本發(fā)明涉及一種含有necrox作為有效成分的用于預(yù)防或治療粘膜炎的組合物。

背景技術(shù)：

粘膜炎是主要因以癌癥患者為對象的放射線及化學(xué)療法而產(chǎn)生的副作用，是指在粘膜或覆蓋消化管的粘膜內(nèi)層中產(chǎn)生炎癥的狀態(tài)。

粘膜炎的癥狀為因細胞致死導(dǎo)致粘膜內(nèi)層變薄且脫落而引起炎癥并產(chǎn)生潰瘍。這種病變極其痛苦，可在包括食道、胃、小腸、大腸和直腸在內(nèi)的從口腔至肛門為止的消化管內(nèi)的部位中發(fā)生這種病變。粘膜炎的發(fā)生會大幅降低患者的生活質(zhì)量。粘膜炎引起的口腔內(nèi)嚴重疼痛感導(dǎo)致不能充分攝取營養(yǎng)，并且誘發(fā)免疫功能的降低。甚至，有可能面臨嚴重到必須終止癌癥治療的狀況。但是，對于目前所使用的治療方法而言，事實上缺乏立足于能夠有效地預(yù)防并克服粘膜炎的方法。

necrox是由lg生命科學(xué)開發(fā)的線粒體特異性的細胞壞死抑制劑，necrox作為同時呈現(xiàn)出對由毒素或疲勞引起的細胞壞死的抑制效果、細胞生存能力的增加效果、抗氧化效果的革新物質(zhì)而備受矚目。報告中指出，在對人類肺纖維芽細胞(lb-helcell)施加24小時的低溫損傷后進行necrox處理的情況下，necrox對因低溫損傷而誘發(fā)的細胞死亡具有防護效果，并且具有防止t-bhp(tertbutylhydroperoxide，叔丁基過氧化氫)所誘導(dǎo)的細胞壞死的效果(kimetal.，archpharmres.(藥物研究文獻)2010nov；33(11)1813-23；choietal.，transplantproc.(移植學(xué)會會報)2010nov；42(9)3414-21)。特別是，報告中指出，necrox-7對氧化壓力和乙酰氨基酚所誘導(dǎo)的細胞壞死具有防護作用，并且具有在小鼠標本中預(yù)防由四氯化碳所誘發(fā)的肝損傷的效果，能夠有效地抑制因缺血再灌流而導(dǎo)致的肝損傷(parketal.，antioxidredoxsignal.(抗氧化劑與氧化還原信號)2013may10；18(14)1713-22)。

此外，還證實了necrox的癌轉(zhuǎn)移抑制效果(韓國專利公開第2013-0088720號)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

技術(shù)問題

由此，本發(fā)明人通過在因放射線或化學(xué)療法而誘發(fā)的粘膜炎標本中，確認necrox處理所帶來的粘膜保護效果、口腔及腸粘膜的損傷抑制效果、腸內(nèi)存在的細胞增值效果，從而完成了本發(fā)明。

因此，本發(fā)明的目的在于提供一種含有necrox、該necrox的藥學(xué)上允許的鹽或該necrox的異構(gòu)體作為有效成分的用于預(yù)防及治療粘膜炎的組合物。

技術(shù)方案

作為用于解決上述問題的方案，本發(fā)明提供一種含有necrox、該necrox的藥學(xué)上允許的鹽或該necrox的異構(gòu)體作為有效成分的用于預(yù)防或治療粘膜炎的組合物。

作為用于解決上述問題的另一方案，本發(fā)明提供一種含有necrox、該necrox的藥學(xué)上允許的鹽或該necrox的異構(gòu)體作為有效成分的抗癌助劑。

作為用于解決上述問題的又一方案，本發(fā)明提供一種含有necrox、該necrox的藥學(xué)上允許的鹽或該necrox的異構(gòu)體作為有效成分的用于預(yù)防或治療粘膜炎的食品組合物。

發(fā)明的效果

本發(fā)明在因放射線或化學(xué)療法而誘發(fā)的粘膜炎標本中確認necrox處理所帶來的粘膜保護效果后發(fā)現(xiàn)，在給藥necrox的組中降低了因放射線或化學(xué)療法而導(dǎo)致的疾病死亡率，并且減輕體重。此外，確認腸功能后發(fā)現(xiàn)，保護腸功能至大便生成率與正常組類似的程度，抑制了因放射線而導(dǎo)致的腸粘膜損傷，并且對腸內(nèi)存在的細胞增值率也做出了貢獻。

附圖說明

圖1的a是示出用于建立放射線誘發(fā)粘膜炎動物標本的實驗設(shè)計的圖表，b是示出對放射線誘發(fā)粘膜炎動物標本給藥necrox-7之后的存活率和體重的圖表。

圖2是示出對粘膜炎動物標本給藥necrox-7之后的腸功能保護效果的照片。

圖3示出未進行necrox-7處理的粘膜炎動物標本及進行necrox-7處理的粘膜炎小鼠的各個腸(intestine)組織的h&e(hematocylin&eosin，蘇木精-伊紅)染色結(jié)果。

