相關(guān)申請(qǐng)

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序列表

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發(fā)明背景

腫瘤學(xué)家用于治療癌癥的主要治療形態(tài)是手術(shù)切除，放射療法，和經(jīng)典的化療藥物。不幸的是，手術(shù)切除對(duì)于許多腫瘤或形式的癌癥不是一個(gè)可行的選項(xiàng)。而且，放射療法和化療藥物不僅靶向患病細(xì)胞，并且因此以傷害健康細(xì)胞告終。通過(guò)利用抗原的腫瘤特異性表達(dá)或腫瘤細(xì)胞內(nèi)特定蛋白質(zhì)的不當(dāng)過(guò)表達(dá)或活化，正在開(kāi)發(fā)更加特異性地靶向腫瘤細(xì)胞的治療劑，但是腫瘤細(xì)胞傾向于突變且能變成對(duì)特異性靶向腫瘤細(xì)胞的藥物有抗性的。

一種新的癌癥治療范例已經(jīng)浮現(xiàn)，它駕馭患者自己的免疫系統(tǒng)來(lái)克服許多癌癥利用的免疫逃避策略及增強(qiáng)抗腫瘤免疫。一種此類策略是抑制免疫應(yīng)答的負(fù)調(diào)節(jié)物，它們?cè)谡Ｇ闆r下發(fā)揮維持外周耐受的功能，容許腫瘤抗原識(shí)別為非自身實(shí)體。

發(fā)明概述

本文中提供了包含(編程性死亡-1)pd-1軸拮抗劑和造血先祖激酶1(hpk1)拮抗劑的組合物。該pd-1軸拮抗劑能結(jié)合及拮抗pd-1或它的兩種配體(pd-l1或pd-l2)任一，干擾pd-1下游的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)或阻止配體結(jié)合pd-1受體。此類組合物可用于在受試者中增強(qiáng)免疫功能，特別是抗腫瘤免疫。因而，包含這兩種拮抗劑的組合物還可用于治療想要增強(qiáng)免疫原性，諸如提高腫瘤免疫原性來(lái)治療癌癥的狀況。

附圖簡(jiǎn)述

圖1描繪人hpk1的長(zhǎng)同等型，其包含一個(gè)氨基末端激酶域，四個(gè)富脯氨酸(pr)基序和一個(gè)羧基末端citron(枸櫞)同源域。

圖2展現(xiàn)hpk1激酶抑制和抗pdl1抗體的抗腫瘤效果。比較性數(shù)據(jù)顯示hpk1激酶失效敲入小鼠中與野生型小鼠中相比抗pd-l1抗體抗腫瘤功效的差異。圖2提供用對(duì)照抗體或抗pd-l1抗體處理的野生型和hpk1.kd小鼠的平均腫瘤體積。線圖代表18-20只小鼠每組。天值代表抗pd-l1抗體處理起始日后的天數(shù)。

圖3展現(xiàn)hpk1激酶抑制和抗pd-1抗體的抗腫瘤效果。比較性數(shù)據(jù)顯示hpk1激酶失效敲入小鼠中與野生型小鼠中相比抗pd-1抗體抗腫瘤功效的差異。圖3提供用對(duì)照抗體或抗pd-1抗體處理的野生型和hpk1.kd小鼠的平均腫瘤體積。線圖代表15只小鼠每組。天值代表抗pd-1抗體處理起始日后的天數(shù)。

發(fā)明詳述

i.定義

術(shù)語(yǔ)“抗體”包括單克隆抗體(包括具有免疫球蛋白fc區(qū)的全長(zhǎng)抗體)，具有多表位特異性的抗體組合物，多特異性抗體(例如雙特異性抗體)，雙抗體，和單鏈分子，及抗體片段(例如fab，f(ab’)2，和fv)。術(shù)語(yǔ)“免疫球蛋白”(ig)在本文中與“抗體”可互換使用。

基本的4鏈抗體單元是由兩條相同的輕鏈(l)和兩條相同的重鏈(h)構(gòu)成的異四聚體糖蛋白。igm抗體由5個(gè)基本的異四聚體單元及稱作j鏈的另外多肽組成，而且包含10個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)，而iga抗體包含與j鏈組合的2-5個(gè)能聚合而形成多價(jià)裝配物的基本4鏈單元。在igg的情況中，4鏈單元通常是約150,000道爾頓。每條輕鏈通過(guò)一個(gè)共價(jià)二硫鍵與重鏈相連，而兩條重鏈通過(guò)一個(gè)或多個(gè)二硫鍵彼此相連，二硫鍵的數(shù)目取決于重鏈的同種型。每條重鏈和輕鏈還具有間隔規(guī)律的鏈內(nèi)二硫橋。每條重鏈在n-末端具有一個(gè)可變域(vh)，接著是三個(gè)(對(duì)于α和γ鏈)或四個(gè)(對(duì)于μ和ε同種型)恒定域(ch)。每條輕鏈在n-末端具有一個(gè)可變域(vl)，接著是其另一端的一個(gè)恒定域(cl)。vl與vh排列在一起，而cl與重鏈第一恒定域(ch1)排列在一起。認(rèn)為特定的氨基酸殘基在輕鏈和重鏈可變域之間形成界面。一個(gè)vh和一個(gè)vl一起配對(duì)而形成一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。關(guān)于不同類別抗體的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，參見(jiàn)例如basicandclinicalimmunology,第8版,danielp.sties,abbai.terrandtristramg.parsolw(編),appleton&lange,norwalk,ct,1994,第71頁(yè)和第6章。根據(jù)其恒定域氨基酸序列，來(lái)自任何脊椎動(dòng)物物種的l鏈可歸入兩種截然不同類型中的一種，稱作卡帕(κ)和拉姆達(dá)(λ)。根據(jù)其重鏈恒定域(ch)氨基酸序列，免疫球蛋白可歸入不同的類別或同種型。有五類免疫球蛋白：iga，igd，ige，igg和igm，分別具有稱作α，δ，ε，γ和μ的重鏈。根據(jù)ch序列和功能的較小差異，γ和α類可進(jìn)一步分為亞類，例如人類表達(dá)下列亞類：igg1，igg2a，igg2b，igg3，igg4，iga1和iga2。

抗體的“可變區(qū)”或“可變域”指抗體重鏈或輕鏈的氨基末端結(jié)構(gòu)域。重鏈可變域和輕鏈可變域分別可以稱為“vh”和“vl”。這些結(jié)構(gòu)域一般是抗體的最易變部分(相對(duì)于同一類的其它抗體而言)且包含抗原結(jié)合位點(diǎn)。

術(shù)語(yǔ)“可變的”指可變域中的某些區(qū)段在抗體間序列差異廣泛的實(shí)情。v結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)抗原結(jié)合且限定特定抗體對(duì)其特定抗原的特異性。然而，變異性并非均勻分布于可變域的整個(gè)跨度。而是，它集中于輕鏈和重鏈可變域二者中稱作高變區(qū)(hvr)的三個(gè)區(qū)段?？勺冇蛑懈痈叨缺Ｊ氐牟糠址Q作框架區(qū)(fr)。天然重鏈和輕鏈的可變域各自包含四個(gè)fr區(qū)，它們大多采取β-折疊片構(gòu)象，通過(guò)形成環(huán)狀連接且在有些情況中形成β-折疊片結(jié)構(gòu)一部分的三個(gè)hvr連接。每條鏈中的hvr通過(guò)fr區(qū)非常接近的保持在一起，并與另一條鏈的hvr一起促成抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)的形成(參見(jiàn)kabat等,sequencesofimmunologicalinterest,第5版,nationalinstituteofhealth,bethesda,md.(1991))。恒定域不直接參與抗體與抗原的結(jié)合，但展現(xiàn)出多種效應(yīng)器功能，諸如抗體在抗體依賴性細(xì)胞的細(xì)胞毒性中的參與。

術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”在用于本文時(shí)指從一群基本上同質(zhì)的抗體獲得的抗體，即構(gòu)成群體的各個(gè)抗體相同，除了可能以極小量存在的可能的天然存在突變和/或翻譯后修飾(例如異構(gòu)化，酰胺化)外。單克隆抗體是高度特異性的，針對(duì)單一抗原性位點(diǎn)。與典型的包含針對(duì)不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體制備物不同，每種單克隆抗體針對(duì)抗原上的單一決定簇。在它們的特異性以外，單克隆抗體的優(yōu)勢(shì)在于它們是由雜交瘤培養(yǎng)物合成的，未受到其它免疫球蛋白的污染。修飾語(yǔ)“單克隆”指示抗體從基本上同質(zhì)的抗體群獲得的特征，不應(yīng)解釋為要求通過(guò)任何特定方法來(lái)生成抗體。例如，當(dāng)前公開(kāi)的組合物和方法的單克隆抗體可通過(guò)多種技術(shù)來(lái)生成，包括例如雜交瘤法(例如kohlerandmilstein.,nature,256:495-97(1975)；hongo等,hybridoma,14(3):253-260(1995),harlow等,antibodies:alaboratorymanual,(coldspringharborlaboratorypress,2nded.1988)；hammerling等,in:monoclonalantibodiesandt-cellhybridomas563-681(elsevier,n.y.,1981))，重組dna法(參見(jiàn)例如美國(guó)專利no.4,816,567)，噬菌體展示技術(shù)(參見(jiàn)例如clackson等,nature352:624-628(1991)；marks等,j.mol.biol.222:581-597(1992)；sidhu等,j.mol.biol.338(2):299-310(2004)；lee等,j.mol.biol.340(5):1073-1093(2004)；fellouse,proc.nat.acad.sci.usa101(34):12467-12472(2004)；lee等,j.immunol.methods284(1-2):119-132(2004))，及用于在具有部分或整個(gè)人免疫球蛋白基因座或編碼人免疫球蛋白序列的基因的動(dòng)物中生成人或人樣抗體的技術(shù)(參見(jiàn)例如wo1998/24893；wo1996/34096；wo1996/33735；wo1991/10741；jakobovits等,proc.natl.acad.sci.usa90:2551(1993)；jakobovits等,nature362:255-258(1993)；bruggemann等,yearinimmunol.7:33(1993)；美國(guó)專利no.5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；及5,661,016；marks等,bio/technology10:779-783(1992)；lonberg等,nature368:856-859(1994)；morrison,nature368:812-813(1994)；fishwild等,naturebiotechnol.14:845-851(1996)；neuberger,naturebiotechnol.14:826(1996)；lonbergandhuszar,intern.rev.immunol.13:65-93(1995))。

術(shù)語(yǔ)“裸抗體(裸露的抗體)”指未綴合細(xì)胞毒性模塊或放射性標(biāo)記物的抗體。

術(shù)語(yǔ)“全長(zhǎng)抗體”，“完整抗體”和“全抗體”可互換使用，指基本上完整形式的抗體，與抗體片段不同。具體而言，完整抗體包括那些具有重鏈和輕鏈(包括fc區(qū))的。恒定域可以是天然序列恒定域(例如人天然序列恒定域)或其氨基酸序列變體。在有些情況中，完整抗體可具有一項(xiàng)或多項(xiàng)效應(yīng)器功能。

“抗體片段”包含完整抗體的一部分，在大多數(shù)情況中，完整抗體的抗原結(jié)合和/或可變區(qū)。抗體片段的例子包括fab，fab’，f(ab’)2和fv片段；雙抗體；線性抗體(參見(jiàn)美國(guó)專利5,641,870,實(shí)施例2；zapata等,proteineng.8(10):1057-1062(1995))；單鏈抗體分子；及由抗體片段形成的多特異性抗體。用木瓜蛋白酶消化抗體產(chǎn)生兩個(gè)相同的抗原結(jié)合片段，稱作“fab”片段，和一個(gè)殘余“fc”片段，其名稱反映了它易于結(jié)晶的能力。fab片段由完整l鏈及h鏈可變區(qū)域(vh)和重鏈第一恒定域(ch1)組成。每個(gè)fab片段對(duì)于抗原結(jié)合是單價(jià)的，即它具有一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)。胃蛋白酶處理抗體產(chǎn)生一個(gè)較大f(ab’)2片段，它大體相當(dāng)于兩個(gè)通過(guò)二硫鍵相連的fab片段，具有不同抗原結(jié)合活性且仍能夠交聯(lián)抗原。fab’片段因在ch1結(jié)構(gòu)域的羧基末端增加了少數(shù)殘基而與fab片段有所不同，包括來(lái)自抗體鉸鏈區(qū)的一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸。fab’-sh是本文中對(duì)其中恒定域半胱氨酸殘基攜帶游離硫醇基的fab’的稱謂。f(ab’)2抗體片段最初是作為成對(duì)fab’片段生成的，在fab’片段之間具有鉸鏈半胱氨酸。還知道抗體片段的其它化學(xué)偶聯(lián)。

fc片段包含通過(guò)二硫鍵保持在一起的兩條h鏈的羧基末端部分。抗體的效應(yīng)器功能由fc區(qū)中的序列來(lái)決定，該區(qū)域也受到在某些類型的細(xì)胞上找到的fc受體(fcr)識(shí)別。

“fv”是包含完整抗原識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)的最小抗體片段。此片段由緊密，非共價(jià)結(jié)合的一個(gè)重鏈可變區(qū)和一個(gè)輕鏈可變區(qū)的二聚體組成。從這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域的折疊中生發(fā)出六個(gè)高變環(huán)(重鏈和輕鏈各3個(gè)環(huán))，貢獻(xiàn)出抗原結(jié)合的氨基酸殘基并賦予抗體以抗原結(jié)合特異性。然而，即使是單個(gè)可變域(或只包含對(duì)抗原特異的三個(gè)hvr的半個(gè)fv)也具有識(shí)別和結(jié)合抗原的能力，盡管親和力低于完整結(jié)合位點(diǎn)。

“單鏈fv”，也縮寫成“sfv”或“scfv”，是包含連接成一條多肽鏈的vh和vl抗體結(jié)構(gòu)域的抗體片段。在一些情況中，sfv多肽在vh與vl結(jié)構(gòu)域之間進(jìn)一步包含多肽接頭，其使得sfv能夠形成結(jié)合抗原的期望結(jié)構(gòu)。關(guān)于sfv的綜述參見(jiàn)pluckthun，于《thepharmacologyofmonoclonalantibodies》，第113卷，rosenburg和moore編，springer-verlag，newyork，第269-315頁(yè)，1994。

在當(dāng)前公開(kāi)的組合物和方法中有用的“功能性片段”包含完整抗體的一部分，一般包括完整抗體的抗原結(jié)合或可變區(qū)或抗體的保留或具有改良fcr結(jié)合能力的fc區(qū)?？贵w片段的例子包括線性抗體，單鏈抗體分子和自抗體片段形成的多特異性抗體。

術(shù)語(yǔ)“雙抗體”指通過(guò)在vh和vl結(jié)構(gòu)域之間使用短接頭(約5-10個(gè)殘基)構(gòu)建sfv片段(見(jiàn)上一段)而制備的小型抗體片段，由于接頭短，使得v結(jié)構(gòu)域?qū)嵭墟滈g而非鏈內(nèi)配對(duì)，由此導(dǎo)致二價(jià)片段，即具有兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的片段。雙特異性雙抗體是兩個(gè)“交叉”sfv片段的異二聚體，其中兩種抗體的vh和vl結(jié)構(gòu)域存在于不同多肽鏈上。雙抗體更詳細(xì)的描述于例如ep404,097；wo93/11161；hollinger等,proc.natl.acad.sci.usa,90:6444-6448(1993)。

在當(dāng)前公開(kāi)的組合物和方法中有用的單克隆抗體具體包括“嵌合”抗體(免疫球蛋白)，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或?qū)儆谔囟贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，而鏈的剩余部分與衍生自另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w類別或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，以及此類抗體的片段，只要它們展現(xiàn)出期望的生物學(xué)活性(美國(guó)專利no.4,816,567；morrison等,proc.natl.acad.sci.usa81:6851-6855(1984))。本文中感興趣的嵌合抗體包括“靈長(zhǎng)類化”抗體，其中抗體的抗原結(jié)合區(qū)衍生自通過(guò)用例如感興趣抗原免疫短尾猴(macaquemonkey)而生成的抗體。如本文中所使用的，“人源化抗體”作為“嵌合抗體”的一個(gè)子集使用。

非人(例如鼠)抗體的“人源化”形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，人源化抗體指人免疫球蛋白(受體抗體)中的hvr殘基(下文限定)用具有期望特異性，親和力和/或能力的非人物種(供體抗體)(諸如小鼠，大鼠，家兔或非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物)的hvr殘基替換的免疫球蛋白。在有些情況中，將人免疫球蛋白的框架(“fr”)殘基用相應(yīng)的非人殘基替換。此外，人源化抗體可包含在受體抗體中或在供體抗體中沒(méi)有找到的殘基。進(jìn)行這些修飾可以是為了進(jìn)一步改進(jìn)抗體的性能，諸如結(jié)合親和力。一般而言，人源化抗體將包含至少一個(gè)，通常兩個(gè)基本上整個(gè)如下的可變域，其中所有或基本上所有高變環(huán)對(duì)應(yīng)于非人免疫球蛋白序列的高變環(huán)，且所有或基本上所有fr區(qū)是人免疫球蛋白序列的fr區(qū)，盡管fr區(qū)可包含一處或多處改進(jìn)抗體性能(諸如結(jié)合親和力，異構(gòu)化，免疫原性等)的個(gè)別fr殘基替代。fr中這些氨基酸替代的數(shù)目，h鏈中通常不超過(guò)6處，l鏈中通常不超過(guò)3處。人源化抗體任選還將包含至少部分免疫球蛋白恒定區(qū)(fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定區(qū)。更多細(xì)節(jié)參見(jiàn)例如jones等,nature321:522-525(1986)；riechmann等,nature332:323-329(1988)；及presta,curr.op.struct.biol.2:593-596(1992)。還可參見(jiàn)例如vaswaniandhamilton,ann.allergy,asthma&immunol.1:105-115(1998)；harris,biochem.soc.transactions23:1035-1038(1995)；hurleandgross,curr.op.biotech.5:428-433(1994)；及美國(guó)專利no.6,982,321和7,087,409。

“人抗體”指擁有與由人生成的抗體的氨基酸序列對(duì)應(yīng)的氨基酸序列和/或使用本文所公開(kāi)的用于生成人抗體的任何技術(shù)生成的抗體。人抗體的這種定義明確排除包含非人抗原結(jié)合殘基的人源化抗體。人抗體可使用本領(lǐng)域已知的多種技術(shù)來(lái)生成，包括噬菌體展示文庫(kù)(hoogenboomandwinter,j.mol.biol.227:381(1991)；marks等,j.mol.biol.222:581(1991))。還可用于制備人單克隆抗體的是以下文獻(xiàn)中記載的方法：cole等,monoclonalantibodiesandcancertherapy,alanr.liss,p.77(1985)；boerner等,j.immunol.147(1):86-95(1991)。還可參見(jiàn)vandijkandvandewinkel,curr.opin.pharmacol.,5:368-74(2001)?？赏ㄟ^(guò)給已經(jīng)修飾以應(yīng)答抗原性刺激而生成人抗體但其內(nèi)源基因座已經(jīng)失去能力的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物例如經(jīng)過(guò)免疫的異種小鼠(xenomice)施用抗原來(lái)制備人抗體(參見(jiàn)例如美國(guó)專利no.6,075,181和6,150,584，關(guān)于xenomouse^tm技術(shù))。還可參見(jiàn)例如li等,proc.natl.ascad.sci.usa,103:3557-3562(2006)，關(guān)于經(jīng)人b-細(xì)胞雜交瘤技術(shù)生成的人抗體。

術(shù)語(yǔ)“高變區(qū)”，“hvr”或“hv”在用于本文時(shí)指抗體可變域中序列上高度可變和/或形成結(jié)構(gòu)上定義的環(huán)的區(qū)域。通常，抗體包含六個(gè)hvr：三個(gè)在vh中(h1，h2，h3)，三個(gè)在vl中(l1，l2，l3)。在天然抗體中，h3和l3展示這六個(gè)hvr的最大多樣性，而且認(rèn)為特別是h3在賦予抗體以精密特異性中發(fā)揮獨(dú)特作用。參見(jiàn)例如xu等，immunity13:37-45(2000)；johnsonandwu,于:methodsinmolecularbiology248:1-25(lo編,humanpress,totowa,nj,2003)。事實(shí)上，僅由重鏈組成的天然存在駱駝(camelid)抗體在缺乏輕鏈時(shí)是有功能的且穩(wěn)定的。參見(jiàn)例如hamers-casterman等,nature363:446-448(1993)；sheriff等,naturestruct.biol.3:733-736(1996)。

本文中使用且涵蓋許多hvr的敘述。kabat互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)是以序列變異性為基礎(chǔ)的，而且是最常用的(kabat等,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,5thed.publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md.(1991))。chothia改為指結(jié)構(gòu)環(huán)的位置(chothiaandleskj.mol.biol.196:901-917(1987))。abmhvr代表kabathvr與chothia結(jié)構(gòu)環(huán)之間的折衷，而且得到oxfordmolecular的abm抗體建模軟件的使用。“接觸”hvr是以對(duì)可獲得的復(fù)合物晶體結(jié)構(gòu)的分析為基礎(chǔ)的。下文記錄了這些hvr中每一個(gè)的殘基。

hvr可包括如下“延伸的hvr”：vl中的24-36或24-34(l1)，46-56或50-56(l2)和89-97或89-96(l3)及vh中的26-35(h1)，50-65或49-65(h2)和93-102，94-102，或95-102(h3)。對(duì)于這些定義中的每一個(gè)，可變域殘基是依照kabat等,見(jiàn)上文編號(hào)的。

表述“依照kabat的可變域殘基編號(hào)方式”或“依照kabat的氨基酸位置編號(hào)方式”及其變體指kabat等,見(jiàn)上文中用于抗體重鏈可變域或輕鏈可變域編輯的編號(hào)系統(tǒng)。使用此編號(hào)系統(tǒng)，實(shí)際的線性氨基酸序列可包含較少或另外的氨基酸，對(duì)應(yīng)于可變域fr或hvr的縮短或插入。例如，重鏈可變域可包含h2殘基52后的單一氨基酸插入(依照kabat為殘基52a)及重鏈fr殘基82后的插入殘基(例如依照kabat為殘基82a，82b和82c等)。給定抗體的kabat殘基編號(hào)方式可通過(guò)將抗體序列與“標(biāo)準(zhǔn)”kabat編號(hào)序列對(duì)比同源區(qū)來(lái)確定。

“框架”或“fr”殘基指可變域中除本文中所定義的hvr殘基外的那些殘基。

“人共有框架”或“受體人框架”指代表人免疫球蛋白vl或vh框架序列選集中最常見(jiàn)的氨基酸殘基的框架。通常，人免疫球蛋白vl或vh序列選集來(lái)自可變域序列亞組。通常，序列亞組是如kabat等,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,第5版,publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md(1991)中的亞組。例子包括對(duì)于vl，亞組可以是亞組κi，κii，κiii或κiv，如在kabat等,見(jiàn)上文中的。另外，對(duì)于vh，亞組可以是亞組i，亞組ii，或亞組iii，如在kabat等,見(jiàn)上文中的。或者，人共有框架可以自上述框架衍生，其中特定殘基，諸如人框架殘基通過(guò)比對(duì)供體框架序列與各種人框架序列的集合基于其與供體框架的同源性選擇。自人免疫球蛋白框架“衍生”的受體人框架或人共有框架可以包含其相同的氨基酸序列，或者它可以含有先前存在的氨基酸序列變化。在一些實(shí)施方案中，先前存在的氨基酸變化的數(shù)目是10或更少，9或更少，8或更少，7或更少，6或更少，5或更少，4或更少，3或更少，或2或更少。

“vh亞組iii共有框架”包含從kabat等，見(jiàn)上文的可變重鏈亞型iii中的氨基酸序列獲得的共有序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，vh亞型iii共有框架氨基酸序列包含下列各序列中每一項(xiàng)的至少一部分或整個(gè)全部：

evqlvesggglvqpggslrlscaas(hc-fr1)(seqidno:15)，

wvrqapgkglewv(hc-fr2)(seqidno:16)，

rftisadtskntaylqmnslraedtavyycar(hc-fr3)(seqidno:17)，

wgqgtlvtvsa(hc-fr4)(seqidno:18)。

“vlκi共有框架”包含從kabat等，見(jiàn)上文的可變輕鏈κ亞型i中的氨基酸序列獲得的共有序列。在一個(gè)實(shí)施方案中，vl亞型i共有框架氨基酸序列包含下列各序列中每一項(xiàng)的至少一部分或整個(gè)：

diqmtqspsslsasvgdrvtitc(lc-fr1)(seqidno:19)，

wyqqkpgkapklliy(lc-fr2)(seqidno:20)，

gvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyc(lc-fr3)(seqidno:21)，

fgqgtkveikr(lc-fr4)(seqidno:22)。

指定位置(例如fc區(qū)的)處的“氨基酸修飾”指指定殘基的替代或刪除，或指定殘基附近至少一個(gè)氨基酸殘基的插入。指定殘基“附近”的插入意味著其一個(gè)至兩個(gè)殘基內(nèi)的插入。插入可以在指定殘基的n端或c端。在一些實(shí)施方案中，氨基酸修飾是替代。

