本發(fā)明涉及一種組合物，使用包含脂肪細(xì)胞分化誘導(dǎo)物質(zhì)的干細(xì)胞來源外泌體，誘導(dǎo)干細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞和/或使脂肪組織再生。另外，本發(fā)明涉及用于皮膚美白、改善皺紋或皮膚再生的包含干細(xì)胞來源外泌體的化妝品組合物。
背景技術(shù)：
：作為使脂肪組織再生的治療方法，存在使用包括干細(xì)胞的治療試劑的方法，該干細(xì)胞使用具有在水凝膠中三維培養(yǎng)的脂肪組織的基質(zhì)來培養(yǎng)。在水凝膠中三維培養(yǎng)所述組織之后，生長因子和細(xì)胞外基質(zhì)可由干細(xì)胞分泌出。然而，為了使治療試劑用作可注射劑型，從培養(yǎng)容器去除薄膜形式的水凝膠和使用裂合酶處理組織是不方便的。為了克服這樣的不方便，已經(jīng)研發(fā)了通過自體同源脂肪移植或者直接移植干細(xì)胞來再生組織的治療方法。在自體同源脂肪移植的情況中，所述方法使用手術(shù)中受試者的身體的一部分。因此，所述方法不會導(dǎo)致組織或免疫排斥的問題，并且不會出現(xiàn)免疫應(yīng)答。然而，脂肪組織為高度氧依賴性的，并在周圍具有許多血管的時候與相鄰細(xì)胞相互作用。移植的脂肪很難表現(xiàn)出血管形成能力，并且由此是不利的。例如，可能會由于組織缺氧而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或者細(xì)胞壞死，并且由于植入率不高，受試者可能需要接受數(shù)個步驟。以前，干細(xì)胞已經(jīng)常被用于修復(fù)已損壞的組織，其受到手術(shù)或者藥物治療的限制。例如，如透明質(zhì)酸和膠原蛋白的生物聚合物被用于干細(xì)胞移植。因為干細(xì)胞可被分化成包括脂肪細(xì)胞的多種不同的細(xì)胞，所以這些干細(xì)胞具有廣泛的應(yīng)用。然而，因為存活率和植入率較低，一旦它們被置于體內(nèi)，效率就會被降低。而且，存在無法分化的干細(xì)胞可能會形成腫瘤的風(fēng)險。目前，用于將干細(xì)胞分化為脂肪細(xì)胞用于組織再生的方法通常包括在干細(xì)胞上處理分化誘導(dǎo)材料，例如胰島素、地塞米松、異丁基甲基黃嘌呤等，并長時間培養(yǎng)它們。然而，如上所述的干細(xì)胞分化誘導(dǎo)材料是昂貴的，并且對于僅通過單一組分的分化并不是有效的。由此，它們是不利的。例如，它們必須通過混合不同的物質(zhì)來處理，并且細(xì)胞分化的效率較低。這是有問題的。在另一方面，便利地，已經(jīng)做出嘗試，使用通過培養(yǎng)干細(xì)胞而獲得的培養(yǎng)溶液作為化妝品?？偟膩碚f，包含合適量抗生素和血清的培養(yǎng)基被用于培養(yǎng)干細(xì)胞。作為化妝品組合物而研發(fā)的絕大多數(shù)干細(xì)胞培養(yǎng)液使用常規(guī)培養(yǎng)基，且化妝品組合物包括脂質(zhì)體，其中，干細(xì)胞培養(yǎng)溶液被封裝在脂質(zhì)體中(參見韓國專利號1237430；1047873)。另外，已經(jīng)研發(fā)出使用培養(yǎng)基的化妝品組合物，所述培養(yǎng)基不使用作為不允許用于化妝品的原材料的成分來制備，以及包括不含血清的培養(yǎng)基的化妝品組合物等(參見韓國專利號1413686；1108847)。培養(yǎng)基為包含用于細(xì)胞增殖的蛋白質(zhì)、氨基酸、激素和生長因子的物質(zhì)。所述培養(yǎng)基已經(jīng)以非常成熟的方式制備并供給。然而，因為細(xì)胞培養(yǎng)基、抗生素和血清具有尚未被證明是安全的風(fēng)險，它們應(yīng)當(dāng)僅被用于研究的目的，并且它們在人體的應(yīng)用是禁止的。在培養(yǎng)基中包括的組分，例如氯化膽鹼、次黃嘌呤鈉鹽、胸苷、腐胺二鹽酸鹽、硝酸鐵、l-谷氨酰胺等，并未被允許作為用于化妝品的原材料。由此，這樣的培養(yǎng)基的使用不適用于化妝品組合物。由此培養(yǎng)基包含有干細(xì)胞分泌的各種蛋白質(zhì)、細(xì)胞因子、生長因子等。與之相比，它們還包含例如隨著細(xì)胞生長而分泌的廢物、經(jīng)添加以防止污染的抗生素、或者動物來源的血清等的組分。由此，當(dāng)用于皮膚上的時候，它們極有可能會引起不同的風(fēng)險。用于化妝品的干細(xì)胞培養(yǎng)溶液的組分受到限制。而且，在封裝至脂質(zhì)體內(nèi)的過程中，培養(yǎng)溶液組分的變質(zhì)和污染，以及使用脂質(zhì)體進行封裝的其它處理過程是必然會發(fā)生的。由此，使用包括脂質(zhì)的脂質(zhì)體封裝干細(xì)胞培養(yǎng)溶液來提高培養(yǎng)溶液的皮膚吸收速率的技術(shù)在應(yīng)用于化妝品時也是受限的。為了克服這些干細(xì)胞培養(yǎng)溶液的不利之處，研發(fā)了使用干細(xì)胞來源外泌體的技術(shù)。干細(xì)胞通常在包含抗生素和血清的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。由在包括人類的多細(xì)胞生物體中存在的不同細(xì)胞分泌的生物納米顆?？杀环譃橥饷隗w和微囊泡，取決于它們的尺寸和分泌機制的不同。已知，外泌體為由不同類型細(xì)胞分泌的膜結(jié)構(gòu)囊泡，其扮演著多種角色。例如，所述角色包括通過結(jié)合至其它細(xì)胞和組織來轉(zhuǎn)移膜組分、蛋白質(zhì)、rna等。包括外泌體的絕大多數(shù)分泌組由細(xì)胞培養(yǎng)上層清液獲得。由此，在目前使用的干細(xì)胞來源外泌體分離方法中，由于在分離包括外泌體的分泌組的步驟中的培養(yǎng)基或血清中蛋白質(zhì)的干預(yù)，完全純化外泌體很難。因此，本發(fā)明已經(jīng)從干細(xì)胞分離出外泌體，并且發(fā)現(xiàn)干細(xì)胞來源外泌體具有干細(xì)胞分化、脂肪組織再生、美白、改善皺紋和皮膚再生的作用。發(fā)明概述本發(fā)明的一個方面在于提供一種組合物，用于誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞或者再生脂肪組織。所述組合物可以包括源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體，作為活性成分。本發(fā)明的另一個方面在于提供一種化妝品組合物，包括用于誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞或者再生脂肪組織的組合物。所述組合物可以包括源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體，作為活性成分。本發(fā)明的又一個方面在于提供一種培養(yǎng)基組合物，用于誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞或者再生脂肪組織。所述培養(yǎng)基組合物可以包括源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞來的外泌體，作為活性成分。本發(fā)明的又一個方面在于提供一種可注射制劑，包括用于誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞或者再生脂肪組織的組合物。所述可注射制劑可以包括作為活性成分的源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體，以及水凝膠。本發(fā)明的又一個方面在于提供一種化妝品組合物，用于皮膚美白、改善皺紋或皮膚再生?；瘖y品組合物可以包括衍生自增殖的干細(xì)胞的外泌體，作為活性成分。發(fā)明詳述本發(fā)明的一個實施方式提供了一種用于誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞或者再生脂肪組織的組合物。所述組合物可以包括源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體，作為活性成分。