本申請要求保護(hù)2014年10月9日提交的美國臨時(shí)專利申請第62/062,046號的權(quán)益，其公開內(nèi)容通過引用整體并入本文。

領(lǐng)域

本文的公開內(nèi)容涉及胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的組合物及其制備和使用方法。

背景

外泌體(exosome)是源自活細(xì)胞的小的非細(xì)胞體。一般來說，外泌體的直徑為50-150納米(nm)并且由源自多泡體的磷脂雙層或真核細(xì)胞的質(zhì)膜組成。外泌體在形狀上可為圓形，但也可以是使用電子顯微鏡和其它成像技術(shù)在視覺上可鑒定的“杯形”體。外泌體不含完整細(xì)胞核或必需細(xì)胞組分來支持細(xì)胞的代謝和/或分子功能，但外泌體可含蛋白質(zhì)、核酸和其它分子，或可裝飾有可有助于其檢測和分離的表面蛋白。外泌體的含量可以反映它們所來源的細(xì)胞類型并且可以由反映源細(xì)胞的功能狀態(tài)的分子標(biāo)志物組成。外泌體有望作為研究工具和治療方式，但是在本領(lǐng)域中需要新的和有用的外泌體。

概述

一方面，本文提供了包含由胎盤細(xì)胞生成和/或源自胎盤細(xì)胞，例如胎盤來源的貼壁細(xì)胞的外泌體的組合物。在某些實(shí)施方案中，本文提供的外泌體由已經(jīng)體外培養(yǎng)，例如1、2、3、4、5、6代或更多代的胎盤來源的貼壁細(xì)胞生成。在某些實(shí)施方案中，本文提供的外泌體從已經(jīng)體外培養(yǎng)1代的胎盤來源的貼壁細(xì)胞收集。在其它某些實(shí)施方案中，本文提供的外泌體從已經(jīng)體外培養(yǎng)2代的胎盤來源的貼壁細(xì)胞收集。在其它某些實(shí)施方案中，本文提供的外泌體從已經(jīng)體外培養(yǎng)3代的胎盤來源的貼壁細(xì)胞收集。在其它某些實(shí)施方案中，本文提供的外泌體從已經(jīng)體外培養(yǎng)4代的胎盤來源的貼壁細(xì)胞收集。在其它某些實(shí)施方案中，本文提供的外泌體從已經(jīng)體外培養(yǎng)5代的胎盤來源的貼壁細(xì)胞收集。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文提供的外泌體從已經(jīng)體外培養(yǎng)6代的胎盤來源的貼壁細(xì)胞收集。在其它某些實(shí)施方案中，本文提供的外泌體從已經(jīng)體外培養(yǎng)多于6代的胎盤來源的貼壁細(xì)胞收集。在某些實(shí)施方案中，本文提供的外泌體從第6代平板接種的胎盤來源的貼壁細(xì)胞收集，并且從第7代的培養(yǎng)上清液收集(例如，收獲)。

本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含特定標(biāo)志物。此類標(biāo)志物可以，例如，用于外泌體的鑒定和將其與其它外泌體，例如非源自胎盤來源的貼壁細(xì)胞的外泌體區(qū)別開。參見5.1.1部分。在某些實(shí)施方案中，本文提供的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含以下中的一種、兩種、三種、四種或更多種：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和/或cd200，即例如通過流式細(xì)胞術(shù)，例如熒光活化細(xì)胞分選術(shù)(facs)所測定，此類外泌體是cd9⁺、cd10⁺、cd13⁺、cd29⁺、cd44⁺、cd49b⁺、cd49c⁺、cd55⁺、cd59⁺、cd63⁺、cd73⁺、cd81⁺、cd82⁺、cd90⁺、cd98⁺、cd105⁺、cd141⁺、cd142⁺、cd151⁺、cd164⁺、cd295⁺和/或cd200⁺中的一種或多種。另外，可基于某些標(biāo)志物的不存在來鑒定本文提供的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體。在某些實(shí)施方案中，本文提供的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體缺乏以下標(biāo)志物中的一種、兩種、三種、四種或更多種：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和/或cd34，即例如通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs所測定，此類外泌體是cd3^-、cd11b^-、cd14^-、cd19^-、cd33^-、cd192^-、hla-a^-、hla-b^-、hla-c^-、hla-dr^-、cd11c^-和/或cd34^-中的一種或多種。確定此類標(biāo)志物存在或不存在可以使用本領(lǐng)域已知的方法，例如熒光活化細(xì)胞分選術(shù)(facs)完成。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，例如通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs所測定，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd55⁺和cd10⁺。

在具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd10⁺和cd55⁺(通過例如facs所測定)并且另外含有水平高于絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的cd82、cd142、cd49c和cd90。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，例如通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs所測定，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd4、cd5、cd6、cd7、cd8、cd16、cd24、cd25、cd26、cd27、cd32、cd35、cd37、cd39、cd45、cd46、cd54、cd56、cd61、cd74、cd86、cd88、cd91、cd99、cd103、cd108、cd112、cd117、cd119、cd120a、cd123、cd126、cd130、cd134、cd138、cd140a、cd140b、cd144、cd146、cd147、cd152、cd163、cd183、cd184、cd186、cd191、cd194、cd196、cdw198、cd202b、cd220、cd221、cd235a、cd252、cd266、cd271、cd273、cd274、cd318、cd326、cd333、cd334、hla-dp、hla-dq、hla-g、igd、igm、ng2、pdgf和/或ssea-3。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd4。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd5。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd6。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd7。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd8。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd16。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd24。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd25。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd26。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd27。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd32。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd35。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd37。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd39。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd45。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd46。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd54。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd56。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd61。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd74。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd86。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd88。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd91。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd99。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd103。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd108。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd112。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd117。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd119。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd120a。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd123。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd126。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd130。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd134。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd138。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd140a。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd140b。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd144。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd146。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd147。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd152。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd163。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd183。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd184。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd186。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd191。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd194。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd196。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cdw198。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd202b。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd220。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd221。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd235a。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd252。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd266。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd271。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd273。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd274。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd318。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd326。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd333。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd334。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的hla-dp。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的hla-dq。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的hla-g。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的igd。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的igm。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的ng2。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的pdgf。在某些實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的ssea-3。

在某些實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd82⁺并且例如通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs所測定，含有低水平的cd141(即，為cd141(低))。

在某些實(shí)施方案中，通過例如facs所測定，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比同等數(shù)量或同等質(zhì)量的源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體中存在的標(biāo)志物的水平高至少兩倍的一種或多種標(biāo)志物。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，例如通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs所測定，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平分別比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體中存在的每種標(biāo)志物的水平高至少兩倍的cd49c、cd142、cd90和/或cd82。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含比非胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中所述標(biāo)志物的量更高的量的cd49c、cd82、cd90和/或cd142。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體中存在的所述標(biāo)志物的量更高的量的cd49c、cd82、cd90和/或cd142。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含比源自前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體中存在的所述標(biāo)志物的量更高的量的cd49c、cd73、cd82、cd90和/或cd142。

在某些實(shí)施方案中，通過例如facs所測定，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比同等數(shù)量或同等質(zhì)量的源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體中存在的標(biāo)志物的水平低至少兩倍的一種或多種標(biāo)志物。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含比非胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中所述標(biāo)志物的量更低的量的cd164。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含比源自前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞或絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體中存在的所述標(biāo)志物的量更低的量的cd164。

在某些實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含一種或多種核酸。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述核酸為非編碼rna。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述非編碼rna為微rna(mirna)。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含一種或多種選自以下的mirna：mir-218-5p、mir-133b、mir-422a、mir-564、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-124-5p、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含為mir-218-5p的mirna。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含為mir-133b的mirna。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含為mir-422a的mirna。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含為mir-564、mir-16-5p的mirna。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含為let-7a的mirna。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含為mir-92的mirna。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含為mir-142-3p的mirna。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含為mir-451的mirna。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含為mir-124-5p的mirna。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含為mir-223-3p的mirna。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含為mir-630的mirna。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含為mir-296-5p的mirna。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含為let-7b-3p的mirna。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含為let-7d-3p的mirna。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含mirnamir-218-5p、mir-133b、mir-422a和/或mir-564中的一種或多種。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含mirnamir-133b、mir-422a、mir-16-5p、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-223-3p、mir-296-5p和/或mir-let-7d*/let-7d-3p中的一種或多種。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含mirnamir-591、mir-218-5p、mir-133b、mir-422a和/或mir-564中的一種或多種。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述一種或多種mirna以比絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞中存在的相應(yīng)mirna的水平高至少兩倍的水平存在。在其它具體實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體，當(dāng)對于特定mirna進(jìn)行rt-pcr并與對照rna(例如，rnu44)比較時(shí)，所含水平比絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體中相同的mirna高1.1、2、5、10、100、500、600、700、800、900、1000、1100或1200倍，或比絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體中相同的mirna高1.1至2、2至5、2至10、5至10、10至100、100至500、500至600、600至700、700至800、800至900、900至1000、1000至1100或1100至1200倍之間。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含至少一種水平比源自間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高至少1.1倍的標(biāo)志物。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含至少一種水平比源自間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高至少2倍的標(biāo)志物。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含至少一種水平比源自間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高至少5倍的標(biāo)志物。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含至少一種水平比源自間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高至少10倍的標(biāo)志物。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含至少一種水平比源自間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高至少100倍的標(biāo)志物。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含至少一種水平比源自間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高至少500倍的標(biāo)志物。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含至少一種水平比源自間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高至少600倍的標(biāo)志物。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含至少一種水平比源自間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高至少700倍的標(biāo)志物。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含至少一種水平比源自間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高至少800倍的標(biāo)志物。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含至少一種水平比源自間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高至少900倍的標(biāo)志物。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含至少一種水平比源自間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高至少1000倍的標(biāo)志物。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含至少一種水平比源自間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高至少1100倍的標(biāo)志物。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含至少一種水平比源自間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高至少1200倍的標(biāo)志物。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體含有一種或多種選自以下的血管生成蛋白：內(nèi)皮糖蛋白(endoglin)、瘦素(leptin)、血管生成素-2(angiopoietin-2)、g-csf、卵泡抑素(follistatin)、fgf-2、hgf、vegf-a、il-8和/或egf。

本文還提供了包含本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的外泌體群體。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文提供的外泌體群體相對于胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的內(nèi)容物是純的或基本上純的，例如，外泌體群體包含約90％、95％、98％、99％或100％胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文提供的外泌體群體包含本文提供的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體和一種或多種其它類型的外泌體，例如源自不同于胎盤來源的貼壁細(xì)胞的細(xì)胞的外泌體。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文提供了胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體群體，其中通過例如facs所測定，所述群體中約75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的外泌體為cd9⁺、cd10⁺、cd13⁺、cd29⁺、cd44⁺、cd49b⁺、cd49c⁺、cd55⁺、cd59⁺、cd63⁺、cd73⁺、cd81⁺、cd82⁺、cd90⁺、cd98⁺、cd105⁺、cd141⁺、cd142⁺、cd151⁺、cd164⁺、cd295⁺和/或cd200⁺中的一種或多種。

本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體可通過本領(lǐng)域中已知適于分離外泌體的任何方法分離。參見5.2部分。例如，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體可通過離心(例如，密度依賴性超速離心)、聚合物共沉淀(例如，systembiosciences生產(chǎn)的exoquick-tc外泌體沉淀試劑)、過濾(例如，高效液相色譜法和凝膠過濾色譜法)、抗體捕獲或熒光活化細(xì)胞分選術(shù)(facs)來分離。在某些實(shí)施方案中，本文提供的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的分離和純化產(chǎn)生基本上純的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體群體，例如通過與本文提供的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體相關(guān)的一種或多種標(biāo)志物(例如，表面標(biāo)志物和/或mirna)的存在所測定，純度為至少99％、98％、97％、96％、95％、94％、93％、92％、91％或90％的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體群體。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體群體純度為至少99％。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體群體純度為至少98％。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體群體純度為至少97％。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體群體純度為至少96％。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體群體純度為至少95％。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體群體純度為至少94％。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體群體純度為至少93％。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體群體純度為至少92％。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體群體純度為至少91％。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體群體純度為至少90％。

本文還提供了包含胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的組合物。此類組合物通常不包含胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體已源自其中的胎盤細(xì)胞。而且，此類組合物通常不包含來自胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體已源自其中的細(xì)胞培養(yǎng)物的細(xì)胞培養(yǎng)物上清液。