“親和力成熟的”抗體指在抗體的一個(gè)或多個(gè)hvr中具有一處或多處改變，導(dǎo)致該抗體對(duì)抗原的親和力與沒(méi)有這些改變的親本抗體相比有所改進(jìn)的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案，親和力成熟的抗體具有納摩爾或甚至皮摩爾量級(jí)的對(duì)靶抗原的親和力。親和力成熟的抗體可通過(guò)本領(lǐng)域已知規(guī)程來(lái)生成。例如，marks等,bio/technology10:779-783(1992)記載了通過(guò)vh和vl結(jié)構(gòu)域改組進(jìn)行的親和力成熟。以下文獻(xiàn)記載了hvr和/或框架殘基的隨機(jī)誘變：例如，barbas等,proc.nat.acad.sci.usa91:3809-3813(1994)；schier等,gene169:147-155(1995)；yelton等,j.immunol.155:1994-2004(1995)；jackson等,j.immunol.154(7):3310-9(1995)；hawkins等,j.mol.biol.226:889-896(1992)。

如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“特異性結(jié)合”或“對(duì)…特異性的”指可測(cè)量且可再現(xiàn)的相互作用，諸如靶物和抗體之間的結(jié)合，其確定在存在分子(包括生物學(xué)分子)的異質(zhì)群體的情況中靶物的存在。例如，特異性結(jié)合靶物(其可以是表位)的抗體是以比其結(jié)合其它無(wú)關(guān)靶物更大的親和力，親合力，更容易，和/或以更大的持續(xù)時(shí)間結(jié)合此靶物的抗體。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體結(jié)合無(wú)關(guān)靶物的程度小于抗體結(jié)合此靶物的約10％，如例如通過(guò)放射性免疫測(cè)定法(ria)測(cè)量的。在某些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合靶物的抗體具有≤1μm，≤100nm，≤10nm，≤1nm，或≤0.1nm的解離常數(shù)(kd)。在某些實(shí)施方案中，抗體特異性結(jié)合蛋白質(zhì)上在來(lái)自不同物種的蛋白質(zhì)間保守的表位。在另一個(gè)實(shí)施方案中，特異性結(jié)合可以包括但不需要排他結(jié)合。

“特異性拮抗劑”意指比無(wú)關(guān)靶物更大地降低，抑制，或以其它方式減小限定靶物的活性的藥劑。例如，hpk1特異性拮抗劑降低hpk1的至少一種生物學(xué)活性的量在統(tǒng)計(jì)學(xué)上大于拮抗劑對(duì)任何其它蛋白質(zhì)(例如其它絲氨酸/蘇氨酸激酶)的抑制效果。在一些實(shí)施方案中，拮抗劑對(duì)于靶物的ic50是拮抗劑對(duì)非靶物的ic50的約90％，80％，70％，60％，50％，40％，30％，20％，10％，5％，1％，0.1％，0.01％，0.001％或更少。

如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“免疫粘附素”指組合異源蛋白質(zhì)(“粘附素”)的結(jié)合特異性與免疫球蛋白恒定域的效應(yīng)器功能的抗體樣分子。在結(jié)構(gòu)上，免疫粘附素包含具有與抗體的抗原識(shí)別和結(jié)合位點(diǎn)不同的期望結(jié)合特異性的氨基酸序列(即，是“異源的”)和免疫球蛋白恒定域序列的融合物。免疫粘附素分子的粘附素部分通常是至少包含受體或配體的結(jié)合位點(diǎn)的連續(xù)氨基酸序列。免疫粘附素中的免疫球蛋白恒定域序列可以獲自任何免疫球蛋白，諸如igg-1，igg-2(包括igg2a和igg2b)，igg-3，或igg-4亞型，iga(包括iga-1和iga-2)，ige，igd或igm。ig融合物可以包含用本文中描述的多肽或抗體的域替換ig分子內(nèi)的至少一個(gè)可變區(qū)的取代。在一些實(shí)施方案中，免疫球蛋白融合物包括igg1分子的鉸鏈，ch2和ch3，或鉸鏈，ch1，ch2和ch3區(qū)。為了生成免疫球蛋白融合物，還可見(jiàn)美國(guó)專利no.5,428,130。igfc和細(xì)胞表面受體胞外域的免疫粘附素組合有時(shí)稱作可溶性受體。

“融合蛋白”和“融合多肽”指具有兩個(gè)共價(jià)連接在一起的部分的多肽，其中每個(gè)部分是具有不同特性的多肽。特性可以是生物學(xué)特性，諸如體外或體內(nèi)活性。特性也可以是簡(jiǎn)單的化學(xué)或物理特性，諸如對(duì)靶分子的結(jié)合，反應(yīng)的催化，等等。兩個(gè)部分可以通過(guò)單一肽鍵直接連接，或者經(jīng)由肽接頭連接，但是為彼此以符合讀碼框的方式。

“阻斷性”抗體或“拮抗性”抗體是抑制或降低其結(jié)合的抗原的生物學(xué)活性的抗體。在一些實(shí)施方案中，阻斷性抗體或拮抗性抗體實(shí)質(zhì)性或完全抑制抗原的生物學(xué)活性。

術(shù)語(yǔ)“fc區(qū)”在本文中用于定義免疫球蛋白重鏈的c端區(qū)，包括天然序列fc區(qū)和變異fc區(qū)。雖然免疫球蛋白重鏈fc區(qū)的邊界可以變化，但是人igg重鏈fc區(qū)通常定義為自其cys226或pro230位置的氨基酸殘基至羧基末端的區(qū)段。fc區(qū)的c-末端賴氨酸(殘基447，依照eu編號(hào)系統(tǒng))可以消除，例如在生產(chǎn)或純化抗體的過(guò)程中，或者通過(guò)對(duì)編碼抗體重鏈的核酸進(jìn)行重組工程改造。因而，完整抗體的組合物可包括所有k447殘基都被消除的抗體群，無(wú)一k447殘基被消除的抗體群，以及混合了有和無(wú)k447殘基的抗體的抗體群。對(duì)于在本文所述抗體中使用而言合適的天然序列fc區(qū)包括人igg1，igg2(igg2a，igg2b)，igg3和igg4。

“fc受體”或“fcr”描述結(jié)合抗體fc區(qū)的受體。在一些實(shí)施方案中，fcr是天然序列人fcr。此外，fcr可以是結(jié)合igg抗體的fcr(γ受體)，包括fcγri，fcγrii和fcγriii亞類的受體，包括這些受體的等位變體和可變剪接形式。fcγrii受體包括fcγriia(“活化受體”)和fcγriib(“抑制受體”)，它們具有相似的氨基酸序列，區(qū)別主要在其胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域中?；罨荏wfcγriia在其胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域中包含免疫受體基于酪氨酸的活化基序(itam)。抑制受體fcγriib在其胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域中包含免疫受體基于酪氨酸的抑制基序(itim)(參見(jiàn)m.annu.rev.immunol.15:203-234(1997))。fcr的綜述參見(jiàn)ravetchandkinet,annu.rev.immunol.9:457-492(1991)；capel等,immunomethods4:25-34(1994)；dehaas等,j.lab.clin.med.126:330-41(1995)。術(shù)語(yǔ)“fcr”在本文中涵蓋其它fcr，包括那些未來(lái)將會(huì)鑒定的。

術(shù)語(yǔ)“fc受體”或“fcr”還包括新生兒受體，fcrn，它負(fù)責(zé)將母體igg轉(zhuǎn)移給胎兒(guyer等,j.immunol.117:587(1976)和kim等,j.immunol.24:249(1994))。測(cè)量對(duì)fcrn的結(jié)合的方法是已知的(參見(jiàn)例如ghetieandward,immunoltoday18(12):592-8(1997)；ghetie等,naturebiotechnology,15(7):637-40(1997)；hinton等,j.biol.chem279(8):6213-6(2004)；andwo2004/92219(hinton等))?？蓽y(cè)定人fcrn高親和力結(jié)合多肽與fcrn的體內(nèi)結(jié)合和血清半衰期，例如在表達(dá)人fcrn的轉(zhuǎn)基因小鼠或經(jīng)轉(zhuǎn)染的人細(xì)胞系中，或者在施用了具有變異fc區(qū)的多肽的靈長(zhǎng)類動(dòng)物中。wo2004/42072(presta)記載了對(duì)fcr的結(jié)合得到改良或消除的抗體變體。還可參見(jiàn)例如shields等,j.biol.chem.9(2):6591-6604(2001)。

術(shù)語(yǔ)“胞內(nèi)抗體”(intrabody)指能夠在細(xì)胞內(nèi)結(jié)合細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的抗體。胞內(nèi)抗體一般經(jīng)由投遞編碼該抗體的表達(dá)盒而在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，通常作為scfv，而且包含多種定位信號(hào)以將抗體靶向感興趣的細(xì)胞內(nèi)隔室(參見(jiàn)loetal.(2008)handbexppharmacol181:343-373，將其完整收入本文)。使胞內(nèi)抗體穩(wěn)定化的方法是本領(lǐng)域已知的，而且包括但不限于導(dǎo)致超穩(wěn)定性的對(duì)免疫球蛋白vl域的修飾(cohen(1998)oncogene17(19):2445-2456)或作為與其它穩(wěn)定的細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)，諸如麥芽糖結(jié)合蛋白的融合蛋白表達(dá)抗體(shaki-loewenstein(2005)jimmunolmethods303(1-2):19-39)。

短語(yǔ)“實(shí)質(zhì)性降低”或“實(shí)質(zhì)性不同”在用于本文時(shí)表示兩個(gè)數(shù)值(通常一個(gè)與某分子有關(guān)而另一個(gè)與參照/比較分子有關(guān))之間足夠高的差異程度，以致本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)為在用所述數(shù)值(例如kd值)所測(cè)量的生物學(xué)特性背景內(nèi)兩個(gè)數(shù)值之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。作為參照/比較分子該數(shù)值的函數(shù)，所述兩個(gè)數(shù)值之間的差異例如大于約10％，大于約20％，大于約30％，大于約40％，和/或大于約50％。

短語(yǔ)“實(shí)質(zhì)性相似”或“實(shí)質(zhì)性相同”在用于本文時(shí)表示兩個(gè)數(shù)值(例如，一個(gè)涉及本文所述抗體而另一個(gè)涉及參照/比較抗體)之間足夠高的相似程度，以致本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)為在用所述數(shù)值(例如kd值)所測(cè)量的生物學(xué)特性背景內(nèi)兩個(gè)數(shù)值之間的差異具有很小的或沒(méi)有生物學(xué)和/或統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。作為參照/比較值的函數(shù)，所述兩個(gè)數(shù)值之間的差異例如小于約50％，小于約40％，小于約30％，小于約20％，和/或小于約10％。

如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞因子”一般指由一種細(xì)胞群體釋放的，作為細(xì)胞間介質(zhì)對(duì)另一細(xì)胞起作用或者對(duì)生成該蛋白質(zhì)的細(xì)胞具有自分泌影響的蛋白質(zhì)。此類細(xì)胞因子的例子包括淋巴因子，單核因子；白介素(“il”)，諸如il-1，il-1α，il-2，il-3，il-4，il-5，il-6，il-7，il-8，il-9，il10，il-11，il-12，il-13，il-15，il-17a-f，il-18至il-29(諸如il-23)，il-31，包括ril-2；腫瘤壞死因子，諸如tnf-α或tnf-β，tgf-β1-3；和其它多肽因子，包括白血病抑制因子(“l(fā)if”)，睫狀節(jié)神經(jīng)細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)因子(“cntf”)，cntf樣細(xì)胞因子(“clc”)，心肌營(yíng)養(yǎng)蛋白(“ct”)，和kit配體(“kl”)。

如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“趨化因子”指具有選擇性誘導(dǎo)白細(xì)胞的趨化性和活化的能力的可溶性因子(例如細(xì)胞因子)。它們還觸發(fā)血管發(fā)生，炎癥，傷口愈合，和腫瘤發(fā)生的過(guò)程。趨化因子的一個(gè)非限制性例子是il-8，即鼠角質(zhì)形成細(xì)胞化學(xué)引誘物(kc)的人同系物。

ii.包含pd-1軸拮抗劑和/或hpk1拮抗劑的組合物及其使用方法

本文中提供了包含pd-1軸拮抗劑和/或hpk1拮抗劑的組合物及其使用方法。本文中呈現(xiàn)的數(shù)據(jù)證明hpk1抑制和pd-1軸阻斷的組合以超過(guò)疊加的方式降低腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。pd-1(連同它的配體pd-l1和pd-l2)和hpk1二者作為t細(xì)胞活化的負(fù)調(diào)節(jié)物發(fā)揮功能。hpk1還負(fù)調(diào)節(jié)b細(xì)胞，而且抑制hpk1導(dǎo)致增強(qiáng)的抗原呈遞細(xì)胞(諸如樹(shù)突細(xì)胞)的抗原呈遞。pd-l1在許多癌癥中過(guò)表達(dá)，而且伴隨的pd-1過(guò)表達(dá)常常在腫瘤浸潤(rùn)性t細(xì)胞中發(fā)生，導(dǎo)致削弱t細(xì)胞活化和逃避免疫監(jiān)督，這促成受損的抗腫瘤免疫應(yīng)答(keirmeetal.(2008)annu.rev.immunol.26:677)。雖然不受任何理論或作用機(jī)制束縛，認(rèn)為同時(shí)靶向pd-1軸和hpk1二者以超過(guò)疊加的方式增強(qiáng)抗腫瘤免疫應(yīng)答，導(dǎo)致出乎意料的腫瘤生長(zhǎng)降低。在一些實(shí)施方案中，所得效果大于預(yù)期的或計(jì)算的分開(kāi)的各個(gè)成分的疊加效應(yīng)。如此，包含pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑的組合物在增強(qiáng)免疫應(yīng)答和治療癌癥中找到令人驚訝地有效的用途。

a.pd-1軸拮抗劑

編程性死亡-1(pd-1)蛋白，也稱作cd279或sleb2，是一種i型跨膜蛋白和b7-cd28家族的t細(xì)胞調(diào)節(jié)物的成員。pd-1多核苷酸和多肽是本領(lǐng)域已知的(ishidaetal.(1992)emboj11(11):3887-3895，通過(guò)援引將其完整收入本文)。pd-1多核苷酸和多肽的非限制性例子包含seqidno:1(genbank登錄號(hào)nm_005018.2的核苷酸69-935)中所列人pd-1多核苷酸和seqidno:2中所列所編碼的288個(gè)氨基酸的人pd-1多肽(登錄號(hào)np_005009.2)。

為了容易提及，會(huì)將它們涉及人pd-1討論pd-1多肽的基序，人pd-1由包含ig樣v型域(aa35-145)的胞外域(aa35-145)，接著是跨膜域(aa171-191)，和具有免疫受體基于酪氨酸的抑制性基序(itim)和免疫受體基于酪氨酸的開(kāi)關(guān)基序(itsm)(它們中的后者對(duì)于抑制tcr信號(hào)傳導(dǎo)是至關(guān)重要的)的胞內(nèi)尾(192-288)組成。

pd-1由活化的t細(xì)胞，b細(xì)胞，和髓樣細(xì)胞表達(dá)。而且，大多數(shù)腫瘤浸潤(rùn)性t淋巴細(xì)胞相對(duì)于正常組織中的t淋巴細(xì)胞和外周血t淋巴細(xì)胞過(guò)表達(dá)pd-1(ahmadzadehetal.(2009)blood114(8):1537)。

pd-1具有兩種已知的配體，編程性死亡配體1(pd-l1)和編程性死亡配體2(pd-l2)。pd-l1，也稱作b7-h1，b7-4，cd274，和b7-h，是一種細(xì)胞表面蛋白質(zhì)和b7家族的成員。pd-l1多核苷酸和多肽是本領(lǐng)域已知的(dongetal.(1999)natmed5(12):1365-1369，通過(guò)援引將其完整收入本文)。pd-l1多核苷酸和多肽的非限制性例子包含seqidno:3(genbank登錄號(hào)nm_014143.3的核苷酸109-981)中所列人pd-l1同等型1多核苷酸和seqidno:4中所列所編碼的290個(gè)氨基酸的人pd-l1同等型1多肽(登錄號(hào)np_054862.1)；seqidno:5(genbank登錄號(hào)nm_001267706.1的核苷酸109-639)中所列人pd-l1同等型2多核苷酸和seqidno:6中所列所編碼的176個(gè)氨基酸的人pd-l1同等型2多肽(登錄號(hào)np_001254635.1)；和seqidno:7(genbank登錄號(hào)xm_006716759.1的核苷酸213-749)中所列預(yù)測(cè)的人pd-l1同等型3多核苷酸和seqidno:8中所列所編碼的178個(gè)氨基酸的預(yù)測(cè)的人pd-l1同等型3多肽(登錄號(hào)xp_006716822.1)。

pd-l1是一種推定的跨膜蛋白質(zhì)，具有推定的人pd-l1同等型胞外域(跨越氨基酸殘基19-238)，螺旋跨膜域(aa239-259)，和推定的胞質(zhì)尾(延伸aa260-290)。在胞外域內(nèi)存在ig樣v型和ig樣c型域(分別為aa19-127和aa133-225)。

pd-l1在幾乎所有類型的淋巴造血細(xì)胞上找到，由t細(xì)胞，b細(xì)胞，巨噬細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞組成性表達(dá)，而且認(rèn)為是pd-1依賴性免疫遏制的主要介導(dǎo)物。pd-l1還由一些非造血細(xì)胞表達(dá)且在許多癌癥中過(guò)表達(dá)，其中它的過(guò)表達(dá)常常與較差的預(yù)后有關(guān)(okazakitetal.,intern.immun.200719(7):813；thompsonrhetal.,cancerres2006,66(7):3381)。

連同結(jié)合pd-1，pd-l1還已經(jīng)顯示結(jié)合cd80或b7-1，這抑制t細(xì)胞活化和細(xì)胞因子生成。

pd-1的另一種已知的配體，pd-l2，也稱作b7-dc，btdc，和cd273，是一種細(xì)胞表面蛋白質(zhì)。pd-l2多核苷酸和多肽是本領(lǐng)域已知的(latchmanetal.(2001)natureimmunol2:261-268；及tsengetal.(2001)jexpmed193:839-845，通過(guò)援引將其每一篇完整收入本文)。pd-l2多核苷酸和多肽的非限制性例子包含seqidno:9(genbank登錄號(hào)nm_025239的核苷酸274-1095)中所列人pd-l2多核苷酸和seqidno:10中所列所編碼的273個(gè)氨基酸的人pd-l2多肽(登錄號(hào)np_079515)。

像pd-l1一樣，pd-l2是一種推定的跨膜蛋白質(zhì)，具有推定的人pd-l2胞外域(跨越aa20-220)，推定的跨膜域(aa221-241)和推定的胞質(zhì)域(aa242-273)。胞外域包含ig樣v型域(aa21-118)和ig樣c2型域(aa122-203)。

pd-l2由抗原呈遞細(xì)胞表達(dá)，包括樹(shù)突細(xì)胞，表達(dá)還在其它非造血組織中找到。

如本文中證明的，同時(shí)抑制hpk1和pd-1軸導(dǎo)致出乎意料地有效的抗腫瘤應(yīng)答。如此，本文中提供的組合物包含pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑。

術(shù)語(yǔ)“pd-1軸拮抗劑”指抑制pd-1軸結(jié)合配偶(即pd-1，pd-l1，pd-l2)與一種或多種其結(jié)合配偶任一的相互作用，使得消除源自pd-1信號(hào)傳導(dǎo)軸上的信號(hào)傳導(dǎo)的t細(xì)胞功能障礙(結(jié)果是恢復(fù)或增強(qiáng)t細(xì)胞功能(例如增殖，細(xì)胞因子生成，靶細(xì)胞殺傷))的分子。如本文中使用的，pd-1軸拮抗劑包括pd-1拮抗劑，pd-l1拮抗劑和pd-l2拮抗劑。

術(shù)語(yǔ)“pd-1拮抗劑”指降低，阻斷，抑制，消除或干擾源自pd-1與一種或多種其結(jié)合配偶(諸如pd-l1，pd-l2)的相互作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子。在一些實(shí)施方案中，pd-1拮抗劑是抑制pd-1與其結(jié)合配偶結(jié)合的分子。在一個(gè)具體的方面，pd-1拮抗劑抑制pd-1與pd-l1和/或pd-l2的結(jié)合。例如，pd-1拮抗劑包括降低，阻斷，抑制，消除或干擾源自pd-1與pd-l1和/或pd-l2相互作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的抗pd-1抗體，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。pd-1拮抗劑包括那些結(jié)合pd-1的拮抗劑(在本文中也稱作pd-1結(jié)合拮抗劑)和降低pd-1表達(dá)的分子，諸如本文中別處描述的沉默元件。

在一個(gè)實(shí)施方案中，pd-1拮抗劑降低負(fù)共刺激信號(hào)，從而增強(qiáng)對(duì)抗原識(shí)別的效應(yīng)器應(yīng)答，所述負(fù)共刺激信號(hào)由t淋巴細(xì)胞上表達(dá)的pd-1細(xì)胞表面蛋白介導(dǎo)或經(jīng)由t淋巴細(xì)胞上表達(dá)的pd-1細(xì)胞表面蛋白。

在一些實(shí)施方案中，pd-1拮抗劑是免疫粘附素，例如包含與恒定區(qū)(例如免疫球蛋白序列的fc區(qū))融合的pd-l1或pd-l2的胞外或pd-1結(jié)合部分的免疫粘附素。在一些實(shí)施方案中，pd-1拮抗劑是amp-224。amp-224，也稱作b7-dcig，是一種pd-l2-fc融合可溶性受體，記載于wo2010/027827和wo2011/066342。

在一些實(shí)施方案中，pd-1拮抗劑是抗pd-1抗體(例如人抗體，人源化抗體，或嵌合抗體)。在一些實(shí)施方案中，抗pd-1抗體是單克隆抗體。在一些實(shí)施方案中，抗pd-1抗體是選自下組的抗體片段：fab，fab’-sh，fv，scfv，和(fab’)2片段。在一些實(shí)施方案中，抗pd-1抗體是人源化抗體。在一些實(shí)施方案中，抗pd-1抗體是人抗體。

在一些實(shí)施方案中，抗pd-1抗體是選自由mdx-1106，merck3475和ct-011組成的組。

在一些實(shí)施方案中，抗pd-1抗體是mdx-1106(記載于wo2006/121168，將其完整收入本文)或其抗原結(jié)合片段。“mdx-1106”的備選名稱包括mdx-1106-04，ono-4538，bms-936558，nivolumab，和在一些實(shí)施方案中，抗pd-1抗體是nivolumab(cas注冊(cè)號(hào)：946414-94-4)。在其它實(shí)施方案中，抗pd-1抗體是結(jié)合能夠結(jié)合mdx-1106的表位或在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與mdx-1106競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體。

在仍有又一個(gè)實(shí)施方案中，作為pd-1拮抗劑有用的抗pd-1抗體包含包含來(lái)自seqidno:23的重鏈氨基酸序列的重鏈和/或包含來(lái)自seqidno:24的輕鏈氨基酸序列的輕鏈。在當(dāng)前公開(kāi)的組合物和方法中有用的抗pd-1抗體還可以是抗pd-1抗體，其包含重鏈和/或輕鏈序列，其中：

(a)重鏈序列與下述重鏈序列具有至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性：

qvqlvesgggvvqpgrslrldckasgitfsnsgmhwvrqapgkglewvaviwydgskryyadsvkgrftisrdnskntlflqmnslraedtavyycatnddywgqgtlvtvssastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslslgk(seqidno:23)，或

(b)輕鏈序列與下述輕鏈序列具有至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性：

eivltqspatlslspgeratlscrasqsvssylawyqqkpgqaprlliydasnratgiparfsgsgsgtdftltisslepedfavyycqqssnwprtfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seqidno:24)。

在其它實(shí)施方案中，抗pd-1抗體是merck3475，也稱作mk-3475，sch-900475，pembrolizumab，lambrolizumab，和(cas注冊(cè)號(hào)：1374853-91-4，而且記載于wo2009/114335和美國(guó)專利no.8,354,509，通過(guò)援引將其每一篇完整收入本文)，或其抗原結(jié)合片段。在其它實(shí)施方案中，抗pd-1抗體是結(jié)合能夠結(jié)合merck3475的表位或在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與merck3475競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體。