圖4是在摘除未進行necrox-7處理的粘膜炎動物標本及進行necrox-7處理的粘膜炎小鼠的各個腸(intestine)組織后通過免疫組織化學(xué)檢查(ihc：immunohistochemistry)確認細胞增殖(bromodeoxyuridine)的照片。

圖5確認necrox-7對經(jīng)放射線照射的正常細胞和癌細胞帶來的影響。

圖6示出通過mts分析法以及經(jīng)cm-h2ros染色的線粒體內(nèi)的活氧來測量necrox-7對放射線照射之后的細胞增殖能力帶來的影響的結(jié)果。

圖7是示出用于建立抗癌劑誘發(fā)粘膜炎動物標本的實驗設(shè)計的圖表以及示出對抗癌劑誘發(fā)粘膜炎動物標本給藥necrox-7之后的存活率和體重的圖表。

圖8示出未進行necrox-7處理的粘膜炎動物標本及進行necrox-7處理的粘膜炎小鼠的各個舌組織的h&e(hematocylin&eosin)染色結(jié)果。

圖9示出未進行necrox-7處理的粘膜炎動物標本及進行necrox-7處理的粘膜炎小鼠的各個腸組織的h&e(hematocylin&eosin)染色結(jié)果。

圖10示出necrox在人類腫瘤細胞中作為抗癌助劑的效果，是在按不同濃度單獨用necrox-7處理時、單獨用抗癌劑5-fu(fluorouracil，氟尿嘧啶)處理時以及并用5-fu和necrox-7處理時對腫瘤細胞的存活細胞數(shù)進行分析的結(jié)果。

具體實施方式

本發(fā)明涉及一種含有necrox、該necrox的藥學(xué)上允許的鹽或該necrox的異構(gòu)體作為有效成分的用于預(yù)防及治療粘膜炎的組合物。

上述necrox為韓國專利公開第10-2009-0018593號中所公開的化合物，對于該necrox的種類并不特別限定，但優(yōu)選該necrox可包含選自由necrox-1、necrox-2([5-(1，1-二氧-巰基嗎啉-4-基甲基)-2-苯基-1h-吲哚-7-基]-(1-甲磺?；?哌啶-4-基)-胺)、necrox-5(([5-(1，1-二氧-巰基嗎啉-4-基甲基)-2-苯基-1h-吲哚-7-基]-(四氫吡喃-4-基甲基)-胺)、necrox-7((四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1，1-二氧-巰基嗎啉-4-基)甲基-1h-吲哚-7-基]胺)和necrox-18組成的組中的一個以上。

本說明書中“藥學(xué)上允許的鹽”包括通過用于形成含有藥學(xué)上允許的負離子的無毒性酸加成鹽的酸而形成的酸加成鹽，例如，所述酸為如硫酸、鹽酸、硝酸、磷酸、氫溴酸、氫碘酸等的無機酸；如酒石酸、甲酸、檸檬酸、乙酸、三氯乙酸、三氟乙酸、葡萄糖酸、苯甲酸、乳酸、富馬酸、馬來酸、水楊酸等的有機羧酸鹽；如甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、萘磺酸等的磺酸等。此外，包括藥學(xué)上允許的堿加成鹽，例如利用鋰、鈉、鉀、鈣、鎂等形成的堿金屬或堿土金屬鹽；賴氨酸、精氨酸、胍等的氨基酸鹽；如二環(huán)己基胺、n-甲基-d-葡糖胺、三(羥甲基)甲胺、二乙醇氨、膽堿、三乙胺等的有機鹽等。本發(fā)明的化合物(四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1，1-二氧-巰基嗎啉-4-基)甲基-1h-吲哚-7-基]胺可通過本領(lǐng)域公知的通常方法來轉(zhuǎn)換為其鹽，本領(lǐng)域技術(shù)人員在沒有其它說明的情況下能夠容易進行鹽的制造。

本說明書中“異構(gòu)體(isomer)”是指雖然具有相同的化學(xué)式或分子式，但在光學(xué)上或立體上不同的化合物或其鹽。由于本發(fā)明的necrox可具有非對稱碳中心，因此可以以光學(xué)異構(gòu)體(r或s異構(gòu)體)、消旋體、部分立體異構(gòu)體的混合物、各個部分立體異構(gòu)體等形式存在，并且還可以以幾何異構(gòu)體(反異構(gòu)體、順異構(gòu)體)形式存在。這些所有異構(gòu)體及其混合物也均包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

以下在沒有其它說明的情況下，本發(fā)明的化合物necrox的藥學(xué)上允許的鹽及/或其異構(gòu)體均包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。

本發(fā)明在因放射線及/或抗癌治療而誘發(fā)的粘膜炎標本中確認了necrox處理所帶來的粘膜保護效果。其結(jié)果，具有如下功效：在給藥necrox的組中降低了因放射線而導(dǎo)致的疾病死亡率，并且減輕體重。此外，確認腸功能的結(jié)果，腸功能被保護至大便生成率與正常組相似的程度，抑制了因放射線而導(dǎo)致的腸粘膜損傷，并且對腸內(nèi)存在的細胞增值率也做出了貢獻。

