gòu)自吉林大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。常規(guī)飼養(yǎng)，房間恒溫在20～28℃自動(dòng)人工光照明暗各12h，標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)方法：取體重在180～200g的96只wistar大鼠，飼養(yǎng)1周后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。急性心臟毒性模型的建立將大鼠隨機(jī)分為6組，分別為正常對(duì)照組、thp組、tff200mg/kg+thp組、tff100mg/kg+thp組、tff50mg/kg+thp組和dzr+thp組，參見(jiàn)表8。表8羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星誘導(dǎo)急性心臟毒性的心電圖改善情況給藥方式如表9：表9動(dòng)物分組及藥物處理方法大鼠心臟功能的測(cè)定大鼠在給予thp72h后，用7％水合氯醛(0.3ml/100g)腹腔麻醉，固定于自制的手術(shù)臺(tái)上，在胸鎖骨胸鎖乳突肌內(nèi)側(cè)分離右頸總動(dòng)脈，頭端結(jié)扎，向心端插入連有感受器的靜脈留置針，將靜脈留置針緩緩插入，使之通過(guò)左側(cè)動(dòng)脈瓣和房室瓣進(jìn)入左心室，采集左心室內(nèi)壓曲線，bl-420e生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)會(huì)自動(dòng)采集左心室收縮壓(lvsp，mmhg)、左心室舒張壓(lvdp，mmhg)、左心室終末舒張壓(lvedp，mmhg)、左心室內(nèi)壓最大上升速率(dp/dtmax，mmhg/s)、左心室內(nèi)壓最大下降速率(-dp/dtmax，mmhg/s)、心率(hr)等數(shù)據(jù)。心肌酶譜的檢測(cè)大鼠在給予thp后24、48及72h，腹主動(dòng)脈采血，室溫靜置4-6h，3000rpm、4℃離心15min，分裝血清，保存于-80℃冰箱。根據(jù)試劑盒的要求，全自動(dòng)生化分析儀檢mda、sod及bnp、ck-mb、ctnt、ldh，統(tǒng)計(jì)各組數(shù)據(jù)并分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果a)不同比例的羅布麻葉總黃酮和吡柔比星組合物致大鼠急性心臟毒性24、48及72h心電圖的影響。由圖7～9結(jié)果顯示：正常對(duì)照組r波變化不明顯，偶發(fā)心律失常；吡柔比星18mg/kg組的心律失常發(fā)生率及r波電壓下降幅度顯著高于正常對(duì)照組；羅布麻葉總黃酮各劑量組與吡柔比星組比較，心律失常發(fā)生率及r波電壓下降幅度有所減輕，尤以羅布麻葉總黃酮中、高劑量組心律失常發(fā)生率低。100mg/kg、200mg/kg羅布麻葉總黃酮組較右丙亞胺組心臟收縮及舒張功能明顯改善，以200mg/kg羅布麻葉總黃酮組效果最佳。b)不同比例的羅布麻葉總黃酮和吡柔比星組合物致大鼠急性心臟毒性24、48及72h左心功能的影響.表10羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星組合物致急性心臟毒性大鼠24h心功能的影響(n＝6)注：與正常對(duì)照組比較，ap＜0.05；與模型組比較，bp＜0.05；與右丙亞胺組比較，cp＜0.05.表11羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星致大鼠急性心臟毒性48h心功能的影響(n＝6)注：與正常對(duì)照組比較，ap＜0.05；與模型組比較，bp＜0.05；與右丙亞胺組比較，cp＜0.05.表12羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星致大鼠急性心臟毒性72h心功能的影響(n＝6)注：與正常對(duì)照組比較，ap＜0.05；與模型組比較，bp＜0.05；與右丙亞胺組比較，cp＜0.05.表10～12和圖10～12結(jié)果提示，大鼠在給予吡柔比星(thp)造模后(24、48及72h)，可引發(fā)左心室收縮壓(lvsp)、左心室舒張壓(lvdp)左心室內(nèi)壓最大上升速率(dp/dtmax)、左心室內(nèi)壓最大下降速率(-dp/dtmax)和心率等下降，左心室終末舒張壓(lvedp)上升。與thp組相比，提前給予羅布麻葉總黃酮或dzr的大鼠，可明顯改善心臟的收縮和舒張功能，且羅布麻葉總黃酮中高劑量組保護(hù)心臟作用效果好于dzr(右丙亞胺)p＜0.05。