在仍有其它實(shí)施方案中，在當(dāng)前公開(kāi)的組合物和方法中有用的抗pd-1抗體是ct-011，也稱作hbat，hbat-1，或pidilizumab(記載于wo2009/101611，通過(guò)援引將其完整收入本文)，或其抗原結(jié)合片段。在其它實(shí)施方案中，抗pd-1抗體是結(jié)合能夠結(jié)合ct-011的表位或在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與ct-011競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體。

抗pd-1抗體可包含人或鼠恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，人恒定區(qū)選自下組：igg1，igg2，igg2，igg3，igg4。在這些實(shí)施方案的一些中，人恒定區(qū)是igg1。在其它實(shí)施方案中，鼠恒定區(qū)選自下組：igg1，igg2a，igg2b，igg3。在這些實(shí)施方案的一些中，鼠恒定區(qū)是igg2a。

在一些實(shí)施方案中，抗pd-1抗體具有降低的或最小的效應(yīng)器功能。在這些實(shí)施方案的一些中，最小效應(yīng)器功能源自“效應(yīng)器較小(effector-less)的fc突變”或無(wú)糖基化(aglycosylation)。在一些實(shí)施方案中，效應(yīng)器較小的fc突變是恒定區(qū)中的n297a或d265a/n297a替代。

在當(dāng)前公開(kāi)的組合物和方法中有用的pd-1軸拮抗劑可包含pd-l1拮抗劑。術(shù)語(yǔ)“pd-l1拮抗劑”指降低，阻斷，抑制，消除或干擾源自pd-l1與一種或多種其結(jié)合配偶(諸如pd-1，b7-1)任一的相互作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子。在一些實(shí)施方案中，pd-l1拮抗劑是抑制pd-l1與其結(jié)合配偶結(jié)合的分子。在一個(gè)具體的方面，pd-l1拮抗劑抑制pd-l1與pd-1和/或b7-1的結(jié)合。

在一些實(shí)施方案中，pd-l1拮抗劑包括降低，阻斷，抑制，消除或干擾源自pd-l1與一種或多種其結(jié)合配偶(諸如pd-1，b7-1)的相互作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的抗pd-l1抗體，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。pd-l1拮抗劑包括結(jié)合pd-l1的分子(本文中也稱作pd-l1結(jié)合拮抗劑)和降低pd-l1表達(dá)的分子，諸如本文中別處描述的沉默元件。

在一個(gè)實(shí)施方案中，pd-l1拮抗劑降低負(fù)共刺激信號(hào)，從而增強(qiáng)對(duì)抗原識(shí)別的效應(yīng)器應(yīng)答，所述負(fù)共刺激信號(hào)由t淋巴細(xì)胞上表達(dá)的pd-1細(xì)胞表面蛋白介導(dǎo)或經(jīng)由t淋巴細(xì)胞上表達(dá)的pd-1細(xì)胞表面蛋白。

在一些實(shí)施方案中，pd-l1拮抗劑是免疫粘附素，諸如包含與免疫球蛋白序列的恒定域(例如fc區(qū))融合的pd-1的胞外或pd-l1結(jié)合部分的多肽。

在一些實(shí)施方案中，pd-l1拮抗劑是抗pd-l1抗體。在一些實(shí)施方案中，抗pd-l1抗體是單克隆抗體。在一些實(shí)施方案中，抗pd-l1抗體是選自下組的抗體片段：fab，fab’-sh，fv，scfv，和(fab’)2片段。在一些實(shí)施方案中，抗pd-l1抗體是人源化抗體。在一些實(shí)施方案中，抗pd-l1抗體是人抗體。

在當(dāng)前公開(kāi)的組合物和方法中有用的抗pd-l1抗體的非限制性例子及其生成方法記載于pct專利申請(qǐng)wo2010/077634a1，通過(guò)援引將其收入本文。

在一些實(shí)施方案中，抗pd-l1抗體選自由yw243.55.s70，mpdl3280a，mdx-1105，和medi4736組成的組。

在一些實(shí)施方案中，抗pd-l1是mdx-1105抗體，也稱作bms-936559，(其記載于wo2007/005874，通過(guò)援引完整收入本文)或其抗原結(jié)合片段。在仍有其它實(shí)施方案中，抗pd-l1抗體是結(jié)合能夠結(jié)合mdx-1105的表位或在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與mdx-1105競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-l1的抗體。

在其它實(shí)施方案中，抗pd-l1抗體是medi4736(其記載于wo2011/066389和us2013/034559，通過(guò)援引將其每一篇完整收入本文)或其抗原結(jié)合片段。在仍有其它實(shí)施方案中，抗pd-l1抗體是結(jié)合能夠結(jié)合medi4736的表位或在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與medi4736競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-l1的抗體。

在一個(gè)實(shí)施方案中，抗pd-l1抗體含有重鏈可變區(qū)多肽，其包含hvr-h1，hvr-h2和hvr-h3序列，其中：

(a)hvr-h1序列是gftfsx1swih(seqidno:29)；

(b)hvr-h2序列是awix2pyggsx3yyadsvkg(seqidno:30)；

(c)hvr-h3序列是rhwpggfdy(seqidno:31)；

進(jìn)一步其中：x1是d或g；x2是s或l；x3是t或s。

在一個(gè)具體的方面，x1是d；x2是s且x3是t。在另一個(gè)方面，多肽進(jìn)一步包含依照下式的hvr間并置的可變區(qū)重鏈框架序列：(hc-fr1)-(hvr-h1)-(hc-fr2)-(hvr-h2)-(hc-fr3)-(hvr-h3)-(hc-fr4)。在又一個(gè)方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在別的方面，框架序列是vh亞組iii共有框架。在又一個(gè)方面，至少一個(gè)框架序列如下：

hc-fr1是evqlvesggglvqpggslrlscaas(seqidno:15)

hc-fr2是wvrqapgkglewv(seqidno:16)

hc-fr3是rftisadtskntaylqmnslraedtavyycar(seqidno:17)

hc-fr4是wgqgtlvtvsa(seqidno:18)。

在又一個(gè)方面，重鏈多肽與可變區(qū)輕鏈進(jìn)一步組合，所述可變區(qū)輕鏈包含hvr-l1，hvr-l2和hvr-l3，其中：

(a)hvr-l1序列是rasqx4x5x6tx7x8a(seqidno:32)；

(b)hvr-l2序列是sasx9lx10s(seqidno:33)；

(c)hvr-l3序列是qqx11x12x13x14px15t(seqidno:34)；

進(jìn)一步其中：x4是d或v；x5是v或i；x6是s或n；x7是a或f；x8是v或l；x9是f或t；x10是y或a；x11是y，g，f，或s；x12是l，y，f或w；x13是y，n，a，t，g，f或i；x14是h，v，p，t或i；x15是a，w，r，p或t。

在又一個(gè)方面，x4是d；x5是v；x6是s；x7是a；x8是v；x9是f；x10是y；x11是y；x12是l；x13是y；x14是h；x15是a。在又一個(gè)方面，輕鏈進(jìn)一步包含依照下式的hvr間并置的可變區(qū)輕鏈框架序列：(lc-fr1)-(hvr-l1)-(lc-fr2)-(hvr-l2)-(lc-fr3)-(hvr-l3)-(lc-fr4)。在又一個(gè)方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在又一個(gè)方面，框架序列是vlκi共有框架。在又一個(gè)方面，至少一個(gè)框架序列如下：

lc-fr1是diqmtqspsslsasvgdrvtitc(seqidno:19)

lc-fr2是wyqqkpgkapklliy(seqidno:20)

lc-fr3是gvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyc(seqidno:21)

lc-fr4是fgqgtkveikr(seqidno:22)。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，在當(dāng)前公開(kāi)的組合物和方法中有用的抗pd-l1抗體包含重鏈和輕鏈可變區(qū)序列，其中：

(a)重鏈包含hvr-h1，hvr-h2和hvr-h3，其中進(jìn)一步：

(i)hvr-h1序列是gftfsx1swih(seqidno:29)，

(ii)hvr-h2序列是awix2pyggsx3yyadsvkg(seqidno:30)

(iii)hvr-h3序列是rhwpggfdy(seqidno:31)，且

(b)輕鏈包含hvr-l1，hvr-l2和hvr-l3，其中進(jìn)一步：

(i)hvr-l1序列是rasqx4x5x6tx7x8a(seqidno:32)，

(ii)hvr-l2序列是sasx9lx10s(seqidno:33)，和

(iii)hvr-l3序列是qqx11x12x13x14px15t(seqidno:34)

進(jìn)一步其中：x1是d或g；x2是s或l；x3是t或s；x4是d或v；x5是v或i；x6是s或n；x7是a或f；x8是v或l；x9是f或t；x10是y或a；x11是y，g，f，或s；x12是l，y，f或w；x13是y，n，a，t，g，f或i；x14是h，v，p，t或i；x15是a，w，r，p或t。

在一個(gè)具體的方面，x1是d；x2是s且x3是t。在另一個(gè)方面，x4是d；x5是v；x6是s；x7是a；x8是v；x9是f；x10是y；x11是y；x12是l；x13是y；x14是h；x15是a。在又一個(gè)方面，x1是d；x2是s且x3是t，x4是d；x5是v；x6是s；x7是a；x8是v；x9是f；x10是y；x11是y；x12是l；x13是y；x14是h且x15是a。

在別的方面，重鏈可變區(qū)包含如下的hvr間并置的一個(gè)或多個(gè)框架序列：(hc-fr1)-(hvr-h1)-(hc-fr2)-(hvr-h2)-(hc-fr3)-(hvr-h3)-(hc-fr4)，并且輕鏈可變區(qū)包含如下的hvr間并置的一個(gè)或多個(gè)框架序列：(lc-fr1)-(hvr-l1)-(lc-fr2)-(hvr-l2)-(lc-fr3)-(hvr-l3)-(lc-fr4)。在又一個(gè)方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在又一個(gè)方面，重鏈框架序列自kabat亞組i，ii，或iii序列衍生。在又一個(gè)方面，重鏈框架序列是vh亞組iii共有框架。在又一個(gè)方面，一個(gè)或多個(gè)重鏈框架序列如下：

hc-fr1evqlvesggglvqpggslrlscaas(seqidno:15)

hc-fr2wvrqapgkglewv(seqidno:16)

hc-fr3rftisadtskntaylqmnslraedtavyycar(seqidno:17)

hc-fr4wgqgtlvtvsa(seqidno:18)。

在又一個(gè)方面，輕鏈框架序列自kabatκi，ii，ii或iv亞組序列衍生。在又一個(gè)方面，輕鏈框架序列是vlκi共有框架。在又一個(gè)方面，一個(gè)或多個(gè)輕鏈框架序列如下：

lc-fr1diqmtqspsslsasvgdrvtitc(seqidno:19)

lc-fr2wyqqkpgkapklliy(seqidno:20)

lc-fr3gvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyc(seqidno:21)

lc-fr4fgqgtkveikr(seqidno:22)。

抗pd-l1抗體可進(jìn)一步包含人或鼠恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，人恒定區(qū)選自下組：igg1，igg2，igg2，igg3，igg4。在這些實(shí)施方案的一些中，人恒定區(qū)是igg1。在其它實(shí)施方案中，鼠恒定區(qū)選自下組：igg1，igg2a，igg2b，igg3。在這些實(shí)施方案的一些中，鼠恒定區(qū)是igg2a。

在一些實(shí)施方案中，抗pd-l1抗體具有降低的或最小的效應(yīng)器功能。在這些實(shí)施方案的一些中，最小效應(yīng)器功能源自“效應(yīng)器較小(effector-less)的fc突變”或無(wú)糖基化(aglycosylation)。在一些實(shí)施方案中，效應(yīng)器較小的fc突變是恒定區(qū)中的n297a或d265a/n297a替代。

在又一個(gè)實(shí)施方案中，在當(dāng)前公開(kāi)的組合物和方法中有用的抗pd-l1抗體包含重鏈和輕鏈可變區(qū)序列，其中：

(a)重鏈進(jìn)一步包含分別與gftfsdswih(seqidno:35)，awispyggstyyadsvkg(seqidno:36)和rhwpggfdy(seqidno:31)具有至少85％序列同一性的hvr-h1，hvr-h2和hvr-h3序列，或(b)輕鏈進(jìn)一步包含分別與rasqdvstava(seqidno:37)，sasflys(seqidno:38)和qqylyhpat(seqidno:39)具有至少85％序列同一性的hvr-l1，hvr-l2和hvr-l3序列。

在一個(gè)具體的方面，序列同一性是86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％。在另一個(gè)方面，重鏈可變區(qū)包含如下的hvr間并置的一個(gè)或多個(gè)框架序列：(hc-fr1)-(hvr-h1)-(hc-fr2)-(hvr-h2)-(hc-fr3)-(hvr-h3)-(hc-fr4)，且輕鏈可變區(qū)包含如下的hvr間并置的一個(gè)或多個(gè)框架序列：(lc-fr1)-(hvr-l1)-(lc-fr2)-(hvr-l2)-(lc-fr3)-(hvr-l3)-(lc-fr4)。在又一個(gè)方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在又一個(gè)方面，重鏈框架序列自kabat亞組i，ii，或iii序列衍生。在又一個(gè)方面，重鏈框架序列是vh亞組iii共有框架。在又一個(gè)方面，一個(gè)或多個(gè)重鏈框架序列如下：

hc-fr1evqlvesggglvqpggslrlscaas(seqidno:15)

hc-fr2wvrqapgkglewv(seqidno:16)

hc-fr3rftisadtskntaylqmnslraedtavyycar(seqidno:17)

hc-fr4wgqgtlvtvsa(seqidno:18)。

在又一個(gè)方面，輕鏈框架序列自kabatκi，ii，ii或iv亞組序列衍生。在又一個(gè)方面，輕鏈框架序列是vlκi共有框架。在又一個(gè)方面，一個(gè)或多個(gè)輕鏈框架序列如下：

lc-fr1diqmtqspsslsasvgdrvtitc(seqidno:19)

lc-fr2wyqqkpgkapklliy(seqidno:20)

lc-fr3gvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyc(seqidno:21)

lc-fr4fgqgtkveikr(seqidno:22)。

抗pd-l1抗體可進(jìn)一步包含人或鼠恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，人恒定區(qū)選自下組：igg1，igg2，igg2，igg3，igg4。在這些實(shí)施方案的一些中，人恒定區(qū)是igg1。在其它實(shí)施方案中，鼠恒定區(qū)選自下組：igg1，igg2a，igg2b，igg3。在這些實(shí)施方案的一些中，鼠恒定區(qū)是igg2a。

在一些實(shí)施方案中，抗pd-l1抗體具有降低的或最小的效應(yīng)器功能。在這些實(shí)施方案的一些中，最小效應(yīng)器功能源自“效應(yīng)器較小的fc突變”或無(wú)糖基化。在一些實(shí)施方案中，效應(yīng)器較小的fc突變是恒定區(qū)中的n297a或d265a/n297a替代。

抗體yw243.55.s70(重和輕鏈可變區(qū)序列分別顯示于seqidno.25和26)是一種抗pd-l1抗體，記載于wo2010/077634a1。在一些實(shí)施方案中，抗pd-l1抗體yw243.55.s70抗體或其抗原結(jié)合片段。在其它實(shí)施方案中，在當(dāng)前公開(kāi)的組合物和方法中有用的抗pd-l1抗體包含結(jié)合能夠結(jié)合yw243.55s70的表位或在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與yw243.55.s70競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-l1的抗體。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗pd-l1抗體包含重鏈和輕鏈可變區(qū)序列，其中：

(a)重鏈可變區(qū)序列與下述重鏈可變區(qū)序列具有至少85％序列同一性：

evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsdswihwvrqapgkglewvawispyggstyyadsvkgrftisadtskntaylqmnslraedtavyycarrhwpggfdywgqgtlvtvsa(seqidno:25)，或

(b)輕鏈可變區(qū)序列與下述輕鏈可變區(qū)序列具有至少85％序列同一性：

diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdvstavawyqqkpgkapklliysasflysgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqylyhpatfgqgtkveikr(seqidno:26)。

在一個(gè)具體的方面，序列同一性是86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％。在另一個(gè)方面，重鏈可變區(qū)包含如下的hvr間并置的一個(gè)或多個(gè)框架序列：(hc-fr1)-(hvr-h1)-(hc-fr2)-(hvr-h2)-(hc-fr3)-(hvr-h3)-(hc-fr4)，且輕鏈可變區(qū)包含如下的hvr間并置的一個(gè)或多個(gè)框架序列：(lc-fr1)-(hvr-l1)-(lc-fr2)-(hvr-l2)-(lc-fr3)-(hvr-l3)-(lc-fr4)。在又一個(gè)方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在又一個(gè)方面，重鏈框架序列自kabat亞組i，ii，或iii序列衍生。在又一個(gè)方面，重鏈框架序列是vh亞組iii共有框架。在又一個(gè)方面，一個(gè)或多個(gè)重鏈框架序列如下：

hc-fr1evqlvesggglvqpggslrlscaas(seqidno:15)

hc-fr2wvrqapgkglewv(seqidno:16)

hc-fr3rftisadtskntaylqmnslraedtavyycar(seqidno:17)

hc-fr4wgqgtlvtvsa(seqidno:18)。

在又一個(gè)方面，輕鏈框架序列自kabatκi，ii，ii或iv亞組序列衍生。在又一個(gè)方面，輕鏈框架序列是vlκi共有框架。在又一個(gè)方面，一個(gè)或多個(gè)輕鏈框架序列如下：

lc-fr1diqmtqspsslsasvgdrvtitc(seqidno:19)

lc-fr2wyqqkpgkapklliy(seqidno:20)

lc-fr3gvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyc(seqidno:21)

lc-fr4fgqgtkveikr(seqidno:22)。

抗pd-l1抗體可進(jìn)一步包含人或鼠恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，人恒定區(qū)選自下組：igg1，igg2，igg2，igg3，igg4。在這些實(shí)施方案的一些中，人恒定區(qū)是igg1。在其它實(shí)施方案中，鼠恒定區(qū)選自下組：igg1，igg2a，igg2b，igg3。在這些實(shí)施方案的一些中，鼠恒定區(qū)是igg2a。

在一些實(shí)施方案中，抗pd-l1抗體具有降低的或最小的效應(yīng)器功能。在這些實(shí)施方案的一些中，最小效應(yīng)器功能源自“效應(yīng)器較小的fc突變”或無(wú)糖基化。在一些實(shí)施方案中，效應(yīng)器較小的fc突變是恒定區(qū)中的n297a或d265a/n297a替代。

在其它實(shí)施方案中，抗pd-l1抗體是mpdl3280a(其記載于wo2010/077634，通過(guò)援引完整收入本文)或其抗原結(jié)合片段。在仍有其它實(shí)施方案中，抗pd-l1抗體是結(jié)合能夠結(jié)合mpdl3280a的表位或在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與mpdl3280a競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-l1的抗體。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，在當(dāng)前公開(kāi)的組合物和方法中有用的抗pd-l1抗體包含重鏈和輕鏈可變區(qū)序列，其中：

(a)重鏈可變區(qū)序列與下述重鏈可變區(qū)序列具有至少85％序列同一性：

evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsdswihwvrqapgkglewvawispyggstyyadsvkgrftisadtskntaylqmnslraedtavyycarrhwpggfdywgqgtlvtvss(seqidno:27)，或

(b)輕鏈可變區(qū)序列與下述輕鏈可變區(qū)序列具有至少85％序列同一性：

diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdvstavawyqqkpgkapklliysasflysgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqylyhpatfgqgtkveikr(seqidno:26)。

在一個(gè)具體的方面，序列同一性是86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％。在另一個(gè)方面，重鏈可變區(qū)包含如下的hvr間并置的一個(gè)或多個(gè)框架序列：(hc-fr1)-(hvr-h1)-(hc-fr2)-(hvr-h2)-(hc-fr3)-(hvr-h3)-(hc-fr4)，且輕鏈可變區(qū)包含如下的hvr間并置的一個(gè)或多個(gè)框架序列：(lc-fr1)-(hvr-l1)-(lc-fr2)-(hvr-l2)-(lc-fr3)-(hvr-l3)-(lc-fr4)。在又一個(gè)方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在又一個(gè)方面，重鏈框架序列自kabat亞組i，ii，或iii序列衍生。在又一個(gè)方面，重鏈框架序列是vh亞組iii共有框架。在又一個(gè)方面，一個(gè)或多個(gè)重鏈框架序列如下：

hc-fr1evqlvesggglvqpggslrlscaas(seqidno:15)

hc-fr2wvrqapgkglewv(seqidno:16)

hc-fr3rftisadtskntaylqmnslraedtavyycar(seqidno:17)

hc-fr4wgqgtlvtvsa(seqidno:28)。

在又一個(gè)方面，輕鏈框架序列自kabatκi，ii，ii或iv亞組序列衍生。在又一個(gè)方面，輕鏈框架序列是vlκi共有框架。在又一個(gè)方面，一個(gè)或多個(gè)輕鏈框架序列如下：

lc-fr1diqmtqspsslsasvgdrvtitc(seqidno:19)

lc-fr2wyqqkpgkapklliy(seqidno:20)

lc-fr3gvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyc(seqidno:21)

lc-fr4fgqgtkveikr(seqidno:22)。

在仍有又一個(gè)實(shí)施方案中，在當(dāng)前公開(kāi)的組合物和方法中有用的抗pd-l1抗體包含包含來(lái)自seqidno:40的重鏈氨基酸序列的重鏈和/或包含來(lái)自seqidno:41的輕鏈氨基酸序列的輕鏈。在仍有又一個(gè)實(shí)施方案中，抗pd-1抗體包含重鏈和/或輕鏈序列，其中：

(a)重鏈序列與下述重鏈序列具有至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性：

evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsdswihwvrqapgkglewvawispyggstyyadsvkgrftisadtskntaylqmnslraedtavyycarrhwpggfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqyastyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(seqidno:40)，或

(b)輕鏈序列與下述輕鏈序列具有至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性：

diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdvstavawyqqkpgkapklliysasflysgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqylyhpatfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seqidno:41)。

抗pd-l1抗體可進(jìn)一步包含人或鼠恒定區(qū)。在一些實(shí)施方案中，人恒定區(qū)選自下組：igg1，igg2，igg2，igg3，igg4。在這些實(shí)施方案的一些中，人恒定區(qū)是igg1。在其它實(shí)施方案中，鼠恒定區(qū)選自下組：igg1，igg2a，igg2b，igg3。在這些實(shí)施方案的一些中，鼠恒定區(qū)是igg2a。

在一些實(shí)施方案中，抗pd-l1抗體具有降低的或最小的效應(yīng)器功能。在這些實(shí)施方案的一些中，最小效應(yīng)器功能源自“效應(yīng)器較小(effector-less)的fc突變”或無(wú)糖基化(aglycosylation)。在一些實(shí)施方案中，效應(yīng)器較小的fc突變是恒定區(qū)中的n297a或d265a/n297a替代。

在其它實(shí)施方案中，在組合物和方法中有用的pd-1軸拮抗劑包含pd-l2拮抗劑。術(shù)語(yǔ)“pd-l2拮抗劑”指降低，阻斷，抑制，消除或干擾源自pd-l2與一種或多種其結(jié)合配偶(諸如pd-1)任一的相互作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的分子。在一些實(shí)施方案中，pd-l2拮抗劑是抑制pd-l2與其結(jié)合配偶結(jié)合的分子。在一個(gè)具體的方面，pd-l2拮抗劑抑制pd-l2與pd-1的結(jié)合。在一些實(shí)施方案中，pd-l2拮抗劑包括降低，阻斷，抑制，消除或干擾源自pd-l2與一種或多種其結(jié)合配偶(諸如pd-1)任一的相互作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的抗pd-l2抗體，其抗原結(jié)合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。pd-l2拮抗劑包括結(jié)合pd-l2的分子(本文中也稱作pd-l2結(jié)合拮抗劑)和降低pd-l2表達(dá)的分子，諸如本文中別處描述的沉默元件。

在一個(gè)實(shí)施方案中，pd-l2拮抗劑降低負(fù)共刺激信號(hào)，從而增強(qiáng)對(duì)抗原識(shí)別的效應(yīng)器應(yīng)答，所述負(fù)共刺激信號(hào)由t淋巴細(xì)胞上表達(dá)的pd-1細(xì)胞表面蛋白介導(dǎo)或經(jīng)由t淋巴細(xì)胞上表達(dá)的pd-1細(xì)胞表面蛋白。

在一些實(shí)施方案中，pd-l2拮抗劑是免疫粘附素，諸如包含與免疫球蛋白序列的恒定域(例如fc區(qū))融合的pd-1的胞外或pd-l2結(jié)合部分的多肽。

在一些實(shí)施方案中，抗pd-l2抗體是單克隆抗體。在一些實(shí)施方案中，抗pd-l2抗體是選自下組的抗體片段：fab，fab’-sh，fv，scfv，和(fab’)2片段。在一些實(shí)施方案中，抗pd-l2抗體是人源化抗體。在一些實(shí)施方案中，抗pd-l2抗體是人抗體。