在某些實(shí)施方案中，將純化的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體配制成適于向有需要的對象施用的藥物組合物。在某些實(shí)施方案中，所述對象為人。本文提供的含胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物可以配制成向有需要的對象局部、全身性皮下、腸胃外、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、局部性、口服、皮內(nèi)、經(jīng)皮或鼻內(nèi)施用。在某一實(shí)施方案中，本文提供的含胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物經(jīng)配制用于局部施用。在某一實(shí)施方案中，本文提供的含胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物經(jīng)配制用于全身性皮下施用。在某一實(shí)施方案中，本文提供的含胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物經(jīng)配制用于腸胃外施用。在某一實(shí)施方案中，本文提供的含胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物經(jīng)配制用于肌肉內(nèi)施用。在某一實(shí)施方案中，本文提供的含胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物經(jīng)配制用于局部性施用。在某一實(shí)施方案中，本文提供的含胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物經(jīng)配制用于口服施用。在某一實(shí)施方案中，本文提供的含胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物經(jīng)配制用于皮內(nèi)施用。在某一實(shí)施方案中，本文提供的含胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物經(jīng)配制用于經(jīng)皮施用。在某一實(shí)施方案中，本文提供的含胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物經(jīng)配制用于鼻內(nèi)施用。在某一實(shí)施方案中，本文提供的含胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物經(jīng)配制用于靜脈內(nèi)施用。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文提供的外泌體所源自的胎盤來源的貼壁細(xì)胞為cd34^-、cd10⁺、cd105⁺和cd200⁺。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供的外泌體所源自的胎盤來源的貼壁細(xì)胞以比骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞高至少兩倍的水平衍生表達(dá)一個(gè)或多個(gè)基因，其中所述一個(gè)或多個(gè)基因是以下的一種或多種：actg2、adarb1、amigo2、arts-1、b4galt6、bche、c11orf9、cd200、col4a1、col4a2、cpa4、dmd、dsc3、dsg2、elovl2、f2rl1、fij10781、gata6、gpr126、gprc5b、hla-g、icam1、ier3、igfbp7、il1a、il6、il18、krt18、krt8、lipg、lrap、matn2、mest、nfe2l3、nuak1、pcdh7、pdlim3、pjp2、rtn1、serpinb9、st3gal6、st6galnac5、slc12a8、tcf21、tgfb2、vtn和/或zc3h12a。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供的外泌體所源自的胎盤來源的貼壁細(xì)胞以比骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞高至少兩倍的水平衍生表達(dá)一個(gè)或多個(gè)基因，其中所述一個(gè)或多個(gè)基因是lovl2、st3gal6、st6galnac5和/或slc12a8中的一個(gè)或多個(gè)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供的外泌體所源自的胎盤來源的貼壁細(xì)胞以比骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞高至少兩倍的水平衍生表達(dá)一個(gè)或多個(gè)基因，其中所述一個(gè)或多個(gè)基因是cpa4、tcf21、vtn、b4galt6、flj10781和/或nuak1中的一個(gè)或多個(gè)。

在某些實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體分離自含血清(例如，胎牛血清)的胎盤來源的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物。在某些實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體分離自缺乏血清的胎盤來源的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物。

在某些實(shí)施方案中，從中分離本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的胎盤來源的貼壁細(xì)胞在分離所述外泌體之前已經(jīng)傳代至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18或20次或更多次。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)傳代至少1次。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)傳代至少2次。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)傳代至少3次。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)傳代至少4次。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)傳代至少5次。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)傳代至少6次。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)傳代至少7次。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)傳代至少8次。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)傳代至少9次。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)傳代至少10次。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)傳代至少12次。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)傳代至少14次。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)傳代至少16次。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)傳代至少18次。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)傳代至少20次。在某些實(shí)施方案中，從中分離本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的胎盤來源的貼壁細(xì)胞在分離所述外泌體之前已經(jīng)擴(kuò)增1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38或40次群體倍增或更多。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行1次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行2次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行3次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行4次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行5次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行6次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行7次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行8次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行9次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行10次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行12次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行14次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行16次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行18次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行20次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行22次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行24次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行26次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行28次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行30次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行32次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行34次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行36次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行38次群體倍增。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行40次群體倍增。

在某些實(shí)施方案中，從中分離本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的胎盤來源的貼壁細(xì)胞至少80％、至少90％、至少95％、至少99％或100％是胎兒來源的。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞至少80％是胎兒來源的。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞至少90％是胎兒來源的。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞至少95％是胎兒來源的。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞至少99％是胎兒來源的。在某一實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞至少100％是胎兒來源的。

另一方面，本文提供了胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體和/或包含本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物的用途。參見5.4部分。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體和/或包含本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物用于治療和/或預(yù)防有需要的對象中的疾病和/或病狀。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體和/或包含本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物用于促進(jìn)有需要的對象中的血管生成和/或血管化。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體和/或包含本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物用于調(diào)節(jié)有需要的對象的免疫活性(例如，增加免疫反應(yīng)或減少免疫反應(yīng))。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體和/或包含本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物用于修復(fù)有需要的對象中的組織損傷，例如由急性或慢性損害引起的組織損傷。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，來源的貼壁細(xì)胞外泌體和/或包含本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物用于治療和/或預(yù)防有需要的對象中的疾病和/或病狀的方法中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，包含本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物用于治療有需要的對象中的疾病和/或病狀的方法中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，包含本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物用于預(yù)防有需要的對象中的疾病和/或病狀的方法中。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，包含本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物用于促進(jìn)有需要的對象中的血管生成和/或血管化的方法中。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，包含本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物用于調(diào)節(jié)有需要的對象的免疫活性(例如，增加免疫反應(yīng)或減少免疫反應(yīng))的方法中。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，包含本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物用于修復(fù)有需要的對象中的組織損傷，例如由急性或慢性損害引起的組織損傷的方法中。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體和/或包含本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物用作細(xì)胞保護(hù)劑。另一方面，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體和/或包含本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的藥物組合物呈適于藥用的試劑盒形式提供。參見5.5部分。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了使胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體負(fù)載外源劑例如藥劑的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，此類方法包括孵育胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體和外源劑例如藥劑，例如在室溫下孵育，進(jìn)行或不進(jìn)行皂角苷透化、凍/融循環(huán)、超聲處理或擠壓。在某些實(shí)施方案中，通過在室溫下孵育將外源劑例如藥劑負(fù)載到胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中。在具體實(shí)施方案中，進(jìn)行孵育，例如在室溫下孵育，不進(jìn)行外泌體的皂角苷透化。在具體實(shí)施方案中，進(jìn)行孵育，例如在室溫下孵育，進(jìn)行胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的皂角苷透化。在某些實(shí)施方案中，通過凍/融循環(huán)，例如1、2、3、4、5個(gè)或更多個(gè)凍/融循環(huán)將外源劑例如藥劑負(fù)載到外泌體中。在某些實(shí)施方案中，通過超聲處理將外源劑例如藥劑負(fù)載到胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中。在某些實(shí)施方案中，通過擠壓將外源劑例如藥劑負(fù)載到胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中。在某些實(shí)施方案中，通過電穿孔將外源劑例如藥劑負(fù)載到胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中。在具體實(shí)施方案中，使胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體負(fù)載外源劑例如藥劑的方法包括以上的任何組合。

在某些實(shí)施方案中，負(fù)載到本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含多肽。在具體實(shí)施方案中，外源劑例如藥劑為結(jié)合劑，例如抗體，諸如人、人源化或嵌合抗體或其抗原結(jié)合片段。在特定實(shí)施方案中，抗體為單特異性、雙特異性或多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段。還有其它特定實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合片段為單鏈抗體或fab片段。在具體實(shí)施方案中，沒有胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的幫助，抗體或其抗原結(jié)合片段不會內(nèi)化到靶細(xì)胞中，例如不同于從中獲得外泌體的細(xì)胞類型的細(xì)胞。

在某些實(shí)施方案中，負(fù)載到本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含一種或多種核酸。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種核酸包含小干擾rna(sirna)或mirna。

在某些實(shí)施方案中，負(fù)載到本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含一種或多種基因修飾組分。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含crispr-cas系統(tǒng)。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含向?qū)na。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含內(nèi)切核酸酶。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含向?qū)na和內(nèi)切核酸酶。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含cas9。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含cpf1。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含鋅指核酸酶。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含轉(zhuǎn)錄活化因子樣效應(yīng)物核酸酶(talen)系統(tǒng)。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了將外源劑例如藥劑遞送至靶細(xì)胞的方法，其中將所述外源劑負(fù)載到胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中。在某些實(shí)施方案中，靶細(xì)胞是不同于從中獲得外泌體的細(xì)胞類型的細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，負(fù)載到本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含多肽。在具體實(shí)施方案中，外源劑例如藥劑為結(jié)合劑，例如抗體，諸如人、人源化或嵌合抗體或其抗原結(jié)合片段。在特定實(shí)施方案中，抗體為單特異性、雙特異性或多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段。還有其它特定實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合片段為單鏈抗體或fab片段。在具體實(shí)施方案中，沒有胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的幫助，抗體或其抗原結(jié)合片段不會內(nèi)化到靶細(xì)胞中，例如不同于從中獲得外泌體的細(xì)胞類型的細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，負(fù)載到本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含一種或多種核酸。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種核酸包含sirna或mirna。在某些實(shí)施方案中，負(fù)載到本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含一種或多種基因修飾組分。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含crispr-cas系統(tǒng)。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含向?qū)na。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含內(nèi)切核酸酶。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含向?qū)na和內(nèi)切核酸酶。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含cas9。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含cpf1。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含鋅指核酸酶。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含轉(zhuǎn)錄活化因子樣效應(yīng)物核酸酶(talen)系統(tǒng)。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了向?qū)ο罄缛耸┯冒庠磩├缢巹┑耐饷隗w的方法。在某些實(shí)施方案中，外源劑例如藥劑包含多肽。在具體實(shí)施方案中，外源劑例如藥劑為結(jié)合劑，例如抗體，諸如人、人源化或嵌合抗體或其抗原結(jié)合片段。在特定實(shí)施方案中，抗體為單特異性、雙特異性或多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段。還有其它特定實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合片段為單鏈抗體或fab片段。在具體實(shí)施方案中，沒有外泌體的幫助，抗體或其抗原結(jié)合片段不會內(nèi)化到靶細(xì)胞中。在某些實(shí)施方案中，負(fù)載到本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含一種或多種核酸。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種核酸包含sirna或mirna。在某些實(shí)施方案中，負(fù)載到本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含一種或多種基因修飾組分。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含crispr-cas系統(tǒng)。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含向?qū)na。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含內(nèi)切核酸酶。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含向?qū)na和內(nèi)切核酸酶。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含cas9。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含cpf1。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含鋅指核酸酶。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含轉(zhuǎn)錄活化因子樣效應(yīng)物核酸酶(talen)系統(tǒng)。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了包含負(fù)載有一種或多種外源劑例如藥劑的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的組合物。在某些實(shí)施方案中，摻入本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含多肽。在具體實(shí)施方案中，外源劑例如藥劑為結(jié)合劑，例如抗體，諸如人、人源化或嵌合抗體或其抗原結(jié)合片段。在特定實(shí)施方案中，抗體為單特異性、雙特異性或多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段。還有其它特定實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合片段為單鏈抗體或fab片段。在具體實(shí)施方案中，沒有外泌體的幫助，抗體或其抗原結(jié)合片段不會內(nèi)化到靶細(xì)胞中。在某些實(shí)施方案中，負(fù)載到本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含一種或多種核酸。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種核酸包含sirna或mirna。在某些實(shí)施方案中，負(fù)載到本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含一種或多種基因修飾組分。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含crispr-cas系統(tǒng)。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含向?qū)na。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含內(nèi)切核酸酶。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含向?qū)na和內(nèi)切核酸酶。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含cas9。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含cpf1。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含鋅指核酸酶。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含轉(zhuǎn)錄活化因子樣效應(yīng)物核酸酶(talen)系統(tǒng)。

附圖說明

圖1顯示證明存在胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的外泌體抗體陣列的結(jié)果。上圖：來自于絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞的陽性對照；下圖：胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體。

圖2a-2b：圖2a是胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的電子顯微照片，箭頭指示的杯形結(jié)構(gòu)是外泌體的常見區(qū)別特征。圖2b顯示通過納米粒子跟蹤測定法確定的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的尺寸分布。

圖3a-3d顯示相比于來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體(圖3b)或在含有或缺乏血清的培養(yǎng)條件下分離的本文描述的非絨膜絨毛的胎盤來源的貼壁細(xì)胞的外泌體(圖3c和3d)，已知分子的洗脫圖譜(圖3a)。

圖4a-4c：圖4a顯示分離自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體或本文描述的外泌體中所含的各種微rna的水平。圖4b-4c顯示本文描述的外泌體上或內(nèi)部所含的各種血管生成蛋白的水平。

圖5顯示本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體被血液的某些細(xì)胞攝取的能力。

圖6顯示胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體和胎盤來源的貼壁細(xì)胞對人血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響。

圖7a-b顯示在隨胎盤來源的貼壁細(xì)胞或胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體孵育之后由受lps刺激的人血體外生成的各種細(xì)胞因子和趨化因子的水平。

圖8a-8g顯示胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體對血管內(nèi)皮細(xì)胞生長和增殖的影響。圖8a和8b顯示胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體在所述外泌體收集自含血清(圖8a)或缺乏血清(圖8b)的胎盤來源的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物時(shí)促進(jìn)培養(yǎng)的血管細(xì)胞的小管形成和分支的能力。圖8c顯示隨胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體共同培養(yǎng)之后vegf通路基因的相對表達(dá)。陰影越深對應(yīng)的表達(dá)越高，白色條目除外，其為陽性對照(即，18s、gapdh、hprt1和gusb)。圖8d-8g顯示在隨胎盤來源的貼壁細(xì)胞或胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體共同培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞之后，隨時(shí)間推移vegf通路基因在基因表達(dá)上的變化。用胎盤來源的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物上清液(十字)、50μg胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體(三角形)或作為對照的培養(yǎng)基(菱形)孵育培養(yǎng)的huvec。