c)羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星致大鼠急性心臟毒性外周血24、48及72h心肌酶譜的影響表13羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星致急性心臟毒性大鼠外周血24h心肌酶譜的影響(n＝6)注：與正常對(duì)照組比較，ap＜0.05；與模型組比較，bp＜0.05；與右丙亞胺組比較，cp＜0.05表14羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星致急性心臟毒性大鼠外周血48h心肌酶譜的影響(n＝6)注：與正常對(duì)照組比較，ap＜0.05；與模型組比較，bp＜0.05；與右丙亞胺組比較，cp＜0.05表15羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星致急性心臟毒性大鼠外周血72h心肌酶譜的影響(n＝6)注：與正常對(duì)照組比較，ap＜0.05；與模型組比較，bp＜0.05；與右丙亞胺組比較，cp＜0.05表13～15結(jié)果顯示，相對(duì)于正常對(duì)照組，大鼠在給予吡柔比星造模24、48及72h后會(huì)引起外周血中心肌酶的升高；右丙亞胺在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)可明顯降低心肌酶活性或含量，不同劑量組的羅布麻葉總黃酮也具有類似的作用，但高劑量組作用最好，絕大多數(shù)酶活性或含量?jī)?yōu)于右丙亞胺組，中劑量組次之，而低劑量組的改善作用不及dzr組。d)羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星致大鼠急性心臟毒性外周血24、48及72hsod、mda影響表16羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星致急性心臟毒性大鼠外周血24hsod、mda影響(n＝6)注：與正常對(duì)照組比較，ap＜0.05；與模型組比較，bp＜0.05；與右丙亞胺組比較，cp＜0.05表17羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星致急性心臟毒性大鼠外周血48hsod、mda影響(n＝6)注：與正常對(duì)照組比較，ap＜0.05；與模型組比較，bp＜0.05；與右丙亞胺組比較，cp＜0.05表18羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星致急性心臟毒性大鼠外周血24hsod、mda影響(n＝6)注：與正常對(duì)照組比較，ap＜0.05；與模型組比較，bp＜0.05；與右丙亞胺組比較，cp＜0.05表16～18統(tǒng)計(jì)結(jié)果提示：與正常對(duì)照組相比，大鼠在給予吡柔比星后可造成超氧化物歧化酶(sod)等酶活力下降，丙二醛(mda)含量升高；右丙亞胺可明顯提高sod的活力，降低丙二醛的含量；羅布麻葉總黃酮三個(gè)劑量組對(duì)于sod、mda的作用與右丙亞胺類似，但高劑量組作用最好，絕大多數(shù)指標(biāo)均優(yōu)于右丙亞胺，中劑量組次之。e)羅布麻葉總黃酮對(duì)吡柔比星致大鼠急性心臟毒性心臟組織形態(tài)學(xué)變化(he染色，×200)；由圖13可以看出，正常對(duì)照組：心肌細(xì)胞類圓形或多邊形，胞漿均勻呈淡色，核圓形，較小，居中。肌纖維排列整齊，肌細(xì)胞間連接緊密，心肌細(xì)胞間有極少量結(jié)締組織，毛細(xì)血管豐富。模型對(duì)照組：可見(jiàn)數(shù)量不等的、僅涉及幾個(gè)心肌細(xì)胞的病變。表現(xiàn)為肌漿紅染，部分細(xì)胞的細(xì)胞核濃染，不規(guī)則，部分細(xì)胞核消失；也可見(jiàn)部分細(xì)胞空泡變性及脂肪變性。未見(jiàn)肌間水腫及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。右丙亞胺組：可見(jiàn)數(shù)量不等的、僅涉及幾個(gè)心肌細(xì)胞的病變。表現(xiàn)為肌漿紅染，小部分細(xì)胞的細(xì)胞核濃染，不規(guī)則，部分細(xì)胞核消失；也可見(jiàn)部分細(xì)胞空泡變性及脂肪變性。未見(jiàn)肌間水腫及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。羅布麻葉總黃酮低濃度組：病變基本與右丙亞胺組相近。羅布麻葉總黃酮中濃度組：正常心肌細(xì)胞間見(jiàn)散在幾個(gè)心肌細(xì)胞的病變，可見(jiàn)數(shù)量不等的、僅涉及幾個(gè)心肌細(xì)胞的病變，但病變的數(shù)目及病變細(xì)胞數(shù)量較模型對(duì)照組有所減少。表現(xiàn)為肌漿紅染，部分細(xì)胞的細(xì)胞核濃染，不規(guī)則；未見(jiàn)細(xì)胞空泡變性及脂肪變性，肌間水腫及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。羅布麻葉總黃酮高濃度組：可見(jiàn)數(shù)量不等的、僅涉及幾個(gè)心肌細(xì)胞的病變，但病變的數(shù)目及病變細(xì)胞數(shù)量較模型對(duì)照組有所減少。表現(xiàn)為肌漿紅染，小部分細(xì)胞的細(xì)胞核濃染，不規(guī)則，部分細(xì)胞核消失；也可見(jiàn)部分細(xì)胞空泡變性及脂肪變性。未見(jiàn)肌間水腫及炎細(xì)胞浸潤(rùn)。當(dāng)前第1頁(yè)12