如在本文中所使用的，“分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞”是指干細(xì)胞，其分化成脂肪細(xì)胞，例如來自脂肪組織(ascs)來源的干細(xì)胞。在圖1中示出脂肪組織來源的干細(xì)胞的一個例子。包含遺傳信息、蛋白質(zhì)和生長因子的外泌體可以由其分離。特別地，當(dāng)干細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞的時候，它們的形狀會發(fā)生明顯的變化，并且此時外泌體被分離。因此，不同于由未分化的干細(xì)胞分離的外泌體。外泌體是指包含細(xì)胞特異性組分的細(xì)胞來源的信使囊泡，其通過與受體細(xì)胞融合在細(xì)胞間的通信中發(fā)揮作用。在一個實施方式中，外泌體為內(nèi)吞作用來源的并且為囊泡，參與細(xì)胞通信，由包含細(xì)胞特異性組分例如脂質(zhì)、遺傳物質(zhì)和蛋白質(zhì)的細(xì)胞分泌。外泌體可以由本領(lǐng)域已知的外泌體分離方法制備，或者通過如下的步驟制備，例如1)在培養(yǎng)基中培養(yǎng)干細(xì)胞，并隨后在不含血清和無抗生素的培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)；2)回收細(xì)胞培養(yǎng)上層清液；3)離心所回收的細(xì)胞培養(yǎng)上層清液；和4)分離并提純外泌體，但不限于此。分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞可以是骨髓干細(xì)胞，臍帶血干細(xì)胞或者脂肪來源干細(xì)胞，并且可以是人、動物或者植物來源的干細(xì)胞，但不限于此。外泌體可以1至150μg每1ml組合物的濃度應(yīng)用于干細(xì)胞，所述組合物用于誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞或者再生細(xì)胞組織，特別是5至150μg的濃度，更特別是10至150μg的濃度，甚至更特別是20至130μg的濃度，并且還更特別是20至100μg的濃度，但不限于此。如在本文中所使用的，術(shù)語“誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞”是指將干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明的一種實施方式，組合物可以包括源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體，作為活性成分。所述組合物可以將干細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞。因此，組合物可被用作為用于誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞的組合物。如在本文中所使用的，術(shù)語“再生脂肪組織”是指通過復(fù)原受損的脂肪組織或者誘導(dǎo)有缺陷的脂肪組織的產(chǎn)生。另外，組合物可以再生脂肪組織。因此，組合物可被用作為用于再生脂肪組織的組合物。根據(jù)本發(fā)明的另一種實施方式，用于誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞或者再生脂肪細(xì)胞組織的組合物可被用作為藥物組合物。特別地，藥物組合物的含量可以是0.001至10重量份，基于100重量份的全部組合物計。根據(jù)上述實施方式，藥物組合物可以是不同的口服或者非腸道制劑。所述制劑可以使用稀釋劑或者賦形劑來制備，例如常規(guī)填料、增重劑、粘合劑、潤濕劑、崩解劑、表面活性劑等。用于口服給藥的固體制劑包括片劑、丸劑、粉劑、顆粒、膠囊等。這樣的固體制劑可以通過混合至少一種化合物和至少一種賦形劑來制備，例如淀粉、碳酸鈣、蔗糖或者乳糖、凝膠等。除了簡單的賦形劑，例如硬脂酸鎂、滑石等的潤滑劑也可被使用。用于口服給藥的液體制劑包括混懸液、用于內(nèi)服的液體、乳液、糖漿等。除了常用的簡單稀釋劑，例如水和液體石蠟，液體制劑還可以包括不同的賦形劑，例如潤濕劑、甜味劑、增味劑、防腐劑等。用于非腸道給藥的制劑包括無菌水性溶液、非水性溶劑、混懸液、乳液、凍干制劑和栓劑。對于根據(jù)上述實施方式的藥物組合物，植物油例如丙二醇、聚乙二醇和橄欖油，以及可注射酯例如油酸乙酯等，可被用作為非水性溶劑和懸浮劑。合成脂肪酸酯(witepsol)、聚乙二醇、吐溫61、可可脂、月桂(laurinum)、甘油明膠等可被用作栓劑基質(zhì)。根據(jù)上述實施方式的藥物組合物的劑型可以是其制藥學(xué)上可接受的形式，或者其可被單獨使用或者恰當(dāng)?shù)嘏c其它藥物活性化合物組合使用。外泌體化合物的鹽并未被特別地限制，只要其為制藥學(xué)上可接受的。所述鹽例如包括鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸、氫氟酸、氫溴酸、甲酸、乙酸、酒石酸、乳酸、檸檬酸、富馬酸、蘋果酸、琥珀酸、甲磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘磺酸等的鹽。根據(jù)上述實施方式的藥物組合物可以根據(jù)目的非腸道或者口服給藥，并且可以根據(jù)需要每天給藥一次或多次，從而使得給藥量為0.1至500mg/kg，1至100mg/kg。具體病人的有效劑量取決于病人的體重、年齡、性別、健康狀況、飲食、給藥周期、給藥方式、排泄速率、疾病嚴(yán)重程度等而有所不同。根據(jù)常規(guī)方法，根據(jù)上述實施方式的藥物組合物可以通過配制成適用于藥物劑型的任意形式來使用，包括口服組合物例如粉末、顆粒、片劑、膠囊、混懸液、乳液、糖漿、氣霧劑等，外用制劑例如藥膏、乳劑等，栓劑和無菌可注射溶液。根據(jù)上述實施方式的藥物組合物可以使用不同的路徑例如非腸道、口服等給藥至哺乳動物，例如大鼠、小鼠、家畜、人等，并且盡管所有的給藥路徑都可預(yù)期，但優(yōu)選通過口服、直腸或者靜脈內(nèi)、肌肉、皮下、子宮內(nèi)或者腦室內(nèi)注射給藥。用于誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞或者再生脂肪組織的藥物組合物可以進一步包括分化誘導(dǎo)材料，例如胰島素、地塞米松、脫氫表雄酮(dhea)、組胺和異丁基甲基黃嘌呤等，從而將干細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞，但不限于此。本發(fā)明的另一個實施方式提供了一種化妝品組合物，用于誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞或再生脂肪組織，并且可以包括源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體，作為活性成分?；瘖y品組合物可以通過誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞而促進脂肪組織的再生。在化妝品組合物中包含的外泌體的濃度可以是1至150μg每1ml的化妝品組合物，特別是5至150μg的濃度，更特別是10至150μg的濃度，甚至更特別是20至130μg的濃度，并且還更特別是20至100μg的濃度，但不限于此。根據(jù)上述實施方式的化妝品組合物可以包含在化妝品或者皮膚病科學(xué)中常用的輔料，例如含脂肪物質(zhì)、有機溶劑、增溶劑、增稠劑、膠凝劑、軟化劑、抗氧劑、懸浮劑、穩(wěn)定劑、發(fā)泡劑、增味劑、表面活性劑、水、離子或非離子乳化劑、填料、隱蔽劑、螯合劑、防腐劑、維生素、阻滯劑、潤濕劑、基礎(chǔ)油、染料、顏料、親水性或親脂性活性試劑、脂質(zhì)囊泡或者化妝品中常用的任何其它成分。這樣的輔料以在化妝品或皮膚病領(lǐng)域中以常用的用量引入。根據(jù)上述實施方式的化妝品組合物的外在形式包含化妝用或者皮膚病學(xué)上可接受的介質(zhì)或基質(zhì)?；瘖y品組合物可以是適用于局部施用的任意形式。