圖9a-9b：圖9a顯示在隨胎盤來源的貼壁細(xì)胞或胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體共同培養(yǎng)之后單核細(xì)胞來源的巨噬細(xì)胞分泌的tnf-α和mcp-1的相對水平。圖9b顯示在隨胎盤來源的貼壁細(xì)胞或胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體共同培養(yǎng)之后巨噬細(xì)胞分泌的tnf-α和mcp-1(分別為左側(cè)和中間)的分泌水平。還顯示了(圖9b，右側(cè))完整或裂解的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體對il-8從單核細(xì)胞來源的巨噬細(xì)胞分泌的影響。

詳述

5.1胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體

如下所述，可通過其形態(tài)和/或分子標(biāo)志物來選擇和鑒定本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體。本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不同于本領(lǐng)域中已知的外泌體，例如絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體，例如salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的那些。因此，如本文中所用的術(shù)語“胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體”并非意在包括獲自或源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體。

在某些實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體群體不包含細(xì)胞，例如有核細(xì)胞，例如胎盤細(xì)胞，例如胎盤來源的貼壁細(xì)胞。

5.1.1.胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體標(biāo)志物

本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體含有可用于鑒定和/或分離所述外泌體的標(biāo)志物。這些標(biāo)志物可以是，例如蛋白質(zhì)、核酸、糖分子、糖基化蛋白質(zhì)、脂質(zhì)分子，并且可呈單體、寡聚體和/或多聚體形式存在。在某些實(shí)施方案中，標(biāo)志物由外泌體所源自的胎盤來源的貼壁細(xì)胞生成。在某些實(shí)施方案中，標(biāo)志物由外泌體所源自的胎盤來源的貼壁細(xì)胞提供，但標(biāo)志物不是由所述細(xì)胞以更高水平表達(dá)的。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的標(biāo)志物當(dāng)與對照標(biāo)志分子比較時(shí)，在外泌體中相比于源細(xì)胞更高。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，相比于獲自另一細(xì)胞類型(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞和前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的標(biāo)志物在所述外泌體中富集，其中外泌體是通過相同方法獲得的并且其中將外泌體所源自的細(xì)胞保持在相同條件下。

外泌體的三維結(jié)構(gòu)允許標(biāo)志物保留在外泌體表面和/或含于外泌體內(nèi)。類似地，標(biāo)志分子可部分存在于外泌體內(nèi)部，部分存在于外泌體的外表面上和/或穿過外泌體的磷脂雙層。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，與本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體相關(guān)的標(biāo)志物為蛋白質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，標(biāo)志物為跨膜蛋白，其錨定在外泌體磷脂雙層內(nèi)或穿過外泌體磷脂雙層錨定，使得部分蛋白質(zhì)分子處于外泌體內(nèi)部，而部分相同分子暴露于外泌體的外表面。在某些實(shí)施方案中，標(biāo)志物完全含于外泌體內(nèi)。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，與本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體相關(guān)的標(biāo)志物為核酸。在某些實(shí)施方案中，所述核酸為非編碼rna分子，例如微rna(mirna)。

5.1.1.1.表面標(biāo)志物

本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含表面標(biāo)志物，表面標(biāo)志物允許對其進(jìn)行鑒定并且可用于分離/獲得不含其來源的胎盤來源的貼壁細(xì)胞和其它細(xì)胞和非細(xì)胞物質(zhì)的基本上純的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體群體。用于確定外泌體表面標(biāo)志物組成的方法在本領(lǐng)域中已知。例如，可通過熒光活化細(xì)胞分選術(shù)(facs)或western印跡法檢測外泌體表面標(biāo)志物。

本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體含有允許將其與本領(lǐng)域已知的其它外泌體區(qū)別開的不同表面標(biāo)志物。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文提供的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含以下標(biāo)志物中的一種、兩種、三種、四種、五種或更多種：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295、cd200(通過例如facs所測定)。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，例如通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs所測定，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd55⁺和cd10⁺。

在具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd10⁺和cd55⁺(通過例如facs所測定)并且另外含有水平高于絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的cd82、cd142、cd49c和cd90。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd9⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd10⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd13⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd29⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd44⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd49b⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd49c⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd55⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd59⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd63⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd73⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd81⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd82⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd90⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd98⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd105⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd141⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd142⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd151⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd164⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd295⁺。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd200⁺。確定此類標(biāo)志物的存在可以例如通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs進(jìn)行。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述了含有以上提及的表面標(biāo)志物的任何組合的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體群體。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd9⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd10⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd13⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd29⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd44⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd49b⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd49c⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd55⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd59⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd63⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd73⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd81⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd82⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd90⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd98⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd105⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd141⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd142⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd151、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd151⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd164⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd295⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd200⁺并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd164和cd295。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd49b⁺、cd49c⁺、cd98⁺、cd29⁺、cd142⁺、cd10⁺、cd47⁺、cd55⁺、cd90⁺、cd147⁺、cd151⁺、cd166⁺、cd82⁺和cd200⁺。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述了含有以上提及的表面標(biāo)志物的任何組合的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體群體。

本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體通常不包含表面標(biāo)志物cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c或cd34。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd3^-。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd11b^-。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd14^-。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd19^-。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd33^-。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd192^-。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為hla-a^-。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為hla-b^-。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為hla-c^-。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為hla-dr^-。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd11c^-。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd34^-。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd3^-并且不包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd11b^-并且不包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd14^-并且不包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd19^-并且不包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd33^-并且不包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd192^-并且不包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為hla-a^-并且不包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為hla-b^-并且不包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為hla-c^-并且不包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為hla-dr^-并且不包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd11c^-并且不包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr和cd34

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd34^-并且不包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr和cd11c。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd3^-、cd11b^-、cd14^-、cd19^-、cd33^-、cd192^-、hla-a^-、hla-b^-、hla-c^-、hla-dr^-、cd11c^-和cd34^-。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd9+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd10+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd13+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd29+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd44+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd49b+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd49c+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd55+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd59+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd63+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd73+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd81+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd82+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd90+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd98+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd105+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd141+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd142+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd151、cd164、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd151+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd164、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd164+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd295和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd295+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151和cd200，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd200+并且另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd164和cd295，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述了含有以上提及的表面標(biāo)志物的任何組合的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體群體。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd9⁺、cd10⁺、cd13⁺、cd29⁺、cd44⁺、cd49b⁺、cd49c⁺、cd55⁺、cd59⁺、cd63⁺、cd73⁺、cd81⁺、cd82⁺、cd90⁺、cd98⁺、cd105⁺、cd141⁺、cd142⁺、cd151⁺、cd164⁺、cd295⁺和cd200⁺，而進(jìn)一步缺乏一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd3、cd11b、cd14、cd19、cd33、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c和cd34。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd3^-、cd11b^-、cd14^-、cd19^-、cd33^-、cd192^-、hla-a^-、hla-b^-、hla-c^-、hla-dr^-、cd11c^-和cd34^-，同時(shí)另外包含一種或多種選自下組的標(biāo)志物：cd9、cd10、cd13、cd29、cd44、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd82、cd90、cd98、cd105、cd141、cd142、cd151、cd164、cd295和cd200。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd9⁺、cd10⁺、cd13⁺、cd29⁺、cd44⁺、cd49b⁺、cd49c⁺、cd55⁺、cd59⁺、cd63⁺、cd73⁺、cd81⁺、cd82⁺、cd90⁺、cd98⁺、cd105⁺、cd141⁺、cd142⁺、cd151⁺、cd164⁺、cd295⁺、cd200⁺、cd3^-、cd11b^-、cd14^-、cd19^-、cd33^-、cd192^-、hla-a^-、hla-b^-、hla-c^-、hla-dr^-、cd11c^-和cd34^-。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的cd4、cd5、cd6、cd7、cd8、cd16、cd24、cd25、cd26、cd27、cd32、cd35、cd37、cd39、cd45、cd46、cd54、cd56、cd61、cd74、cd86、cd88、cd91、cd99、cd103、cd108、cd112、cd117、cd119、cd120a、cd123、cd126、cd130、cd134、cd138、cd140a、cd140b、cd144、cd146、cd147、cd152、cd163、cd183、cd184、cd186、cd191、cd194、cd196、cdw198、cd202b、cd220、cd221、cd235a、cd252、cd266、cd271、cd273、cd274、cd318、cd326、cd333、cd334、hla-dp、hla-dq、hla-g、igd、igm、ng2、pdgf和/或ssea-3。

在某些實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體為cd82⁺并且例如通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs所測定，含有低水平的cd141(即，為cd141(低))。

在某些實(shí)施方案中，通過例如facs所測定，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含比本領(lǐng)域已知的外泌體更高的量的表面標(biāo)志物。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含比非胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中所述標(biāo)志物的量更高的量的cd49c、cd82、cd90和/或cd142。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含比源自前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞或絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體中存在的所述標(biāo)志物的量更高的量的cd49c、cd82、cd90和/或cd142。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含比源自前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體中存在的所述標(biāo)志物的量更高的量的cd49c、cd73、cd82、cd90和/或cd142。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含比非胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中所述標(biāo)志物的量更低的量的cd164。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含比源自前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞或絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體中存在的所述標(biāo)志物的量更低的量的cd164。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體低兩倍、三倍、四倍、五倍、六倍、七倍、八倍、九倍或十倍的cd164，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd164含量，其中在同樣條件下收獲外泌體，并且其中所述源細(xì)胞在同樣條件下生長。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體低兩倍至三倍、三倍至四倍、四倍至五倍、五倍至六倍、六倍至七倍、七倍至八倍、八倍至九倍或九倍至十倍的cd164，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd164含量，其中在同樣條件下收獲外泌體，并且其中所述源細(xì)胞在同樣條件下生長。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體低兩倍、三倍、四倍、五倍、六倍、七倍、八倍、九倍或十倍的cd164，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd164含量，并且其中每份樣品使用相同數(shù)量和/或質(zhì)量的外泌體。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體低兩倍至三倍、三倍至四倍、四倍至五倍、五倍至六倍、六倍至七倍、七倍至八倍、八倍至九倍或九倍至十倍的cd164，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd164含量，并且其中每份樣品使用相同數(shù)量和/或質(zhì)量的外泌體。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍、三倍、四倍、五倍、六倍、七倍、八倍、九倍或十倍的cd49c，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd49c含量，其中在同樣條件下收獲外泌體，并且其中所述源細(xì)胞在同樣條件下生長。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍至三倍、三倍至四倍、四倍至五倍、五倍至六倍、六倍至七倍、七倍至八倍、八倍至九倍或九倍至十倍的cd49c，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd49c含量，其中在同樣條件下收獲外泌體，并且其中所述源細(xì)胞在同樣條件下生長。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍、三倍、四倍、五倍、六倍、七倍、八倍、九倍或十倍的cd49c，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd49c含量，并且其中每份樣品使用相同數(shù)量和/或質(zhì)量的外泌體。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍至三倍、三倍至四倍、四倍至五倍、五倍至六倍、六倍至七倍、七倍至八倍、八倍至九倍或九倍至十倍的cd49c，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd49c含量，并且其中每份樣品使用相同數(shù)量和/或質(zhì)量的外泌體。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍、三倍、四倍、五倍、六倍、七倍、八倍、九倍或十倍的cd73，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd73含量，其中在同樣條件下收獲外泌體，并且其中所述源細(xì)胞在同樣條件下生長。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍至三倍、三倍至四倍、四倍至五倍、五倍至六倍、六倍至七倍、七倍至八倍、八倍至九倍或九倍至十倍的cd73，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd73含量，其中在同樣條件下收獲外泌體，并且其中所述源細(xì)胞在同樣條件下生長。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍、三倍、四倍、五倍、六倍、七倍、八倍、九倍或十倍的cd73，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd73含量，并且其中每份樣品使用相同數(shù)量和/或質(zhì)量的外泌體。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍至三倍、三倍至四倍、四倍至五倍、五倍至六倍、六倍至七倍、七倍至八倍、八倍至九倍或九倍至十倍的cd73，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd73含量，并且其中每份樣品使用相同數(shù)量和/或質(zhì)量的外泌體。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍、三倍、四倍、五倍、六倍、七倍、八倍、九倍或十倍的cd82，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd82含量，其中在同樣條件下收獲外泌體，并且其中所述源細(xì)胞在同樣條件下生長。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍至三倍、三倍至四倍、四倍至五倍、五倍至六倍、六倍至七倍、七倍至八倍、八倍至九倍或九倍至十倍的cd82，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd82含量，其中在同樣條件下收獲外泌體，并且其中所述源細(xì)胞在同樣條件下生長。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍、三倍、四倍、五倍、六倍、七倍、八倍、九倍或十倍的cd82，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd82含量，并且其中每份樣品使用相同數(shù)量和/或質(zhì)量的外泌體。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍至三倍、三倍至四倍、四倍至五倍、五倍至六倍、六倍至七倍、七倍至八倍、八倍至九倍或九倍至十倍的cd82，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd82含量，并且其中每份樣品使用相同數(shù)量和/或質(zhì)量的外泌體。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍、三倍、四倍、五倍、六倍、七倍、八倍、九倍或十倍的cd90，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd90含量，其中在同樣條件下收獲外泌體，并且其中所述源細(xì)胞在同樣條件下生長。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍至三倍、三倍至四倍、四倍至五倍、五倍至六倍、六倍至七倍、七倍至八倍、八倍至九倍或九倍至十倍的cd90，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd90含量，其中在同樣條件下收獲外泌體，并且其中所述源細(xì)胞在同樣條件下生長。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍、三倍、四倍、五倍、六倍、七倍、八倍、九倍或十倍的cd90，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd90含量，并且其中每份樣品使用相同數(shù)量和/或質(zhì)量的外泌體。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍至三倍、三倍至四倍、四倍至五倍、五倍至六倍、六倍至七倍、七倍至八倍、八倍至九倍或九倍至十倍的cd90，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd90含量，并且其中每份樣品使用相同數(shù)量和/或質(zhì)量的外泌體。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍、三倍、四倍、五倍、六倍、七倍、八倍、九倍或十倍的cd142，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd142含量，其中在同樣條件下收獲外泌體，并且其中所述源細(xì)胞在同樣條件下生長。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍至三倍、三倍至四倍、四倍至五倍、五倍至六倍、六倍至七倍、七倍至八倍、八倍至九倍或九倍至十倍的cd142，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd142含量，其中在同樣條件下收獲外泌體，并且其中所述源細(xì)胞在同樣條件下生長。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍、三倍、四倍、五倍、六倍、七倍、八倍、九倍或十倍的cd142，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd142含量，并且其中每份樣品使用相同數(shù)量和/或質(zhì)量的外泌體。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍至三倍、三倍至四倍、四倍至五倍、五倍至六倍、六倍至七倍、七倍至八倍、八倍至九倍或九倍至十倍的cd142，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd142含量，并且其中每份樣品使用相同數(shù)量和/或質(zhì)量的外泌體。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍、三倍、四倍、五倍、六倍、七倍、八倍、九倍或十倍的cd49c、cd90、cd142和cd82，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd49c、cd90、cd142和cd82含量，其中在同樣條件下收獲外泌體，并且其中所述源細(xì)胞在同樣條件下生長。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍至三倍、三倍至四倍、四倍至五倍、五倍至六倍、六倍至七倍、七倍至八倍、八倍至九倍或九倍至十倍的cd49c、cd90、cd142和cd82，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd49c、cd90、cd142和cd82含量，其中在同樣條件下收獲外泌體，并且其中所述源細(xì)胞在同樣條件下生長。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍、三倍、四倍、五倍、六倍、七倍、八倍、九倍或十倍的cd49c、cd90、cd142和cd82，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd49c、cd90、cd142和cd82含量，并且其中每份樣品使用相同數(shù)量和/或質(zhì)量的外泌體。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平比源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)或前脂肪細(xì)胞間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體高兩倍至三倍、三倍至四倍、四倍至五倍、五倍至六倍、六倍至七倍、七倍至八倍、八倍至九倍或九倍至十倍的cd49c、cd90、cd142和cd82，其中在相同實(shí)驗(yàn)條件下(例如，通過流式細(xì)胞術(shù)，例如通過facs)測量cd49c、cd90、cd142和cd82含量，并且其中每份樣品使用相同數(shù)量和/或質(zhì)量的外泌體。