因此，本發(fā)明的necrox能夠治療因放射線或化學(xué)療法而誘發(fā)的粘膜炎。

在本發(fā)明中，粘膜炎包含治療對象即消化管(gi)的粘膜薄膜化和潰瘍化的概念，例如包含以紅斑性燒傷形病變或以不規(guī)則且集中性或分散性的潰瘍性病變表現(xiàn)的概念。例如，暴露到化學(xué)療法或放射線治療之后僅在3日內(nèi)表現(xiàn)出紅斑性粘膜炎，更普遍地在5日至7日內(nèi)表現(xiàn)出紅斑性粘膜炎，并且紅斑性粘膜炎向潰瘍性粘膜炎的進展通常在開始化學(xué)療法后7日內(nèi)產(chǎn)生，根據(jù)情況會嚴重到需要終止藥物治療的程度。

本發(fā)明中所使用的術(shù)語“粘膜炎”不僅包含口腔和口腔咽部的粘膜炎，而且還包含從嘴到肛門為止的胃腸道在內(nèi)的消化道粘膜炎(alimentarymucositis)及陰道粘膜炎，消化道粘膜炎包含口腔粘膜炎和/或腸炎(腸炎癥，特別是小腸炎癥)，消化管粘膜炎包含食道炎(食道炎癥)、咽部粘膜炎、口腔炎(胃炎癥)和/或直腸炎(直腸炎癥)。

作為本發(fā)明的一實施方式，包括以下步驟：按治療有效量對具有粘膜炎或具有發(fā)生粘膜炎的危險的對象的一個以上的消化管區(qū)域給藥本發(fā)明的化合物。

在因抗癌療法(放射線或化學(xué)療法)而體重減輕的情況下，為了防止不期望的體重減輕且為了“防止和/或預(yù)防體重減輕”而使用本發(fā)明。

因此，本發(fā)明可擴展到預(yù)防待接受放射線和/或化學(xué)療法的對象的粘膜炎和/或體重減輕的領(lǐng)域。

在本發(fā)明中，在暴露到化學(xué)損傷、生物學(xué)損傷、放射線或它們的混合下的對象中有可能發(fā)生粘膜炎和/或體重減輕，放射線暴露有可能從用于抗癌治療的放射線療法等中產(chǎn)生，或者還有可能因偶然的放射線暴露或恐怖分子襲擊導(dǎo)致的放射線暴露而產(chǎn)生。此外，本發(fā)明的組合物、方法及用途還可與宇宙旅行之前或之后為了預(yù)防、治療或改善粘膜炎和/或體重減輕而向?qū)ο蠼o藥的情況關(guān)聯(lián)。

可在對象受到能夠誘發(fā)或引起粘膜炎和/或體重減輕的損傷之前給藥本發(fā)明的necrox，或者可在對象受到損傷后粘膜炎和/或?qū)ο篌w重減輕的開始及發(fā)生之前給藥本發(fā)明的necrox。

在本發(fā)明中，“粘膜炎的預(yù)防及治療”除粘膜炎發(fā)病的抑制或預(yù)防、治療之外，還包含雖然不具有胃腸道粘膜炎但具有發(fā)病危險(例如，之前接受過放射線和/或抗癌療法治療、或者目前正在接受治療放射線和/或抗癌療法治療、或者計劃接受放射線和/或抗癌療法治療的癌癥患者及其它患者)的癥狀的治療或預(yù)防、減輕除此之外的癌癥治療引起的粘膜炎的惡化等。

因此，本發(fā)明提供一種含有necrox、該necrox的藥學(xué)上允許的鹽或該necrox的異構(gòu)體作為有效成分的用于預(yù)防及治療粘膜炎的藥學(xué)組合物。

上述藥學(xué)組合物的適用對象并不特別限定，但該適用對象優(yōu)選可以是包含家畜、人類等的哺乳動物。

通過使包含人類等的哺乳動物攝取上述藥學(xué)組合物，從而能夠預(yù)防粘膜炎，并且還可以治療粘膜炎。

相對于組合物的總重量，可包含0.1重量％至99重量％的本發(fā)明的有效成分，但本發(fā)明的范圍并不限于此。

本發(fā)明的藥學(xué)組合物可包含通常在藥學(xué)組合物的制造中所使用的適當?shù)妮d體、賦形劑或稀釋劑，可以用本領(lǐng)域通常所制造的任何劑型來制造本發(fā)明的藥學(xué)組合物(例：文獻[remington'spharmaceuticalscience(remington氏藥物科學(xué))，最新版；mackpublishingcompany，eastonpa(賓夕法尼亞州的伊斯頓))。

可根據(jù)各個通常的方法，以散劑、顆粒劑、錠劑、膠囊劑、懸浮劑、乳液、糖漿、氣溶劑等的口服型劑型、外用劑、栓劑及滅菌注射溶液的形態(tài)進行劑型化來使用本發(fā)明的藥學(xué)組合物。在進行制劑化時，使用常用的填充劑、增量劑、結(jié)合劑、潤濕劑、分散劑、表面活性劑等的稀釋劑或賦形劑來進行調(diào)制。