例如，化妝品組合物可以溶液、凝膠、固體、軟膏、無水產(chǎn)物、在水相中分散油相而獲得的乳液、懸浮液、微乳液、微膠囊、或者離子(脂質(zhì)體)和非離子囊泡分散劑的形式來提供，并且這些組合物可以根據(jù)本領(lǐng)域常規(guī)方法來制備。根據(jù)上述實施方式的化妝品組合物優(yōu)選以使用微型針等而吸收至皮膚內(nèi)的形式而被施加，但不限于此。用于誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞或者再生脂肪組織的化妝品組合物可以包括源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體作為活性成分?；瘖y品組合物可以進一步包括分化誘導(dǎo)材料，例如胰島素、地塞米松、脫氫表雄酮(dhea)、組胺和異丁基甲基黃嘌呤，從而將干細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞，但不限于此。本發(fā)明的另一個實施方式提供了一種用于干細(xì)胞分化的培養(yǎng)基組合物，其包含源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體，并誘導(dǎo)干細(xì)胞以分化成脂肪細(xì)胞。在用于干細(xì)胞分化的培養(yǎng)基組合物中包含的外泌體的濃度為1至150μg每1ml的用于干細(xì)胞分化的培養(yǎng)基組合物，特別是5至150μg的濃度，更特別是10至150μg的濃度，甚至更特別是20至130μg的濃度，并且還更特別是20至100μg的濃度，但不限于此。用于干細(xì)胞分化的培養(yǎng)基組合物可以進一步包括干細(xì)胞培養(yǎng)基，但不限于此。用于干細(xì)胞分化的培養(yǎng)基組合物可以進一步包括分化誘導(dǎo)材料，例如胰島素、地塞米松、脫氫表雄酮(dhea)、組胺和異丁基甲基黃嘌呤等，從而將干細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞，但不限于此。本發(fā)明的另一個實施方式提供了一種可注射制劑，包括用于誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞或者再生脂肪組織的組合物?？勺⑸渲苿┛梢园ㄗ鳛榛钚猿煞值脑醋苑只芍炯?xì)胞的干細(xì)胞的外泌體；以及水凝膠。在可注射制劑中包含的外泌體的濃度為1至150μg每1ml，特別是5至150μg的濃度，更特別是10至150μg的濃度，甚至更特別是20至130μg的濃度，并且還更特別是20至100μg的濃度，但不限于此。水凝膠可以是至少一種水凝膠例如明膠、藻酸鹽、殼聚糖、纖維蛋白、彈性蛋白、透明質(zhì)酸、膠原蛋白、甲基纖維素或膠原蛋白和甲基纖維素水凝膠，但不限于此。可注射制劑可以是用于誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞或再生脂肪組織的可注射制劑，但不限于此。也就是說，當(dāng)本發(fā)明的可注射制劑通過注射而被給藥至動物的時候，就會表現(xiàn)出誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞或再生脂肪組織的效果。在本發(fā)明的一個實施方式中，水凝膠通過將甲基纖維素粉末添加至膠原蛋白溶液來制備。特別地，甲基纖維素粉末被添加至膠原蛋白溶液，以3mg/ml的濃度溶解于0.02n的乙酸中，從而使得甲基纖維素的最終濃度為6wt％。隨后，在4℃下攪拌混合物1小時來制備膠原蛋白和甲基纖維素水凝膠。在本發(fā)明的一個實施方式中，可注射制劑通過在膠原蛋白和甲基纖維素水凝膠中裝載(carry)外泌體而制備，所述外泌體源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞。特別地，源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體在水凝膠中裝載成50μg/ml的最終濃度，并隨后通過移液操作分散于水凝膠中。根據(jù)上述實施方式的可注射制劑可以通過口服、直腸或靜脈內(nèi)、肌肉、皮下、子宮內(nèi)或者腦室內(nèi)注射給藥至哺乳動物，例如大鼠、小鼠、家畜、人等。在本發(fā)明的一個實施方式中，根據(jù)本發(fā)明源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體與源自增殖干細(xì)胞的外泌體相比，顯示出極佳的影響分化成脂肪細(xì)胞的生物活性因子的表達速率(圖4和5)。在本發(fā)明的另一個實施方式中，根據(jù)本發(fā)明的源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體，以及源自增殖干細(xì)胞的外泌體作為對照組，添加到用于使干細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞的實驗中。在這些情況中確認(rèn)的是，當(dāng)使用根據(jù)本發(fā)明的外泌體時，脂肪細(xì)胞在第7天以類似于在分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)的干細(xì)胞的水平而分化，并且因此，產(chǎn)生油。然而，在使用源自增殖干細(xì)胞的外泌體處理干細(xì)胞的情況中，所確認(rèn)的是這些干細(xì)胞僅發(fā)生增殖，而不會分化成脂肪細(xì)胞(圖6和7)。在本發(fā)明的另一個實施方式中，與裝載源自增殖干細(xì)胞的外泌體的可注射制劑相比，其中源自根據(jù)本發(fā)明分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體被裝載至膠原蛋白/甲基纖維素水凝膠中的可注射制劑顯示出對脂肪組織的再生極佳的作用(圖9和10)。用于根據(jù)上述實施方式的干細(xì)胞分化和脂肪組織再生的組合物包括外泌體，所述外泌體包含與分化成脂肪細(xì)胞相關(guān)的遺傳信息、蛋白質(zhì)和脂肪細(xì)胞生長因子。因此，組合物可被有效地用于分化干細(xì)胞，因為其并不必須添加復(fù)雜的和不同的生長因子來分化。干細(xì)胞通過本發(fā)明的源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體而分化成脂肪細(xì)胞，由此當(dāng)應(yīng)用于體內(nèi)的時候，對脂肪組織的再生起到有利的作用。本發(fā)明的源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體為細(xì)胞來源的材料，因此為生物相容性的，最小化現(xiàn)有細(xì)胞治療試劑的副作用。另外，外泌體本身可以作為載體，其能夠?qū)⒃谄渲醒b載的組分容易地應(yīng)用于人體。由此，外泌體可被用作干細(xì)胞分化誘導(dǎo)劑，用于組織再生的可注射制劑，用于化妝品目的填充物，用于組織工程的制劑等。本發(fā)明的另一個實施方式提供了一種化妝品組合物，包含干細(xì)胞來源的外泌體作為活性成分，并且更特別地，用于皮膚美白、改善皺紋或者皮膚再生的化妝品組合物包含干細(xì)胞來源的外泌體作為活性成分。在不含血清的并且無抗生素的培養(yǎng)基中，干細(xì)胞來源的外泌體包含細(xì)胞外基質(zhì)衍生物以及膠原蛋白和對皮膚再生有效的生長因子，并由此可以有效地用于改善皮膚。在上述實施方式中，術(shù)語“干細(xì)胞”是指增殖的干細(xì)胞。能夠由其分離包含干細(xì)胞的遺傳信息、蛋白質(zhì)和生長因子的外泌體。干細(xì)胞可以是骨髓干細(xì)胞、臍帶血干細(xì)胞或者脂肪來源的干細(xì)胞，并且可以是人、動物或植物源干細(xì)胞，但不限于此。如在本文中所使用的，術(shù)語“人脂肪源干細(xì)胞”是指源自人脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞。能夠由其分離包含干細(xì)胞的遺傳信息信息、蛋白質(zhì)和生長因子的外泌體。分離外泌體的方法可以通過本領(lǐng)域已知的方法來實施，但不限于此。在本發(fā)明的一個實施方式中，外泌體在傳代培養(yǎng)人脂肪源干細(xì)胞的過程中分離。