除本文描述的外泌體標(biāo)志物以外，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體另外可包含某些其它外泌體標(biāo)志物。例如，在具體實(shí)施方案中，除本文描述的任何標(biāo)志物組合以外，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體還包含外泌體表面標(biāo)志物flot1、alix、anxa5和tsg101。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文公開了含有以上提及的表面標(biāo)志物的任何組合的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的組合物。

5.1.1.2.微rna

在某些實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體含有一種或多種核酸分子，例如一種或多種非編碼rna分子。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文提供的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含微rna(mirna)。通常，mirna是調(diào)節(jié)大范圍的細(xì)胞功能并牽涉于疾病和代謝調(diào)控的17-22個(gè)核苷酸(nt)的非編碼rna。檢測mirna水平的方法在本領(lǐng)域中公知，例如實(shí)時(shí)pcr(rt-pcr)，例如taqman測定法。在其它具體實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體含有mirna，當(dāng)進(jìn)行rt-pcr并且與對照rna比較時(shí)，所述mirna所含水平比絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞中相同的mirna高1.1、2、5、10、100、500、600、700、800、900、1000、1100或1200倍，或比絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞中相同的mirna高1.1至2、2至5、2至10、5至10、10至100、100至500、500至600、600至700、700至800、800至900、900至1000、1000至1100或1100至1200倍之間。

在某些實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體含有可檢測水平的以下mirna中的一種、兩種、三種、四種或更多種：mir-218-5p、mir-133b、mir-422a、mir-564、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-124-5p、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p。在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-218-5p。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-133b。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-422a。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-564。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-16-5p。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的let-7a。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-92。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-142-3p。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-451。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-124-5p。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-223-3p。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-630。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-296-5p。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的let-7b-3p。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的let-7d-3p。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-218-5p并且另外包含可檢測水平的一種或多種選自下組的mirna：mir-133b、mir-422a、mir-564、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-124-5p、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-133b并且另外包含可檢測水平的一種或多種選自下組的mirna：mir-218-5p、mir-422a、mir-564、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-124-5p、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-422a并且另外包含可檢測水平的一種或多種選自下組的mirna：mir-218-5p、mir-133b、mir-564、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-124-5p、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-564并且另外包含可檢測水平的一種或多種選自下組的mirna：mir-218-5p、mir-133b、mir-422a、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-124-5p、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-16-5p并且另外包含可檢測水平的一種或多種選自下組的mirna：mir-218-5p、mir-133b、mir-422a、mir-564、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-124-5p、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的let-7a并且另外包含可檢測水平的一種或多種選自下組的mirna：mir-218-5p、mir-133b、mir-422a、mir-564、mir-16-5p、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-124-5p、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-92并且另外包含可檢測水平的一種或多種選自下組的mirna：mir-218-5p、mir-133b、mir-422a、mir-564、mir-16-5p、let-7a、mir-142-3p、mir-451、mir-124-5p、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-142-3p并且另外包含可檢測水平的一種或多種選自下組的mirna：mir-218-5p、mir-133b、mir-422a、mir-564、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-451、mir-124-5p、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-451并且另外包含可檢測水平的一種或多種選自下組的mirna：mir-218-5p、mir-133b、mir-422a、mir-564、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-124-5p、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-124-5p并且另外包含可檢測水平的一種或多種選自下組的mirna：mir-218-5p、mir-133b、mir-422a、mir-564、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-223-3p并且另外包含可檢測水平的一種或多種選自下組的mirna：mir-218-5p、mir-133b、mir-422a、mir-564、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-124-5p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-630并且另外包含可檢測水平的一種或多種選自下組的mirna：mir-218-5p、mir-133b、mir-422a、mir-564、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-124-5p、mir-223-3p、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的mir-296-5p并且另外包含可檢測水平的一種或多種選自下組的mirna：mir-218-5p、mir-133b、mir-422a、mir-564、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-124-5p、mir-223-3p、mir-630、let-7b-3p和let-7d-3p。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的let-7b-3p并且另外包含可檢測水平的一種或多種選自下組的mirna：mir-218-5p、mir-133b、mir-422a、mir-564、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-124-5p、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p和let-7d-3p。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含可檢測水平的let-7d-3p并且另外包含可檢測水平的一種或多種選自下組的mirna：mir-218-5p、mir-133b、mir-422a、mir-564、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-124-5p、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p和let-7b-3p。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含mir-218-5p、mir-133b、mir-422a、mir-564、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-124-5p、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p。

在某些實(shí)施方案中，可以基于其包含的mirna將本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體與來自其它細(xì)胞(例如絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞，例如salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體區(qū)別開。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，當(dāng)在同樣條件下處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體比較時(shí)，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平高至少兩倍的mir-133b。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平高至少兩倍的mir-422a。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平高至少兩倍的mir-16-5p。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平高至少兩倍的let-7a。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平高至少兩倍的mir-92。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平高至少兩倍的mir-142-3p。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平高至少兩倍的mir-451。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平高至少兩倍的mir-124-5p。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平高至少兩倍的mir-223-3p。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平高至少兩倍的mir-630。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平高至少兩倍的mir-296-5p。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平高至少兩倍的let-7b-3p。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含水平高至少兩倍的let-7d-3p。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含mir-133b并且另外包含一種或多種選自下組的mirna：mir-422a、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，所述mirna的水平高至少兩倍。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含mir-422a并且另外包含一種或多種選自下組的mirna：mir-133b、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，所述mirna的水平高至少兩倍。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含mir-16-5p并且另外包含一種或多種選自下組的mirna：mir-133b、mir-422a、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，所述mirna的水平高至少兩倍。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含let-7a并且另外包含一種或多種選自下組的mirna：mir-133b、mir-422a、mir-16-5p、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，所述mirna的水平高至少兩倍。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含mir-92并且另外包含一種或多種選自下組的mirna：mir-133b、mir-422a、mir-16-5p、let-7a、mir-142-3p、mir-451、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，所述mirna的水平高至少兩倍。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含mir-142-3p并且另外包含一種或多種選自下組的mirna：mir-133b、mir-422a、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-451、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，所述mirna的水平高至少兩倍。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含mir-451并且另外包含一種或多種選自下組的mirna：mir-133b、mir-422a、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，所述mirna的水平高至少兩倍。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含mir-223-3p并且另外包含一種或多種選自下組的mirna：mir-133b、mir-422a、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，所述mirna的水平高至少兩倍。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含mir-630并且另外包含一種或多種選自下組的mirna：mir-133b、mir-422a、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-223-3p、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，所述mirna的水平高至少兩倍。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含mir-296-5p并且另外包含一種或多種選自下組的mirna：mir-133b、mir-422a、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-223-3p、mir-630、let-7b-3p和let-7d-3p，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，所述mirna的水平高至少兩倍。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含let-7b-3p并且另外包含一種或多種選自下組的mir-133b、mir-422a、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p和let-7d-3p，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，所述mirna的水平高至少兩倍。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含let-7d-3p并且另外包含一種或多種選自下組的mirna：mir-133b、mir-422a、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p和let-7b-3p，當(dāng)通過同樣方法處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體相比，所述mirna的水平高至少兩倍。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體包含mir-133b、mir-422a、mir-16-5p、let-7a、mir-92、mir-142-3p、mir-451、mir-223-3p、mir-630、mir-296-5p、let-7b-3p和let-7d-3p或前述任何一種的組合，當(dāng)通過同樣條件處理外泌體及其所來源的細(xì)胞時(shí)，與來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞)的外泌體比較時(shí)，其水平高至少兩倍。

5.1.1.3.血管生成蛋白

在某些實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體含有一種或多種促進(jìn)血管生成的蛋白質(zhì)。檢測血管生成蛋白水平的方法在本領(lǐng)域中公知，例如，使用基于elisa的方法，例如angiosecretomemilliplex(millipore)。在具體實(shí)施方案中，通過下文6.2.4.3部分中描述的方法測定與本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體相關(guān)的血管生成蛋白的存在和相對水平。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體含有一種或多種選自下組的血管生成蛋白：內(nèi)皮糖蛋白、瘦素、血管生成素-2、g-csf、卵泡抑素、fgf-2、hgf、vegf-a、il-8和egf。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體含有一種或多種選自下組的血管生成蛋白：內(nèi)皮糖蛋白、瘦素、血管生成素-2、g-csf、卵泡抑素、fgf-2、hgf、vegf-a、il-8和egf，其水平比缺乏外泌體的培養(yǎng)基高。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述血管生成蛋白以高于10pg/ml、50pg/ml、100pg/ml、500pg/ml、1,000pg/ml、2,000pg/ml、4,000pg/ml、6,000pg/ml、8,000pg/ml、10,000pg/ml、12,000pg/ml、14,000pg/ml、16,000pg/ml、18,000pg/ml、20,000pg/ml、25,000pg/ml、30,000pg/ml、35,000pg/ml、40,000pg/ml、45,000pg/ml或50,000pg/ml或更高的濃度存在于培養(yǎng)基中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述血管生成蛋白以10pg/ml至50pg/ml、50pg/ml至100pg/ml、100pg/ml至500pg/ml、500pg/ml至1,000pg/ml、1,000pg/ml至2,000pg/ml、2,000pg/ml至4,000pg/ml、4,000pg/ml至6,000pg/ml、6,000pg/ml至8,000pg/ml、8,000pg/ml至10,000pg/ml、10,000pg/ml12,000pg/ml、12,000pg/ml至14,000pg/ml、14,000pg/ml至16,000pg/ml、16,000pg/ml至18,000pg/ml、18,000pg/ml至20,000pg/ml、20,000pg/ml至25,000pg/ml、25,000pg/ml至30,000pg/ml、30,000pg/ml至35,000pg/ml、35,000pg/ml至40,000pg/ml、40,000pg/ml至45,000pg/ml或45,000pg/ml至50,000pg/ml的濃度存在于培養(yǎng)基中。