用于口服的固態(tài)制劑包含錠劑、丸劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑等，這種固態(tài)制劑通過混合至少一種的賦形劑例如淀粉、碳酸鈣(calciumcarbonate)、蔗糖(sucrose)或乳糖(lactose)、明膠等來調(diào)制。此外，除單一的賦形劑以外，還可以使用硬脂酸鎂、滑石等的潤滑劑。作為用于口服的液態(tài)制劑，適合懸浮劑、內(nèi)用液劑、乳劑、糖漿劑等，除普遍使用的單一稀釋劑即水、液體石蠟以外，還可以包含各種賦形劑例如潤濕劑、甜味劑、芳香劑、保存劑等。

在用于非口服的制劑中包含滅菌水溶液、非水性溶劑、懸浮劑、乳劑、冷凍干燥制劑、栓劑。作為非水性溶劑、懸浮劑，可使用丙二醇(propyleneglycol)、聚乙二醇、如橄欖油的植物油、如油酸乙酯的能夠注射的酯等。作為栓劑基質(zhì)，可使用半合成脂肪酸酯(witepsol)、聚乙二醇、吐溫(tween)61、可可脂、月桂酸甘油酯、甘油明膠等。

上述藥學(xué)組合物可通過多種途徑給藥到小鼠、白鼠、家畜、人類等哺乳動物中。能夠預(yù)想到所有的給藥方式，例如可選擇口服、皮膚外用或腹腔內(nèi)注射、直腸內(nèi)注射、皮下注射、靜脈注射、肌肉內(nèi)注射或胸腔內(nèi)注射注入方式等。

此外，為了預(yù)防和/或治療粘膜炎，可單獨使用本發(fā)明的組合物，或者可與手術(shù)、放射線治療、荷爾蒙治療、化學(xué)治療及使用生物學(xué)反應(yīng)調(diào)節(jié)劑的方法等一同使用本發(fā)明的組合物。

此外，本發(fā)明包括預(yù)防或治療粘膜炎的方法，該方法將治療有效量的necrox、該necrox的藥學(xué)上允許的鹽或該necrox的異構(gòu)體給藥到對象中。

在此所使用的術(shù)語“對象”是指作為治療、觀察或?qū)嶒瀸ο蟮牟溉閯游?，?yōu)選是指人類。

在此所使用的術(shù)語“治療有效量”是指在研究者、獸醫(yī)、醫(yī)生或其它臨床上能夠想到的組織系統(tǒng)、動物或人類中誘導(dǎo)生物學(xué)或醫(yī)學(xué)反應(yīng)的有效成分或藥學(xué)組合物的量，該治療有效量包含誘導(dǎo)所治療的疾病或障礙的癥狀緩和的量。本發(fā)明的關(guān)于有效成分的治療有效量及給藥次數(shù)根據(jù)所期望的效果而有所變化，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠容易確定應(yīng)給藥的最佳給藥量，并且根據(jù)疾病的種類、疾病的重癥度、組合物中含有的有效成分及其它成分的含量、劑型的種類、患者的體重、年齡、性別、健康狀態(tài)、飲食、給藥時間、給藥方法、排泄率等，具有多種該最佳給藥量的范圍。對于本發(fā)明的治療方法而言，在成人的情況下，優(yōu)選在1日給藥1次或給藥數(shù)次時，按約0.3～30㎎/㎏或約3～30㎎/㎏的用量給藥本發(fā)明的necrox。

對于本發(fā)明的治療方法而言，可根據(jù)目標方法口服給藥或非口服給藥(例如，應(yīng)用到靜脈內(nèi)、皮下、腹腔內(nèi)或身體局部)本發(fā)明的含有necrox、該necrox的藥學(xué)上允許的鹽或該necrox的異構(gòu)體作為有效成分的組合物。

此外，本發(fā)明提供一種necrox、該necrox的藥學(xué)上允許的鹽或該necrox的異構(gòu)體用于制造預(yù)防或治療粘膜炎的組合物的用途。

此外，由于本發(fā)明的藥學(xué)組合物能夠預(yù)防和/或治療在為了抗癌治療而進行放射線處理或化學(xué)處理等的抗癌治療中有可能發(fā)生的粘膜炎，因此也能夠與抗癌劑一同作為抗癌助劑來使用。

在本發(fā)明中，“抗癌助劑”增加針對抗癌劑的敏感性，不僅預(yù)防和/或治療因抗癌治療而產(chǎn)生的副作用例如粘膜炎，而且還可以增加抗癌治療的活性，因此“抗癌助劑”可作為抗癌活性助劑來發(fā)揮功能。