特別地，人脂肪組織源干細(xì)胞(通道3至7)在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基(達爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基，包含10％牛胎兒血清，1％青霉素/鏈霉素的dmem)中培養(yǎng)。隨后，在分離外泌體前的24小時，使用dmem培養(yǎng)基代替細(xì)胞培養(yǎng)基，其為不含血清的并且是無抗生素的培養(yǎng)基，不存在酚紅，并隨后保持24小時。在24小時后，回收細(xì)胞培養(yǎng)上層清液。經(jīng)回收的細(xì)胞培養(yǎng)上層清液以300xg離心10分鐘，從而去除細(xì)胞，并隨后以2000xg離心30分鐘，從而去除細(xì)胞分泌物。其后，使用裝備有具有3000分子量的過濾器的離心管以5000xg離心60分鐘來濃縮細(xì)胞。濃縮后獲得的上層清液與外泌體分離試劑以1:0.5的比例混合，并在4℃儲存一天。外泌體沉淀物通過在10000xg下離心60分鐘而獲得，隨后通過0.22μm過濾器過濾，并使用磷酸鹽緩沖溶液(pbs)沖洗。經(jīng)沖洗的外泌體沉淀物以10000xg離心60分鐘，并再次懸浮于pbs中(圖1)。在回收上層清液之后，標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基被添加至干細(xì)胞并培養(yǎng)。該程序被重復(fù)至干細(xì)胞的通道7?；瘖y品組合物使用在增殖干細(xì)胞至通道7的過程中分離的外泌體來制備。在用于皮膚美白、改善皺紋或再生的化妝品組合物中，所含有的外泌體的濃度可以是1至150μg每1ml的化妝品組合物，特別是5至150μg的濃度，更特別是10至150μg的濃度，甚至更特別是20至130μg的濃度，并且還更特別是20至100μg的濃度，但不限于此。在本發(fā)明的一個實施方式中，源自人脂肪源干細(xì)胞的外泌體所使用的濃度為10、30或50μg/ml。另外，已確定人包皮纖維原細(xì)胞極佳的傷口愈合(圖18)、極佳的膠原蛋白合成速率(圖19)和黑色素合成的減少(圖20)。通過將外泌體封裝至脂質(zhì)體內(nèi)，外泌體可以封裝外泌體的脂質(zhì)體的形式包含于化妝品組合物中，但不限于此。在某些實施方式中，外泌體可以是任何形式，只要其適用于化妝品組合物。還能夠使用外泌體本身，而不將其封裝至脂質(zhì)體中。當(dāng)外泌體以脂質(zhì)體封裝的形式被使用的時候，外泌體的含量可以是0.1至10.0wt％，更特別地為0.1至1.0wt％，基于脂質(zhì)體的總重量計，但不限于此。包封外泌體的脂質(zhì)體的含量可以是0.001至10.0wt％，特別是0.001至1.0wt％，更特別是0.01至1.0wt％，并且甚至更特別是0.01至0.1wt％，基于整個化妝品組合物的總重量計，但不限于此。在本發(fā)明的一個實施方式中，3wt％的卵磷脂在室溫下(例如15℃)分散于包含0.01wt％源自干細(xì)胞的外泌體的水相中，并隨后使用超臨界二氧化碳形成反向微乳液(水/低溫處理的二氧化碳)。隨后，終止反應(yīng)，超臨界二氧化碳在減壓下汽化以去除超臨界二氧化碳相，由此獲得低溫處理的脂質(zhì)體懸浮液，其中外泌體被封裝?；瘖y品組合物經(jīng)制備以使得由此制備的封裝外泌體的脂質(zhì)體的含量為5wt％，基于整個化妝品組合物的總重量計。在常規(guī)技術(shù)中，使用在培養(yǎng)人脂肪源干細(xì)胞過程中獲得的培養(yǎng)溶液。然而，前述實施方式是與之不同的，其中，在培養(yǎng)溶液中呈納米囊泡形式的外泌體會被分離并提純，以作為化妝品成分，而非使用培養(yǎng)溶液作為所述成分。當(dāng)干細(xì)胞外泌體被分離并提純時，在外泌體中所包含的再生相關(guān)蛋白質(zhì)、膠原蛋白衍生物和不同的生長因子可以這種方式而被有效地使用，即它們會消除來自于培養(yǎng)基組分的干擾。由此，由包括抗生素和血清的培養(yǎng)基組分所導(dǎo)致的問題就可被解決。根據(jù)上述實施方式的外泌體包含干細(xì)胞的遺傳信息，蛋白質(zhì)和生長因子，并且外泌體自身可用作為載體。由約50至150nm尺寸的脂質(zhì)組成的外泌體為生物相容性的，因為其為細(xì)胞源材料，并且顯示出極佳的細(xì)胞吸收速率。因此，有利的是，其無需如在常規(guī)技術(shù)中的那樣，沒有將培養(yǎng)溶液封裝至脂質(zhì)體內(nèi)的額外步驟，并且其可以容易地應(yīng)用于皮膚。此外，根據(jù)上述實施方式包含源自干細(xì)胞的外泌體的化妝品組合物可被用作為用于改善疤痕外觀的制劑。由于干細(xì)胞來源外泌體包含誘導(dǎo)細(xì)胞增殖和分化以及皮膚再生的蛋白質(zhì)和生長因子，所以它們可被應(yīng)用于舊傷和痤瘡疤痕以減輕疤痕或其表觀。因此，當(dāng)被用作用于改善疤痕組織的制劑時，其可以包含源自干細(xì)胞的外泌體的噴霧、凝膠類型的藥膏和貼片等的形式來應(yīng)用。此外，本發(fā)明的另一個實施方式提供了一種包含源自干細(xì)胞的外泌體作為活性成分的藥物組合物，更特別地，提供了一種包含源自干細(xì)胞的外泌體作為活性成分的用于皮膚再生的藥物組合物。據(jù)此，根據(jù)本發(fā)明的一個實施方式的包含源自干細(xì)胞的外泌體作為活性成分的用于皮膚再生的化妝品組合物可被用作為藥物組合物。干細(xì)胞可以是骨髓干細(xì)胞，臍帶血干細(xì)胞或者脂肪來源干細(xì)胞，并且可以是人、動物或植物來源干細(xì)胞。舉例來說，這些干細(xì)胞可以是人脂肪來源干細(xì)胞，但不限于此。在本發(fā)明的一種實施方式中，當(dāng)衍生自增殖人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體(stem-exo)尺寸被檢測時，其尺寸為約69nm，確認(rèn)其小于衍生自人表皮角化細(xì)胞的外泌體(k-exo)或者衍生自人包皮纖維原細(xì)胞的外泌體(f-exo)(圖13)。在本發(fā)明的另一個實施方式中，當(dāng)比較和分析與在stem-exo、k-exo和f-exo中存在的改善皺紋、美白和皮膚再生相關(guān)的生物活性因子時，所確認(rèn)的是單核細(xì)胞趨化蛋白-1、-3(mcp-1、-3)，趨化因子配體5(ccl-5)和膠原酶抑制劑(金屬蛋白酶-1的組織抑制劑(timp-1))涉及與促進膠原蛋白合成和抑制其分解相關(guān)的機制，與k-exo和/或f-exo相比，與美白相關(guān)的白介素-6、-8(il-6、-8)，與皮膚再生和血管生成相關(guān)的肝細(xì)胞生長因子(hgf)、纖溶酶原激活物抑制劑-1(pai-1)、血管生成素和血管生成素-1，在stem-exo中被過度表達(圖15、16和17)。在本發(fā)明的另一個實施方式中，stem-exo中人包皮纖維原細(xì)胞的傷口愈合效果被檢測到。結(jié)果是，當(dāng)stem-exo的使用濃度為10、30和50μg/ml時，與k-exo或f-exo相比顯示出對包皮纖維原細(xì)胞移植的極佳效果，由此顯示出對傷口愈合極佳的效果(圖18)。在本發(fā)明的又一個實施方式中，stem-exo的皺紋改善作用被確認(rèn)。結(jié)果是，膠原蛋白合成隨著stem-exo所使用濃度的提高而加強。特別地，在50μg/ml時與k-exo或f-exo相比，stem-exo顯示出非常優(yōu)異的膠原蛋白合成速率，由此確認(rèn)對皺紋改善極佳的效果(圖19)。在本發(fā)明的另一個實施方式中，stem-exo對黑色素形成的抑制效果被檢測到。結(jié)果是，當(dāng)stem-exo以10、30和50μg/ml的濃度用于小鼠黑素瘤時，確認(rèn)黑色素合成有所下降，由此確認(rèn)非常良好的美白效果(圖20)。有益效果根據(jù)本發(fā)明實施方式的外泌體顯示出影響分化成脂肪細(xì)胞的生物活性因子極佳的表達速率，并具有將干細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞的作用。因此，本發(fā)明可被用作為干細(xì)胞分化誘導(dǎo)試劑，用于組織再生的可注射制劑，用于化妝品目的的填充物，用于組織工程的制劑等。