在仍有又一個(gè)具體方面，本文中描述的抗體(諸如抗pd-1抗體，抗pd-l1抗體，或抗pd-l2抗體)進(jìn)一步包含人或鼠恒定區(qū)。在仍有又一個(gè)方面，人恒定區(qū)選自下組：igg1，igg2，igg2，igg3，igg4。在仍有又一個(gè)具體方面，人恒定區(qū)是igg1。在仍有又一個(gè)方面，鼠恒定區(qū)選自下組：igg1，igg2a，igg2b，igg3。在仍有又一個(gè)方面，鼠恒定區(qū)是igg2a。在仍有又一個(gè)具體方面，抗體具有降低的或最小的效應(yīng)器功能。在仍有又一個(gè)具體方面，最小效應(yīng)器功能源自原核細(xì)胞中的生成。在仍有又一個(gè)具體方面，最小的效應(yīng)器功能源自“效應(yīng)器較小的fc突變”或無(wú)糖基化。在仍有又一個(gè)方面，效應(yīng)器較小的fc突變是恒定區(qū)中的n297a或d265a/n297a替代。

在仍有又一個(gè)方面，本文中提供的是編碼本文中描述的任何抗pd-1，抗pd-l1，或抗pd-l2抗體的核酸。在一些實(shí)施方案中，核酸進(jìn)一步包含適合于表達(dá)核酸的載體，所述核酸編碼所描述的抗pd-l1，抗pd-1，或抗pd-l2抗體之任一種。在仍有又一個(gè)具體方面，載體進(jìn)一步包含適合于表達(dá)核酸的宿主細(xì)胞。在仍有又一個(gè)具體方面，宿主細(xì)胞是真核細(xì)胞或原核細(xì)胞。在仍有又一個(gè)具體方面，真核細(xì)胞是哺乳動(dòng)物細(xì)胞，諸如中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(cho)。

可以使用本領(lǐng)域中已知的方法，例如通過(guò)如下的方法生成抗體或其抗原結(jié)合片段，所述方法包括在適合于生成此類抗體的條件下培養(yǎng)含有核酸的宿主細(xì)胞，并回收抗體，所述核酸編碼適合于表達(dá)的形式的先前描述的抗pd-l1，抗pd-1，或抗pd-l2抗體之任一種。

在一些實(shí)施方案中，pd-1拮抗劑，pd-l1拮抗劑，或pd-l2拮抗劑包含寡肽?！皃d-1寡肽”，“pd-l1寡肽”，或“pd-l2寡肽”是分別結(jié)合(在一些實(shí)施方案中，特異性結(jié)合)pd-1，pd-l1或pd-l2負(fù)共刺激多肽的寡肽，分別包括受體，配體或信號(hào)傳導(dǎo)組分，如本文中描述的。此類寡肽可以使用已知的寡肽合成方法學(xué)化學(xué)合成或者可以使用重組技術(shù)制備并純化。此類寡肽的長(zhǎng)度通常是至少約5個(gè)氨基酸，或者長(zhǎng)度為至少約6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，60，61，62，63，64，65，66，67，68，69，70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80，81，82，83，84，85，86，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99，或100個(gè)氨基酸或更多?？梢允褂霉募夹g(shù)鑒定此類寡肽。在這點(diǎn)上，注意到用于對(duì)寡肽文庫(kù)篩選能夠特異性結(jié)合多肽靶物的寡肽的技術(shù)是本領(lǐng)域中公知的(見(jiàn)例如美國(guó)專利no.5,556,762，5,750,373，4,708,871，4,833,092，5,223,409，5,403,484，5,571,689，5,663,143；pct公開(kāi)文本no.wowo84/03506和wo84/03564；geysenetal.,proc.natl.acad.sci.u.s.a.,81:3998-4002(1984)；geysenetal.,proc.natl.acad.sci.u.s.a.,82:178-182(1985)；geysenetal.,insyntheticpeptidesasantigens,130-149(1986)；geysenetal.,j.immunol.meth.,102:259-274(1987)；schoofsetal.,j.immunol.,140:611-616(1988)；cwirla,s.e.etal.proc.natl.acad.sci.usa,87:6378(1990)；lowman,h.b.etal.biochemistry,30:10832(1991)；clackson,t.etal.nature,352:624(1991)；marks,j.d.etal.,j.mol.biol.,222:581(1991)；kang,a.s.etal.proc.natl.acad.sci.usa,88:8363(1991)；及smith,g.p.,currentopin.biotechnol.,2:668(1991))。

b.hpk1拮抗劑

造血祖先激酶1或hpk1，也稱作絲裂原活化的蛋白質(zhì)激酶激酶激酶激酶1或map4k1，是ste20相關(guān)絲氨酸/蘇氨酸激酶的生發(fā)中心激酶亞家族的一個(gè)成員。hpk1多核苷酸和多肽是本領(lǐng)域已知的(huetal.(1996)genesdev.10:2251-2264，通過(guò)援引將其完整收入本文)。hpk1多核苷酸和多肽的非限制性例子包含seqidno:11(genbank登錄號(hào)nm_007181.5的核苷酸141-2642)中所列人hpk1多核苷酸和所編碼的seqidno:12中所列的人hpk1多肽(登錄號(hào)np_009112.1)。人中存在hpk1的一種較短的821個(gè)氨基酸的同等型，其編碼序列和氨基酸序列分別在seqidno:13和14(分別為genbank登錄號(hào)nm_001042600.2的核苷酸141-2606和genbank登錄號(hào)np_001036065.1)中列出。

hpk1多肽包含多個(gè)保守的結(jié)構(gòu)基序。為了容易提及，會(huì)將它們涉及較長(zhǎng)的人hpk1同等型討論此類基序，較長(zhǎng)的人hpk1同等型在seqidno:12中列出，包含833個(gè)氨基酸殘基，且在圖1中描繪。hpk1多肽包含氨基端ste20樣激酶域，其跨越氨基酸殘基17-293，包括來(lái)自氨基酸殘基23-46的atp結(jié)合位點(diǎn)。激酶域的后面是四個(gè)富脯氨酸(pr)基序，它們充當(dāng)含sh3蛋白(諸如crkl，grb2，hip-55，gads，nck，和crk)的結(jié)合位點(diǎn)。四個(gè)pr基序分別跨越氨基酸殘基308-407，394-402，432-443，和468-477。hpk1響應(yīng)tcr或bcr刺激而變成磷酸化的和活化的。tcr和bcr誘導(dǎo)的第381位酪氨酸(位于pr1和pr2之間)磷酸化介導(dǎo)經(jīng)由slp-76或blnksh2域?qū)細(xì)胞中的slp-76或b細(xì)胞中的blnk的結(jié)合，而且是激酶活化所需要的。在hpk1的c末端中找到的citron同源域(大致跨越殘基495-800)可能起調(diào)節(jié)域的作用，而且可能牽涉高分子相互作用。

雖然hpk1在出生后在所有胚胎組織中表達(dá)，但是它的表達(dá)主要局限于造血器官和細(xì)胞。hpk1通過(guò)磷酸化和活化map3k蛋白(包括mekk1，mlk3和tak1)發(fā)揮map4k的功能，導(dǎo)致mapkjnk活化。

hpk1是t和b細(xì)胞應(yīng)答的負(fù)調(diào)節(jié)物。在t細(xì)胞中，認(rèn)為hpk1通過(guò)降低信號(hào)傳導(dǎo)微簇的持久性從而負(fù)調(diào)節(jié)t細(xì)胞活化，其在ser376處磷酸化slp76(dibartoloetal.(2007)jem204:681-691)并在thr254處磷酸化gads，這導(dǎo)致募結(jié)合磷酸化slp76和gads的14-3-3蛋白質(zhì)，自含lat微簇釋放slp76-gads-14-3-3復(fù)合物(lasserreetal.(2011)jcellbiol195(5):839-853)。hpk1還能響應(yīng)前列腺素e2而變成活化的，前列腺素e2常常由腫瘤分泌，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞逃避免疫系統(tǒng)。

當(dāng)前公開(kāi)的組合物包含pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑二者，能用于增強(qiáng)免疫應(yīng)答及通過(guò)抑制腫瘤生長(zhǎng)來(lái)治療癌癥。

如本文中使用的，“hpk1拮抗劑”是降低，抑制，或以其它方式減小hpk1的一種或多種生物學(xué)活性(例如絲氨酸/蘇氨酸激酶活性，在tcr活化后募集tcr復(fù)合物，與蛋白質(zhì)結(jié)合配偶諸如slp76相互作用)的分子。使用hpk1拮抗劑實(shí)現(xiàn)的拮抗并非必然指示完全消除hpk1活性。反而，活性可以與適宜對(duì)照相比降低統(tǒng)計(jì)上顯著的量，包括例如降低至少約5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，45％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，95％或100％的hpk1活性。在一些實(shí)施方案中，hpk1拮抗劑降低，抑制，或以其它方式減小hpk1的絲氨酸/蘇氨酸激酶活性。在這些實(shí)施方案的一些中，hpk1拮抗劑降低，抑制，或以其它方式減小hpk1介導(dǎo)的slp76和/或gads磷酸化。

如本文中顯示的，任何hpk1抑制在與pd1軸拮抗劑組合時(shí)提供卓越的抗腫瘤功效。有用的hpk1拮抗劑，也可以鑒定為絲裂原活化的蛋白質(zhì)激酶激酶激酶激酶1拮抗劑或map4k1拮抗劑，包括那些如上文描述的及如通過(guò)本領(lǐng)域的任何測(cè)定方法測(cè)定的顯示抑制的。特異性hpk1抑制劑包括那些在本文中別處描述的mc38模型中展現(xiàn)抑制活性的。在特別有用的實(shí)施方案中，hpk1抑制劑是如本文中別處描述的小分子抑制劑。許多此類抑制劑是已知化合物。已知化合物的例行篩選能鑒定出作為hpk1抑制劑的化合物?；衔锇ńY(jié)合酶的鉸鏈區(qū)的雜芳基化合物。hpk1拮抗劑可以直接或間接結(jié)合hpk1，抑制它的活性，或hpk1拮抗劑可以發(fā)揮功能降低或抑制hpk1，諸如hpk1沉默元件表達(dá)的，在本文中別處有更加信息的記載。

例如，hpk1拮抗劑包括降低，阻斷，抑制，消除或干擾hpk1生物學(xué)活性的抗hpk1胞內(nèi)抗體和其它分子。

hpk1拮抗劑可以是小分子，它可以是有機(jī)或無(wú)機(jī)化合物(即包括雜原子有機(jī)和有機(jī)金屬化合物)。hpk1拮抗劑還可以是肽，肽模擬物，氨基酸，氨基酸類似物，多核苷酸，多核苷酸類似物，核苷酸，核苷酸類似物，或脂質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，小分子具有小于約10,000，5,000，1,000，或500克每摩爾的重量。

而且，hpk1拮抗劑可以是或不是特異性hpk1拮抗劑。特異性hpk1拮抗劑以在統(tǒng)計(jì)上比該拮抗劑對(duì)任何其它蛋白質(zhì)(例如其它絲氨酸/蘇氨酸激酶)的抑制效果要大的量降低hpk1的生物學(xué)活性。在某些實(shí)施方案中，hpk1拮抗劑特異性抑制hpk1的絲氨酸/蘇氨酸激酶活性。在這些實(shí)施方案的一些中，hpk1拮抗劑對(duì)hpk1的ic50是該hpk1拮抗劑對(duì)另一種絲氨酸/蘇氨酸激酶或其它類型的激酶(例如酪氨酸激酶)的ic50的約90％，80％，70％，60％，50％，40％，30％，20％，10％，0.1％，0.01％，0.001％，或更少。

抑制hpk1的絲氨酸-蘇氨酸激酶活性的hpk1拮抗劑可以是阻止底物(atp或蛋白質(zhì)底物)結(jié)合的競(jìng)爭(zhēng)性(competitive)抑制劑，無(wú)論底物(atp或蛋白質(zhì)底物)是否結(jié)合都結(jié)合酶的非競(jìng)爭(zhēng)性(non-competitive)抑制劑，或只在結(jié)合底物(atp和蛋白質(zhì)底物)后才結(jié)合酶的不競(jìng)爭(zhēng)性(un-competitive)抑制劑。hpk1拮抗劑可以是結(jié)合hpk1上除活性位點(diǎn)以外的位點(diǎn)的變構(gòu)抑制劑。

拮抗劑可以作為競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑發(fā)揮功能，通過(guò)在底物結(jié)合域(atp結(jié)合域或蛋白質(zhì)底物結(jié)合域)內(nèi)結(jié)合，如此阻斷底物(atp或蛋白質(zhì)底物)的結(jié)合?；蛘?，競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑可以作為變構(gòu)抑制劑發(fā)揮功能，而且結(jié)合游離酶上底物結(jié)合位點(diǎn)以外的位點(diǎn)，阻斷底物(atp或蛋白質(zhì)底物)的結(jié)合。

在一些實(shí)施方案中，hpk1拮抗劑是hpk1的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑。在這些實(shí)施方案的一些中，hpk1拮抗劑是當(dāng)hpk1處于活性構(gòu)象時(shí)結(jié)合hpk1的atp結(jié)合位點(diǎn)的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，抑制atp的結(jié)合并作為atp模擬物發(fā)揮功能。在其它實(shí)施方案中，hpk1拮抗劑結(jié)合hpk1的無(wú)活性構(gòu)象。

hpk1小分子拮抗劑是本領(lǐng)域已知的，而且包括但不限于staurosporine，bosutinib，sunitinib，lestaurtinib，crizotinib，foretinib，dovitinib，和kw-2449(davisetal.(2011)natbiotechnol29(11):1046-1051；wodickaetal.(2010)chembiol17(11):1241-1249，通過(guò)援引將其每一篇完整收入本文)。

由于hpk1的胞質(zhì)定位，抗體不是有效的hpk1拮抗劑。然而，在一些實(shí)施方案中，hpk1拮抗劑可以是編碼胞內(nèi)抗體的多核苷酸。當(dāng)將多核苷酸導(dǎo)入表達(dá)hpk1的細(xì)胞并在該細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時(shí)，胞內(nèi)抗體結(jié)合hpk1并拮抗它的活性。胞內(nèi)抗體結(jié)合hpk1并抑制生物學(xué)活性，諸如激酶活性，在tcr活化后募集至tcr復(fù)合物，或與蛋白質(zhì)結(jié)合配偶(諸如slp76)相互作用。

在其它實(shí)施方案中，hpk1拮抗劑是編碼能夠結(jié)合hpk1并抑制其活性的肽的多核苷酸。當(dāng)將此類多核苷酸導(dǎo)入表達(dá)hpk1的細(xì)胞并在該細(xì)胞內(nèi)表達(dá)時(shí)，細(xì)胞內(nèi)肽結(jié)合并抑制hpk1活性。

在還有其它實(shí)施方案中，hpk1拮抗劑是介導(dǎo)定點(diǎn)誘變的多核苷酸，經(jīng)由hpk1基因的同源重組生成激酶失效hpk1蛋白。例如，如本文中證明的，人和鼠hpk1二者中氨基酸第46位處保守賴氨酸變成谷氨酸的突變產(chǎn)生激酶失效hpk1蛋白質(zhì)。

hpk1和/或pd-1軸拮抗劑可包含沉默元件。如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“沉默元件”指在表達(dá)或?qū)爰?xì)胞時(shí)能夠降低或消除靶多核苷酸序列或由其編碼的多肽的表達(dá)水平的多核苷酸。在一些實(shí)施方案中，沉默元件可以可操作連接至啟動(dòng)子以容許該沉默元件在細(xì)胞中表達(dá)。

在一個(gè)實(shí)施方案中，沉默元件編碼結(jié)合hpk1，pd-1，pd-l1，或pd-l2基因，導(dǎo)致該基因表達(dá)降低的鋅指蛋白。在特定的實(shí)施方案中，鋅指蛋白結(jié)合hpk1，pd-1，pd-l1，或pd-l2基因的調(diào)節(jié)區(qū)。在其它實(shí)施方案中，鋅指蛋白結(jié)合編碼hpk1，pd-1，pd-l1，或pd-l2的信使rna并阻止它的翻譯。選擇鋅指蛋白所靶向的位點(diǎn)的方法已有記載，例如美國(guó)專利no.6,453,242，通過(guò)援引將其收入本文。

在一些實(shí)施方案中，分別通過(guò)破壞hpk1，pd-1，pd-l1，或pd-l2基因來(lái)降低或消除hpk1，pd-1，pd-l1，或pd-l2的活性。可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法來(lái)破壞hpk1，pd-1，pd-l1，或pd-l2基因。例如，在一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽來(lái)破壞基因。在另一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)使用隨機(jī)或靶向誘變來(lái)誘變細(xì)胞，并選擇具有降低的hpk1，pd-1，pd-l1，或pd-l2活性的細(xì)胞來(lái)破壞基因。

在一個(gè)實(shí)施方案中，使用轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽來(lái)降低或消除hpk1，pd-1，pd-l1，或pd-l2的活性。轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽包含在內(nèi)源hpk1，pd-1，pd-l1，或pd-l2基因內(nèi)插入轉(zhuǎn)座子以降低或消除hpk1，pd-1，pd-l1，或pd-l2的表達(dá)。在這個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)在hpk1，pd-1，pd-l1，或pd-l2基因的調(diào)節(jié)區(qū)或編碼區(qū)內(nèi)插入轉(zhuǎn)座子來(lái)降低或消除hpk1，pd-1，pd-l1，或pd-l2基因的表達(dá)?？梢苑謩e使用在hpk1，pd-1，pd-l1，或pd-l2基因的外顯子，內(nèi)含子，5′或3′非翻譯序列，啟動(dòng)子，或任何其它調(diào)節(jié)序列內(nèi)的轉(zhuǎn)座子來(lái)降低或消除所編碼的hpk1，pd-1，pd-l1，或pd-l2的表達(dá)和/或活性。在這些實(shí)施方案中，沉默元件包含或編碼能在hpk1，pd-1，pd-l1，或pd-l2基因內(nèi)插入的靶向轉(zhuǎn)座子。

在其它實(shí)施方案中，沉默元件包含對(duì)于經(jīng)由hpk1，pd-1，pd-l1，或pd-l2基因的某個(gè)區(qū)域內(nèi)的同源重組的定點(diǎn)誘變有用的核苷酸序列?；蛲怙@子中的插入突變通常導(dǎo)致無(wú)效突變體?？梢允褂昧硗獾挠糜诮档突蛳齢pk1，pd-1，pd-l1，或pd-l2的活性或表達(dá)的方法，諸如那些涉及基于啟動(dòng)子的沉默的。參見(jiàn)例如metteetal.(2000)emboj.19:5194-5201；sijenetal.(2001)curr.biol.11:436-440；jonesetal.(2001)curr.biol.11:747-757，通過(guò)援引將其每一篇完整收入本文。

沉默元件可包含或編碼反義寡核苷酸或干擾rna(rnai)。術(shù)語(yǔ)“干擾rna”或“rnai”指能進(jìn)入rnai途徑并由此降低靶基因表達(dá)的任何rna分子，諸如小rna(srna)，短干擾rna(sirna)，micro-rna(mirna)，雙鏈rna(dsrna)，發(fā)夾rna，短發(fā)夾rna(shrna)，和其它。參見(jiàn)例如meisterandtuschl(2004)nature431:343-349；bonettaetal.(2004)naturemethods1:79-86；chuangandmeyerowitz(2000)proc.natl.acad.sci.usa97:4985-4990；mcmanusetal.(2002)naturereviewsgenetics3:737-747；dykxhoornetal.(2003)naturereviewsmolecularcellbiology4:457-467。

還有多種計(jì)算機(jī)程序可用于輔助選擇sirna序列，例如來(lái)自ambion(web站點(diǎn)urlwww.ambion.com)，在web站點(diǎn)urlwww.sinc.sunysb.edu/stu/shilin/rnai.html。還可采用的另外的設(shè)計(jì)考慮事項(xiàng)記載于semizarovetal.proc.natl.acad.sci.100:6347-6352。

在一些實(shí)施方案中，沉默元件包含或編碼反義寡核苷酸?！胺戳x寡核苷酸”是與靶基因整個(gè)或部分互補(bǔ)的單鏈核酸序列，而且可以是dna，或它的rna對(duì)應(yīng)物(即其中dna的t殘基在rna對(duì)應(yīng)物中為u殘基)。

在當(dāng)前公開(kāi)的組合物和方法中有用的反義寡核苷酸設(shè)計(jì)成與靶rna(例如mrna)或dna可雜交的。例如，可使用與mrna分子雜交的寡核苷酸(例如dna寡核苷酸)來(lái)靶向mrna進(jìn)行rna酶h消化?；蛘撸墒褂门cmrna分子的翻譯起始位點(diǎn)雜交的寡核苷酸來(lái)阻止mrna翻譯。在另一種辦法中，可施用與雙鏈dna結(jié)合的寡核苷酸。此類寡核苷酸能形成三聯(lián)構(gòu)建物并抑制dna轉(zhuǎn)錄。叁螺旋配對(duì)阻止雙螺旋充分打開(kāi)以容許聚合酶，轉(zhuǎn)錄因子，或調(diào)節(jié)分子結(jié)合。可以使用叁螺旋形成的堿基配對(duì)規(guī)則和靶基因的核苷酸序列來(lái)構(gòu)建此類寡核苷酸。

作為非限制性例子，可以將反義寡核苷酸靶向成與下述區(qū)域雜交：mrna帽區(qū)，翻譯起始位點(diǎn)，翻譯終止位點(diǎn)，轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)，轉(zhuǎn)錄終止位點(diǎn)，聚腺苷酸化信號(hào)，3'非翻譯區(qū)，5'非翻譯區(qū)，5'編碼區(qū)，中間編碼區(qū)，和3'編碼區(qū)。在一些實(shí)施方案中，互補(bǔ)寡核苷酸設(shè)計(jì)成與基因的最獨(dú)特5'序列雜交，包括任何跨越5'編碼序列的約15-35個(gè)核苷酸。可以通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)來(lái)生成反義核酸(參見(jiàn)例如shewmaker等人，美國(guó)專利no.5,107,065)。可以使用oligo軟件來(lái)設(shè)計(jì)適宜的寡核苷酸(molecularbiologyinsights,inc.,cascade,colo.；http://www.oligo.net)。

當(dāng)前公開(kāi)的方法和組合物中采用的沉默元件可包含用于dsrna(例如shrna)或反義rna的dna模板。在此類實(shí)施方案中，在表達(dá)盒中找到編碼dsrna或反義rna的dna分子。另外，可以在表達(dá)盒中找到包含多肽或抗體(例如抑制hpk1，pd-1，pd-l1，或pd-l2活性的抗體)的編碼序列的多核苷酸。

表達(dá)盒可包含一種或多種與編碼沉默元件，多肽，或抗體的核苷酸序列可操作連接的推動(dòng)多核苷酸或多肽表達(dá)的調(diào)節(jié)序列?！罢{(diào)節(jié)序列”指位于編碼序列上游(5'非編碼序列)，之內(nèi)，或下游(3'非編碼序列)且影響轉(zhuǎn)錄，rna加工或穩(wěn)定性，或相關(guān)編碼序列翻譯的核苷酸序列。參見(jiàn)例如goeddel(1990)ingeneexpressiontechnology:methodsinenzymology185(academicpress,sandiego,california)。調(diào)節(jié)序列可包括啟動(dòng)子，翻譯前導(dǎo)序列，內(nèi)含子，和聚腺苷酸化識(shí)別序列。

調(diào)節(jié)序列與編碼序列可操作連接以容許由該編碼序列編碼的多肽表達(dá)或容許所編碼的多核苷酸沉默元件表達(dá)。“可操作連接”意圖表示編碼序列(即編碼沉默元件的dna或感興趣多肽的編碼序列)以容許核苷酸序列表達(dá)的方式與調(diào)節(jié)序列功能性連接?？刹僮鬟B接的元件可以是連續(xù)的或非連續(xù)的。多核苷酸可以以有義或反義取向與調(diào)節(jié)序列可操作連接。

調(diào)節(jié)區(qū)(即啟動(dòng)子，轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)區(qū)，和翻譯終止區(qū))和/或編碼多核苷酸對(duì)于多核苷酸所導(dǎo)入的細(xì)胞或彼此可以是天然的/類似的。或者，調(diào)節(jié)區(qū)和/或編碼多核苷酸對(duì)于多核苷酸所導(dǎo)入的細(xì)胞或彼此可以是異源的。