本發(fā)明所提及的抗癌劑選自由烷化劑、抗代謝藥物、抗生劑、植物生物堿、分子靶向藥物、荷爾蒙、鉑配合物、反義、抗體及rnai(rna干涉)組成的組。

作為抗癌劑的例，包含烷化劑，如環(huán)磷酰胺及白消安；抗代謝藥物，如甲氨蝶呤、6-巰基嘌呤(6-mp)、硫唑嘌呤、氟尿嘧啶(5-fu)、替加氟及胞嘧啶阿拉伯糖苷(ara-c)；抗生劑，如博來霉素、絲裂霉素c、柔紅霉素、亞德里亞霉素及放線菌素d；植物生物堿，如長春新堿、硫酸長春堿、去乙酰長春酰胺、特素、多西他賽、依托泊甙及伊立替康；分子靶向藥物，如伊馬替尼、吉非替尼、厄洛替尼、索拉非尼、舒尼替尼、曲妥珠單抗、利妥昔單抗、吉妥珠單抗-奧佐米星、貝伐珠單抗及西妥昔單抗；荷爾蒙，如1-烯可的索、己烯雌酚及他莫昔芬；鉑配合物，如順氯氨鉑、卡鉑及奧沙利鉑；反義，如bcl-2反義(例如g3139)、hsp27反義(例如ogx427)、xiap反義(例如aeg35156)、pkc-α反義(例如ly900003)、低氧誘導(dǎo)因子反義(例如ezn-2968)；抗體，如例如利妥昔單抗的cd20抗體、例如曲妥珠單抗的her2抗體、例如貝伐珠單抗的vegf抗體、例如西妥昔單抗的egfr抗體；rnai，如例如calaa-01的rnai核糖核苷酸還原酶?？拱﹦┑膬?yōu)選例包含5-fu、替加氟及順氯氨鉑。

適合與本發(fā)明的組合物一同使用的化學(xué)治療劑例如包含有絲分裂抑制劑，如硫酸長春堿(vinblastine)；烷化劑，如順氯氨鉑、卡鉑(carboplatin)及環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)；微管組合抑制劑，如特素(paclitaxel)或其它紫杉烷(taxanes)；抗代謝物，如5-氟尿嘧啶、卡培他濱(capecitabine)、阿糖胞甙(cytosinearabinoside)及羥基脲；嵌入(intercalating)抗生劑，如亞德里亞霉素(adriamycin)及博來霉素(bleomycin)；免疫刺激劑，如曲妥珠單抗(trastuzumab)；dna合成抑制劑，如吉西他濱(gemcitabine)；酶，如門冬酰胺(asparaginase)；局部異構(gòu)酶(topoisomerase)抑制劑，如依托泊甙(etoposide)；活體反應(yīng)調(diào)節(jié)物質(zhì)，如干擾素；抗激素劑，如抗雌激素藥物(antioestrogen)(例如他莫昔芬)或抗雄激素藥物(antiandrogens)(例如4'-氰基-3-(4-氟代苯磺酰)-2-羥基-2-甲基-3'-(三氟甲基)-丙酰苯胺)；其它治療劑；以及例如選自[devita，v.t.，jr.，hellmann，s.，rosenberg，s.a.；in：cancer：principles&practiceofoncology(癌癥：腫瘤學(xué)原理與實踐)，5thed.(第五版)，lippincott-ravenpublishers(1997)]中記載的主要成分物質(zhì)的一個以上的其它抗癌物質(zhì)。

此外，本發(fā)明提供一種上述組合醫(yī)藥的給藥方法。在實施例中，連續(xù)、同時提供本發(fā)明的化合物及化學(xué)治療劑，或者通過不同給藥渠道提供本發(fā)明的化合物及化學(xué)治療劑。此外，如固體及液體形態(tài)那樣，上述化合物及化學(xué)治療劑可具有相同或不同的形態(tài)。上述方法可包括與化學(xué)治療劑一同同時給藥本發(fā)明的化合物的方法。在實施例中，可將本發(fā)明的化合物與化學(xué)治療劑一同連續(xù)地給藥到對象中。在同時給藥的情況下，在一實施例中，可在化學(xué)治療劑之前給藥本發(fā)明的化合物。在又一實施例中，可在化學(xué)治療劑之后給藥本發(fā)明的化合物。在一實施例中，與本發(fā)明的化合物分開而提供化學(xué)治療劑。

作為本發(fā)明的一實施方式，合并給藥化學(xué)治療劑及本發(fā)明的化合物。合并給藥是指其成分作為組合物或作為相同的單一給藥量的一部分而一同給藥。此外，本發(fā)明中所使用的術(shù)語“合并給藥”還可以表示雖然分開給藥上述成分但作為療法或治療項目的一部分來給藥。在一實施例中，上述成分被同時給藥到對象中。但是，也可以進行成分分開給藥，或者也可以通過給藥劑型分開而進行成分給藥。在進行成分分開給藥的情況下，成分的合并給藥不會限制時間、頻率、給藥或成分給藥順序。

本發(fā)明的抗癌助劑給藥對象的癌癥種類可以是頭頸部癌、非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkin’slymphoma)、白血病(leukemia)、大腸癌(coloncancer)、膀胱癌(bladdercancer)、卵巢癌(ovariancancer)、胃癌(gastriccancer)、肺癌(lungcancer)、前列腺癌(prostatecancer)、胰腺癌(pancreaticcancer)及結(jié)腸直腸癌(colorectalcancer)、非霍奇金淋巴瘤，白血病等，但不限于此。

此外，本發(fā)明提供一種含有necrox、該necrox的藥學(xué)上允許的鹽或該necrox的異構(gòu)體作為有效成分的用于預(yù)防或改善粘膜炎的食品組合物。