5.1.2.外泌體尺寸和區(qū)別特征

在某些實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體直徑為約50nm至150nm。在某些實(shí)施方案中，通過本領(lǐng)域中已知的方法(例如，電子顯微鏡術(shù)和納米粒子跟蹤測定法)測定，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體直徑為約70nm至150nm，直徑為約100nm至150nm，或直徑為約130nm至145nm。在某些實(shí)施方案中，可基于其尺寸將本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體與細(xì)胞和/或非細(xì)胞碎片區(qū)別開。在某些實(shí)施方案中，可通過其形狀區(qū)別本文描述的外泌體，例如，當(dāng)通過本領(lǐng)域中已知的成像技術(shù)(例如，電子顯微鏡術(shù))檢查時(shí)，本文描述的外泌體為杯形。

在某些實(shí)施方案中，可基于其分子組成(例如，表面標(biāo)志蛋白或mirna分子)鑒定本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體。參見5.1.1部分。在某些實(shí)施方案中，可基于其分子圖譜(例如，其包含的表面標(biāo)志蛋白和/或mirna分子)將本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體與其它外泌體(即，非胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體)區(qū)別開。

5.1.3.胎盤來源的貼壁細(xì)胞

本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體源自胎盤來源的貼壁細(xì)胞(例如，美國專利第7,468,276、8,057,788和8,202,703號中公開的胎盤來源的貼壁細(xì)胞，該專利的公開內(nèi)容據(jù)此通過引用整體并入)。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體源自cd34^-、cd10⁺、cd105⁺和cd200⁺胎盤來源的貼壁細(xì)胞。

在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體源自胎盤來源的貼壁細(xì)胞，其以比骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞高至少兩倍的水平表達(dá)一個(gè)或多個(gè)基因，其中所述基因選自actg2、adarb1、amigo2、arts-1、b4galt6、bche、c11orf9、cd200、col4a1、col4a2、cpa4、dmd、dsc3、dsg2、elovl2、f2rl1、fij10781、gata6、gpr126、gprc5b、hla-g、icam1、ier3、igfbp7、il1a、il6、il18、krt18、krt8、lipg、lrap、matn2、mest、nfe2l3、nuak1、pcdh7、pdlim3、pjp2、rtn1、serpinb9、st3gal6、st6galnac5、slc12a8、tcf21、tgfb2、vtn和zc3h12a。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文描述的外泌體所源自的胎盤來源的貼壁細(xì)胞以比骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞高至少兩倍的水平衍生表達(dá)一個(gè)或多個(gè)基因，其中所述一個(gè)或多個(gè)基因是lovl2、st3gal6、st6galnac5和/或slc12a8中的一個(gè)或多個(gè)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供的外泌體所源自的胎盤來源的貼壁細(xì)胞以比骨髓來源的間充質(zhì)干細(xì)胞高至少兩倍的水平衍生表達(dá)一個(gè)或多個(gè)基因，其中所述一個(gè)或多個(gè)基因是cpa4、tcf21、vtn、b4galt6、flj10781和/或nuak1中的一個(gè)或多個(gè)。

在某些實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體獲自培養(yǎng)生長的胎盤來源的貼壁細(xì)胞，例如已附著于組織培養(yǎng)基質(zhì)的胎盤來源的貼壁細(xì)胞，或獲自已經(jīng)施用給活生物體(例如，哺乳動物，例如人)的胎盤來源的貼壁細(xì)胞。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，細(xì)胞在血清的存在下培養(yǎng)。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，在不存在血清的情況下培養(yǎng)細(xì)胞。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體所源自的胎盤來源的貼壁細(xì)胞基本上是胎兒來源的，例如，胎盤來源的貼壁細(xì)胞約或至少90％、95％、99％或100％是胎兒來源的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體所源自的胎盤來源的貼壁細(xì)胞是混合來源的，例如胎盤來源的貼壁細(xì)胞為胎兒和母體來源兩種。

在某些實(shí)施方案中，在從胎盤來源的貼壁細(xì)胞分離外泌體之前，本文提供的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體所源自的胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)傳代。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，在從胎盤來源的貼壁細(xì)胞分離外泌體之前，本文提供的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體所源自的胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)傳代約或至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18或20次。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文提供的外泌體收集自已經(jīng)體外培養(yǎng)6代的胎盤來源的貼壁細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，本文提供的外泌體收集自第6代平板接種的胎盤來源的貼壁細(xì)胞，和收集自第7代的培養(yǎng)物上清液。

在某些實(shí)施方案中，在從胎盤來源的貼壁細(xì)胞分離外泌體之前，本文提供的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體所源自的胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，在某些實(shí)施方案中，在從胎盤來源的貼壁細(xì)胞分離外泌體之前，本文提供的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體所源自的胎盤來源的貼壁細(xì)胞已經(jīng)擴(kuò)增以進(jìn)行1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38或40次群體倍增或更多。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文提供的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體所源自的胎盤來源的貼壁細(xì)胞不是絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞且/或不包含絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞，例如，本文提供的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體所源自的胎盤來源的貼壁細(xì)胞不是salomon等，2013,plosone,8:7,e68451描述的絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞。在另一個(gè)實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞所源自的來源不含絨膜絨毛。

5.2.分離胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的方法

5.2.1.從培養(yǎng)基獲得外泌體的方法

本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體可由，例如5.1.3部分中描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞生成。在某些實(shí)施方案中，此類胎盤來源的貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)引起外泌體向培養(yǎng)基中的沉積，其中可以使用本文描述的且本領(lǐng)域已知的技術(shù)從培養(yǎng)基中分離所述外泌體。本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的分離可基于與胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體相關(guān)的特定表面標(biāo)志分子，使用尺寸過濾，使用密度依賴性離心及通過使用本領(lǐng)域已知的其它方法來實(shí)現(xiàn)。在某些實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的分離可結(jié)合兩種或更多種技術(shù)以從培養(yǎng)基中存在的污染性細(xì)胞和非細(xì)胞物質(zhì)中基本上純化外泌體群體。

5.2.1.1.通過超速離心分離外泌體

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，使用超速離心將本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體與細(xì)胞培養(yǎng)基的其它組分分開。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，分離并高速(例如，100,000xg)離心收集自胎盤來源的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物的培養(yǎng)基一定時(shí)間，時(shí)間足以將胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體與培養(yǎng)基中存在的細(xì)胞和非細(xì)胞物質(zhì)分開。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，在收集培養(yǎng)基以分離胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體之前，在血清(例如，胎牛血清)的存在下培養(yǎng)胎盤來源的貼壁細(xì)胞。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，在收集培養(yǎng)基以分離胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體之前，在不存在血清(例如，胎牛血清)的情況下培養(yǎng)胎盤來源的貼壁細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，根據(jù)下文實(shí)施例1的方法分離并離心收集自胎盤來源的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物的培養(yǎng)基。

5.2.1.2.通過熒光活化細(xì)胞分選術(shù)分離外泌體

可以在含有一種或多種表面標(biāo)志蛋白的基礎(chǔ)上和/或在缺乏一種或多種表面標(biāo)志蛋白的基礎(chǔ)上分離和/或純化本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體。具體地，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體可基本上與非胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體或不含目標(biāo)表面標(biāo)志物的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體分離。例如，含有表面標(biāo)志物特定組合的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的一個(gè)亞群可與一個(gè)或多個(gè)另外的含獨(dú)特或基本上不同的表面標(biāo)志物組合的外泌體(胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體)群體分離。因此，可以在本文描述的表面標(biāo)志物任何組合的基礎(chǔ)上分離和/或純化本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體。參見5.1.1部分。

在一個(gè)實(shí)施方案中，熒光活化細(xì)胞分選術(shù)(facs)用于使用對外泌體上存在的細(xì)胞表面標(biāo)志物有特異性的抗體，分離和/或純化本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體。使用facs分離細(xì)胞和外泌體的方法在本領(lǐng)域中公知。

在一個(gè)實(shí)施方案中，純化/分離本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的方法包括在足以允許在所述外泌體和所述基質(zhì)之間產(chǎn)生復(fù)合物(例如，通過被動吸附)的條件下使本文描述的外泌體群體與固體基質(zhì)(例如，乳膠珠粒)接觸一段時(shí)間。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，根據(jù)本文描述的方法(例如，本文描述的facs)分離在足以允許在所述外泌體和所述基質(zhì)之間產(chǎn)生復(fù)合物(例如，通過被動吸附)的條件下與固體基質(zhì)(例如，乳膠珠粒)接觸一段時(shí)間的外泌體群體。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，可以使用兩部分“夾心”檢測技術(shù)純化和/或分離本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，部分純化或未純化群體中的外泌體首先與基質(zhì)，例如涂布有對本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體表面上存在的蛋白質(zhì)有特異性的抗體的珠粒群體(例如，乳膠珠粒群體)接觸。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，使用此類方法，將特異性識別cd63的抗體用于分離本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，使用此類方法，將特異性識別mhcii類分子家族成員的抗體用于分離本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體。在第一個(gè)接觸步驟之后，使與基質(zhì)結(jié)合的外泌體與對本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體表面上存在的表面標(biāo)志蛋白有特異性的第二分子接觸。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，表面分子為四跨膜蛋白(tetraspanin)并且所述抗體為熒光標(biāo)記抗體。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，表面分子為flot1、alix、anxa5、tsg101、annexinv、cd3、cd9、cd10、cd11b、cd13、cd14、cd19、cd29、cd33、cd44、cd46、cd47、cd49b、cd49c、cd55、cd59、cd63、cd73、cd81、cd90、cd98、cd105、cd142、cd147、cd151、cd164、cd166、cd192、hla-a、hla-b、hla-c、hla-dr、cd11c、cd34、cd49d或cd200中的任一種。

5.2.1.3.使用尺寸排阻色譜法分離外泌體

可以與培養(yǎng)基中存在的常見污染物，包括甲狀腺球蛋白二聚體、甲狀腺球蛋白單體、免疫球蛋白(例如，igg)、牛血清白蛋白(bsa)、肌肉球蛋白和尿嘧啶(參見6.3部分)分離和/或純化本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)樣品在hplc上以0.5ml/min的流速運(yùn)行時(shí)在分級收集開始10分鐘至11分鐘或11分鐘至12分鐘后收集的成分中，通過從尺寸排阻柱(例如，tskguardswxl柱)洗脫，將所述樣品中本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體與常見培養(yǎng)基污染物(例如，甲狀腺球蛋白、igg、bsa、肌肉球蛋白和尿嘧啶)區(qū)別開。在具體實(shí)施方案中，所述樣品在hplc上以0.5ml/min的流速運(yùn)行之后，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體在從尺寸排阻柱(例如，tskguardswxl柱)收集的樣品的第一可檢測峰洗脫。

外泌體的分離可基于尺寸，例如約50-150nm的直徑。因此，外泌體尺寸允許使用諸如高效液相色譜法(hplc)結(jié)合尺寸排阻色譜法等技術(shù)來分離基本上純的外泌體群體和/或測定分離的外泌體群體的純度。具體而言，通過本文描述的方法之一純化和/或分離的外泌體可通過hplc后續(xù)純化以去除污染性大分子和其它不需要的污染物。使用hplc和尺寸排阻色譜法分離混合分子群體的方法在本領(lǐng)域中公知并且依賴于半多孔基質(zhì)和離子/ph梯度來差異性分離混合群體的各種組分。

在一個(gè)實(shí)施方案中，使用包括hplc的方法(例如，使用agilent1200系列l(wèi)c系統(tǒng))進(jìn)一步純化本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體(例如，先前從培養(yǎng)基分離的外泌體)。在一個(gè)特定實(shí)施方案中，所述方法還包括使用尺寸排阻色譜柱(例如，tskguardswxl和/或tsk凝膠g4000，tosohcorp.)和固定流速(例如，0.5ml/min)的緩沖液(例如，20mmk2po4、150mmnacl，ph7.2)。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的直徑為50-150nm。

5.2.2.體內(nèi)抗體捕獲

在一個(gè)特定實(shí)施方案中，在引入本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞或胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體后從對象(例如，小鼠或人)分離本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體。在一個(gè)實(shí)施方案中，為對象(例如，小鼠)注射對本文描述的外泌體內(nèi)部或上面所含的蛋白質(zhì)有特異性的抗體，其中所述抗體與第二高親和力分子(例如，生物素)偶聯(lián)。另外為所述對象(例如，小鼠)注射(例如，靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或肌肉注射)本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞和/或分離的胎盤來源的貼壁細(xì)胞。在足以使所述胎盤來源的貼壁細(xì)胞生成外泌體的時(shí)間后，分離來自于對象(例如，小鼠)的血液，其含有包含胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體和對本文描述的外泌體蛋白質(zhì)有特異性的抗體的復(fù)合物。可通過接觸對偶聯(lián)至所述抗體的第二高親和力分子(例如，生物素)有特異性的基質(zhì)(例如，鏈霉親和素)而純化所述抗體-外泌體復(fù)合物，并且所得抗體-外泌體復(fù)合物可根據(jù)本文描述的任何方法進(jìn)一步純化。

5.2.3.量化

可以量化從本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物分離的外泌體以測定總產(chǎn)量。量化外泌體產(chǎn)量的方法在本領(lǐng)域中已知并且包括bradford測定法、bca測定法、分光光度法(例如，使用nanodrop分光光度計(jì))、直接酶聯(lián)免疫吸附測定法(例如cd63/cd9/cd81exoelisa(systembiosciences))、成像技術(shù)諸如納米粒子跟蹤分析(例如，nanosightlm10(malverninstruments)或諸如qnano(izon)的基于電阻抗的測量)。根據(jù)這些方法，可按照分離的物質(zhì)的總量(例如，每天每個(gè)細(xì)胞分離的外泌體物質(zhì)的質(zhì)量)或按照規(guī)定體積的培養(yǎng)基單個(gè)粒子的數(shù)量(例如，每ml培養(yǎng)基的外泌體粒子)測定外泌體產(chǎn)量。