此外，根據(jù)本發(fā)明實施方式的外泌體為在干細(xì)胞增殖過程中分泌的外泌體，并包含與干細(xì)胞的細(xì)胞增殖、分化和再生等相關(guān)的基因、蛋白質(zhì)、生長因子等，并由此可以在不存在其它添加劑例如細(xì)胞激活劑或生長因子的情況下誘導(dǎo)皮膚再生。另外，外泌體為提純的組分，其并不包括抗生素、血清或培養(yǎng)溶液中的有害因子，并且由此，與培養(yǎng)化妝品相關(guān)的問題就可被克服。而且，所述外泌體為細(xì)胞來源脂質(zhì)載體，由此顯示出極佳的細(xì)胞浸潤，并對傳遞有效因子是高度有效的。由此，本發(fā)明可被用于具有皮膚美白、皺紋改善和皮膚再生功能的功能性化妝品組合物，以及用于美容目的的改善疤痕表觀的制劑，等等。附圖說明圖1為源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體及其應(yīng)用的示意圖。圖2為從分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞分離外泌體的方法的示意圖。圖3示出描述源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體的特征的圖示；a：外泌體的結(jié)構(gòu)和形狀(透射電子顯微鏡)，b：外泌體的尺寸(納米顆粒分析儀，動態(tài)光散射)，c：外泌體膜表面標(biāo)記(蛋白質(zhì)免疫印跡雜交)。圖4示出通過微陣列描述脂質(zhì)相關(guān)的生物活性因子的圖示；a：源自增殖干細(xì)胞的外泌體(hasc-exo)，b：源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體(d-exo)，c：脂肪因子陣列地圖(adipokinearraymap)。圖5示出描述影響分化成脂肪細(xì)胞的因子的表達速率的圖示；源自增殖干細(xì)胞的外泌體(hasc-exo)和源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體(d-exo)。圖6示出將人脂肪來源干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞的結(jié)果；a：人脂肪來源干細(xì)胞(hascs)，b：陽性對照組(dm)，源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體(d-exo)和源自增殖干細(xì)胞的外泌體(hasc-exo)。圖7示出經(jīng)誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的油紅o染色結(jié)果；a：人脂肪來源干細(xì)胞(hascs)，b：陽性對照組(dm)，源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體(d-exo)和源自增殖干細(xì)胞的外泌體(hasc-exo)。圖8示出通過在混合膠原蛋白和甲基纖維素而獲得的水凝膠中裝載外泌體并將外泌體皮下注射至裸鼠模型內(nèi)3周來誘導(dǎo)形成脂肪組織的結(jié)果；a：膠原蛋白/甲基纖維素水凝膠(gel)，b：裝載源自增殖干細(xì)胞的外泌體(hasc-exo)的水凝膠，c：裝載源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體(d-exo)的水凝膠。圖9示出對皮下注射至裸鼠模型內(nèi)的凝膠進行蘇木精-曙紅染色的結(jié)果。一種凝膠并未裝載有外泌體(gel)，并且其它凝膠分別裝載有源自增殖干細(xì)胞的外泌體(hasc-exo)以及源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體(d-exo)。a，c，e：放大40倍；b，d，f：放大100倍。圖10示出對皮下注射至裸鼠模型內(nèi)的凝膠進行油紅o染色的結(jié)果。一種凝膠并未裝載有外泌體(gel)，并且其它凝膠分別裝載有源自增殖干細(xì)胞的外泌體(hasc-exo)以及源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體(d-exo)。圖11為從增殖的人脂肪來源干細(xì)胞分離外泌體的方法的示意圖。圖12示出使用顯微鏡觀察到的人脂肪來源干細(xì)胞、人表皮角化細(xì)胞和人包皮纖維原細(xì)胞的圖像。圖13示出描述衍生自人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體(stem-exo)特征的圖像。源自人表皮角化細(xì)胞的外泌體(k-exo)和源自人包皮纖維原細(xì)胞的外泌體(f-exo)被用作對照組。外泌體的結(jié)構(gòu)和形狀(透射電子顯微鏡)，以及外泌體的尺寸(納米顆粒分析儀，動態(tài)光散射)分別被描述；a：stem-exo(比例尺分別為50nm(黑色)，100nm(白色))，b：k-exo(比例尺分別為50nm(黑色)，100nm(白色))和c：f-exo(比例尺分別為50nm(黑色)和200nm(白色))。圖14示出使用微陣列顯示在衍生自人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體(stem-exo)，源自人表皮角化細(xì)胞的外泌體(k-exo)和源自人包皮纖維原細(xì)胞的外泌體(f-exo)中包含的生物活性因子表達水平的對比圖；a：微陣列表格，b：微陣列結(jié)果，c和d：示出生物活性因子相對表達水平的示意圖。圖15示出使用微陣列說明在外泌體中與皺紋改善效果相關(guān)的生物活性因子表達水平的示意圖(a：pdgf-aa，b：pdgf-ab，c：pdgf-bb，d：fgf-6，e：mcp-1，f：mcp-3，g:嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子(eotaxin)，h：ccl-5，i：timp-1)；stem-exo：源自增殖的人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體，k-exo：源自人表皮角化細(xì)胞的外泌體，f-exo：源自人包皮纖維原細(xì)胞的外泌體。圖16示出使用微陣列說明在外泌體中與美白效果相關(guān)的生物活性因子表達水平的示意圖(a：tgf-β，b：tnf-α，c：il-6，d：il-8)；stem-exo：源自增殖的人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體，k-exo：源自人表皮角化細(xì)胞的外泌體，f-exo：源自人包皮纖維原細(xì)胞的外泌體。圖17示出使用微陣列說明在外泌體中與皮膚再生和血管生成相關(guān)的生物活性因子表達水平的示意圖(a：egf，b：hgf，c：pai-1，d：vegf，e：血管生成素，f：血管生成素-1)；stem-exo：源自增殖的人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體，k-exo：源自人表皮角化細(xì)胞的外泌體，f-exo：源自人包皮纖維原細(xì)胞的外泌體。圖18示出描述人脂肪來源干細(xì)胞外泌體(stem-exo)對人纖維原細(xì)胞移植的作用的示意圖；gm：干細(xì)胞培養(yǎng)基(生長培養(yǎng)基)，sfm：不含血清的培養(yǎng)基，stem-exo：源自增殖的人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體，k-exo：源自人表皮角化細(xì)胞的外泌體，f-exo：源自人包皮纖維原細(xì)胞的外泌體。圖19示出說明人脂肪來源干細(xì)胞外泌體(stem-exo)對人纖維原細(xì)胞的膠原蛋白合成的作用的示意圖：sfm：不含血清的培養(yǎng)基，stem-exo：源自增殖的人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體，k-exo：源自人表皮角化細(xì)胞的外泌體，f-exo：源自人包皮纖維原細(xì)胞的外泌體。