上述食品組合物的適用對象并不特別限定，優(yōu)選該適用對象可以是包含家畜、人類等的哺乳動物。

作為能夠添加上述有效成分的食品的一例，具有各種食品類、飲料、口香糖、茶、復(fù)合維生素、功能性健康食品類等。

食品或飲料中的上述necrox的量為食品總重量的0.01至50重量％，對于健康飲料組合物而言，可以以100ml為基準按0.01至50g的比率添加上述necrox，但本發(fā)明的范圍不限于此。

本發(fā)明的功能性健康飲料組合物除含有有效成分以外，對其它成分并不特別限制，如通常飲料那樣作為添加成分可含有各種香味劑或天然碳水化合物等。除上述之外，本發(fā)明的組合物可包含多種營養(yǎng)劑、維生素、礦物(電解質(zhì))、合成風(fēng)味劑及天然風(fēng)味劑等的風(fēng)味劑、著色劑及填充劑(奶酪、巧克力等)、果膠酸及其鹽、褐藻酸及其鹽、有機酸、保護性膠質(zhì)增稠劑、ph調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、甘油、酒精、碳酸飲料中所使用的碳氧化劑等。

上述食品組合物中不僅可包含人類攝取的食品，而且還可以包含動物的飼料組合物。

上述飼料添加劑可進一步包含家禽類及家畜等中所允許的載體。在本發(fā)明中，可直接添加上述飼料添加劑或眾所周知的載體、穩(wěn)定劑等，還可以根據(jù)需要添加維生素、氨基酸類、礦物質(zhì)等各種營養(yǎng)成分、抗氧化劑、抗生物質(zhì)、抗菌劑及其它添加劑等，作為上述飼料添加劑的形狀可以是粉體、顆粒、錠劑、懸浮液等適當?shù)男螒B(tài)。

在供應(yīng)本發(fā)明的飼料添加劑的情況下，能夠?qū)仪蓊惣凹倚蟮葐为毺峁┰擄暳咸砑觿蛘咄ㄟ^與飼料混合而提供該飼料添加劑。

實施例

下面，通過本發(fā)明的實施例對本發(fā)明進行更詳細說明，但本發(fā)明的范圍并不限于下述實施例。

實施例1：粘膜炎小鼠標本的建立及necrox治療效果

從lg生命科學(xué)獲得necrox-7((四氫吡喃-4-基)-[2-苯基-5-(1，1-二氧-巰基嗎啉-4-基)甲基-1h-吲哚-7-基]胺)。作為動物標本使用7～9周齡的c57bl/6(h-2k)小鼠，并且按1100cgy的放射線進行全身照射(tbi)，從而建立了引起腸粘膜損傷的粘膜炎標本。通過存活率、體重、腸功能來比較分析對這種粘膜炎標本給藥necrox-7后的效果。

在本實驗中，通過反射線誘發(fā)粘膜炎小鼠標本，來觀察necrox的粘膜炎抑制效果。

為了使用(a)c57bl/6(h-2k)小鼠來誘導(dǎo)粘膜炎，以1gy/min劑量率照射1100cgy(放射源：x-raymevatronmxe-2)的強力放射線。然后，按0.3mg/kg或3mg/kg或30mg/kg用量分五次給藥necrox-7后進行了比較。作為這種實驗結(jié)果，與未進行necrox-7處理的組相比，進行necrox-7處理的組的存活率增加，并且抑制體重減輕(圖1)。

因放射線而誘導(dǎo)的腸粘膜炎有可能產(chǎn)生腸出血及大便生成障礙的副作用。因此，在本實驗中通過照射高劑量的1100cgy放射線而建立了粘膜炎標本，并且按不同用量進行總計五次的necrox-7處理后與未進行necrox-7處理的組進行了比較。確認necrox-7對放射線誘導(dǎo)腸粘膜炎的保護效果。

其結(jié)果，在未進行necrox-7處理而進行放射線照射(粘膜炎)的組中確認腸長度縮短且大便生成大幅減小。相反，在進行necrox-7處理的組中確認腸被保護至與正常的腸類似的程度(圖2)。

實施例2：確認組織學(xué)上的腸功能保護效果

從被石蠟包埋的組織中獲取4μm的連續(xù)切片，并在二甲苯(xylene)中進行三次處理以去除石蠟后，用95％、90％、70％乙醇進行分階段沖洗。在0.5％過氧化氫中去除內(nèi)源性過氧化酶(endogenousperoxidase)之后，使用正常羊血清(goatserum，山羊血清)進行30分鐘的處理，并按照制造公司的指示在包含3％bsa(bovineserumalbumin，牛血清白蛋白)的pbs(phosphatebuffersaline，磷酸鹽緩沖液)中稀釋一級抗體后使其反應(yīng)1小時。對在上述研究中呈現(xiàn)出表達差異的基因進行針對表達蛋白的一級抗體反應(yīng)之后，用tbs(tris-buffersaline，tris緩沖生理鹽水)清洗三次，并且使其在被3％bsa稀釋的5μg/ml生物素化抗小鼠/抗小兔igg(biotinylatedanti-mouse/anti-rabbitigg)中反應(yīng)30分鐘之后，用tbs清洗三次。在3μg/ml的hrp(horseradishperoxidase，辣根過氧化物酶)鏈霉親和素(streptoavidin)中放置30分鐘，并利用dab(二氨基聯(lián)苯胺)和過氧化氫進行顯色之后，在meyer's蘇木精(hematoxylin)或1％甲基綠(methylgreen)中進行對照染色。