如本文中使用的，提到某序列的“異源”指序列源自外來(lái)物種，或者，如果源自相同物種的話，通過(guò)有意的人為干預(yù)在組成和/或基因座上相對(duì)于它的天然形式得到實(shí)質(zhì)性修飾。例如，與異源多核苷酸可操作連接的啟動(dòng)子來(lái)自與衍生該多核苷酸的物種不同的物種，或者，如果源自相同/類似物種的話，之一或二者相對(duì)于它們的最初形式和/或基因座得到實(shí)質(zhì)性修飾，或者啟動(dòng)子不是可操作連接的多核苷酸的天然啟動(dòng)子?；蛘?，對(duì)于細(xì)胞而言異源的序列指序列源自外來(lái)物種，或者，如果源自相同物種的話，在細(xì)胞中通過(guò)有意的人為干預(yù)在組成和/或基因座上相對(duì)于它的天然形式得到實(shí)質(zhì)性修飾。

一般而言，在重組dna技術(shù)中有用的表達(dá)盒常常處于質(zhì)粒(載體)的形式。然而，可以使用其它形式的表達(dá)盒，諸如病毒載體(例如復(fù)制缺陷型逆轉(zhuǎn)錄病毒，腺病毒，慢病毒，和腺伴隨病毒)。參見(jiàn)例如美國(guó)公開(kāi)文本2005214851，通過(guò)援引收入本文。通過(guò)將載體包裝入病毒粒體中，之后與細(xì)胞接觸來(lái)轉(zhuǎn)導(dǎo)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，特別是慢病毒載體。

表達(dá)盒可進(jìn)一步包含選擇標(biāo)志。如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“選擇標(biāo)志”包含當(dāng)在細(xì)胞中表達(dá)時(shí)容許選擇經(jīng)載體轉(zhuǎn)化的細(xì)胞的任何多核苷酸。

此類方法涉及將多肽或多核苷酸導(dǎo)入細(xì)胞中。“導(dǎo)入”意圖表示以使得序列實(shí)現(xiàn)到達(dá)細(xì)胞的內(nèi)部的方式將多核苷酸或多肽呈遞給細(xì)胞。當(dāng)前公開(kāi)的方法不依賴于特定方法將序列導(dǎo)入細(xì)胞中，只是多核苷酸或多肽實(shí)現(xiàn)到達(dá)細(xì)胞的內(nèi)部。用于將多核苷酸或多肽導(dǎo)入各種細(xì)胞類型的方法是本領(lǐng)域已知的，包括但不限于穩(wěn)定轉(zhuǎn)化方法，瞬時(shí)轉(zhuǎn)化方法，和病毒介導(dǎo)的方法。

用于將外來(lái)多核苷酸導(dǎo)入宿主細(xì)胞中的例示性公認(rèn)技術(shù)包括但不限于磷酸鈣或氯化鈣共沉淀，deae-右旋糖苷介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染，脂轉(zhuǎn)染，顆粒槍(基因槍)，或電穿孔和病毒載體。用于轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的合適方法可見(jiàn)于美國(guó)專利no.5,049,386，美國(guó)專利no.4,946,787，和美國(guó)專利no.4,897,355，sambrooketal.(1989)molecularcloning:alaboratorymanual(2ded.,coldspringharborlaboratorypress,plainview,newyork)及其它標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)。多種轉(zhuǎn)染劑可用于這些技術(shù)。此類藥劑是已知的，參見(jiàn)例如wo2005012487。技術(shù)人員會(huì)認(rèn)識(shí)到，取決于將多核苷酸導(dǎo)入細(xì)胞中的方法，沉默元件能穩(wěn)定并入細(xì)胞的基因組中，在自主載體或質(zhì)粒上復(fù)制，或在細(xì)胞中瞬時(shí)呈現(xiàn)。

病毒載體投遞系統(tǒng)包括在投遞至細(xì)胞之后具有附加型或整合型基因組任一的dna和rna病毒。關(guān)于病毒載體規(guī)程的綜述，參見(jiàn)anderson(1992)science256:808-813；haddadaetal.(1995)currenttopicsinmicrobiologyandimmunologydoerflerandbohm(eds)；及yuetal.(1994)genetherapy1:13-26。常規(guī)的用于投遞多核苷酸的基于病毒的系統(tǒng)可包括用于基因轉(zhuǎn)移的逆轉(zhuǎn)錄病毒，慢病毒，腺病毒，腺伴隨病毒和單純皰疹病毒載體。宿主基因組中的整合憑借逆轉(zhuǎn)錄病毒，慢病毒，和腺伴隨病毒基因轉(zhuǎn)移方法是可能的，常常導(dǎo)致所插入的轉(zhuǎn)基因的長(zhǎng)期表達(dá)。

當(dāng)前公開(kāi)的組合物和方法包含pd-1軸拮抗劑和hpk-1拮抗劑，其中該拮抗劑中至少一項(xiàng)是能利用體內(nèi)基因療法的多核苷酸，其中經(jīng)由對(duì)受試者施用該多核苷酸或離體基因療法(其中在受試者以外將該多核苷酸導(dǎo)入細(xì)胞，然后將包含該多核苷酸的細(xì)胞施用于受試者)將該多核苷酸導(dǎo)入該受試者內(nèi)的細(xì)胞。在將pd-1軸拮抗劑和hpk-1拮抗劑中至少一項(xiàng)離體導(dǎo)入細(xì)胞的實(shí)施方案的一些中，其中導(dǎo)入多核苷酸且隨后施用于受試者的細(xì)胞就該受試者而言是自體，同種異體，或異種細(xì)胞。在那些利用離體基因療法的實(shí)施方案的一些中，其中導(dǎo)入多核苷酸的細(xì)胞是干細(xì)胞，諸如造血干細(xì)胞，或造血祖細(xì)胞。在其它實(shí)施方案中，其中離體導(dǎo)入多核苷酸的細(xì)胞是t細(xì)胞，b細(xì)胞，或樹(shù)突細(xì)胞。

c.藥物組合物

pd-1軸拮抗劑和/或hpk1拮抗劑可以在藥物組合物或配制劑中。在一些實(shí)施方案中，藥物組合物或配制劑包含本文中描述的一種或多種hpk1拮抗劑和/或一種或多種pd-1軸拮抗劑和藥學(xué)可接受載劑。

短語(yǔ)“藥學(xué)可接受的”指明該物質(zhì)或組合物必須是在化學(xué)和/或毒理學(xué)方面與構(gòu)成配制劑的其它組分和/或用它治療的受試者相容的。

如本文中使用的，“載劑”包括藥劑學(xué)可接受的載劑，賦形劑，或穩(wěn)定劑，它們?cè)谒捎玫膭┝亢蜐舛葘?duì)暴露于其的細(xì)胞或哺乳動(dòng)物是無(wú)毒的。通常，生理學(xué)可接受的載劑是ph緩沖水溶液。生理學(xué)可接受載劑的例子包括緩沖劑，諸如磷酸鹽，檸檬酸鹽，和其它有機(jī)酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸；低分子量(少于約10個(gè)殘基)多肽；蛋白質(zhì)，諸如血清清蛋白，明膠，或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，諸如甘氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，精氨酸或賴氨酸；單糖，二糖，和其它碳水化合物，包括葡萄糖，甘露糖，或糊精；螯合劑，諸如edta；糖醇，諸如甘露醇或山梨醇；成鹽反荷離子，諸如鈉；和/或非離子表面活性劑，諸如tween^tm，聚乙二醇(peg)，和pluronics^tm。在某些實(shí)施方案中，藥物組合物包含非天然發(fā)生的藥學(xué)可接受載劑。

藥物組合物配制成與它的預(yù)定施用路徑相容。在一些實(shí)施方案中，在囊泡中投遞活性化合物，諸如脂質(zhì)體(參見(jiàn)例如langer(1990)science249:1527-33；及treatetal.,inliposomesinthetherapyofinfectiousdiseaseandcancer,lopezberesteinandfidler(eds.),liss,n.y.,pp.353-65,1989)。

在還有另一個(gè)實(shí)施方案中，可以在受控釋放系統(tǒng)中投遞活性化合物。在一個(gè)例子中，可以使用泵(參見(jiàn)例如langer(1990)science249:1527-33；sefton(1987)crit.rev.biomed.eng.14:201-40；buchwaldetal.(1980)surgery88:507-16；saudeketal.(1989)n.engl.j.med.321:574-79)。在另一個(gè)例子中，可以使用聚合材料(參見(jiàn)例如levyetal.(1985)science228:190-92；duringetal.(1989)ann.neurol.25:351-56；howardetal.(1989)j.neurosurg.71:105-12)。也可以使用其它受控釋放系統(tǒng)，諸如langer(1990)science249:1527-33中討論的那些。

用于胃腸外，皮內(nèi)，或皮下應(yīng)用的溶液或懸浮液可包括下述成分：無(wú)菌稀釋劑，諸如注射用水，鹽水溶液，不揮發(fā)性油，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其它合成溶劑；抗細(xì)菌劑，諸如苯甲醇或?qū)αu基苯甲酸甲酯；抗氧化劑，諸如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑，諸如乙二胺四乙酸；緩沖劑，諸如乙酸鹽，檸檬酸鹽或磷酸鹽；及用于調(diào)節(jié)張度的藥劑，諸如氯化鈉或右旋糖。可以用酸或堿(諸如氫氯酸或氫氧化鈉)來(lái)調(diào)節(jié)ph。胃腸外制備物可封裝在玻璃或塑料制成的安瓿，一次性注射器或多劑管形瓶中。

適合于注射使用的藥物組合物包括無(wú)菌水溶液(在水溶性的情況中)或分散體及用于即時(shí)制備無(wú)菌可注射溶液或分散體的無(wú)菌粉末。對(duì)于靜脈內(nèi)施用，合適的載劑包括生理鹽水，抑菌水，el(basf；parsippany,nj)或磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)。在所有情況中，組合物必須是無(wú)菌的，而且流動(dòng)性的程度應(yīng)當(dāng)易于注射。它在制造和貯存的條件下必須是穩(wěn)定的，而且必須針對(duì)微生物(諸如細(xì)菌和真菌)的污染作用提供防護(hù)。載劑可以是溶劑或分散介質(zhì)，包括例如水，乙醇，多元醇(例如甘油，丙二醇，和液體聚乙二醇，等等)，及其合適混合物。恰當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性可以例如通過(guò)使用涂層諸如卵磷脂，通過(guò)維持所需粒度(在分散的情況中)及通過(guò)使用表面活性劑來(lái)維持。針對(duì)微生物作用的防護(hù)可以通過(guò)各種抗細(xì)菌和抗真菌劑來(lái)實(shí)現(xiàn)，例如對(duì)羥基苯甲酸酯類，氯丁醇，酚，抗壞血酸，硫柳汞，等等。在許多情況中，在組合物中包括等張劑，例如糖，多元醇諸如甘露醇，山梨醇，氯化鈉?？勺⑸浣M合物的延遲吸收可通過(guò)在組合物中包括延遲吸收的藥劑例如單硬脂酸鋁和明膠來(lái)獲得。

無(wú)菌可注射溶液可以通過(guò)在根據(jù)需要具有上文所列一種組分或組分組合的適宜溶劑中摻入所需量的活性化合物，接著過(guò)濾除菌來(lái)制備。通常，分散體通過(guò)將活性化合物摻入含有來(lái)自上文所列的基本分散介質(zhì)和所需其它組分的無(wú)菌媒介來(lái)制備。在用于制備無(wú)菌可注射溶液的無(wú)菌粉劑的情況中，制備方法可以包括真空干燥和冷凍干燥，其自先前無(wú)菌過(guò)濾的溶液產(chǎn)生活性組分加任何別的期望組分的粉末。

口服組合物一般包括惰性稀釋劑或可食用載劑。它們可以封裝在明膠膠囊中或壓縮成片劑。出于口服治療性施用的目的，可以將活性化合物與賦形劑摻合在一起并以片劑，錠劑，或膠囊劑的形式使用。口服組合物也可使用流體載劑來(lái)制備，供作為漱口水使用，其中流體載劑中的化合物口腔應(yīng)用，嗖嗖漱口，并吐出或吞下。可以包含藥學(xué)相容的結(jié)合劑和/或佐劑物質(zhì)作為組合物的一部分。片劑，丸劑，膠囊，錠劑等可以含有任何下述組分或具有相似性質(zhì)的化合物：粘合劑諸如微晶纖維素，黃蓍膠或明膠；賦形劑諸如淀粉或乳糖，崩解劑諸如褐藻酸，primogel，或玉米淀粉；滑潤(rùn)劑諸如硬脂酸鎂或sterotes；助流劑諸如膠體二氧化硅；甜味劑諸如蔗糖或糖精；或調(diào)味劑諸如薄荷，水楊酸甲酯，或桔味劑。對(duì)于通過(guò)吸入進(jìn)行的施用，從含有合適推進(jìn)劑(例如氣體諸如二氧化碳)的加壓容器或分配器，或噴霧器以氣溶膠噴射形式投遞化合物。

系統(tǒng)施用也可以是通過(guò)經(jīng)粘膜或經(jīng)皮手段。對(duì)于經(jīng)粘膜或經(jīng)皮施用，在配制劑中使用適合于要滲透的屏障的滲透劑。一般而言，此類滲透劑是本領(lǐng)域中已知的，而且包括例如用于經(jīng)粘膜施用的去污劑，膽汁鹽，和梭鏈孢酸衍生物?？梢越?jīng)由使用鼻噴霧或栓劑來(lái)實(shí)現(xiàn)經(jīng)粘膜施用。對(duì)于經(jīng)皮施用，將活性化合物配制成軟膏劑，油膏劑，凝膠劑，或乳膏，如本領(lǐng)域中普遍知道的?；衔镞€可以以用于直腸投遞的栓劑(例如用常規(guī)栓劑基質(zhì)，諸如可可脂及其它甘油酯)或保留灌腸劑形式來(lái)制備。

在一個(gè)實(shí)施方案中，活性化合物與會(huì)保護(hù)化合物免于從身體內(nèi)快速消除的載劑一起制備，諸如受控釋放配制劑，包括植入物和微囊化投遞系統(tǒng)?？梢允褂蒙锟山到獾?，生物相容的聚合物，諸如乙烯-乙酸乙烯，聚(酸)酐，聚乙醇酸，膠原，多正酯(polyorthoester)，和聚乳酸。用于制備此類配制劑的方法對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)是顯而易見(jiàn)的。材料也可以購(gòu)自alzacorporation和novapharmaceuticals,inc。脂質(zhì)體懸浮液(包括用針對(duì)病毒抗原的單克隆抗體靶向受感染細(xì)胞的脂質(zhì)體)也可以用作藥學(xué)可接受載劑。這些可以依照本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法來(lái)制備，例如如記載于美國(guó)專利號(hào)4,522,811的。

為了容易施用和劑量的一致性以單位劑量形式配制口服或胃腸外組合物是尤其有利的。如本文中所使用的，劑量單位形式指物理上離散的單元，適合作為要治療的受試者的單一劑量，每個(gè)單元含有與所需藥學(xué)載劑聯(lián)合的，預(yù)先確定數(shù)量的活性化合物，其根據(jù)計(jì)算，產(chǎn)生期望的治療效果?；衔锏膭┝繂挝恍问降囊?guī)格由下述各項(xiàng)規(guī)定，并直接依賴于下述各項(xiàng)：活性化合物的獨(dú)特特征和要實(shí)現(xiàn)的特定治療效果，及本領(lǐng)域配合此類活性化合物以治療受試者所固有的局限性。

d.試劑盒

另一方面，提供的是試劑盒，其包含pd-1軸拮抗劑和/或hpk1拮抗劑，和印有使用說(shuō)明書包裝插頁(yè)?！鞍b插頁(yè)”指通常包括在藥物的商業(yè)包裝中的說(shuō)明書，它們包含有關(guān)涉及此類藥物應(yīng)用的適應(yīng)征，用法，劑量，施用，禁忌癥，與該包裝產(chǎn)品聯(lián)合的其它藥物，和/或警告等的信息。

在一些實(shí)施方案中，該試劑盒包含pd-1軸拮抗劑和包裝插頁(yè)，該包裝插頁(yè)包含關(guān)于與hpk1拮抗劑組合使用該pd-1軸拮抗劑以在有需要的受試者中增強(qiáng)免疫應(yīng)答或治療癌癥的用法說(shuō)明書。在一些實(shí)施方案中，該試劑盒包含hpk1拮抗劑和包裝插頁(yè)，該包裝插頁(yè)包含關(guān)于與pd-1軸拮抗劑組合使用該hpk1拮抗劑在有需要的受試者中增強(qiáng)免疫應(yīng)答或治療癌癥的用法說(shuō)明書。在一些實(shí)施方案中，該試劑盒包含pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑，和包裝插頁(yè)，該包裝插頁(yè)包含關(guān)于使用該pd-1軸拮抗劑和該hpk1拮抗劑在有需要的受試者中增強(qiáng)免疫應(yīng)答或治療癌癥的用法說(shuō)明書。該試劑盒中可以包含本文中描述的任何pd-1軸拮抗劑和/或hpk1拮抗劑。

在一些實(shí)施方案中，該試劑盒包含含有本文中描述的一種或多種pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑的容器。合適的容器包括例如瓶，管形瓶(例如雙室管形瓶)，注射器(諸如單或雙室注射器)和試管。容器可以由多種材料諸如玻璃或塑料形成。在一些實(shí)施方案中，試劑盒可以包含標(biāo)簽(例如在容器上或與容器聯(lián)合)。標(biāo)簽可以指示其中含有的化合物可用于或意圖用于在有需要的受試者中增強(qiáng)免疫應(yīng)答或治療癌癥。試劑盒可以進(jìn)一步包含從商業(yè)和用戶觀點(diǎn)看期望的其它材料，包括其它緩沖劑，稀釋劑，濾器，針，和注射器。

在一些實(shí)施方案中，該試劑盒進(jìn)一步包含化療劑，包括但不限于本文中其它地方描述的那些。

e.使用pd-1軸拮抗劑和hpk-1拮抗劑的方法

本文中提供的是在有需要的受試者中增強(qiáng)免疫應(yīng)答的方法，其包括施用有效量的pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑。

如本文中使用的，“增強(qiáng)免疫應(yīng)答”指任何針對(duì)抗原的免疫原性應(yīng)答的改善。針對(duì)抗原的免疫原性應(yīng)答的改善的非限制性例子包括增強(qiáng)的樹(shù)突細(xì)胞的成熟或遷移，增強(qiáng)的t細(xì)胞(例如cd4t細(xì)胞，cd8t細(xì)胞)的活化，增強(qiáng)的t細(xì)胞(例如cd4t細(xì)胞，cd8t細(xì)胞)增殖，增強(qiáng)的b細(xì)胞增殖，延長(zhǎng)的t細(xì)胞和/或b細(xì)胞的存活，改善的抗原呈遞細(xì)胞(例如樹(shù)突細(xì)胞)的抗原呈遞，改善的抗原清除，升高的t細(xì)胞的細(xì)胞因子生成(例如白介素-2)，升高的對(duì)前列腺素e2誘導(dǎo)的免疫遏制的抗性，和增強(qiáng)的cd8t細(xì)胞的引發(fā)和/或溶胞活性。

在一些實(shí)施方案中，受試者中的cd8t細(xì)胞具有相對(duì)于施用pd-1途徑拮抗劑和hpk1拮抗劑之前增強(qiáng)的引發(fā)，活化，增殖和/或溶胞活性。在一些實(shí)施方案中，cd8t細(xì)胞引發(fā)特征在于cd8t細(xì)胞中升高的cd44表達(dá)和/或增強(qiáng)的溶胞活性。在一些實(shí)施方案中，cd8t細(xì)胞活化特征在于升高的γ-ifn⁺cd8t細(xì)胞頻率。在一些實(shí)施方案中，cd8t細(xì)胞是抗原特異性t細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，通過(guò)經(jīng)由pd-l1表面表達(dá)的信號(hào)傳導(dǎo)實(shí)現(xiàn)的免疫逃避受到調(diào)控。

在一些實(shí)施方案中，受試者中的抗原呈遞細(xì)胞具有相對(duì)于施用pd-1途徑拮抗劑和hpk1拮抗劑之前增強(qiáng)的成熟和活化。在一些實(shí)施方案中，抗原呈遞細(xì)胞是樹(shù)突細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，抗原呈遞細(xì)胞的成熟特征在于升高的cd83⁺樹(shù)突細(xì)胞頻率。在一些實(shí)施方案中，抗原呈遞細(xì)胞的活化特征在于樹(shù)突細(xì)胞上升高的cd80和cd86表達(dá)。

在一些實(shí)施方案中，受試者中細(xì)胞因子il-10和/或趨化因子il-8，鼠kc的人同系物的血清水平相對(duì)于施用pd-1拮抗劑和hpk1拮抗劑之前降低。

pd-l1或pd-l2結(jié)合pd-1導(dǎo)致pd-1胞質(zhì)域的酪氨酸磷酸化和隨后磷酸酶(包括shp2)的募集，這導(dǎo)致zap70和其它tcr近程信號(hào)傳導(dǎo)分子的去磷酸化，導(dǎo)致削弱tcr信號(hào)傳導(dǎo)和t細(xì)胞功能障礙，包括無(wú)反應(yīng)性和耗竭(chemnitzetal.(2004)jimmunol173(2):945-954)。

術(shù)語(yǔ)“功能障礙”在免疫功能障礙的背景中指降低的對(duì)抗原性刺激的免疫響應(yīng)性的狀態(tài)。該術(shù)語(yǔ)包括可以發(fā)生抗原識(shí)別，但是隨后的免疫應(yīng)答對(duì)于控制感染或腫瘤生長(zhǎng)無(wú)效的耗竭和/或無(wú)反應(yīng)性二者的共同要素。

如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“功能障礙性的”還包括對(duì)抗原識(shí)別的不感受或不響應(yīng)，特別地，將抗原識(shí)別轉(zhuǎn)化成下游t細(xì)胞效應(yīng)器功能，諸如增殖，細(xì)胞因子生成(例如il-2，γ-ifn)和/或靶細(xì)胞殺傷的能力受損。

術(shù)語(yǔ)“無(wú)反應(yīng)性”指源自經(jīng)由t細(xì)胞受體投遞的不完全或不充分信號(hào)(例如在缺乏ras活化的情況中胞內(nèi)ca⁺²增加)的對(duì)抗原刺激的無(wú)響應(yīng)性狀態(tài)。t細(xì)胞無(wú)反應(yīng)性也可以在缺乏共刺激的情況中在用抗原刺激后發(fā)生，生成即使在共刺激的背景中對(duì)抗原的隨后活化變得不感受的細(xì)胞。無(wú)響應(yīng)性狀態(tài)經(jīng)?？梢员话捉樗?2的存在超越。無(wú)反應(yīng)性t細(xì)胞不經(jīng)歷克隆擴(kuò)充和/或獲得效應(yīng)器功能。

術(shù)語(yǔ)“耗竭”指作為源自在許多慢性感染和癌癥期間發(fā)生的持續(xù)tcr信號(hào)傳導(dǎo)的t細(xì)胞功能障礙狀態(tài)的t細(xì)胞耗竭。它與無(wú)反應(yīng)性的區(qū)別在于它不經(jīng)由不完全或缺乏的信號(hào)傳導(dǎo)，而是由于持續(xù)信號(hào)傳導(dǎo)而發(fā)生。它以較差的效應(yīng)器功能，持續(xù)的抑制性受體表達(dá)和與功能性效應(yīng)或記憶t細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄狀態(tài)不同的轉(zhuǎn)錄狀態(tài)限定。耗竭阻止感染和腫瘤的最佳控制。耗竭可以源自外在負(fù)調(diào)節(jié)途徑(例如免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子)及細(xì)胞固有負(fù)調(diào)節(jié)(共刺激)途徑(pd-1，b7-h3，b7-h4，等等)二者。

在一些實(shí)施方案中，對(duì)受試者施用pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑導(dǎo)致t細(xì)胞功能的增強(qiáng)。

“增強(qiáng)t細(xì)胞功能”意指誘導(dǎo)，引起或刺激t細(xì)胞具有持續(xù)或放大的生物學(xué)功能，或者恢復(fù)或再活化耗竭的或無(wú)活性的t細(xì)胞。增強(qiáng)t細(xì)胞功能的例子包括：相對(duì)于干預(yù)前的此類水平，cd8t細(xì)胞的升高的細(xì)胞因子(例如γ-干擾素，il-2，il-12，和tnfα)分泌，升高的增殖，升高的抗原響應(yīng)性(例如病毒，病原體，或腫瘤清除)，和升高的效應(yīng)器顆粒生成，諸如粒酶b。在一個(gè)實(shí)施方案中，增強(qiáng)的水平是至少50％，或者60％，70％，80％，90％，100％，120％，150％，200％。測(cè)量此增強(qiáng)的方式是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的。