5.2.4.產(chǎn)量

可以根據(jù)本文描述的方法分離本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體并且可量化其產(chǎn)量。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，以約0.5-5.0mg/l培養(yǎng)基(例如，有或無血清的培養(yǎng)基)的濃度分離本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，以約2-3mg/l培養(yǎng)基(例如，含血清的培養(yǎng)基)的濃度分離本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，以約0.5-1.5mg/l培養(yǎng)基(例如，缺乏血清的培養(yǎng)基)的濃度分離本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體。

5.2.5.儲存和保藏

本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體可保藏，即放置在允許長期儲存的條件下，或抑制外泌體降解的條件下。

在某些實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體在根據(jù)上述方法收集之后可在適當(dāng)溫度下儲存在包含緩沖劑的組合物中。在某些實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體冷凍儲存，例如在約-20℃或約-80℃下。

在某些實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體可冷藏，例如在小容器，例如安瓿(例如，2ml的小瓶)中。在某些實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體以約0.1mg/ml至約10mg/ml的濃度冷藏。

在某些實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體冷藏在約-80℃至約-180℃的溫度下。解凍使用之前可以將冷藏的外泌體轉(zhuǎn)移到液氮中。在一些實(shí)施方案中，例如，一旦安瓿達(dá)到約-90℃，就將其轉(zhuǎn)移到液氮儲存區(qū)。冷藏也可使用控速冷凍機(jī)進(jìn)行。使用之前在約25℃至約40℃的溫度下使冷藏的外泌體解凍。

在某些實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體短時(shí)間(例如，少于兩周)儲存在約4℃至約20℃的溫度下。

5.3.組合物

本文還提供了包含本文提供的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的組合物，例如藥物組合物。參見例如，5.1部分。本文描述的組合物用于治療對象(例如，人對象)中的某些疾病和病癥，其中用外泌體治療是有益的。參見5.4.1部分。

在某些實(shí)施方案中，除包含本文提供的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體以外，本文描述的組合物(例如，藥物組合物)還包含藥學(xué)上可接受的載體。如本文中所用，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”意指經(jīng)聯(lián)邦監(jiān)管機(jī)構(gòu)或國家政府批準(zhǔn)或列入美國藥典(u.s.pharmacopeia)或其它公認(rèn)的藥典中用于動物中，并且特別是用于人中。術(shù)語“載體”，如本文在藥學(xué)上可接受的載體的上下文中所用，是指藥物組合物與之一起施用的稀釋劑、佐劑、賦形劑或媒介物。鹽水溶液及葡萄糖和甘油水溶液也可用作液體載體，特別是用于注射液。合適的賦形劑包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、水稻、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂乳粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。合適的藥物載體的實(shí)例在jpremington和argennaro的“remington'spharmaceuticalsciences”，1990，第18版中有描述。

在某些實(shí)施方案中，本文描述的組合物另外包含一種或多種緩沖液，例如鹽水、磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)、杜爾貝科pbs(dpbs)和/或蔗糖磷酸谷氨酸鹽緩沖液。在其它實(shí)施方案中，本文描述的組合物不含緩沖液。在某些實(shí)施方案中，本文描述的組合物另外包含plasmalyte。

在某些實(shí)施方案中，本文描述的組合物另外包含一種或多種鹽，例如氯化鈉、氯化鈣、磷酸鈉、谷氨酸一鈉和鋁鹽(例如，氫氧化鋁、磷酸鋁、明礬(硫酸鋁鉀)或此類鋁鹽的混合物)。在其它實(shí)施方案中，本文描述的組合物不含鹽。

本文描述的組合物可隨施用說明書一起包括在容器、包裝或分配器中。

本文描述的組合物在使用之前可儲存，例如，該組合物可冷凍儲存(例如，在約-20℃下或在約-80℃下)；儲存在制冷條件下(例如，在約4℃下)；或儲存在室溫下。

5.3.1.制劑和施用途徑

將在疾病或病狀的治療和/或預(yù)防中治療性用途有效的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體(參見5.1部分)或本文描述的組合物(參見5.3部分)的量將取決于疾病的特性，并且可通過標(biāo)準(zhǔn)臨床技術(shù)測定。待向?qū)ο笫┯玫奶ケP來源的貼壁細(xì)胞外泌體或其組合物的精確劑量還將取決于施用途徑和待治療的疾病或病狀的嚴(yán)重性，并且應(yīng)該根據(jù)醫(yī)師的判斷和每位對象的情形來決定。例如，有效劑量可根據(jù)施用方式，靶位點(diǎn)，患者的生理狀態(tài)(包括年齡、體重和健康狀況)，患者是人還是動物，施用的其它藥物及治療是預(yù)防性的還是治療性的而改變。治療劑量經(jīng)最佳滴定以優(yōu)化安全性和功效。

本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體(參見5.1部分)或其組合物(參見5.3部分)的施用可經(jīng)由本領(lǐng)域已知的各種途徑進(jìn)行。在某些實(shí)施方案中，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體或其組合物通過局部、全身、皮下、腸胃外、靜脈內(nèi)、肌肉、局部性、口服、皮內(nèi)、經(jīng)皮或鼻內(nèi)施用。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述施用經(jīng)由靜脈內(nèi)注射。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述施用經(jīng)由皮下注射。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述施用是局部性。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體或其組合物在包含細(xì)胞外基質(zhì)的制劑中施用。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體或其組合物與一種或多種附加遞送裝置，例如支架組合施用。在另一個(gè)具體實(shí)施方案中，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體或其組合物局部施用，例如在待用所述外泌體或組合物治療的區(qū)域部位，諸如缺氧組織(例如，在缺血性疾病的治療中)或引流淋巴結(jié)處或周圍。

5.4.使用方法

5.4.1.受益于血管生成的疾病的治療

本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體(參見5.1部分)及其組合物(參見5.3部分)促進(jìn)血管生成，并且，因此可用于治療受益于血管生成的疾病和病癥。因此，本文提供了使用本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體或其組合物促進(jìn)有需要的對象中的血管生成的方法。如本文中所用，術(shù)語“治療”涵蓋對象中疾病、病癥或病狀的治愈、矯正、改善、其嚴(yán)重程度的減輕或其時(shí)程或其任何參數(shù)或癥狀的減少。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，根據(jù)本文提供的方法治療的對象為哺乳動物，例如人。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了在對象中誘導(dǎo)血管化或血管生成的方法，所述方法包括向?qū)ο笫┯帽疚奶峁┑奶ケP來源的貼壁細(xì)胞外泌體或其組合物。因此，本文提供的方法可用于治療對象中受益于血管生成/血管化增加的疾病和病癥。受益于血管生成增加，并且因此可用本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體和組合物治療的此類疾病/病狀的實(shí)例包括但不限于心肌梗塞、充血性心力衰竭，外周動脈疾病、嚴(yán)重肢體缺血、外周血管疾病、左心發(fā)育不全綜合征、糖尿病足部潰瘍、靜脈潰瘍或動脈潰瘍。

在一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了治療例如在外周脈管系統(tǒng)中有血流中斷的對象的方法，所述方法包括向?qū)ο笫┯帽疚奶峁┑奶ケP來源的貼壁細(xì)胞外泌體或其組合物。在一個(gè)具體實(shí)施方案中，本文提供的方法包括用本文提供的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體或其組合物治療有局部缺血的對象。在某些實(shí)施方案中，局部缺血是外周動脈疾病(pad)，例如是嚴(yán)重肢體缺血(cli)。在某些其它實(shí)施方案中，局部缺血是外周血管疾病(pvd)、外周動脈疾病、缺血性血管疾病、缺血性心臟病或缺血性腎病。

5.4.2.患者群體

在某些實(shí)施方案中，向需要治療本文描述的任何疾病或病狀(參見5.4.1部分)的對象施用本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體(參見5.1部分)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，向需要治療本文描述的任何疾病或病狀的對象施用本文描述的組合物(參見5.3部分)。在某些實(shí)施方案中，所述對象為人。

在一個(gè)具體實(shí)施方案中，向需要治療以增加血管生成和/或血管化的對象(例如，人)施用本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體或組合物。

5.5.試劑盒

本文提供了包含一個(gè)或多個(gè)容器的藥物包或試劑盒，所述容器填充有本文描述的藥物組合物，即包含本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的組合物的一種或多種成分。任選與此類容器相關(guān)聯(lián)的可以是由管理藥物或生物制品的生產(chǎn)、使用或銷售的政府機(jī)構(gòu)規(guī)定形式的通知，其反映了該機(jī)構(gòu)對生產(chǎn)、使用或銷售供人體施用的批準(zhǔn)。

本文描述的試劑盒可用于上述方法(參見5.4部分)。本文描述的組合物可制備成可易于施用給個(gè)體的形式。例如，組合物可容納在適于醫(yī)用的容器內(nèi)。此類容器可以是，例如無菌塑料袋、瓶或罐，或可容易地從中分配組合物的其它容器。例如，容器可以是血袋或適于向受者靜脈內(nèi)施用液體的其它醫(yī)學(xué)上可接受的塑料袋。

5.6.遞送系統(tǒng)

本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體及其組合物可負(fù)載有外泌體外源性的試劑，例如藥劑。此類外泌體及其組合物可以，例如攝取到靶細(xì)胞，例如不同于從中獲得外泌體的細(xì)胞類型的細(xì)胞內(nèi)，并且因此將外源劑例如藥劑遞送至靶細(xì)胞內(nèi)。

因此，本文提供了使胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體負(fù)載外源劑例如藥劑的方法。在一個(gè)實(shí)施方案中，此類方法包括孵育胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體和外源劑例如藥劑，例如在室溫下孵育，進(jìn)行或不進(jìn)行皂角苷透化、凍/融循環(huán)、超聲處理或擠壓。參見，例如，haney等，2015,j.controlledrelease207:18-30，其通過引用并入本文。在某些實(shí)施方案中，通過在室溫下孵育將外源劑例如藥劑負(fù)載到胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中。在某些實(shí)施方案中，通過在10℃、15℃、18℃、20℃、22℃、25℃、28℃、30℃、35℃或40℃下孵育將外源劑例如藥劑負(fù)載到胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中。在具體實(shí)施方案中，進(jìn)行孵育，例如在室溫下孵育，不進(jìn)行胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的皂角苷透化。在具體實(shí)施方案中，進(jìn)行孵育，例如在室溫下孵育，進(jìn)行胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的皂角苷透化。在某些實(shí)施方案中，通過凍/融循環(huán)，例如1、2、3、4、5個(gè)或更多個(gè)凍/融循環(huán)將外源劑例如藥劑負(fù)載到胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中。在某些實(shí)施方案中，通過超聲處理將外源劑例如藥劑負(fù)載到胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中。在某些實(shí)施方案中，通過擠壓將外源劑例如藥劑負(fù)載到胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中。在某些實(shí)施方案中，通過電穿孔將外源劑例如藥劑負(fù)載到胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中。在具體實(shí)施方案中，使外泌體負(fù)載外源劑例如藥劑的方法包括以上的任何組合。

在某些實(shí)施方案中，摻入本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含多肽。在具體實(shí)施方案中，外源劑例如藥劑為結(jié)合劑，例如抗體，諸如人、人源化或嵌合抗體或其抗原結(jié)合片段。在特定實(shí)施方案中，抗體為單特異性、雙特異性或多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段。還有其它特定實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合片段為單鏈抗體或fab片段。在具體實(shí)施方案中，沒有胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的幫助，抗體或其抗原結(jié)合片段不會內(nèi)化到靶細(xì)胞中。

在某些實(shí)施方案中，負(fù)載到本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含一種或多種核酸。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種核酸包含sirna或mirna。

在某些實(shí)施方案中，負(fù)載到本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含一種或多種基因修飾組分。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含crispr-cas系統(tǒng)。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含向?qū)na。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含內(nèi)切核酸酶。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含向?qū)na和內(nèi)切核酸酶。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含cas9。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含cpf1。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含鋅指核酸酶。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含轉(zhuǎn)錄活化因子樣效應(yīng)物核酸酶(talen)系統(tǒng)。

在另一個(gè)實(shí)施方案中，本文提供了將外源劑例如藥劑遞送至靶細(xì)胞的方法，其中將所述外源劑負(fù)載到胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中。在某些實(shí)施方案中，所述靶細(xì)胞是不同于從中獲得外泌體的細(xì)胞類型的細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，負(fù)載到本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含多肽。在具體實(shí)施方案中，外源劑例如藥劑為結(jié)合劑，例如抗體，諸如人、人源化或嵌合抗體或其抗原結(jié)合片段。在特定實(shí)施方案中，抗體為單特異性、雙特異性或多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段。還有其它特定實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合片段為單鏈抗體或fab片段。在具體實(shí)施方案中，沒有胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的幫助，抗體或其抗原結(jié)合片段不會內(nèi)化到靶細(xì)胞中，例如不同于從中獲得外泌體的細(xì)胞類型的細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，負(fù)載到本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含一種或多種核酸。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種核酸包含sirna。在某些實(shí)施方案中，負(fù)載到本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含一種或多種基因修飾組分。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含crispr-cas系統(tǒng)。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含向?qū)na。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含內(nèi)切核酸酶。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含向?qū)na和內(nèi)切核酸酶。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含cas9。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含cpf1。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含鋅指核酸酶。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含轉(zhuǎn)錄活化因子樣效應(yīng)物核酸酶(talen)系統(tǒng)。