圖20示出說明人脂肪來源干細(xì)胞外泌體(stem-exo)對小鼠黑色素細(xì)胞的黑色素合成作用的示意圖；gm：干細(xì)胞培養(yǎng)基(生長培養(yǎng)基)，sfm：不含血清的培養(yǎng)基，stem-exo：源自增殖的人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體，k-exo：源自人表皮角化細(xì)胞的外泌體，f-exo：源自人包皮纖維原細(xì)胞的外泌體。具體實施方式在下文，提供優(yōu)選的實施方式以幫助理解本發(fā)明，但是實施方式僅用于說明性的目的。此外，對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說顯而易見的是，可以在本發(fā)明的范圍和技術(shù)理念內(nèi)進行各種修改和替代形式，并且這些修改和替代形式落入本發(fā)明的范圍內(nèi)。。實施例1源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體實施例1-1：外泌體的分離為了從分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞分離外泌體，通過在分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)干細(xì)胞來誘導(dǎo)分化成脂肪細(xì)胞。已確認(rèn)分化成脂肪細(xì)胞因為在細(xì)胞質(zhì)中形成脂滴，而干細(xì)胞變得逐漸不均勻。分化干細(xì)胞培養(yǎng)基由不含血清的培養(yǎng)基替代，并維持48小時，并且細(xì)胞培養(yǎng)上層清液被回收。經(jīng)回收的細(xì)胞培養(yǎng)上層清液以300xg離心10分鐘來去除細(xì)胞，并隨后以2000xg離心30分鐘來去除細(xì)胞分泌物。其后，使用裝備有分子量為3000的過濾器的離心管(截留分子量＝3000，超濾管)以5000xg離心60分鐘來濃縮細(xì)胞。在濃縮之后獲得的上層清液與外泌體分離試劑以1:0.5的比例混合，并在4℃下儲存一天。隨后，細(xì)胞以10,000xg離心60分鐘，用以獲得外泌體沉淀物，隨后通過分子量為3000的過濾器(離心柱)過濾，并使用磷酸鹽緩沖溶液(pbs)沖洗。經(jīng)沖洗的外泌體沉淀物以10,000xg離心60分鐘，并在pbs中再懸浮(圖2)。實施例1-2：外泌體的顯微鏡分析源自實施例1-1的外泌體的尺寸和形狀使用透射電子顯微鏡和動態(tài)光散射來確定，并且外泌體的表面蛋白使用蛋白質(zhì)免疫印跡雜交來確定，蛋白質(zhì)免疫印跡雜交檢測對外泌體膜表面的特異蛋白。結(jié)果，如在圖3a中所示分離的外泌體通過透射電子顯微鏡而確認(rèn)，并且其尺寸如在圖3b中所示的被確認(rèn)為平均約50.75至58.77nm。此外，如在圖3c中所示的，在外泌體膜表面上表達的外泌體特異性標(biāo)記物通過抗體反應(yīng)來確認(rèn)。實施例1-3：與外泌體中脂肪細(xì)胞分化相關(guān)的蛋白質(zhì)和生物活性因子的分析微陣列被用于分析在源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體以及源自增殖干細(xì)胞的外泌體中存在的脂質(zhì)相關(guān)生物活性因子。所述微陣列通過抗原-抗體反應(yīng)來實施，并且熒光度(鏈霉親和素-cy3)表達使用激光掃描器(genepix4000b)來測量。另外，巨噬細(xì)胞集落刺激因子(mcsf)、腫瘤壞死因子-α(tnf-α)、瘦蛋白、胰島素、血管生成素1(angpt1)和30kda的脂肪細(xì)胞補體相關(guān)蛋白(acrp30)，均被確認(rèn)為在微陣列分析中表達的因子中影響分化成脂肪細(xì)胞的生物活性因子，并且在這一方面，比較其在源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體和源自增殖干細(xì)胞的外泌體中的相對表達水平。結(jié)果，如在圖4a至4c和表1中所示的，所確認(rèn)的是，在源自增殖干細(xì)胞的外泌體(hasc-exo)和源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體(d-exo)中存在的脂質(zhì)相關(guān)生物活性因子為不同類型的，并且還確認(rèn)的是，影響分化成脂肪細(xì)胞的生物活性因子的表達水平存在著顯著的差異(圖5)。表1實施例1-4：使用外泌體誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞分化為了使用外泌體誘導(dǎo)干細(xì)胞的脂肪細(xì)胞分化，使用分別包含源自增殖干細(xì)胞的外泌體和源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基組合物。所使用的培養(yǎng)基組合物中，外泌體添加至干細(xì)胞培養(yǎng)基的濃度為30、50和100μg/ml。在培養(yǎng)的人脂肪細(xì)胞來源干細(xì)胞(hascs)中處理每種培養(yǎng)基組合物之后，每三天更換一次培養(yǎng)基組合物，持續(xù)14天。在包含5％牛胎兒血清、1μm地塞米松、1μg/ml胰島素、100μm吲哚美辛、0.5mm3-異丁基-1-甲基黃嘌呤的達爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基的高葡萄糖培養(yǎng)基(dmem)中培養(yǎng)的干細(xì)胞被用作陽性對照組。使用源自增殖干細(xì)胞的外泌體處理的干細(xì)胞被用作陽性對照組。隨后，分析干細(xì)胞的細(xì)胞形狀以及是否分化，其中，分化成脂肪細(xì)胞被誘導(dǎo)，使用顯微鏡和油紅o染色，持續(xù)14天。結(jié)果，當(dāng)源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體(d-exo)被使用的時候，干細(xì)胞在第7天以類似于陽性對照組(dm)的水平而被分化成脂肪細(xì)胞(圖6)，因此，油的形成被確認(rèn)(圖7)。然而，在使用源自增殖干細(xì)胞的外泌體(hasc-exo)處理干細(xì)胞的情況中，所確認(rèn)的是僅產(chǎn)生增殖，而不會分化成脂肪細(xì)胞。實施例1-5：包括源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體的化妝品組合物根據(jù)實施例1-1，制備封裝源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體的脂質(zhì)體。特別地，3wt％的卵磷脂在室溫下(15℃)分散于包含0.01wt％的源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體的水相中，并隨后使用超臨界二氧化碳制備反向微乳液(水/低溫處理的二氧化碳)。隨后，終止反應(yīng)，超臨界二氧化碳在減壓下汽化以去除超臨界二氧化碳相，獲得低溫處理脂質(zhì)體懸浮液，其中，源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體被封裝。在此，反應(yīng)過程的溫度為4℃或更低。使用封裝外泌體的脂質(zhì)體通過表2中所示的組合物來制備化妝品組合物。表2實施例1-6：使用源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體誘導(dǎo)脂肪組織再生為了確認(rèn)對脂肪組織再生的作用，當(dāng)源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體被注射至體內(nèi)時，在膠原蛋白/甲基纖維素水凝膠中獨立地裝載源自增殖干細(xì)胞的外泌體和源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體。特別地，水凝膠通過將甲基纖維素粉末添加至膠原蛋白溶液中以形成膠原蛋白/甲基纖維素水凝膠來制備。也就是說，甲基纖維素粉末以3mg/ml的濃度而被添加至溶解于0.02n乙酸的膠原蛋白溶液中，從而使得甲基纖維素的最終濃度變?yōu)?wt％，并且隨后在4℃下攪拌混合物1小時來制備凝膠。