因而，pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑的組合療法在治療t細(xì)胞功能障礙性病癥中是有用的?！皌細(xì)胞功能障礙性病癥”是特征在于降低的對(duì)抗原性刺激的響應(yīng)性的t細(xì)胞病癥或疾患。在一個(gè)特定的實(shí)施方案中，t細(xì)胞功能障礙性病癥是與不恰當(dāng)?shù)纳叩慕?jīng)由pd-1的信號(hào)傳導(dǎo)和/或不恰當(dāng)?shù)纳叩膆pk1激酶活性特異性相關(guān)的病癥。在另一個(gè)實(shí)施方案中，t細(xì)胞功能障礙性病癥是其中的t細(xì)胞是無(wú)反應(yīng)性的或具有降低的能力來(lái)分泌細(xì)胞因子，增殖，或執(zhí)行溶胞活性的病癥。在一個(gè)具體的方面，降低的響應(yīng)性導(dǎo)致對(duì)病原體或表達(dá)免疫原的腫瘤的無(wú)效控制。特征在于t細(xì)胞功能障礙的細(xì)胞功能障礙性病癥的例子包括未解析的急性感染，慢性感染，和腫瘤免疫。

如此，當(dāng)前公開(kāi)的pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑的組合療法可用于治療期望增強(qiáng)的免疫原性的疾患，諸如提高腫瘤免疫原性來(lái)治療癌癥。

“免疫原性”指特定物質(zhì)引發(fā)免疫應(yīng)答的能力。腫瘤是免疫原性的，并且增強(qiáng)腫瘤免疫原性有助于通過(guò)免疫應(yīng)答清除腫瘤細(xì)胞。

“腫瘤免疫”指腫瘤逃避免疫識(shí)別和清除的過(guò)程。如此，作為治療概念，腫瘤免疫在此類逃避減弱時(shí)得到“治療”，并且腫瘤被免疫系統(tǒng)識(shí)別并攻擊。腫瘤識(shí)別的例子包括腫瘤結(jié)合，腫瘤收縮和腫瘤清除。

在一個(gè)方面，本文中提供的是一種用于在有需要的受試者中治療癌癥的方法，其包括對(duì)該受試者施用有效量的pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑。

術(shù)語(yǔ)“癌癥”和“癌性”指受試者中特征在于不受調(diào)節(jié)的細(xì)胞生長(zhǎng)的疾患，其中癌性細(xì)胞能夠局部侵入和/或轉(zhuǎn)移至非鄰近部位。此定義中包括的是良性和惡性癌癥。如本文中使用的，“癌細(xì)胞”，“癌性細(xì)胞”，或“腫瘤細(xì)胞”指特征在于這種不受調(diào)節(jié)的細(xì)胞生長(zhǎng)和侵入性特性的細(xì)胞。術(shù)語(yǔ)“癌癥”涵蓋所有類型的癌癥，包括但不限于所有形式的癌，黑素瘤，肉瘤，淋巴瘤和白血病，包括但不限于膀胱癌，腦瘤，乳腺癌，宮頸癌，結(jié)直腸癌，食管癌，子宮內(nèi)膜癌，肝細(xì)胞癌，喉癌，肺癌，骨肉瘤，卵巢癌，胰腺癌，前列腺癌，腎的癌和甲狀腺癌，急性淋巴細(xì)胞性白血病，急性髓樣白血病，室管膜瘤，尤因(ewing)氏肉瘤，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤，髓母細(xì)胞瘤，成神經(jīng)細(xì)胞瘤，骨肉瘤，橫紋肌肉瘤，橫紋肌樣癌(rhabdoidcancer)，和腎母細(xì)胞瘤(wilm氏腫瘤)。癌癥的其它具體例子包括但不限于癌，淋巴瘤，母細(xì)胞瘤(包括髓母細(xì)胞瘤和成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤)，肉瘤(包括脂肪肉瘤和滑膜細(xì)胞肉瘤)，神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(包括類癌腫瘤，胃泌素瘤，和島細(xì)胞癌)，間皮瘤，施旺細(xì)胞瘤(包括聽(tīng)神經(jīng)瘤)，腦脊膜瘤，腺癌，黑素瘤，和白血病或淋巴樣惡性。此類癌癥的更加特別的例子包括鱗狀細(xì)胞癌(例如上皮鱗狀細(xì)胞癌)，肺癌(包括小細(xì)胞肺癌(sclc)，非小細(xì)胞肺癌(nsclc)，肺的腺癌和肺的鱗癌)，腹膜癌，肝細(xì)胞癌，胃的癌或胃癌(包括胃腸癌)，胰腺癌，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤，宮頸癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝瘤，乳腺癌(包括轉(zhuǎn)移性乳腺癌)，結(jié)腸癌，直腸癌，結(jié)直腸癌，子宮內(nèi)膜或子宮癌，唾液腺癌，腎癌或腎的癌，前列腺癌，外陰癌，甲狀腺癌，肝的癌，肛門癌，陰莖癌，梅克爾細(xì)胞癌，蕈樣霉菌病，睪丸癌，食管癌，膽道腫瘤，以及頭和頸癌和血液學(xué)惡性。

在一些實(shí)施方案中，該受試者具有黑素瘤。該黑素瘤可以處于早期階段或處于晚期階段。在一些實(shí)施方案中，該受試者具有結(jié)直腸癌。該結(jié)直腸癌可以處于早期階段或處于晚期階段。在一些實(shí)施方案中，該受試者具有非小細(xì)胞肺癌。該非小細(xì)胞肺癌可以處于早期階段或處于晚期階段。在一些實(shí)施方案中，該受試者具有胰腺癌。該胰腺癌可以處于早期階段或晚期階段。在一些實(shí)施方案中，該受試者具有血液學(xué)惡性。該血液學(xué)惡性可以處于早期階段或晚期階段。在一些實(shí)施方案中，該受試者具有卵巢癌。該卵巢癌可以處于早期階段或處于晚期階段。在一些實(shí)施方案中，該受試者具有乳腺癌。該乳腺癌可以處于早期階段或處于晚期階段。在一些實(shí)施方案中，該受試者具有腎細(xì)胞癌。該腎細(xì)胞癌可以處于早期階段或處于晚期階段。

在一些實(shí)施方案中，癌癥具有升高的t細(xì)胞浸潤(rùn)水平。

如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“腫瘤”指所有贅生性(neoplastic)細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖，無(wú)論是惡性的還是良性的，及所有癌前(pre-cancerous)和癌性細(xì)胞和組織。術(shù)語(yǔ)“癌癥”，“癌性”，和“腫瘤”在本文中提到時(shí)并不互相排斥。

如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“治療/處理”指設(shè)計(jì)用于改變臨床病理學(xué)過(guò)程期間所治療/處理受試者或細(xì)胞的自然進(jìn)程的臨床干預(yù)。治療/處理的期望效果包括降低疾病進(jìn)展速率，改善或減輕疾病狀態(tài)，和消退或改善的預(yù)后。例如，若一種或多種與癌癥有關(guān)的癥狀是減輕或消除的，包括但不限于對(duì)癌性細(xì)胞的降低增殖(或破壞)，減少源自疾病的癥狀，提高那些患有疾病的受試者的生命質(zhì)量，降低治療疾病需要的其它藥物的劑量，延遲疾病的進(jìn)展，和/或延長(zhǎng)受試者的存活，則受試者得到成功“治療”。

如本文中使用的，“延遲疾病的進(jìn)展”意指推遲，阻礙，減緩，延遲，穩(wěn)定，和/或延緩疾病(諸如癌癥)的形成。根據(jù)疾病史和/或治療的受試者，此延遲可以是不同時(shí)間長(zhǎng)度的。如對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員明顯的是，充分或顯著的延遲實(shí)質(zhì)上可以涵蓋預(yù)防，因?yàn)槭茉囌卟恍纬杉膊?。例如，可以延遲晚期階段癌癥，諸如轉(zhuǎn)移的形成。

“有效量”至少是實(shí)現(xiàn)特定病癥的可測(cè)量改善或預(yù)防需要的最小濃度。本文中的有效量可以隨諸如患者的疾病狀態(tài)，年齡，性別，和重量，和抗體引發(fā)受試者中期望的應(yīng)答的能力等因素而變化。有效量也是治療有益效果超過(guò)治療的任何毒性或不利效果的量。對(duì)于預(yù)防性使用，有益或期望的結(jié)果包括如下的結(jié)果，諸如消除或降低風(fēng)險(xiǎn)，減輕嚴(yán)重性，或者延遲疾病的發(fā)作，包括疾病的生物化學(xué)，組織學(xué)和/或行為癥狀，其并發(fā)癥和疾病形成期間呈現(xiàn)的中間病理學(xué)表型。對(duì)于治療性使用，有益或期望的結(jié)果包括臨床結(jié)果，諸如減少源自疾病的一種或多種癥狀，提高那些患有疾病的受試者的生命質(zhì)量，降低治療疾病需要的其它藥物的劑量，增強(qiáng)另一種藥物的效果(諸如經(jīng)由靶向)，延遲疾病的進(jìn)展，和/或延長(zhǎng)存活。在癌癥或腫瘤的情況中，藥物的有效量在減少癌細(xì)胞的數(shù)目；降低腫瘤大??；抑制(即在一定程度上減緩或者期望地停止)癌細(xì)胞浸潤(rùn)入外周器官中；抑制(即在一定程度上減緩且期望地停止)腫瘤轉(zhuǎn)移；在一定程度上抑制腫瘤生長(zhǎng)；和/或在一定程度上減輕一種或多種與病癥有關(guān)的癥狀中可以具有效果?？梢栽谝淮位蚨啻问┯弥惺┯糜行Я?。藥物，化合物，或藥物組合物的有效量是足以直接或間接實(shí)現(xiàn)預(yù)防或治療性處理的量。如在臨床背景中理解的，藥物，化合物，或藥物組合物的有效量可以與或不與另一種藥物，化合物，或藥物組合物一起實(shí)現(xiàn)。如此，可以在施用一種或多種治療劑的背景中考慮“有效量”，并且若與一種或多種其它藥劑一起，可以實(shí)現(xiàn)或者實(shí)現(xiàn)期望的結(jié)果，則可以認(rèn)為單一藥劑以有效量給予。

與hpk1拮抗劑聯(lián)合將pd-1軸拮抗劑施用于受試者來(lái)增強(qiáng)免疫應(yīng)答或治療癌癥。如本文中使用的，“與……聯(lián)合/組合/一起”指在一種治療形態(tài)外施用另一種治療形態(tài)。因而，“與……聯(lián)合/組合/一起”指在對(duì)受試者施用一種治療形態(tài)之前，期間，或者之后施用另一種治療形態(tài)。

在一些實(shí)施方案中，通過(guò)施用表達(dá)hpk1和/或pd-1拮抗劑的細(xì)胞來(lái)將hpk1和/或pd-1拮抗劑施用于受試者。

可以以本領(lǐng)域已知的任何合適方式施用pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑。例如，可以序貫(在不同時(shí)間)或并行(在相同時(shí)間)施用pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑。

在一些實(shí)施方案中，連續(xù)施用hpk1拮抗劑。在其它實(shí)施方案中，間歇施用hpk1拮抗劑。在一些實(shí)施方案中，連續(xù)施用pd-1軸拮抗劑。在其它實(shí)施方案中，間歇施用pd-1軸拮抗劑。在一些實(shí)施方案中，在施用pd-1軸拮抗劑之前施用hpk1拮抗劑。在一些實(shí)施方案中，與施用pd-1軸拮抗劑同時(shí)施用hpk1拮抗劑。在一些實(shí)施方案中，在施用pd-1軸拮抗劑之后施用hpk1拮抗劑。此外，用有效量的pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑治療受試者可以包括單次治療，或者可以包括一系列治療。

可以通過(guò)相同施用路徑或者通過(guò)不同施用路徑施用pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑。在一些實(shí)施方案中，靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)，皮下，表面，口服，經(jīng)皮，腹膜內(nèi)，眶內(nèi)，通過(guò)植入，通過(guò)吸入，鞘內(nèi)，室內(nèi)，腫瘤內(nèi)，或鼻內(nèi)施用pd-1軸拮抗劑。在一些實(shí)施方案中，靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)，皮下，表面，口服，經(jīng)皮，腹膜內(nèi)，眶內(nèi)，通過(guò)植入，通過(guò)吸入，鞘內(nèi)，室內(nèi)，腫瘤內(nèi)，或鼻內(nèi)施用hpk1拮抗劑。

理解的是，此類活性化合物的適宜劑量取決于普通技能的內(nèi)科醫(yī)師或獸醫(yī)的知識(shí)內(nèi)的一些因素?；钚曰衔锏膭┝繒?huì)變化，例如取決于所施用拮抗劑的類型，受試者的年齡，體重，整體健康，性別，和飲食，施用的時(shí)間，施用的路徑，排泄的速率，任何藥物組合。

還會(huì)領(lǐng)會(huì)，pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑用于治療的有效劑量可以在特定治療過(guò)程里提高或降低。劑量的變化可源自診斷測(cè)定法的結(jié)果并變得顯而易見(jiàn)。

在一些實(shí)施方案中，以介于約0.001μg/kg和約1000mg/kg之間的劑量將pd-1軸拮抗劑和/或hpk1拮抗劑施用于受試者，包括但不限于約0.001μg/kg，0.01μg/kg，0.05μg/kg，0.1μg/kg，0.5μg/kg，1μg/kg，10μg/kg，25μg/kg，50μg/kg，100μg/kg，250μg/kg，500μg/kg，1mg/kg，5mg/kg，10mg/kg，25mg/kg，50mg/kg，100mg/kg，和200mg/kg。

在pd-1軸拮抗劑是抗體的一些實(shí)施方案中，以介于約0.01mg/kg和約1000mg/kg之間的劑量將抗體施用于受試者，包括但不限于約0.01mg/kg，0.05mg/kg，0.1mg/kg，0.5mg/kg，1mg/kg，2mg/kg，3mg/kg，4mg/kg，5mg/kg，6mg/kg，7mg/kg，8mg/kg，9mg/kg，10mg/kg，11mg/kg，12mg/kg，13mg/kg，14mg/kg，15mg/kg，16mg/kg，17mg/kg，18mg/kg，19mg/kg，20mg/kg，25mg/kg，50mg/kg，100mg/kg，和250mg/kg。

在一些實(shí)施方案中，提供的是一種用于在有需要的受試者中治療癌癥的方法，其包括對(duì)該受試者施用有效量的pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑，進(jìn)一步包括施用另外的療法。另外的療法可以是放射療法，手術(shù)(例如乳房腫瘤切除術(shù)和乳房切除術(shù))，化學(xué)療法，基因療法，dna療法，病毒療法，rna療法，免疫療法，骨髓移植，納米療法(nanotherapy)，單克隆抗體療法，或前述療法的組合。另外的療法可以為輔助或新輔助療法形式。在一些實(shí)施方案中，另外的療法是施用小分子酶促抑制劑或抗轉(zhuǎn)移劑。在一些實(shí)施方案中，另外的療法是施用副作用限制劑(例如意圖減輕治療副作用的發(fā)生和/或嚴(yán)重性的藥劑，諸如抗惡心劑等)。在一些實(shí)施方案中，另外的療法是放射療法。在一些實(shí)施方案中，另外的療法是手術(shù)。在一些實(shí)施方案中，另外的療法是放射療法和手術(shù)的組合。在一些實(shí)施方案中，另外的療法是γ照射。在一些實(shí)施方案中，另外的療法是靶向pi3k/akt/mtor途徑的療法，hsp90抑制劑，微管蛋白抑制劑，凋亡抑制劑，和/或化學(xué)預(yù)防劑。另外的療法可以是一種或多種化療劑。

“化療劑”指可用于治療癌癥的化學(xué)化合物?；焺┑膶?shí)例包括烷化劑類(alkylatingagents)，諸如塞替派(thiotepa)和環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)；磺酸烷基酯類(alkylsulfonates)，諸如白消安(busulfan)，英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶類(aziridines)，諸如苯佐替派(benzodopa)，卡波醌(carboquone)，美妥替派(meturedopa)和烏瑞替派(uredopa)；乙撐亞胺類(ethylenimines)和甲基蜜胺類(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)，三乙撐蜜胺(triethylenemelamine)，三乙撐磷酰胺(trietylenephosphoramide)，三乙撐硫代磷酰胺(triethiylenethiophosphoramide)和三羥甲蜜胺(trimethylolomelamine)；番荔枝內(nèi)酯類(acetogenin)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氫大麻酚(tetrahydrocannabinol)(屈大麻酚(dronabinol)，)；β-拉帕醌(lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙素類(colchicines)；白樺脂酸(betulinicacid)；喜樹(shù)堿(camptothecin)(包括合成類似物托泊替康(topotecan)，cpt-11(伊立替康(irinotecan)，)，乙酰喜樹(shù)堿，東莨菪亭(scopolectin)和9-氨基喜樹(shù)堿)；苔蘚抑素(bryostatin)；培美曲塞(pemetrexed)；callystatin；cc-1065(包括其阿多來(lái)新(adozelesin)，卡折來(lái)新(carzelesin)和比折來(lái)新(bizelesin)合成類似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin)；鬼臼酸(podophyllinicacid)；替尼泊苷(teniposide)；隱藻素類(cryptophycins)(特別是隱藻素1和隱藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；duocarmycin(包括合成類似物，kw-2189和cb1-tm1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；pancratistatin；tlk-286；cdp323，一種口服α-4整聯(lián)蛋白抑制劑；sarcodictyin；海綿抑素(spongistatin)；氮芥類(nitrogenmustards)，諸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)，萘氮芥(chlornaphazine)，膽磷酰胺(cholophosphamide)，雌莫司汀(estramustine)，異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)，雙氯乙基甲胺(mechlorethamine)，鹽酸氧氮芥(mechlorethamineoxidehydrochloride)，美法侖(melphalan)，新氮芥(novembichin)，苯芥膽甾醇(phenesterine)，潑尼莫司汀(prednimustine)，曲磷胺(trofosfamide)，尿嘧啶氮芥(uracilmustard)；亞硝脲類(nitrosoureas)，諸如卡莫司汀(carmustine)，氯脲菌素(chlorozotocin)，福莫司汀(fotemustine)，洛莫司汀(lomustine)，尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素類，諸如烯二炔類抗生素(enediyne)(如加利車霉素(calicheamicin)，尤其是加利車霉素γ1i和加利車霉素ωi1(參見(jiàn)例如nicolaou等,angew,chem.intl.ed.engl.33:183-186(1994))；蒽環(huán)類抗生素(dynemicin)，包括dynemicina；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌素(neocarzinostatin)發(fā)色團(tuán)和相關(guān)色蛋白烯二炔類抗生素發(fā)色團(tuán))，阿克拉霉素(aclacinomysin)，放線菌素(actinomycin)，氨茴霉素(authramycin)，偶氮絲氨酸(azaserine)，博來(lái)霉素(bleomycin)，放線菌素c(cactinomycin)，carabicin，洋紅霉素(carminomycin)，嗜癌霉素(carzinophilin)，色霉素(chromomycinis)，放線菌素d(dactinomycin)，柔紅霉素(daunorubicin)，地托比星(detorubicin)，6-二氮-5-氧-l-正亮氨酸，多柔比星(doxorubicin)(包括嗎啉代多柔比星，氰基嗎啉代多柔比星，2-吡咯代多柔比星，多柔比星鹽酸脂質(zhì)體注射液(和脫氧多柔比星)，表柔比星(epirubicin)，依索比星(esorubicin)，伊達(dá)比星(idarubicin)，麻西羅霉素(marcellomycin)，絲裂霉素類(mitomycins)諸如絲裂霉素c，霉酚酸(mycophenolicacid)，諾拉霉素(nogalamycin)，橄欖霉素(olivomycin)，培洛霉素(peplomycin)，泊非霉素(potfiromycin)，嘌呤霉素(puromycin)，三鐵阿霉素(quelamycin)，羅多比星(rodorubicin)，鏈黑菌素(streptonigrin)，鏈佐星(streptozocin)，殺結(jié)核菌素(tubercidin)，烏苯美司(ubenimex)，凈司他丁(zinostatin)，佐柔比星(zorubicin)；抗代謝物類，諸如甲氨蝶呤，吉西他濱(gemcitabine)，替加氟(tegafur)卡培他濱(capecitabine)，埃坡霉素(epothilone)；和5-氟尿嘧啶(5-fu)；葉酸類似物，諸如二甲葉酸(denopterin)，甲氨蝶呤，蝶酰三谷氨酸(pteropterin)，三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤類似物，諸如氟達(dá)拉濱(fludarabine)，6-巰基嘌呤(mercaptopurine)，硫咪嘌呤(thiamiprine)，硫鳥嘌呤(thioguanine)；嘧啶類似物，諸如安西他濱(ancitabine)，阿扎胞苷(azacitidine)，6-氮尿苷，卡莫氟(carmofur)，阿糖胞苷(cytarabine)，雙脫氧尿苷(dideoxyuridine)，去氧氟尿苷(doxifluridine)，依諾他濱(enocitabine)，和氟尿苷(floxuridine)；抗腎上腺類，諸如氨魯米特(aminoglutethimide)，米托坦(mitotane)，曲洛司坦(trilostane)；葉酸補(bǔ)充劑，諸如亞葉酸(folinicacid)；醋葡醛內(nèi)酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinicacid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；依達(dá)曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfornithine；依利醋銨(elliptiniumacetate)；依托格魯(etoglucid)；硝酸鎵；羥脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼達(dá)明(lonidainine)；美登木素生物堿類(maytansinoids)，諸如美登素(maytansine)和安絲菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌達(dá)醇(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；噴司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基酰肼(ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；多糖復(fù)合物(jhsnaturalproducts,eugene,or)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西索菲蘭(sizofiran)；螺旋鍺(spirogermanium)；細(xì)交鏈孢菌酮酸(tenuazonicacid)；三亞胺醌(triaziquone)；2,2',2”-三氯三乙胺；單端孢菌素類(trichothecenes)(尤其是t-2毒素，疣孢菌素(verracurin)a，桿孢菌素(roridin)a和蛇行菌素(anguidine))；烏拉坦(urethan)；長(zhǎng)春地辛(vindesine)達(dá)卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴衛(wèi)矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(arabinoside)(“ara-c”)；塞替派(thiotepa)；類紫杉醇(taxoids)，例如帕利他塞(paclitaxel)清蛋白改造的納米顆粒劑型帕利他塞(abraxane^tm)，和多西他塞(doxetaxel)苯丁酸氮芥(chloranbucil)；6-硫鳥嘌呤(thioguanine)；巰基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；鉑類似物，諸如順鉑(cisplatin)和卡鉑(carboplatin)；長(zhǎng)春堿(vinblastine)鉑；依托泊苷(etoposide)(vp-16)；異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；長(zhǎng)春新堿(vincristine)奧沙利鉑(oxaliplatin)；亞葉酸(leucovovin)；長(zhǎng)春瑞濱(vinorelbine)能滅瘤(novantrone)；依達(dá)曲沙(edatrexate)；道諾霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；伊本膦酸鹽(ibandronate)；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑rfs2000；二氟甲基鳥氨酸(dmfo)；類維a酸(retinoids)，諸如維a酸(retinoicacid)；任何上述物質(zhì)的藥學(xué)可接受鹽，酸或衍生物；以及兩種或更多種上述物質(zhì)的組合，諸如chop(環(huán)磷酰胺，多柔比星，長(zhǎng)春新堿和潑尼松龍聯(lián)合療法的縮寫)和folfox(奧沙利鉑(eloxatin^tm)聯(lián)合5-fu和亞葉酸的治療方案的縮寫)。

化療劑的別的例子包括作用為調(diào)節(jié)，降低，阻斷，或抑制可促進(jìn)癌生長(zhǎng)的激素效果的抗激素劑，且常常是系統(tǒng)或全身治療的形式。它們自身可以是激素。實(shí)例包括抗雌激素類和選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑類(serm)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括他莫昔芬)，雷洛昔芬(raloxifene)屈洛昔芬(droloxifene)，4-羥基他莫昔芬，曲沃昔芬(trioxifene)，那洛昔芬(keoxifene)，ly117018，奧那司酮(onapristone)和托瑞米芬(toremifene)抗孕酮類；雌激素受體下調(diào)劑類(erd)；雌激素受體拮抗劑，諸如氟維司群(fulvestrant)功能為抑制或關(guān)閉卵巢的藥劑，例如促黃體生成激素釋放激素(lhrh)激動(dòng)劑，諸如醋酸亮丙瑞林(leuprolideacetate)(和)，醋酸戈舍瑞林(goserelinacetate)，醋酸布舍瑞林(buserelinacetate)和曲普瑞林(tripterelin)；抗雄激素類，諸如氟他米特(flutamide)，尼魯米特(nilutamide)和比卡米特(bicalutamide)；及抑制在腎上腺中調(diào)節(jié)雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制劑，諸如例如4(5)-咪唑，氨魯米特(aminoglutethimide)，醋酸甲地孕酮(megestrolacetate)依西美坦(exemestane)福美坦(formestanie)，法倔唑(fadrozole)，伏羅唑(vorozole)來(lái)曲唑(letrozole)和阿那曲唑(anastrozole)另外，化療劑的這種定義包括二膦酸鹽類(bisphosphonates)，諸如氯膦酸鹽(clodronate)(例如或)，依替膦酸鈉(etidronate)ne-58095，唑來(lái)膦酸/唑來(lái)膦酸鹽(zoledronicacid/zoledronate)阿倫膦酸鹽(alendronate)帕米膦酸鹽(pamidronate)替魯膦酸鹽(tiludronate)或利塞膦酸鹽(risedronate)以及曲沙他濱(troxacitabine)(1,3-二氧戊環(huán)核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，特別是抑制涉及異常(abherant)細(xì)胞增殖的信號(hào)途經(jīng)中的基因表達(dá)的反義寡核苷酸，諸如例如pkc-α，raf，h-ras和表皮生長(zhǎng)因子受體(egf-r)；疫苗，諸如疫苗和基因療法疫苗，例如疫苗，疫苗和疫苗；拓?fù)洚悩?gòu)酶1抑制劑(例如)；抗雌激素，諸如氟維司群(fulvestrant)；egfr抑制劑，諸如erlotinib或西妥昔單抗(cetuximab)；抗vegf抑制劑，諸如貝伐單抗(bevacizumab)；arinotecan；rmrh(例如)；17aag(格爾德霉素(geldanamycin)衍生物，其是熱休克蛋白(hsp)90毒物)；及任何上述物質(zhì)的藥學(xué)可接受鹽，酸或衍生物。