本文提供了向個(gè)體，向?qū)ο罄缛耸┯冒庠磩├缢巹┑奶ケP來源的貼壁細(xì)胞外泌體的方法。在某些實(shí)施方案中，外源劑例如藥劑包含多肽。在具體實(shí)施方案中，外源劑例如藥劑為結(jié)合劑，例如抗體，諸如人、人源化或嵌合抗體或其抗原結(jié)合片段。在特定實(shí)施方案中，抗體為單特異性、雙特異性或多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段。還有其它特定實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合片段為單鏈抗體或fab片段。在具體實(shí)施方案中，沒有胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的幫助，抗體或其抗原結(jié)合片段不會內(nèi)化到靶細(xì)胞中。在某些實(shí)施方案中，負(fù)載到本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含一種或多種核酸。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種核酸包含sirna或mirna。在某些實(shí)施方案中，負(fù)載到本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含一種或多種基因修飾組分。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含crispr-cas系統(tǒng)。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含向?qū)na。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含內(nèi)切核酸酶。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含向?qū)na和內(nèi)切核酸酶。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含cas9。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含cpf1。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含鋅指核酸酶。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含轉(zhuǎn)錄活化因子樣效應(yīng)物核酸酶(talen)系統(tǒng)。

本文還提供了包含負(fù)載有一種或多種外源劑例如藥劑的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的組合物。在某些實(shí)施方案中，摻入本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含多肽。在具體實(shí)施方案中，外源劑例如藥劑為結(jié)合劑，例如抗體，諸如人、人源化或嵌合抗體或其抗原結(jié)合片段。在特定實(shí)施方案中，抗體為單特異性、雙特異性或多特異性抗體或其抗原結(jié)合片段。還有其它特定實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合片段為單鏈抗體或fab片段。在具體實(shí)施方案中，沒有外泌體的幫助，抗體或其抗原結(jié)合片段不會內(nèi)化到靶細(xì)胞中。在某些實(shí)施方案中，負(fù)載到本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含一種或多種核酸。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種核酸包含sirna或mirna。在某些實(shí)施方案中，負(fù)載到本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中的外源劑例如藥劑包含一種或多種基因修飾組分。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含crispr-cas系統(tǒng)。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含向?qū)na。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含內(nèi)切核酸酶。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含向?qū)na和內(nèi)切核酸酶。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含cas9。在更多具體實(shí)施方案中，crispr-cas系統(tǒng)包含cpf1。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含鋅指核酸酶。在具體實(shí)施方案中，所述一種或多種基因修飾組分包含轉(zhuǎn)錄活化因子樣效應(yīng)物核酸酶(talen)系統(tǒng)。

6.實(shí)施例

6.1.實(shí)施例1：分離外泌體的方法

根據(jù)以下方法從cd10⁺、cd200⁺、cd105⁺、cd34^-胎盤來源的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物中分離胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體。

通過在4℃下10,000xg超速離心1小時(shí)，然后100,000xg超速離心18小時(shí)為胎牛血清(fbs)排去污染的牛外泌體。在儲存和使用之前通過0.2μm過濾器過濾所得上清液。排去外泌體的fbs與杜爾貝科改良伊格爾培養(yǎng)基(dmem)混合24小時(shí)以產(chǎn)生生長培養(yǎng)基。使生長培養(yǎng)基升溫至37℃并按300-1,000個(gè)細(xì)胞/cm²的密度平板接種胎盤來源的貼壁細(xì)胞并培養(yǎng)3天或直至細(xì)胞培養(yǎng)平臺裝置(具有cellbind涂層的corningcellstack10-培養(yǎng)盤)中80％匯合。在第6代時(shí)平板接種胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體，并且在第7代收集培養(yǎng)物上清液。用于分離本文描述的外泌體的胎盤來源的貼壁細(xì)胞的胎盤來源不包括絨膜絨毛，因此用于生成胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的胎盤來源的貼壁細(xì)胞不包括絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞。

去除培養(yǎng)物上清液之后，用pbs洗滌細(xì)胞培養(yǎng)物單層并補(bǔ)充無血清的培養(yǎng)基(dmem和1x谷氨酰胺)。48小時(shí)后，收集無血清的培養(yǎng)物上清液并進(jìn)行如下所述的外泌體富集和分離程序。收獲所得細(xì)胞單層用于細(xì)胞計(jì)數(shù)、外泌體產(chǎn)量比較和比較研究。

收集來自匯合的含血清和無血清的培養(yǎng)物的上清液并在500ml管中在4℃下400xg離心5-15分鐘。然后將離心的上清液轉(zhuǎn)移到新的500ml管中并在4℃下3000xg離心20-60分鐘。然后將上清液轉(zhuǎn)移到適當(dāng)?shù)某匐x心管中并在4℃下100,000xg離心60分鐘。保存所得的排去外泌體的上清液的一小份等分試樣用于進(jìn)一步分析，并丟棄剩余物。使含有外泌體的團(tuán)塊重新懸浮在pbs或可注射鹽水中并重復(fù)超速離心。丟棄上清液并使所得團(tuán)塊重新懸浮在pbs或可注射鹽水中，并根據(jù)下述實(shí)施例進(jìn)行分析。所得團(tuán)塊當(dāng)分離自含fbs的培養(yǎng)物時(shí)稱為“生長外泌體”，或當(dāng)分離自缺乏fbs的培養(yǎng)物時(shí)稱為“無血清外泌體”。

分離的外泌體組合物等分在2ml冷凍小瓶中并儲存在-20至-80℃下。

6.2.實(shí)施例2：胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的確認(rèn)

本文呈現(xiàn)的結(jié)果證明實(shí)施例1中分離自細(xì)胞培養(yǎng)物上清液的非細(xì)胞物質(zhì)是外泌體。

6.2.1.使用外泌體標(biāo)志物抗體陣列檢測

如同6.1部分中那樣分離胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體。使用exo-check^tm外泌體抗體陣列(systembiosciences)根據(jù)生產(chǎn)商的方案分析400微克分離物質(zhì)。在抗體陣列上孵育外泌體裂解物過夜并使用kodakgel-logic系統(tǒng)為樣品成像并且在2分鐘發(fā)光暴露后顯影。如圖1(下方)所示，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體物質(zhì)產(chǎn)生四種標(biāo)志物flot-1、alix、anxa5和tsg101的可檢測信號。使用作為陣列試劑盒的一部分被包括在內(nèi)的陽性對照樣品，也產(chǎn)生這些標(biāo)志物的可檢測信號(圖1上方)。

6.2.2.胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體樣品的形狀和尺寸特征

分離的外泌體經(jīng)陰性染色并使用透射電子顯微鏡(tem)成像(圖2a)并且發(fā)現(xiàn)其作為離散體存在，直徑為～100nm，常常呈杯狀形狀(箭頭)，兩者均為外泌體的特征。通過納米粒子跟蹤分析(nta)進(jìn)一步分析純化的外泌體以測定分離群體的尺寸分布。如圖2b所示，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體平均尺寸為139nm，與分離自其它細(xì)胞類型的外泌體的已知尺寸一致。

形態(tài)特征和鑒定的蛋白質(zhì)標(biāo)志物證明，使用上述方法從胎盤來源的貼壁細(xì)胞分離的物質(zhì)是外泌體。

6.3.實(shí)施例3：胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的純化

6.3.1.通過尺寸排阻高效液相色譜法純化外泌體

如同6.1部分中那樣分離胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體并通過尺寸排阻高效液相色譜法(se-hplc)進(jìn)一步分析。將來自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞(msc)的外泌體的洗脫圖譜與從含血清(“生長上清液”)和無血清(“無血清上清液”)的胎盤來源的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物獲得的外泌體做比較。在與已知培養(yǎng)基污染物(圖3a)的洗脫峰的比較中分析外泌體制劑的洗脫圖譜(圖3b-d，箭頭)。

絨膜絨毛msc外泌體含有可檢測水平的污染物甲狀腺球蛋白和bsa(圖3b)。生長上清液胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體也含有可檢測水平的甲狀腺球蛋白和bsa(圖3c)，而無血清上清液胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不含可檢測水平的任何此類污染物(圖3d)。分離自生長上清液或無血清培養(yǎng)物的外泌體的洗脫圖譜特征在于峰與陽性對照外泌體的峰一致。在無血清培養(yǎng)物外泌體的情況下，洗脫圖譜在預(yù)測的外泌體洗脫級分中作為單一物質(zhì)存在(圖3d)。這些結(jié)果進(jìn)一步證明分離的胎盤來源的貼壁細(xì)胞微泡是外泌體，并且與由在fbs的存在下生長的細(xì)胞制備的外泌體相比，分離自在無血清條件下生長的細(xì)胞的外泌體沒有典型污染物。

6.4.實(shí)施例4：胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體分子標(biāo)志物

在本研究中，使用facs檢查在外泌體的表面上含有一組細(xì)胞表面標(biāo)志物中的哪些，及與源自其它細(xì)胞類型的外泌體相比，哪些表面標(biāo)志物是胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體獨(dú)有的。

除表面標(biāo)志蛋白外，已知外泌體可含小核酸，包括mirna。外泌體中所含的mirna的組成在外泌體所源自的細(xì)胞類型間不同，并且可通過本領(lǐng)域中已知的方法，包括實(shí)時(shí)pcr(rt-pcr)測定mirna的存在和豐度。在這項(xiàng)研究中，檢查胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的mirna含量并與源自絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞的外泌體做比較。

6.4.1.胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體表面標(biāo)志物

通過facs分析如同6.1部分中那樣分離的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體，并且將表面標(biāo)志物的組成與分離自絨膜絨毛msc或前脂肪細(xì)胞msc的外泌體做比較。確定來自這三種細(xì)胞類型的外泌體差異性地含有幾種表面標(biāo)志物(表1)。使用facs分析，發(fā)現(xiàn)與來自絨膜絨毛msc或前脂肪細(xì)胞msc的外泌體相比，來自胎盤來源的貼壁細(xì)胞的外泌體含有許多在這些外泌體中獨(dú)有或富集的標(biāo)志物。與分離自絨膜絨毛msc或前脂肪細(xì)胞msc的外泌體相比，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體含有cd10和cd55，兩者在兩種間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體群體中均不存在。與兩種間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體群體相比，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體還含有更高水平的cd49c、cd82、cd90和cd142，例如高0.5至1log的水平(表1)。相反，與兩種間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體群體相比，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體含有更低水平的cd164，例如低0.5至1log的水平(表1)。胎盤來源的間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體還含有可檢測水平的cd295，其在前脂肪細(xì)胞msc外泌體上未檢測到(未示出)。如表1所示，每個(gè)條目中“+”號的數(shù)量與指定標(biāo)志物的水平相關(guān)聯(lián)，而“-”號表示無可檢測水平的指定標(biāo)志物。

表1：與前脂肪細(xì)胞msc外泌體和絨膜絨毛msc外泌體相比胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的表面抗原

6.4.2.胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體mirna標(biāo)志物

6.4.2.1.胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體和絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體在其mirna含量上不同

使用exoquick^tm沉淀法根據(jù)生產(chǎn)商的方案(systembiosciences)分離胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體。3000xg離心培養(yǎng)物上清液15分鐘，并丟棄所得團(tuán)塊。將兩毫升所得上清液添加到10ml組織培養(yǎng)物上清液并倒置混合。在4℃下孵育所得混合物過夜。孵育后，1500xg離心混合物30分鐘，丟棄上清液并分離團(tuán)塊。1500xg再離心5分鐘后通過抽吸去除剩余液體。使團(tuán)塊于200ulpbs中復(fù)水。

裂解分離的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體和絨膜絨毛msc外泌體(salomon等，2013,plosone,8:7,e68451)并使用ambion’smirvanamirna分離試劑盒(cat#1566)根據(jù)生產(chǎn)商的說明書分離rna。簡言之，在冰上用裂解/結(jié)合緩沖液(補(bǔ)充有mirna均質(zhì)添加劑)裂解外泌體10分鐘，使用酸-苯酚:氯仿萃取法分離rna，并且經(jīng)乙醇洗滌而沉淀。50納克的純化rna經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄并使用17種mirna的探針集和對照rnarnu44根據(jù)qpcr系統(tǒng)(lifetechnologies)擴(kuò)增樣品。計(jì)算每份樣品的ct值。

如圖4a所示，與絨膜絨毛msc相比，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體含有更高水平的在三個(gè)組中的每一個(gè)中分析的所有mirna。這些數(shù)據(jù)進(jìn)一步表明，本文描述的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體在mirna含量的基礎(chǔ)上不同于絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體。與胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體相比，對于絨膜絨毛間充質(zhì)細(xì)胞外泌體而言，mirnamir-451、mir-142-3p、mir-16-5p、mir-296-5p、mir-233-3p、mir-92、let-7d*、mir-422a和mir-133b全部顯示出大于2的ct值差(參見表2)，表明這些mirna在胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體中顯著更高的存在。所示數(shù)據(jù)來自一式三份進(jìn)行的一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。