在由此制備的膠原蛋白/甲基纖維素水凝膠中，裝載有源自增殖干細(xì)胞的外泌體或者源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體。特別地，在膠原蛋白/甲基纖維素水凝膠中裝載有的外泌體的最終濃度為50μg/ml，并且隨后通過移液分散于水凝膠中。此外，包含外泌體的水凝膠被皮下注射至裸鼠內(nèi)，并觀察3周。不包含外泌體的水凝膠被用作陰性對照組，并且包含源自增殖干細(xì)胞的外泌體(hasc-exo)的水凝膠被用作陽性對照組(圖8)。三周后，進行蘇木精-曙紅染色和油紅o染色以確認(rèn)脂肪組織在移植的水凝膠中的再生。結(jié)果，與陰性和陽性對照組比較，大量的小鼠細(xì)胞被引入至包含源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體(d-exo)的凝膠中(圖9)，并且細(xì)胞內(nèi)生成油的大量脂肪細(xì)胞被觀察到(圖10)。根據(jù)這些結(jié)果，可以得出源自分化成脂肪細(xì)胞的干細(xì)胞的外泌體或者裝載有外泌體的膠原蛋白/甲基纖維素水凝膠對于誘導(dǎo)脂肪組織的再生是顯著有效的。實施例2增殖干細(xì)胞源外泌體實施例2-1：來自增殖的人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體的分離在人脂肪來源干細(xì)胞增殖至通道7的過程中分離外泌體。也就是說，從增殖的人脂肪來源的干細(xì)胞分離外泌體。特別地，在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基(達爾伯克改良伊格爾培養(yǎng)基(dmem)，其包含10％牛胎兒血清，1％青霉素/鏈霉素)中培養(yǎng)人脂肪組織來源干細(xì)胞(通道3至7)。隨后，在分離外泌體前的24小時，使用dmem培養(yǎng)基代替細(xì)胞培養(yǎng)基，其為不含血清的和無抗生素的培養(yǎng)基，不具有酚紅，并隨后保持24小時。在24小時后，回收細(xì)胞培養(yǎng)上層清液。經(jīng)回收的細(xì)胞培養(yǎng)上層清液以300xg離心10分鐘來去除細(xì)胞，并隨后以2000xg離心30分鐘來去除細(xì)胞分泌物。其后，使用裝備有分子量為3000的過濾器的離心管(截留分子量＝3000，超濾管)以5000xg離心60分鐘來濃縮細(xì)胞。在濃縮之后獲得的上層清液與外泌體分離試劑以1:0.5的比例混合，并在4℃下儲存一天。隨后，以10,000xg離心60分鐘，獲得外泌體沉淀物，隨后通過0.22μm過濾器(外泌體離心柱)過濾，并使用磷酸鹽緩沖溶液(pbs)沖洗。經(jīng)沖洗的外泌體沉淀物以10,000xg離心60分鐘，并在pbs中再懸浮(圖11)。在回收上層清液之后，標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基被添加至干細(xì)胞并培養(yǎng)。該步驟被重復(fù)至干細(xì)胞的通道7。在至通道7的增殖過程中分離的外泌體被用于如下的實驗中。為了與來自人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體的效力進行比較，通過如上方法以相同的方式從人表皮角化細(xì)胞和人包皮纖維原細(xì)胞分離外泌體(圖12)。實施例2-2：外泌體的顯微鏡分析實施例2-1的源自人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體(stem-exo)、源自人表皮角化細(xì)胞的外泌體(k-exo)和源自人包皮纖維原細(xì)胞的外泌體(f-exo)的尺寸和形狀使用透射電子顯微鏡和動態(tài)光散射來確定。結(jié)果，每種衍生的外泌體的形狀通過透射電子顯微鏡而確認(rèn)。此外，源自人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體、源自人表皮角化細(xì)胞的外泌體和源自人包皮纖維原細(xì)胞的外泌體的尺寸分別為約69nm、約79.7nm和約94.6nm，并且人脂肪源干細(xì)胞源外泌體(stem-exo)的尺寸是最小的(圖13a至13c)。實施例2-3：外泌體中與皺紋改善、美白和皮膚再生相關(guān)的蛋白質(zhì)和生物活性因子的分析實施微陣列分析以對比和分析在源自人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體(stem-exo)、源自人表皮角化細(xì)胞的外泌體(k-exo)和源自人包皮纖維原細(xì)胞的外泌體(f-exo)中存在的與皺紋改善、美白和皮膚再生相關(guān)的生物活性因子。微陣列分析通過抗原-抗體反應(yīng)來執(zhí)行，并且熒光度(鏈霉親和素-cy3)表達使用激光掃描器(genepix4000b)來測量。通過微陣列分析，影響皺紋改善的9個生物活性因子(pdfg-aa，pdgg-ab，pdgf-bb，fgf-6，mcp-1，mcp-3，嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子，ccl-5，timp-1)4個美白相關(guān)活性因子(tgf-β，tnf-α，il-6，il-8)以及與皮膚再生和血管生成相關(guān)的6個生物活性因子(egf，hgf，pai-1，vegf，血管生成素，血管生成素-1)被確認(rèn)，并且關(guān)于此，比較在源自人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體和源自人表皮角化細(xì)胞的外泌體以及源自人包皮纖維原細(xì)胞的外泌體中的每種生物活性因子的相對表達水平(圖14)。圖14c和14d示出生物活性因子的相對表達水平，并且橫軸表示來自人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體，豎軸分別表示來自表皮角化細(xì)胞的外泌體和來自纖維原細(xì)胞的外泌體。此外，最上邊的線和最下邊的線以及位于中心的圖形的中線分別示出相對于參考值的1.5倍升高/下降。圖15a至15i示出與外泌體的皺紋改善作用相關(guān)的生物活性因子，圖16a至16d示出與外泌體的美白作用相關(guān)的生物活性因子，并且圖17a至17f示出與外泌體的皮膚再生和血管生成相關(guān)的生物活性因子。結(jié)果，如在圖15、16和17中所示的，所確認(rèn)的是在源自人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體(stem-exo)、源自人表皮角化細(xì)胞的外泌體(k-exo)和源自人包皮纖維原細(xì)胞的外泌體(f-exo)中存在不同類型的生物活性因子。特別地，所確認(rèn)的是，單核細(xì)胞趨化蛋白-1、-3(mcp-1、-3)，趨化因子配體5(ccl-5)和膠原酶抑制劑(金屬蛋白酶-1的組織抑制劑(timp-1))涉及與促進膠原蛋白合成和抑制其分解相關(guān)的機制，與k-exo和/或f-exo相比，在源自人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體(stem-exo)中，與美白相關(guān)的白介素-6、-8(il-6、-8)，與皮膚再生和血管生成相關(guān)的肝細(xì)胞生長因子(hgf)、纖溶酶原激活物抑制劑-1(pai-1)、血管生成素和血管生成素-1被過度表達(圖15、16和17)。實施例2-4：使用源自增殖的人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體對人包皮纖維原細(xì)胞的移植作用為了檢測源自人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體對人包皮纖維原細(xì)胞移植的作用，使用分別包含源自增殖的人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體(stem-exo)、源自人表皮角化細(xì)胞的外泌體(k-exo)和源自人包皮纖維原細(xì)胞的外泌體(f-exo)的培養(yǎng)基組合物。