因放射線照射而導(dǎo)致的粘膜炎誘發(fā)腸組織的絨毛損傷。從組織學(xué)形態(tài)上來看，在腸組織的h&e染色(將石蠟包埋組織制作成3μm的切片并附著到載片上之后，進行在二甲苯(xylene)中處理兩次且每次持續(xù)5分鐘的脫石蠟過程，然后在100％乙醇中處理兩次且每次持續(xù)5分鐘并分別在90％、80％、70％乙醇中處理5分鐘之后，用流動的水進行清洗。在mayer's蘇木精溶液中進行8分鐘的染色并用流動的水清洗之后，在70％、80％、90％、100％乙醇中處理，然后在100％乙醇和二甲苯中分別處理兩次且每次持續(xù)5分鐘之后進行封入，以在顯微鏡下觀察)的結(jié)果，在未進行necrox處理的粘膜炎組中觀察到腸絨毛及粘膜損傷(實施hematoxylin&eosin染色并用光學(xué)顯微鏡觀察，其結(jié)果在照射放射線后的腸中絨毛(villis)被損傷，在腔隙(crypy)部位內(nèi)的細胞中呈現(xiàn)出核萎縮、染色質(zhì)的凝縮和細胞性分節(jié)等形態(tài)學(xué)上的變化。)，但在進行30mg/kg的necrox-7處理的組中觀察到腸組織與正常腸組織形態(tài)類似(圖3)。

實施例3：necrox對放射線所抑制的細胞增殖的效果

通過ihc染色確認細胞增殖(bromodeoxyuridine)。在獲取小鼠組織之前，對小鼠注射每只20g劑量的brdu標識試劑(5-bromo-2'-deoxyuridineand5-fluro-2'-deoxyuridine，5-溴-2'-脫氧尿苷和5-氟-2'-脫氧尿苷)之后，在2小時以內(nèi)摘除腸組織以制作石蠟塊。從被石蠟包埋的組織中獲取4μm的連續(xù)切片，并在二甲苯(xylene)中進行三次處理以去除石蠟后，用95％、90％、70％乙醇進行分階段沖洗。在0.3％過氧化氫中去除內(nèi)源性過氧化酶(endogenousperoxidase)之后，使用正常羊血清(goatserum)進行30分鐘的處理，并按照制造公司的指示在包含3％bsa(bovineserumalbumin)的pbs(phosphatebuffersaline)中稀釋一級抗體后使其反應(yīng)1小時。對在上述研究中呈現(xiàn)出表達差異的基因進行關(guān)于表達蛋白的一級抗體反應(yīng)之后，用tbs(tris-buffersaline)清洗三次，并且使其在被3％bsa稀釋的5μg/ml生物素化抗小鼠/抗小兔igg(biotinylatedanti-mouse/anti-rabbitigg)中反應(yīng)30分鐘之后，用tbs清洗三次。在3μg/ml的hrp(horseradishperoxidase)鏈霉親和素(streptoavidin)中放置30分鐘，并利用dab和過氧化氫進行顯色之后，在蘇木精或1％甲基綠中進行對照染色。其結(jié)果，確認與對照組不同，在30mg/kg的necrox-7中出現(xiàn)順暢的細胞增殖(圖4)。

實施例4：在活體外對經(jīng)放射線照射的正常細胞及腫瘤細胞帶來的影響

粘膜炎是因用于治療腫瘤的放射線或抗癌治療而誘發(fā)的一般性的副作用。因此，為了確認粘膜炎治療劑的有效性，需要評價對腫瘤增殖帶來的影響。對正常細胞、腫瘤細胞分別進行800cgy的放射線照射之后，按不同用量進行necrox-7處理并接種到96-孔板(wellplate)，然后在37度、5％的co2中培養(yǎng)3日之后，通過mtt分析確認細胞增殖。培養(yǎng)3日后添加mtt溶液并使其反應(yīng)3小時后用540nm的吸光度進行測定。

其結(jié)果，確認當進行necrox-7處理時，大部分癌細胞株的腫瘤細胞增值得到抑制或減少，與此相反地，當進行necrox-7處理時，在正常細胞中放射線誘導(dǎo)-細胞死亡得到抑制(圖5)。

實施例5：利用necrox-7調(diào)節(jié)線粒體內(nèi)的氧化壓力

活氧(ros)一般因在細胞內(nèi)線粒體的呼吸過程中氧的不完全燃燒而產(chǎn)生，但在接受放射線或抗癌治療的情況下ros有可能大幅增加。由此，本發(fā)明人在腸上皮細胞(iec-6)中確認necrox-7對因放射線治療而增加的ros帶來的影響。

為了獲知在正常環(huán)境下necrox-7對iec-6細胞增殖能力帶來的影響，按各個濃度(5um、10um、20um、40um)對iec-6細胞進行30分鐘的necrox-7處理，然后更換培養(yǎng)基并在兩日后通過mts(3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2h-tetrazolium；3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2h-四唑)分析法測定存活細胞數(shù)。necrox-7的濃度對細胞增殖幾乎沒有影響。