在一些實(shí)施方案中，治療導(dǎo)致該治療停止之后受試者中持久的應(yīng)答?！俺志玫膽?yīng)答”指在治療停止之后降低腫瘤生長(zhǎng)的持久效果。例如，與施用期開(kāi)始時(shí)的大小相比，腫瘤大小可保持相同或更小。在一些實(shí)施方案中，持久的應(yīng)答具有至少與治療持續(xù)時(shí)間相同，治療持續(xù)時(shí)間的至少1.5倍，2.0倍，2.5倍，或3.0倍長(zhǎng)度的持續(xù)時(shí)間。

本文中公開(kāi)的治療方法可導(dǎo)致部分或完全響應(yīng)。如本文中使用的，“完全響應(yīng)”或“cr”指所有靶損傷的消失；“部分響應(yīng)”或“pr”指將基線sld視為參照，靶損傷的最長(zhǎng)直徑和(sld)的至少30％降低；且“穩(wěn)定疾病”或“sd”指將治療開(kāi)始起的最小sld視為參照，既沒(méi)有足夠的靶損傷收縮以符合pr，也沒(méi)有足夠的增加以符合pd。如本文中使用的，“總體響應(yīng)率”(orr)指完全響應(yīng)(cr)率和部分響應(yīng)(pr)率的總和。

本文中公開(kāi)的治療方法可導(dǎo)致施用pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑的受試者的無(wú)進(jìn)展存活和總體存活延長(zhǎng)。如本文中使用的，“無(wú)進(jìn)展存活”(pfs)指治療期間和治療后，所治療疾病(例如癌癥)不變壞的時(shí)間長(zhǎng)度。無(wú)進(jìn)展存活可以包括患者已經(jīng)經(jīng)歷完全響應(yīng)或部分響應(yīng)的時(shí)間量，及患者已經(jīng)經(jīng)歷穩(wěn)定疾病的時(shí)間量。

如本文中使用的，“總體存活”指組中在特定持續(xù)時(shí)間后很可能活著的受試者的百分比。

在一些實(shí)施方案中，施用pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑的受試者為哺乳動(dòng)物，諸如馴養(yǎng)動(dòng)物(例如牛，綿羊，貓，犬，和馬)，靈長(zhǎng)類動(dòng)物(例如人和非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物諸如猴)，家兔，和嚙齒類動(dòng)物(例如小鼠和大鼠)。在一些實(shí)施方案中，所治療的受試者是人。

需要治療癌癥的受試者可以是展現(xiàn)癌癥癥狀的受試者，已經(jīng)診斷有癌癥的受試者，處于癌癥消退的受試者，或具有升高的風(fēng)險(xiǎn)發(fā)生癌癥(例如遺傳素因，某些飲食或環(huán)境暴露)的受試者。

本文中描述的主題的特定實(shí)施方案包括下述：

1.一種組合物，其包含pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑。

2.實(shí)施方案1的組合物，其中該pd-1軸拮抗劑選自由pd-1拮抗劑，pd-l1拮抗劑，和pd-l2拮抗劑組成的組。

3.實(shí)施方案2的組合物，其中該pd-1軸拮抗劑是pd-1拮抗劑。

4.實(shí)施方案3的組合物，其中該pd-1拮抗劑抑制pd-1結(jié)合它的配體結(jié)合配偶。

5.實(shí)施方案4的組合物，其中該pd-1拮抗劑抑制pd-1結(jié)合pd-l1。

6.實(shí)施方案4的組合物，其中該pd-1拮抗劑抑制pd-1結(jié)合pd-l2。

7.實(shí)施方案4的組合物，其中該pd-1拮抗劑抑制pd-1結(jié)合pd-l1和pd-l2二者。

8.實(shí)施方案4-7任一項(xiàng)的組合物，其中該pd-1拮抗劑是抗體。

9.實(shí)施方案8的組合物，其中該抗pd-1抗體是單克隆抗體。

10.實(shí)施方案8的組合物，其中該抗pd-1抗體是選自由fab，fab’-sh，fv，scfv，和(fab’)2片段組成的組的抗體片段。

11.實(shí)施方案8-10任一項(xiàng)的組合物，其中該抗pd-1抗體是人源化抗體。

12.實(shí)施方案8-10任一項(xiàng)的組合物，其中該抗pd-1抗體是人抗體。

13.實(shí)施方案8的組合物，其中該pd-1拮抗劑選自由下述各項(xiàng)組成的組：

a)mdx-1106；

b)merck3475；

c)ct-011；

d)結(jié)合能夠結(jié)合mdx-1106的表位的抗體；

e)結(jié)合能夠結(jié)合merck3475的表位的抗體；

f)結(jié)合能夠結(jié)合ct-011的表位的抗體；

g)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與mdx-1106競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體；

h)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與merck3475競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體；和

i)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與ct-011競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體。

14.實(shí)施方案8的組合物，其中該pd-1拮抗劑是mdx-1106。

15.實(shí)施方案8的組合物，其中該pd-1拮抗劑是merck3475。

16.實(shí)施方案8的組合物，其中該pd-1拮抗劑是ct-011。

17.實(shí)施方案4的組合物，其中該pd-1拮抗劑是amp-224。

18.實(shí)施方案2的組合物，其中該pd-1軸拮抗劑是pd-l1拮抗劑。

19.實(shí)施方案18的組合物，其中該pd-l1拮抗劑抑制pd-l1結(jié)合pd-1。

20.實(shí)施方案18的組合物，其中該pd-l1拮抗劑抑制pd-l1結(jié)合b7-1。

21.實(shí)施方案18的組合物，其中該pd-l1拮抗劑抑制pd-l1結(jié)合pd-1和b7-1二者。

22.實(shí)施方案18的組合物，其中該pd-l1拮抗劑是抗體。

23.實(shí)施方案22的組合物，其中該抗pd-l1抗體是單克隆抗體。

24.實(shí)施方案22的組合物，其中該抗pd-l1抗體是選自由fab，fab’-sh，fv，scfv，和(fab’)2片段組成的組的抗體片段。

25.實(shí)施方案22-24任一項(xiàng)的組合物，其中該抗pd-l1抗體是人源化抗體。

26.實(shí)施方案22-24任一項(xiàng)的組合物，其中該抗pd-l1抗體是人抗體。

27.實(shí)施方案22的組合物，其中該pd-l1拮抗劑選自由下述各項(xiàng)組成的組：

a)yw243.55.s70；

b)mpdl3280a；

c)medi4736；

d)mdx-1105；

e)結(jié)合能夠結(jié)合yw243.55.s70的表位的抗體；

f)結(jié)合能夠結(jié)合mpdl3280a的表位的抗體；

g)結(jié)合能夠結(jié)合medi4736的表位的抗體；

h)結(jié)合能夠結(jié)合mdx-1105的表位的抗體；

i)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與yw243.55.s70競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體；

j)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與mpdl3280a競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體；

k)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與medi4736競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體；和

l)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與mdx-1105競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體。

28.實(shí)施方案22的組合物，其中該pd-l1拮抗劑是yw243.55.s70。

29.實(shí)施方案22的組合物，其中該pd-l1拮抗劑是mpdl3280a。

30.實(shí)施方案22的組合物，其中該pd-l1拮抗劑是medi4736。

31.實(shí)施方案22的組合物，其中該pd-l1拮抗劑是mdx-1105。

32.實(shí)施方案22的組合物，其中該抗體包含包含hvr-h1序列seqidno:35，hvr-h2序列seqidno:36，和hvr-h3序列seqidno:31的重鏈；和包含hvr-l1序列seqidno:37，hvr-l2序列seqidno:38，和hvr-l3序列seqidno:39的輕鏈。

33.實(shí)施方案22的組合物，其中該抗體包含包含氨基酸序列seqidno:27的重鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列seqidno:26的輕鏈可變區(qū)。

34.實(shí)施方案2的組合物，其中該pd-1軸拮抗劑是pd-l2拮抗劑。

35.實(shí)施方案34的組合物，其中該pd-l2拮抗劑是抗體。

36.實(shí)施方案35的組合物，其中該抗pd-l2抗體是單克隆抗體。

37.實(shí)施方案34的組合物，其中該pd-l2拮抗劑是免疫粘附素。

38.實(shí)施方案1-37任一項(xiàng)的組合物，其中該hpk1拮抗劑是特異性hpk1拮抗劑。

39.實(shí)施方案1-38任一項(xiàng)的組合物，其中該hpk1拮抗劑是競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑。

40.實(shí)施方案39的組合物，其中該hpk1拮抗劑是atp模擬物。

41.實(shí)施方案1-40任一項(xiàng)的組合物，其中該組合物進(jìn)一步包含化療劑。

42.一種藥物組合物，其包含實(shí)施方案1-41任一項(xiàng)的組合物和藥學(xué)可接受載劑。

43.一種用于在有需要的受試者中增強(qiáng)免疫應(yīng)答的方法，其中該方法包括施用有效量的pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑的組合。

44.實(shí)施方案43的方法，其中該受試者中的t細(xì)胞具有相對(duì)于施用該組合之前增強(qiáng)的引發(fā)，增強(qiáng)的活化，增強(qiáng)的遷移，增強(qiáng)的增殖，增強(qiáng)的存活，和增強(qiáng)的溶胞活性中至少一項(xiàng)。

45.實(shí)施方案44的方法，其中該t細(xì)胞活化特征在于相對(duì)于施用該組合之前升高的γ-ifn⁺cd8t細(xì)胞的頻率或增強(qiáng)的t細(xì)胞的il-2或粒酶b生成的水平。

46.實(shí)施方案45的方法，其中t細(xì)胞的數(shù)目相對(duì)于施用該組合之前升高。

47.實(shí)施方案44-46任一項(xiàng)的方法，其中該t細(xì)胞是抗原特異性cd8t細(xì)胞。

48.實(shí)施方案43的方法，其中該受試者中的抗原呈遞細(xì)胞具有相對(duì)于施用該pd-1軸拮抗劑和該hpk1拮抗劑之前增強(qiáng)的成熟和活化。

49.實(shí)施方案48的方法，其中該抗原呈遞細(xì)胞是樹(shù)突細(xì)胞。

50.實(shí)施方案48的方法，其中該抗原呈遞細(xì)胞的成熟特征在于升高的cd83⁺樹(shù)突細(xì)胞的頻率。

51.實(shí)施方案48的方法，其中該抗原呈遞細(xì)胞的活化特征在于樹(shù)突細(xì)胞上升高的cd80和cd86表達(dá)。

52.實(shí)施方案43-51任一項(xiàng)的方法，其中該受試者具有癌癥。

53.一種用于在有需要的受試者中治療癌癥的方法，其中該方法包括對(duì)該受試者施用有效量的pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑的組合。

54.實(shí)施方案52或53的方法，其中該癌癥包含至少一種選自由結(jié)直腸癌，黑素瘤，非小細(xì)胞肺癌，卵巢癌，乳腺癌，胰腺癌，血液學(xué)惡性，和腎細(xì)胞癌組成的組的癌癥；或該癌癥是選自由癌，淋巴瘤，母細(xì)胞瘤(包括髓母細(xì)胞瘤和成視網(wǎng)膜細(xì)胞瘤)，肉瘤(包括脂肪肉瘤和滑膜細(xì)胞肉瘤)，神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(包括類癌腫瘤，胃泌素瘤，和島細(xì)胞癌)，間皮瘤，施旺細(xì)胞瘤(包括聽(tīng)神經(jīng)瘤)，腦脊膜瘤，腺癌，黑素瘤，和白血病或淋巴樣惡性組成的組。此類癌癥的更加特別的例子包括鱗狀細(xì)胞癌(例如上皮鱗狀細(xì)胞癌)，肺癌(包括小細(xì)胞肺癌(sclc)，非小細(xì)胞肺癌(nsclc)，肺的腺癌和肺的鱗癌)，腹膜癌，肝細(xì)胞癌，胃的癌或胃癌(包括胃腸癌)，胰腺癌，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤，宮頸癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝瘤，乳腺癌(包括轉(zhuǎn)移性乳腺癌)，結(jié)腸癌，直腸癌，結(jié)直腸癌，子宮內(nèi)膜或子宮癌，唾液腺癌，腎癌或腎的癌，前列腺癌，外陰癌，甲狀腺癌，肝的癌，肛門癌，陰莖癌，梅克爾細(xì)胞癌，蕈樣霉菌病，睪丸癌，食管癌，膽道腫瘤，以及頭和頸癌和血液學(xué)惡性。

55.實(shí)施方案52-54任一項(xiàng)的方法，其中該癌癥具有升高的t細(xì)胞浸潤(rùn)的水平。

56.實(shí)施方案52-55任一項(xiàng)的方法，其中該受試者中的癌細(xì)胞選擇性地具有相對(duì)于施用該pd-1軸拮抗劑和該hpk1拮抗劑之前升高的mhci類抗原表達(dá)。

57.實(shí)施方案52-56任一項(xiàng)的方法，其中該方法進(jìn)一步包括對(duì)該受試者施用化療劑。

58.實(shí)施方案57的方法，其中與該pd-1軸拮抗劑和該hpk1拮抗劑中至少一項(xiàng)同時(shí)對(duì)該受試者施用該化療劑。

59.實(shí)施方案57的方法，其中在施用該pd-1軸拮抗劑和該hpk1拮抗劑中至少一項(xiàng)之前對(duì)該受試者施用該化療劑。

60.實(shí)施方案57的方法，其中在施用該pd-1軸拮抗劑和該hpk1拮抗劑中至少一項(xiàng)之后對(duì)該受試者施用該化療劑。

61.實(shí)施方案43-60任一項(xiàng)的方法，其中該pd-1軸拮抗劑選自由pd-1拮抗劑，pd-l1拮抗劑，和pd-l2拮抗劑組成的組。

62.實(shí)施方案61的方法，其中該pd-1軸拮抗劑是pd-1拮抗劑。

63.實(shí)施方案62的方法，其中該pd-1拮抗劑抑制pd-1結(jié)合它的配體結(jié)合配偶。

64.實(shí)施方案63的方法，其中該pd-1拮抗劑抑制pd-1結(jié)合pd-l1。

65.實(shí)施方案63的方法，其中該pd-1拮抗劑抑制pd-1結(jié)合pd-l2。

66.實(shí)施方案63的方法，其中該pd-1拮抗劑抑制pd-1結(jié)合pd-l1和pd-l2二者。

67.實(shí)施方案62-66任一項(xiàng)的方法，其中該pd-1拮抗劑是抗體。

68.實(shí)施方案67的方法，其中該抗pd-1抗體是單克隆抗體。

69.實(shí)施方案67的方法，其中該抗pd-1抗體是選自由fab，fab’-sh，fv，scfv，和(fab’)2片段組成的組的抗體片段。

70.實(shí)施方案67或69的方法，其中該抗pd-1抗體是人源化抗體。

71.實(shí)施方案67或69的方法，其中該抗pd-1抗體是人抗體。

72.實(shí)施方案67的方法，其中該pd-1拮抗劑是選自由下述各項(xiàng)組成的組：

a)mdx-1106；

b)merck3475；

c)ct-011；

d)結(jié)合能夠結(jié)合mdx-1106的表位的抗體；

e)結(jié)合能夠結(jié)合merck3475的表位的抗體；

f)結(jié)合能夠結(jié)合ct-011的表位的抗體；

g)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與mdx-1106競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體；

h)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與merck3475競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體；和

i)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與ct-011競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體。

73.實(shí)施方案67的方法，其中該pd-1拮抗劑是mdx-1106。

74.實(shí)施方案67的方法，其中該pd-1拮抗劑是merck3475。

75.實(shí)施方案67的方法，其中該pd-1拮抗劑是ct-011。

76.實(shí)施方案62的方法，其中該pd-1拮抗劑是amp-224。

77.實(shí)施方案61的方法，其中該pd-1軸拮抗劑是pd-l1拮抗劑。

78.實(shí)施方案77的方法，其中該pd-l1拮抗劑抑制pd-l1結(jié)合pd-1。

79.實(shí)施方案77的方法，其中該pd-l1拮抗劑抑制pd-l1結(jié)合b7-1。

80.實(shí)施方案77的方法，其中該pd-l1拮抗劑抑制pd-l1結(jié)合pd-1和b7-1二者。

81.實(shí)施方案77的方法，其中該pd-l1拮抗劑是抗體。

82.實(shí)施方案81的方法，其中該抗pd-l1抗體是單克隆抗體。

83.實(shí)施方案81的方法，其中該抗pd-l1抗體是選自由fab，fab’-sh，fv，scfv，和(fab’)2片段組成的組的抗體片段。

84.實(shí)施方案81或82的方法，其中該抗pd-l1抗體是人源化抗體。

85.實(shí)施方案81或82的方法，其中該抗pd-l1抗體是人抗體。

86.實(shí)施方案81的方法，其中該pd-l1拮抗劑選自由下述各項(xiàng)組成的組：

a)yw243.55.s70；

b)mpdl3280a；

c)medi4736；

d)mdx-1105；

e)結(jié)合能夠結(jié)合yw243.55.s70的表位的抗體；

f)結(jié)合能夠結(jié)合mpdl3280a的表位的抗體；

g)結(jié)合能夠結(jié)合medi4736的表位的抗體；

h)結(jié)合能夠結(jié)合mdx-1105的表位的抗體；

i)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與yw243.55.s70競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體；

j)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與mpdl3280a競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體；

k)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與medi4736競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體；和

l)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與mdx-1105競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體。

87.實(shí)施方案81的方法，其中該pd-l1拮抗劑是yw243.55.s70。

88.實(shí)施方案81的方法，其中該pd-l1拮抗劑是mpdl3280a。

89.實(shí)施方案81的方法，其中該pd-l1拮抗劑是medi4736。

90.實(shí)施方案81的方法，其中該pd-l1拮抗劑是mdx-1105。

91.實(shí)施方案81的方法，其中該抗體包含包含hvr-h1序列seqidno:35，hvr-h2序列seqidno:36，和hvr-h3序列seqidno:31的重鏈；和包含hvr-l1序列seqidno:37，hvr-l2序列seqidno:38，和hvr-l3序列seqidno:39的輕鏈。

92.實(shí)施方案81的方法，其中該抗體包含包含氨基酸序列seqidno:27的重鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列seqidno:26的輕鏈可變區(qū)。

93.實(shí)施方案61的方法，其中該pd-1軸拮抗劑是pd-l2拮抗劑。

94.實(shí)施方案93的方法，其中該pd-l2拮抗劑是抗體。

95.實(shí)施方案94的方法，其中該抗pd-l2抗體是單克隆抗體。

96.實(shí)施方案93的方法，其中該pd-l2拮抗劑是免疫粘附素。

97.實(shí)施方案43-96任一項(xiàng)的方法，其中該hpk1拮抗劑是特異性hpk1拮抗劑。

98.實(shí)施方案43-97任一項(xiàng)的方法，其中該hpk1拮抗劑是競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑。

99.實(shí)施方案98的方法，其中該hpk1拮抗劑是atp模擬物。

100.實(shí)施方案43-99任一項(xiàng)的方法，其中該治療導(dǎo)致該治療停止之后該受試者中持久的應(yīng)答。

101.實(shí)施方案43-100任一項(xiàng)的方法，其中靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)，皮下，表面，口服，經(jīng)皮，腹膜內(nèi)，眶內(nèi)，通過(guò)植入，通過(guò)吸入，鞘內(nèi)，室內(nèi)，腫瘤內(nèi)，或鼻內(nèi)施用該pd-1軸拮抗劑。

102.實(shí)施方案43-100任一項(xiàng)的方法，其中靜脈內(nèi)，肌肉內(nèi)，皮下，表面，口服，經(jīng)皮，腹膜內(nèi)，眶內(nèi)，通過(guò)植入，通過(guò)吸入，鞘內(nèi)，室內(nèi)，腫瘤內(nèi)，或鼻內(nèi)施用該hpk1拮抗劑。

103.實(shí)施方案43-102任一項(xiàng)的方法，其中連續(xù)施用該hpk1拮抗劑。

104.實(shí)施方案43-102任一項(xiàng)的方法，其中間歇施用該hpk1拮抗劑。

105.實(shí)施方案43-102任一項(xiàng)的方法，其中在該pd-1軸拮抗劑之前施用該hpk1拮抗劑。

106.實(shí)施方案43-102任一項(xiàng)的方法，其中與該pd-1軸拮抗劑同時(shí)施用該hpk1拮抗劑。

107.實(shí)施方案43-102任一項(xiàng)的方法，其中在該pd-1軸拮抗劑之后施用該hpk1拮抗劑。

108.一種試劑盒，其包含pd-1軸拮抗劑和包裝插頁(yè)，該包裝插頁(yè)包含關(guān)于與hpk1拮抗劑組合使用該pd-1軸拮抗劑以在有需要的受試者中增強(qiáng)免疫應(yīng)答或治療癌癥的用法說(shuō)明書。

109.一種試劑盒，其包含hpk1拮抗劑和包裝插頁(yè)，該包裝插頁(yè)包含關(guān)于與pd-1軸拮抗劑組合使用該hpk1拮抗劑以在有需要的受試者中增強(qiáng)免疫應(yīng)答或治療癌癥的用法說(shuō)明書。

110.一種試劑盒，其包含pd-1軸拮抗劑，hpk拮抗劑，和包裝插頁(yè)，該包裝插頁(yè)包含關(guān)于使用該pd-1軸拮抗劑和該hpk拮抗劑以在有需要的受試者中增強(qiáng)免疫應(yīng)答或治療癌癥的用法說(shuō)明書。

111.實(shí)施方案108-110任一項(xiàng)的試劑盒，其中該pd-1軸拮抗劑選自由pd-1拮抗劑，pd-l1拮抗劑，和pd-l2拮抗劑組成的組。

112.實(shí)施方案111的試劑盒，其中該pd-1軸拮抗劑是pd-1拮抗劑。

113.實(shí)施方案112的試劑盒，其中該pd-1拮抗劑抑制pd-1結(jié)合它的配體結(jié)合配偶。

114.實(shí)施方案113的試劑盒，其中該pd-1拮抗劑抑制pd-1結(jié)合pd-l1。

115.實(shí)施方案113的試劑盒，其中該pd-1拮抗劑抑制pd-1結(jié)合pd-l2。

116.實(shí)施方案113的試劑盒，其中該pd-1拮抗劑抑制pd-1結(jié)合pd-l1和pd-l2二者。

117.實(shí)施方案113-116任一項(xiàng)的試劑盒，其中該pd-1拮抗劑是抗體。

118.實(shí)施方案117的試劑盒，其中該抗pd-1抗體是單克隆抗體。

119.實(shí)施方案117的試劑盒，其中該抗pd-1抗體是選自由fab，fab’-sh，fv，scfv，和(fab’)2片段組成的組的抗體片段。

120.實(shí)施方案117或118的試劑盒，其中該抗pd-1抗體是人源化抗體。

121.實(shí)施方案117或118的試劑盒，其中該抗pd-1抗體是人抗體。

122.實(shí)施方案117-121任一項(xiàng)的試劑盒，其中該pd-1拮抗劑選自由下述各項(xiàng)組成的組：

a)mdx-1106；

b)merck3475；

c)ct-011；

d)結(jié)合能夠結(jié)合mdx-1106的表位的抗體；

e)結(jié)合能夠結(jié)合merck3475的表位的抗體；

f)結(jié)合能夠結(jié)合ct-011的表位的抗體；

g)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與mdx-1106競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體；

h)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與merck3475競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體；和

i)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與ct-011競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體。