表2：來自胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體和絨膜絨毛間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的mirna的ct值。

6.4.3.胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體含有血管生成蛋白

為了分析胎盤外泌體內(nèi)容物的血管生成分泌細(xì)胞因子，使用humanmagbead試劑盒，hagp1mag-12k(millipore)進(jìn)行angioplex。該試劑盒含有用于檢測以下17種細(xì)胞因子的分析物：瘦素、內(nèi)皮糖蛋白、卵泡抑素、hgf、血管生成素-2、g-csf、fgf-1、fgf-2、vegf-a、vegf-c、vegf-d、egf、內(nèi)皮素-1、bmp-9、il-8、hb-egf和plgf。根據(jù)生產(chǎn)商推薦的方案分析外泌體。

如實(shí)施例1中所述分離生長外泌體和無血清外泌體。使用100μg蛋白濃縮制劑于pbs中制備外泌體，將其稀釋10.8x用于血管生成分析物檢測分析。在水浴中超聲處理外泌體以使外泌體分散用于表面標(biāo)志物分析，或使用探針以裂解外泌體用于外泌體內(nèi)部分析。作為比較，使用相同方法分析清除了細(xì)胞的生長培養(yǎng)基(“經(jīng)預(yù)富集調(diào)節(jié)的”)和超速離心去除了外泌體和其它碎片的生長培養(yǎng)基(“排去外泌體的”)。

胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體展示出可檢測水平的幾種細(xì)胞因子，包括hgf和vegf-a(圖4b)、內(nèi)皮糖蛋白和瘦素(圖4c)、血管生成素-2、g-csf、卵泡抑素、fgf-2和il-8(未示出)。在試驗(yàn)的所有生長培養(yǎng)基中這些細(xì)胞因子幾乎全部以較低水平存在，表明細(xì)胞因子水平特別與外泌體相關(guān)。這些數(shù)據(jù)表明胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體含有已知會促進(jìn)血管生成的蛋白質(zhì)因子。

6.5.實(shí)施例5：胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體標(biāo)記和細(xì)胞攝取

為確定分離的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體是否能夠?qū)⑵鋬?nèi)容物遞送給培養(yǎng)的細(xì)胞，使用在truculture管中獲得的血液進(jìn)行外泌體攝取測定。用2μm熒光團(tuán)pkh26，通過將2μlpkh26添加到1ml外泌體懸浮液中來標(biāo)記分離的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體(參見6.1部分)并且在室溫下于黑暗中孵育5分鐘。使用centricon10kda分子量篩截柱根據(jù)生產(chǎn)商的說明書回收外泌體。將標(biāo)記外泌體添加到200μltruculture血液制劑中并且在37℃下在5％co2中孵育24小時(shí)。孵育后，用白細(xì)胞系特異性抗體在室溫下于黑暗中為100μl血液染色15分鐘。孵育后，用ack裂解溶液裂解紅血細(xì)胞并用pbs、1％fbs洗滌3x。通過flowjo軟件中的譜系特異性門控和pkh26熒光測定特定白細(xì)胞群體上的外泌體攝取。如圖5所示，幾個(gè)譜系類型對于pkh26而言陽性染色，表明胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體可以被培養(yǎng)的細(xì)胞攝取。

6.6.實(shí)施例6：胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體增強(qiáng)人血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖

按14,000個(gè)細(xì)胞/孔的濃度將人血管內(nèi)皮細(xì)胞(huvec)平板接種在基質(zhì)膠(matrigel)上并且用遞增量的不存在血清的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體(參見6.1部分)，3x10⁴個(gè)不存在血清的胎盤來源的貼壁細(xì)胞或單獨(dú)的培養(yǎng)基孵育。如圖6所示，huvec的增殖與添加到培養(yǎng)物中的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的濃度相關(guān)。這些數(shù)據(jù)表明胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體可以增強(qiáng)培養(yǎng)的人細(xì)胞的增殖。

6.7.實(shí)施例7：外泌體介導(dǎo)的對全血中的細(xì)胞因子生成的影響

6.7.1.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

使用由于免疫原性刺激在血液中表達(dá)細(xì)胞因子的體外模型。在培養(yǎng)管中，用1ml人全血和遞增量的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體(0、6、12、24、47和94μg/ml)或胎盤來源的貼壁細(xì)胞(2.5、5、10、20或40x10³個(gè)細(xì)胞)孵育2ml的myriadrbmtruculture^tm培養(yǎng)基1小時(shí)，之后用10ng/ml脂多糖(lps)刺激24小時(shí)。使用hcytomag-60k|milliplexmap人細(xì)胞因子/趨化因子磁珠組-免疫學(xué)多重測定(millipore)來檢測培養(yǎng)的血液中生成的細(xì)胞因子。

6.7.2.胎盤來源的貼壁細(xì)胞和胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體改變?nèi)械募?xì)胞因子生成

如圖7a所示，胎盤來源的貼壁細(xì)胞和胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體以劑量依賴方式降低特定細(xì)胞因子的水平。當(dāng)在lps刺激的全血中用遞增量的胎盤來源的貼壁細(xì)胞或胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體孵育時(shí)，促炎性細(xì)胞因子tnf-α、il-12p40、mip1b和il-1b全部減少。相反，在經(jīng)刺激的全血中mcp1水平被胎盤來源的貼壁細(xì)胞和胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體兩者增加，表明胎盤來源的貼壁細(xì)胞和胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體可以影響培養(yǎng)的細(xì)胞中的細(xì)胞因子生成。

6.7.3.胎盤來源的貼壁細(xì)胞和胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體差異性調(diào)節(jié)經(jīng)刺激的血液中細(xì)胞因子的子集

如圖7b所示，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體不提高在胎盤來源的貼壁細(xì)胞的存在下提高的特定細(xì)胞因子的水平。在經(jīng)刺激的全血中在胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體的存在下，ifn-γ、il-6、il-8和gm-csf、與炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子未增加。這個(gè)發(fā)現(xiàn)表明胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體對培養(yǎng)的血液發(fā)揮與其所源自的細(xì)胞有差異的作用。

6.8.實(shí)施例8：胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體促進(jìn)體外血管生成

按28,000個(gè)細(xì)胞/孔的密度將第3或4代的人血管內(nèi)皮細(xì)胞(huvec)平板接種在48孔微量滴定盤中。將細(xì)胞保持在grf-matrigel上0.5ml的pbd或ebm-2培養(yǎng)基(lonza)中3天。然后用不同濃度的從含血清(“生長外泌體”)或無血清(“sf外泌體”)的胎盤來源的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物分離的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體孵育huvec。每兩小時(shí)監(jiān)測huvec生長模式，包括結(jié)節(jié)形成和管區(qū)段長度(血管生成潛力的替代)，總共持續(xù)18-19小時(shí)。使用incucyte活細(xì)胞成像系統(tǒng)(essenbioscience)測定huvec生長參數(shù)并使用imagej量化。

6.8.1.生長外泌體和無血清外泌體促進(jìn)huvec管形成

如圖8a所示，生長外泌體以劑量依賴方式增加培養(yǎng)的huvec中的管區(qū)段長度和分支點(diǎn)頻率。與用pbs孵育的huvec相比，分離純化的濃度范圍為5μg/孔至100μg/孔的外泌體增加區(qū)段長度(8a，左側(cè))。類似地，用生長外泌體處理的huvec與用pbs處理的huvec相比具有更高數(shù)量的結(jié)節(jié)(8a，右側(cè))。

與用生長外泌體所觀察到的結(jié)果相似，分離自無血清培養(yǎng)物的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體增加huvec管區(qū)段長度和分支點(diǎn)頻率。如圖8b所示，與在pbs的存在下培養(yǎng)的huvec相比，在5μg/孔至100μg/孔的濃度范圍內(nèi)的外泌體的存在下培養(yǎng)的huvec增加管區(qū)段長度(8b，左側(cè))和分支點(diǎn)頻率(8b，右側(cè))。這些結(jié)果表明，分離的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體可以促進(jìn)體外血管細(xì)胞增殖和血管分支頻率，表明了胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體作為促血管生成因子的作用。

6.8.2.胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體改變huvec細(xì)胞中的基因表達(dá)

第3代huvec細(xì)胞(lonza批次8f3265；032514ar)在完全egm-2培養(yǎng)基中擴(kuò)增到第4代。收獲細(xì)胞，高密度接種在纖連蛋白涂層板上，并允許附著3小時(shí)直至～100％匯合。在ebm-2培養(yǎng)基中在不存在血清的情況下培養(yǎng)細(xì)胞～2小時(shí)。用胎盤來源的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物上清液、50μg胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體或作為對照的培養(yǎng)基孵育培養(yǎng)的huvec。在4、24和48小時(shí)收集huvec上清液和細(xì)胞裂解物，并且在這些早期、中期和晚期時(shí)間點(diǎn)分析基因表達(dá)。

使用qiagen’srneasymini試劑盒(cat#74134)按照生產(chǎn)商推薦的方案分離rna。使用vilortmm使3.5ug的rna逆轉(zhuǎn)錄并使用taqman快速通用pcr主混合液(taqmanfastuniversalpcrmastermix)和taqman人vegf通路陣列96孔固定板(taqmanhumanvegfpathwayarray96-wellfastplate)通過rt-pcr分析40ng的cdna。

vegf通路陣列的結(jié)果示于圖8c(陰影越深指示表達(dá)水平越高)。值得注意的是，huvec在任何條件下都不能表達(dá)acta1、bad、casp9、map2k1、plcg1和shc1，但是在用胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體和/或胎盤來源的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物上清液處理的huvec中26/44vegf通路基因上調(diào)(圖8c)。重要的是，已知這些基因中的許多在血管生成中起重要作用。

與對照處理的huvec相比，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體和/或胎盤來源的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物上清液改變了幾個(gè)基因表達(dá)子類，包括與以下有關(guān)的基因：(i)細(xì)胞運(yùn)動性(圖8d)，(ii)細(xì)胞增殖(圖8e-f)，和(iii)一氧化氮生成、細(xì)胞透性和細(xì)胞存活率(圖8g)。這些結(jié)果表明，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體能夠改變血管細(xì)胞的基因表達(dá)程序，例如朝增殖狀態(tài)改變。這些結(jié)果還證明外泌體的作用可不同于由胎盤來源的貼壁細(xì)胞培養(yǎng)物上清液所誘導(dǎo)的那些作用。

6.8.3.實(shí)施例9：胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體改變巨噬細(xì)胞中的細(xì)胞因子生成

在gm-csf的存在下培養(yǎng)分離的單核細(xì)胞7-10天，直至分化為巨噬細(xì)胞。將5x10⁴個(gè)巨噬細(xì)胞與胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體或胎盤來源的貼壁細(xì)胞和100ng/mllps共同培養(yǎng)22-24小時(shí)。使用人免疫學(xué)多重組(millipore,hcyto-mag-60k)分析分泌的細(xì)胞因子。根據(jù)生產(chǎn)商的方案使用luminexflexmap-3d系統(tǒng)進(jìn)行測定。

如圖9a所示，胎盤來源的貼壁細(xì)胞和胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體以劑量依賴方式改變由單核細(xì)胞來源的巨噬細(xì)胞所生成的特定細(xì)胞因子的水平。具體地，當(dāng)用遞增量的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體在經(jīng)lps刺激的巨噬細(xì)胞的存在下孵育時(shí)，tnf-α和mcp-1均減少。胎盤來源的貼壁細(xì)胞未降低巨噬細(xì)胞培養(yǎng)物中mcp-1的水平。

如圖9b所示(左側(cè)、中央)，胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體和胎盤來源的貼壁細(xì)胞均阻抑培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞中的tnf-α分泌，同時(shí)胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體而非胎盤來源的貼壁細(xì)胞廣泛地阻抑培養(yǎng)的巨噬細(xì)胞中的細(xì)胞因子分泌(例如，il-8分泌)。值得注意的是，這與在全血中所觀察到的細(xì)胞因子表達(dá)相反，(參見實(shí)施例7)。這些結(jié)果表明胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體可以按不同于外泌體所源自的細(xì)胞的方式改變培養(yǎng)的免疫細(xì)胞中的細(xì)胞因子表達(dá)。當(dāng)用裂解的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體孵育單核細(xì)胞來源的巨噬細(xì)胞時(shí)，il-8阻抑在與用完整的胎盤來源的貼壁細(xì)胞外泌體孵育的培養(yǎng)物相比時(shí)減弱(圖9b，右側(cè))。這些結(jié)果表明觀察到的外泌體作用是由于外泌體自身的存在所引起的，不僅僅是由于構(gòu)成外泌體的組分的混合物所引起的。

等效方案：

本公開在范圍上不受本文描述的具體實(shí)施方案的限制。實(shí)際上，除描述的那些以外，對本文提供的主題的各種修改從前面的描述和附圖看將對本領(lǐng)域的技術(shù)人員變得顯而易見。此類修改旨在落入所附權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。

本文引用了各種出版物、專利和專利申請，其公開內(nèi)容通過引用整體并入。