為了調(diào)查necrox-7對照射放射線后的細胞增殖能力帶來的影響，按不同濃度進行30分鐘的necrox-7處理，然后更換培養(yǎng)基并在自照射放射線的2日后通過mts分析法進行測定，其結(jié)果在20um、40um的necrox-7中存活細胞的數(shù)量明顯增加。通過測定經(jīng)cm-h2ros染色的線粒體內(nèi)活氧，確認necrox-7能大幅抑制因放射線而增加的線粒體內(nèi)的活氧(圖6)。

實施例6：建立由抗癌治療導(dǎo)致的粘膜炎小鼠標本及necrox治療效果

作為動物標本使用7～9周齡的c57bl/6(h-2k)小鼠，并且連續(xù)5日每天向腹腔內(nèi)注射50mg/kg的5-fu(5-fluorouracil)，從而建立引起口腔及腸粘膜損傷的粘膜炎標本。通過存活率、體重、腸功能來比較分析對這種粘膜炎標本給藥necrox-7后的效果。

在本實驗中，通過抗癌劑誘發(fā)粘膜炎小鼠標本，來觀察necrox-7的粘膜炎抑制效果。

為了使用c57bl/6(h-2k)小鼠來誘導(dǎo)口腔及腸粘膜炎，按50mg/kg的用量向腹腔內(nèi)注射五次5-fu。然后，按0.3mg/kg或3mg/kg或30mg/kg用量分五次靜脈給藥necrox-7后進行了比較。作為這種實驗結(jié)果，與未進行necrox-7處理的組相比，進行necrox-7處理的組的組存活率增加，并且抑制體重減輕(圖7)。

實施例7：確認組織學(xué)上的口腔及腸保護效果

從被石蠟包埋的組織中獲取4μm的連續(xù)切片，并在二甲苯(xylene)中進行三次處理以去除石蠟后，用95％、90％、70％乙醇進行分階段沖洗。在0.5％過氧化氫中去除內(nèi)源性過氧化酶(endogenousperoxidase)之后，使用正常羊血清(goatserum)進行30分鐘的處理，并按照制造公司的指示在包含3％bsa(bovineserumalbumin)的pbs(phosphatebuffersaline)中稀釋一級抗體后使其反應(yīng)1小時。對在上述研究中呈現(xiàn)出表達差異的基因進行針對表達蛋白的一級抗體反應(yīng)之后，用tbs(tris-buffersaline)清洗三次，并且使其在被3％bsa稀釋的5μg/ml生物素化抗小鼠/抗小兔igg(biotinylatedanti-mouse/anti-rabbitigg)中反應(yīng)30分鐘之后，用tbs清洗三次。在3μg/ml的hrp(horseradishperoxidase)鏈霉親和素(streptoavidin)中放置30分鐘，并利用dab和過氧化氫進行顯色之后，在meyer's蘇木精(hematoxylin)或1％甲基綠(methylgreen)中進行對照染色。

因抗癌劑而導(dǎo)致的粘膜炎使舌和口腔粘膜的表皮層萎縮，顯現(xiàn)出炎癥細胞及壞死細胞的浸潤。此外，誘發(fā)腸出血及腸組織的絨毛損傷。從組織學(xué)形態(tài)上來看，在舌和腸組織的h&e染色(將石蠟包埋組織制作成3μm切片并附著到載片上之后，進行在二甲苯(xylene)中處理兩次且每次持續(xù)5分鐘的脫石蠟過程，然后在100％乙醇中處理兩次且每次持續(xù)5分鐘并分別在90％、80％、70％乙醇中處理5分鐘之后，用流動的水進行清洗。在mayer's蘇木精溶液中進行8分鐘的染色并用流動的水清洗之后，在70％，80％，90％，100％乙醇中處理，然后在100％乙醇和二甲苯中分別處理兩次且每次持續(xù)5分鐘后進行封入，以在顯微鏡下觀察)的結(jié)果，在未進行necrox-7處理的粘膜炎組中觀察到舌和口腔粘膜表皮層萎縮，顯現(xiàn)出炎癥細胞及壞死細胞的浸潤，但在進行necrox-730mg/kg處理的組中觀察到與正常組織形態(tài)類似。此外，在未進行necrox-7處理的粘膜炎組中顯現(xiàn)出腸絨毛及粘膜損傷，但在進行necrox-7處理的組中觀察到與正常舌及腸組織形態(tài)類似(圖8、9)。

實施例8：確認necrox-7和化學(xué)治療劑的合并給藥效果

按各個濃度(5um、10um、20um、40um)對人類腫瘤細胞進行30分鐘的necrox-7處理，然后更換為包含或不包含化學(xué)治療劑5-fu(fluorouracil)的培養(yǎng)基并鋪到96-孔(well)板中，在3日后使用mts(3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2h-tetrazolium)分析法來測定存活細胞數(shù)。

其結(jié)果如圖10所示，在單獨用necrox-7處理時，呈現(xiàn)出濃度依賴性的抗癌效果。并且，與單獨用5-fu處理的腫瘤細胞株相比，在并用necrox-7和5-fu進行處理的腫瘤細胞株中呈現(xiàn)出比單獨處理更高的細胞殺滅效果。