123.實(shí)施方案117的試劑盒，其中該pd-1拮抗劑是mdx-1106。

124.實(shí)施方案117的試劑盒，其中該pd-1拮抗劑是merck3475。

125.實(shí)施方案117的試劑盒，其中該pd-1拮抗劑是ct-011。

126.實(shí)施方案112的試劑盒，其中該pd-1拮抗劑是amp-224。

127.實(shí)施方案111的試劑盒，其中該pd-1軸拮抗劑是pd-l1拮抗劑。

128.實(shí)施方案127的試劑盒，其中該pd-l1拮抗劑抑制pd-l1結(jié)合pd-1。

129.實(shí)施方案127的試劑盒，其中該pd-l1拮抗劑抑制pd-l1結(jié)合b7-1。

130.實(shí)施方案127的試劑盒，其中該pd-l1拮抗劑抑制pd-l1結(jié)合pd-1和b7-1二者。

131.實(shí)施方案127的試劑盒，其中該pd-l1拮抗劑是抗體。

132.實(shí)施方案131的試劑盒，其中該抗pd-l1抗體是單克隆抗體。

133.實(shí)施方案131的試劑盒，其中該抗pd-l1抗體是選自由fab，fab’-sh，fv，scfv，和(fab’)2片段組成的組的抗體片段。

134.實(shí)施方案131或132的試劑盒，其中該抗pd-l1抗體是人源化抗體。

135.實(shí)施方案131或132的試劑盒，其中該抗pd-l1抗體是人抗體。

136.實(shí)施方案131的試劑盒，其中該pd-l1拮抗劑選自由下述各項(xiàng)組成的組：

a)yw243.55.s70；

b)mpdl3280a；

c)medi4736；

d)mdx-1105；

e)結(jié)合能夠結(jié)合yw243.55.s70的表位的抗體；

f)結(jié)合能夠結(jié)合mpdl3280a的表位的抗體；

g)結(jié)合能夠結(jié)合medi4736的表位的抗體；

h)結(jié)合能夠結(jié)合mdx-1105的表位的抗體；

i)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與yw243.55.s70競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體；

j)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與mpdl3280a競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體；

k)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與medi4736競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體；和

l)在競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合測(cè)定法中與mdx-1105競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合pd-1的抗體。

137.實(shí)施方案131的試劑盒，其中該pd-l1拮抗劑是yw243.55.s70。

138.實(shí)施方案131的試劑盒，其中該pd-l1拮抗劑是mpdl3280a。

139.實(shí)施方案131的試劑盒，其中該pd-l1拮抗劑是medi4736。

140.實(shí)施方案131的試劑盒，其中該pd-l1拮抗劑是mdx-1105。

141.實(shí)施方案131的試劑盒，其中該抗體包含包含hvr-h1序列seqidno:35，hvr-h2序列seqidno:36，和hvr-h3序列seqidno:31的重鏈；和包含hvr-l1序列seqidno:37，hvr-l2序列seqidno:38，和hvr-l3序列seqidno:39的輕鏈。

142.實(shí)施方案131的試劑盒，其中該抗體包含包含氨基酸序列seqidno:27的重鏈可變區(qū)和包含氨基酸序列seqidno:26的輕鏈可變區(qū)。

143.實(shí)施方案111的試劑盒，其中該pd-1軸拮抗劑是pd-l2拮抗劑。

144.實(shí)施方案143的試劑盒，其中該pd-l2拮抗劑是抗體。

145.實(shí)施方案144的試劑盒，其中該抗pd-l2抗體是單克隆抗體。

146.實(shí)施方案143的試劑盒，其中該pd-l2拮抗劑是免疫粘附素。

147.實(shí)施方案108-146任一項(xiàng)的試劑盒，其中該hpk1拮抗劑是特異性hpk1拮抗劑。

148.實(shí)施方案108-146任一項(xiàng)的試劑盒，其中該hpk1拮抗劑是競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑。

149.實(shí)施方案148的試劑盒，其中該hpk1拮抗劑是atp模擬物。

150.實(shí)施方案108-149任一項(xiàng)的試劑盒，其中該試劑盒進(jìn)一步包含化療劑。

151.實(shí)施方案43-102任一項(xiàng)的方法，其中該hpk1拮抗劑是作為單一藥劑或與pd-1或pd-l1拮抗劑組合能夠抑制mc38腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的分子。

152.實(shí)施方案43-102任一項(xiàng)的方法，其中該hpk1拮抗劑是與pd-1或pd-l1拮抗劑組合能夠抑制mc38腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的分子。

要注意，術(shù)語(yǔ)“一個(gè)”或“一種”實(shí)體指一個(gè)/種或多個(gè)/種該實(shí)體；例如，“一個(gè)/種多肽”理解為代表一個(gè)/種或多個(gè)/種多肽。照此，術(shù)語(yǔ)“一個(gè)/種”，“一個(gè)/種或多個(gè)/種”，和“至少一個(gè)/種”在本文中可互換使用。

本文中使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有相同的含義。已經(jīng)做出了努力來(lái)確保就所使用的數(shù)值(例如量，溫度，等)而言的精確性，但是應(yīng)當(dāng)考慮一些實(shí)驗(yàn)誤差和偏差。

貫穿此說(shuō)明書和權(quán)利要求書，詞語(yǔ)“包含”以非排他意義使用，上下文另有要求的情況除外。理解的是，本文中描述的實(shí)施方案包括“由……組成”和/或“基本上由……組成”實(shí)施方案。

如本文中使用的，當(dāng)下述變動(dòng)對(duì)于實(shí)施所公開(kāi)的方法或采用所公開(kāi)的組合物是適宜的時(shí)，術(shù)語(yǔ)“約”在提到數(shù)值時(shí)意圖涵蓋一些實(shí)施方案中的規(guī)定量±50％，一些實(shí)施方案中的±20％，一些實(shí)施方案中的±10％，一些實(shí)施方案中的±5％，一些實(shí)施方案中的±1％，一些實(shí)施方案中的±0.5％，和一些實(shí)施方案中的±0.1％的變動(dòng)。

在提供數(shù)值范圍的情況中，理解為該范圍的上限與下限之間相差下限十分之一(除非上下文另有清楚指明)的每一個(gè)居間值及該敘述的范圍中任何其它敘述的或居間的值涵蓋在本發(fā)明內(nèi)。這些較小范圍的上限和下限可獨(dú)立包括在更小的范圍中，而且也涵蓋在本發(fā)明內(nèi)，服從敘述的范圍中任何具體排除的極限。在所述范圍包括一個(gè)或兩個(gè)極限的情況中，排除一個(gè)或兩個(gè)那些包括的極限的范圍也包括在本發(fā)明中。

受益于在前的描述和相關(guān)的附圖中呈現(xiàn)的教導(dǎo)，本文中所列發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員會(huì)想到這些發(fā)明的許多修改和其它實(shí)施方案。因此，要理解，本發(fā)明不限于所公開(kāi)的具體實(shí)施方案，而且修改和其它實(shí)施方案意圖包括在所附權(quán)利要求的范圍內(nèi)。雖然本文中采用具體術(shù)語(yǔ)，但是它們僅僅以一般性和描述性意義使用，而非用于限制目的。

作為例示而非限制，提供下面的實(shí)施例。

實(shí)施例

實(shí)施例1

hpk1激酶抑制和pd-1阻斷的抗腫瘤效果

方法：

在c57bl/6背景上生成hpk1激酶失效敲入(hpk1.kd)小鼠。簡(jiǎn)言之，將點(diǎn)突變k46e引入hpk1的激酶域中，產(chǎn)生激酶無(wú)活性的hpk1。從hpk1.kd繁殖群落中選擇野生型對(duì)照小鼠，因此是同窩對(duì)照。在體側(cè)中給39只野生型和37只hpk1.kd小鼠接種100μl體積的hbss:matrigel中的1x10⁵個(gè)mc38鼠同基因結(jié)直腸腫瘤細(xì)胞。一旦腫瘤達(dá)到平均體積125-250mm³，就將每個(gè)野生型和hpk1.kd小鼠群組分成兩個(gè)組，并用對(duì)照抗體(抗gp120)或抗pdl1抗體(克隆6e11.1.9，它是與yw243.55.s70和mpdl3280a具有相同cdr的鼠抗pdl1抗體)任一處理。治療方案由持續(xù)三周每周三次腹膜內(nèi)注射10mg/kg抗gp120或抗pdl1抗體組成。19只野生型小鼠和18只hpk1.kd小鼠是用抗gp120處理的，而20只野生型和19只hpk1.kd小鼠是用抗pd-l1抗體處理的。密切監(jiān)測(cè)腫瘤生長(zhǎng)，每周測(cè)量?jī)纱?，以確定hpk1.kd小鼠是否在用抗pdl1抗體處理后具有相對(duì)于野生型對(duì)照縮小的腫瘤體積。對(duì)腫瘤達(dá)到2000mm³或更大體積或超出iacuc關(guān)于嚙齒動(dòng)物中的腫瘤給出的任何指導(dǎo)方針的動(dòng)物處以安樂(lè)死或與獸醫(yī)人員討論。

結(jié)果：

在起始抗pdl1處理方案之前，在野生型和hpk1.kd小鼠之間沒(méi)有觀察到mc38腫瘤獲取和生長(zhǎng)測(cè)量的惹人注目的差異(圖2，第0天)。在抗pdl1抗體處理之后，hpk1.kd群組中的mc38腫瘤體積顯示比野生型小鼠顯著更多的縮小，證明hpk1激酶抑制和pd-l1共阻斷的有效抗腫瘤應(yīng)答(圖2)。

實(shí)施例2

hpk1激酶抑制和pd1阻斷的抗腫瘤效果

方法：

在c57bl/6背景上生成hpk1激酶失效敲入(hpk1.kd)小鼠。簡(jiǎn)言之，將點(diǎn)突變k46e引入hpk1的激酶域中，產(chǎn)生激酶無(wú)活性的hpk1。從hpk1.kd繁殖群落中選擇野生型對(duì)照小鼠，因此是同窩對(duì)照。在體側(cè)中給30只野生型和30只hpk1.kd小鼠接種100μl體積的hbss:matrigel中的1x10⁵個(gè)mc38鼠同基因結(jié)直腸腫瘤細(xì)胞。一旦腫瘤達(dá)到平均體積125-250mm³，就將每個(gè)野生型和hpk1.kd小鼠群組分成15只小鼠的組，并用對(duì)照抗體(抗gp120)或抗pd1抗體(克隆8f11.19.1.1，它是鼠抗pd-1抗體)任一處理。治療方案由持續(xù)三周每周三次腹膜內(nèi)注射10mg/kg抗gp120或5mg/kg抗pd-1抗體組成。密切監(jiān)測(cè)腫瘤生長(zhǎng)，每周測(cè)量?jī)纱?，以確定hpk1.kd小鼠是否在用抗pd-1抗體處理后具有相對(duì)于野生型對(duì)照縮小的腫瘤體積。對(duì)腫瘤達(dá)到2000mm³或更大體積或超出iacuc關(guān)于嚙齒動(dòng)物中的腫瘤給出的任何指導(dǎo)方針的動(dòng)物處以安樂(lè)死或與獸醫(yī)人員討論。

結(jié)果：

在起始抗pd-1處理方案之前，在野生型和hpk1.kd小鼠之間沒(méi)有觀察到mc38腫瘤獲取和生長(zhǎng)測(cè)量的惹人注目的差異(圖3，第0天)。在抗pd-1抗體處理之后，hpk1.kd群組中的mc38腫瘤體積在研究過(guò)程期間保持平坦，而且顯示比野生型小鼠更加突出的縮小，證明hpk1激酶抑制和pd-1共阻斷的有效抗腫瘤應(yīng)答(圖3)。

序列表

<110>基因泰克公司（genentech,inc.）

豪夫邁·羅氏有限公司（f.hoffmann-larocheag）

<120>使用pd-1軸拮抗劑和hpk1拮抗劑用于治療癌癥的方法和組合物

<130>p32458-wo

<140>

<141>

<150>62/087,944

<151>2014-12-05

<160>41

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>867

<212>dna

<213>人（homosapiens）

<400>1

atgcagatcccacaggcgccctggccagtcgtctgggcggtgctacaactgggctggcgg60

ccaggatggttcttagactccccagacaggccctggaacccccccaccttctccccagcc120

ctgctcgtggtgaccgaaggggacaacgccaccttcacctgcagcttctccaacacatcg180

gagagcttcgtgctaaactggtaccgcatgagccccagcaaccagacggacaagctggcc240

gccttccccgaggaccgcagccagcccggccaggactgccgcttccgtgtcacacaactg300

cccaacgggcgtgacttccacatgagcgtggtcagggcccggcgcaatgacagcggcacc360

tacctctgtggggccatctccctggcccccaaggcgcagatcaaagagagcctgcgggca420

gagctcagggtgacagagagaagggcagaagtgcccacagcccaccccagcccctcaccc480

aggccagccggccagttccaaaccctggtggttggtgtcgtgggcggcctgctgggcagc540

ctggtgctgctagtctgggtcctggccgtcatctgctcccgggccgcacgagggacaata600

ggagccaggcgcaccggccagcccctgaaggaggacccctcagccgtgcctgtgttctct660

gtggactatggggagctggatttccagtggcgagagaagaccccggagccccccgtgccc720

tgtgtccctgagcagacggagtatgccaccattgtctttcctagcggaatgggcacctca780

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gatggacactgctcttggcccctctga867

<210>2

<211>288

<212>prt

<213>人（homosapiens）

<400>2

metglnileproglnalaprotrpprovalvaltrpalavalleugln

151015

leuglytrpargproglytrppheleuaspserproaspargprotrp

202530

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354045

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505560

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65707580

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859095

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100105110

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115120125

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130135140

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145150155160

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260265270

seralaglnproleuargprogluaspglyhiscyssertrpproleu

275280285

<210>3

<211>873

<212>dna

<213>人（homosapiens）

<400>3

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atcacagatgtgaaattgcaggatgcaggggtgtaccgctgcatgatcagctatggtggt360

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attttggttgtggatccagtcacctctgaacatgaactgacatgtcaggctgagggctac480

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<210>4

<211>290

<212>prt

<213>人（homosapiens）

<400>4

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151015

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202530

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354045

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505560

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65707580

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859095

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115120125

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130135140

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165170175

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<211>531

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<213>人（homosapiens）

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<210>6

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<213>人（homosapiens）

<400>6

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151015

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354045

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<213>人（homosapiens）

<400>7

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<210>8

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<213>人（homosapiens）

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65707580

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859095

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115120125

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aspprovalthrsergluhisgluleuthrcysglnalagluglytyr

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165170175

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<210>9

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<213>人（homosapiens）

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<211>273

<212>prt

<213>人（homosapiens）

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ile

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<213>人工序列

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<221>來(lái)源

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aspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproarggluglugln

275280285

pheasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleuhisgln

290295300

asptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasnlysgly

305310315320

leuproserserileglulysthrileserlysalalysglyglnpro

325330335

arggluproglnvaltyrthrleuproproserglngluglumetthr

340345350

lysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyrproser

355360365

aspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyr

370375380

lysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphepheleutyr

385390395400

serargleuthrvalasplysserargtrpglngluglyasnvalphe

405410415

sercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthrglnlys

420425430

serleuserleuserleuglylys

435440

<210>24

<211>214

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來(lái)源

<223>/注釋="人工序列的描述:合成的多肽"

<400>24

gluilevalleuthrglnserproalathrleuserleuserprogly

151015

gluargalathrleusercysargalaserglnservalsersertyr

202530

leualatrptyrglnglnlysproglyglnalaproargleuleuile

354045

tyraspalaserasnargalathrglyileproalaargphesergly

505560

serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglupro

65707580

gluaspphealavaltyrtyrcysglnglnserserasntrpproarg

859095

thrpheglyglnglythrlysvalgluilelysargthrvalalaala

100105110

proservalpheilepheproproseraspgluglnleulyssergly

115120125

thralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrproarggluala

130135140

lysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnserglyasnsergln

145150155160

gluservalthrgluglnaspserlysaspserthrtyrserleuser

165170175

serthrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshislysvaltyr

180185190

alacysgluvalthrhisglnglyleuserserprovalthrlysser

195200205

pheasnargglyglucys

210

<210>25

<211>118

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來(lái)源

<223>/注釋="人工序列的描述:合成的多肽"

<400>25

gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalglnproglygly

151015

serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheseraspser

202530

trpilehistrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval

354045

alatrpileserprotyrglyglyserthrtyrtyralaaspserval

505560

lysglyargphethrileseralaaspthrserlysasnthralatyr

65707580

leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys

859095

alaargarghistrpproglyglypheasptyrtrpglyglnglythr

100105110

leuvalthrvalserala

115

<210>26

<211>108

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來(lái)源

<223>/注釋="人工序列的描述:合成的多肽"

<400>26

aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly

151015

aspargvalthrilethrcysargalaserglnaspvalserthrala

202530

valalatrptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuile

354045

tyrseralaserpheleutyrserglyvalproserargphesergly

505560

serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglnpro

65707580

gluaspphealathrtyrtyrcysglnglntyrleutyrhisproala

859095

thrpheglyglnglythrlysvalgluilelysarg

100105

<210>27

<211>118

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來(lái)源

<223>/注釋="人工序列的描述:合成的多肽"

<400>27

gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalglnproglygly

151015

serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheseraspser

202530

trpilehistrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval

354045

alatrpileserprotyrglyglyserthrtyrtyralaaspserval

505560

lysglyargphethrileseralaaspthrserlysasnthralatyr

65707580

leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys

859095

alaargarghistrpproglyglypheasptyrtrpglyglnglythr

100105110

leuvalthrvalserser

115

<210>28

<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來(lái)源

<223>/注釋="人工序列的描述:合成的肽"

<400>28

trpglyglnglythrleuvalthrvalserala

1510

<210>29

<211>10

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來(lái)源

<223>/注釋="人工序列的描述:合成的肽"

<220>

<221>變異

<222>(6)..(6)

<223>/替換="gly"

<220>

<221>混雜特征

<222>(1)..(10)

<223>/注釋="對(duì)于變異位置序列中給出的變異殘基就注解中的那些而言沒(méi)有偏愛(ài)"

<400>29

glyphethrpheseraspsertrpilehis

1510

<210>30

<211>18

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來(lái)源

<223>/注釋="人工序列的描述:合成的肽"

<220>

<221>變異

<222>(4)..(4)

<223>/替換="leu"

<220>

<221>變異

<222>(10)..(10)

<223>/替換="ser"

<220>

<221>混雜特征

<222>(1)..(18)

<223>/注釋="對(duì)于變異位置序列中給出的變異殘基就注解中的那些而言沒(méi)有偏愛(ài)"

<400>30

alatrpileserprotyrglyglyserthrtyrtyralaaspserval

151015

lysgly

<210>31

<211>9

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來(lái)源

<223>/注釋="人工序列的描述:合成的肽"

<400>31

arghistrpproglyglypheasptyr

15

<210>32

<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來(lái)源

<223>/注釋="人工序列的描述:合成的肽"

<220>

<221>變異

<222>(5)..(5)

<223>/替換="val"

<220>

<221>變異

<222>(6)..(6)

<223>/替換="ile"

<220>

<221>變異

<222>(7)..(7)

<223>/替換="asn"

<220>

<221>變異

<222>(9)..(9)

<223>/替換="phe"

<220>

<221>變異

<222>(10)..(10)

<223>/替換="leu"

<220>

<221>混雜特征

<222>(1)..(11)

<223>/注釋="對(duì)于變異位置序列中給出的變異殘基就注解中的那些而言沒(méi)有偏愛(ài)"

<400>32

argalaserglnaspvalserthralavalala

1510

<210>33

<211>7

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來(lái)源

<223>/注釋="人工序列的描述:合成的肽"

<220>

<221>變異

<222>(4)..(4)

<223>/替換="thr"

<220>

<221>變異

<222>(6)..(6)

<223>/替換="ala"

<220>

<221>混雜特征

<222>(1)..(7)

<223>/注釋="對(duì)于變異位置序列中給出的變異殘基就注解中的那些而言沒(méi)有偏愛(ài)"

<400>33

seralaserpheleutyrser

15

<210>34

<211>9

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來(lái)源

<223>/注釋="人工序列的描述:合成的肽"

<220>

<221>變異

<222>(3)..(3)

<223>/替換="gly"或"phe"或"ser"

<220>

<221>變異

<222>(4)..(4)

<223>/替換="tyr"或"phe"或"trp"

<220>

<221>變異

<222>(5)..(5)

<223>/替換="asn"或"ala"或"thr"或"gly"或"phe"或"ile"

<220>

<221>變異

<222>(6)..(6)

<223>/替換="val"或"pro"或"thr"或"ile"

<220>

<221>變異

<222>(8)..(8)

<223>/替換="trp"或"arg"或"pro"或"thr"

<220>

<221>混雜特征

<222>(1)..(9)

<223>/注釋="對(duì)于變異位置序列中給出的變異殘基就注解中的那些而言沒(méi)有偏愛(ài)"

<400>34

glnglntyrleutyrhisproalathr

15

<210>35

<211>10

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來(lái)源

<223>/注釋="人工序列的描述:合成的肽"

<400>35

glyphethrpheseraspsertrpilehis

1510

<210>36

<211>18

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來(lái)源

<223>/注釋="人工序列的描述:合成的肽"

<400>36

alatrpileserprotyrglyglyserthrtyrtyralaaspserval

151015

lysgly

<210>37

<211>11

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來(lái)源

<223>/注釋="人工序列的描述:合成的肽"

<400>37

argalaserglnaspvalserthralavalala

1510

<210>38

<211>7

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來(lái)源

<223>/注釋="人工序列的描述:合成的肽"

<400>38

seralaserpheleutyrser

15

<210>39

<211>9

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來(lái)源

<223>/注釋="人工序列的描述:合成的肽"

<400>39

glnglntyrleutyrhisproalathr

15

<210>40

<211>448

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來(lái)源

<223>/注釋="人工序列的描述:合成的多肽"

<400>40

gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalglnproglygly

151015

serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheseraspser

202530

trpilehistrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval

354045

alatrpileserprotyrglyglyserthrtyrtyralaaspserval

505560

lysglyargphethrileseralaaspthrserlysasnthralatyr

65707580

leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys

859095

alaargarghistrpproglyglypheasptyrtrpglyglnglythr

100105110

leuvalthrvalserseralaserthrlysglyproservalphepro

115120125

leualaproserserlysserthrserglyglythralaalaleugly

130135140

cysleuvallysasptyrpheprogluprovalthrvalsertrpasn

145150155160

serglyalaleuthrserglyvalhisthrpheproalavalleugln

165170175

serserglyleutyrserleuserservalvalthrvalproserser

180185190

serleuglythrglnthrtyrilecysasnvalasnhislysproser

195200205

asnthrlysvalasplyslysvalgluprolyssercysasplysthr

210215220

histhrcysproprocysproalaprogluleuleuglyglyproser

225230235240

valpheleupheproprolysprolysaspthrleumetileserarg

245250255

thrprogluvalthrcysvalvalvalaspvalserhisgluasppro

260265270

gluvallyspheasntrptyrvalaspglyvalgluvalhisasnala

275280285

lysthrlysproargglugluglntyralaserthrtyrargvalval

290295300

servalleuthrvalleuhisglnasptrpleuasnglylysglutyr

305310315320

lyscyslysvalserasnlysalaleuproalaproileglulysthr

325330335

ileserlysalalysglyglnproarggluproglnvaltyrthrleu

340345350

proproserarggluglumetthrlysasnglnvalserleuthrcys

355360365

leuvallysglyphetyrproseraspilealavalglutrpgluser

370375380

asnglyglnprogluasnasntyrlysthrthrproprovalleuasp

385390395400

seraspglyserphepheleutyrserlysleuthrvalasplysser

405410415

argtrpglnglnglyasnvalphesercysservalmethisgluala

420425430

leuhisasnhistyrthrglnlysserleuserleuserproglylys

435440445

<210>41

<211>214

<212>prt

<213>人工序列

<220>

<221>來(lái)源

<223>/注釋="人工序列的描述:合成的多肽"

<400>41

aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly

151015

aspargvalthrilethrcysargalaserglnaspvalserthrala

202530

valalatrptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuile

354045

tyrseralaserpheleutyrserglyvalproserargphesergly

505560

serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglnpro

65707580

gluaspphealathrtyrtyrcysglnglntyrleutyrhisproala

859095

thrpheglyglnglythrlysvalgluilelysargthrvalalaala

100105110

proservalpheilepheproproseraspgluglnleulyssergly

115120125

thralaservalvalcysleuleuasnasnphetyrproarggluala

130135140

lysvalglntrplysvalaspasnalaleuglnserglyasnsergln

145150155160

gluservalthrgluglnaspserlysaspserthrtyrserleuser

165170175

serthrleuthrleuserlysalaasptyrglulyshislysvaltyr

180185190

alacysgluvalthrhisglnglyleuserserprovalthrlysser

195200205

pheasnargglyglucys

210