通過以10、30和50μg/ml的濃度將stem-exo添加至dmem不含血清的培養(yǎng)基，和以50μg/ml的濃度分別將k-exo以及f-exo添加至dmem不含血清的培養(yǎng)基來制備每種培養(yǎng)基組合物。包含10％血清的dmem培養(yǎng)基被用作為陽性對照組，并且dmem不含血清的培養(yǎng)基被用作為陰性對照組。使用綠色熒光染料標(biāo)記人包皮纖維原細(xì)胞，并在24孔板中以1×105個細(xì)胞/孔接種和在培養(yǎng)基(包含10％牛胎兒血清，1％青霉素/鏈霉素的dmem)中培養(yǎng)72小時。在培養(yǎng)過后，使用無菌黃色尖端(tip)在細(xì)胞附著的板的底部中心處制備人造的均勻間隔的傷口，并將包含外泌體的每種培養(yǎng)基組合物施加至細(xì)胞。結(jié)果，與使用陰性對照組，k-exo和f-exo進行處理的細(xì)胞相比，使用包含stem-exo的培養(yǎng)基處理的細(xì)胞在24小時顯示出更高程度的移植，并且這樣的趨勢在包含30和50μg/ml濃度的stem-exo的培養(yǎng)基中是更加突出的。在48小時后，與包含k-exo和f-exo的培養(yǎng)基相比，所述移植在包含10、30和50μg/mlstem-exo的培養(yǎng)基中更快速地發(fā)生，顯示出更好的(例如更快的，留下更小疤痕的，或者更少變色的)傷口愈合作用(圖18a和18b)。因此，與k-exo或f-exo相比，源自人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體(stem-exo)顯示出對人包皮纖維原細(xì)胞的移植更佳的作用。實施例2-5：源自增殖的人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體對皺紋改善的作用為了檢測源自人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體對人包皮纖維原細(xì)胞的膠原蛋白合成的作用，使用分別包含源自增殖的人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體(stem-exo)、源自人表皮角化細(xì)胞的外泌體(k-exo)和源自人包皮纖維原細(xì)胞源的外泌體(f-exo)的培養(yǎng)基組合物。通過以10、30和50μg/ml的濃度將stem-exo添加至dmem不含血清的培養(yǎng)基，和以50μg/ml的濃度分別將k-exo以及f-exo添加至dmem不含血清的培養(yǎng)基來制備每種培養(yǎng)基組合物。dmem不含血清的培養(yǎng)基被用作為陰性對照組。在48孔板中以5×104個細(xì)胞/孔接種人包皮纖維原細(xì)胞，并在培養(yǎng)基(包含10％牛胎兒血清，1％青霉素/鏈霉素的dmem)中培養(yǎng)72小時，隨后使用pbs沖洗，和將包含外泌體的培養(yǎng)基組合物分別施加至細(xì)胞。在培養(yǎng)完成后，回收每個孔的培養(yǎng)溶液，在25℃下，以3000rpm離心10分鐘，并隨后收集上層清液，用于可溶膠原蛋白的萃取和定量。使用pbs沖洗已去除培養(yǎng)溶液的板的每個孔。隨后，通過施加胰蛋白酶(胰蛋白酶-edta)以從每個孔的底部分離細(xì)胞，并測量細(xì)胞的數(shù)目。sircol膠原蛋白分析盒(biocolor，英國)被用于可溶膠原蛋白的定量。使用與聚乙二醇混合的tris-hcl(ph7.6)緩沖溶液處理獲得的上層清液，并維持在4℃下12小時或更長時間。其后，生成物在12000rpm下離心10分鐘，以濃縮膠原蛋白。在去除上層清液后，將1ml所提供的膠原蛋白吸收染料(sircol染料試劑)添加至膠原蛋白小球，并隨后振蕩培養(yǎng)30分鐘。未吸收的染料通過12000rpm離心10分鐘而被去除，并使用酸性鹽緩沖溶液沖洗小球。隨后，吸附在膠原蛋白上的染料通過使用堿性試劑而被溶解，并且吸光度在555nm的波長下測量。將所述吸光度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程來計算可溶膠原蛋白在分別添加stem-exo、k-exo、f-exo和陰性對照組物質(zhì)的孔中的量。膠原蛋白的校準(zhǔn)量被代入方程中來計算合成速率。結(jié)果，對于使用stem-exo處理的組，可溶膠原蛋白合成速率隨著所使用的外泌體的濃度而增高，與陰性對照組相比(0.138μg)。特別地，在以50μg/ml使用stem-exo處理的組的情況中，膠原蛋白合成的量為2.59μg，其與相同量的k-exo(1.4μg)或f-exo(0.8μg)相比顯著地提高。因此，這意味著源自人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體具有促進人包皮纖維原細(xì)胞的膠原蛋白合成的作用(圖19)。實施例2-6：源自增殖的人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體對使用小鼠黑素瘤形成的黑色素的抑制作用源自人表皮角化細(xì)胞的外泌體(k-exo)和源自人包皮纖維原細(xì)胞的外泌體(f-exo)作為對照組，源自人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體(stem-exo)的美白作用通過在小鼠黑素瘤中形成的黑色素的抑制程度來確定。黑素瘤細(xì)胞為源自小鼠黑素瘤的細(xì)胞，并分泌稱為“黑色素”的黑色素顏料。黑素瘤細(xì)胞以1×105細(xì)胞/孔的密度在96孔板中接種以附著細(xì)胞，并隨后通過使用分別包含stem-exo，k-exo和f-exo的培養(yǎng)基替代培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后，回收培養(yǎng)基并以4500rpm離心10分鐘，并在405nm下測量吸光度來計算由細(xì)胞釋放的黑色素量。通過施加胰蛋白酶(胰蛋白酶-edta)來去除附著至孔板的細(xì)胞，并測量細(xì)胞數(shù)量，隨后離心回收細(xì)胞。使用pbs沖洗細(xì)胞一次，并離心以獲得細(xì)胞小球。將1ml包含10％二甲基亞砜(dmso)的1n氫氧化鈉(naoh)溶液添加至細(xì)胞小球以在80℃下溶解黑色素2小時，隨后將生成物添加至96孔板，并在405nm下測量吸光度。使用所測量的吸光度定量黑色素，并歸一化為試樣的蛋白質(zhì)濃度來確定已合成的黑色素的濃度。源自人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體以10、30和50μg/ml的濃度用于黑素瘤細(xì)胞上，并檢測黑色素合成的程度。結(jié)果是，已確認(rèn)黑色素合成對于所有濃度的源自干細(xì)胞的外泌體都有所降低(圖20)。實施例2-7：包含源自增殖的人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體的化妝品組合物根據(jù)實施例2-1，制備封裝源自增殖的人脂肪來源干細(xì)胞的外泌體的脂質(zhì)體。特別地，3wt％的卵磷脂在室溫下(15℃)分散于包含0.01wt％源自增殖的干細(xì)胞的外泌體的水相中，并隨后使用超臨界二氧化碳制備反向微乳液(水/低溫處理的二氧化碳)。之后，終止反應(yīng)，超臨界二氧化碳在減壓下汽化以去除超臨界二氧化碳相，并獲得低溫處理的脂質(zhì)體懸浮液，其中封裝有源自增殖的干細(xì)胞的外泌體。在這里，反應(yīng)溫度為4℃或更低?；瘖y品組合物使用封裝外泌體的脂質(zhì)體通過在下表3中所示的組合物來制備。表3制劑實施例1：制備皮膚軟化化妝水(爽膚水)皮膚軟化化妝水(爽膚水)通過在下表4中所示的成分使用封裝根據(jù)實施例2-7的方法獲得的源自增殖的干細(xì)胞的外泌體的脂質(zhì)體來制備。表4組合物含量(wt％)封裝根據(jù)本發(fā)明實施例2-1的外泌體的脂質(zhì)體0.01乙醇10甘油3丁二醇3透明質(zhì)酸鈉0.1三乙胺0.1抗氧化劑0.1防腐劑、調(diào)味劑、著色劑0.1純水余量制劑實施例2：營養(yǎng)化妝水的制備(牛奶潤膚乳)營養(yǎng)化妝水(牛奶潤膚乳)通過在下表5中所示的成分來制備，使用封裝有實施例2-7的方法獲得的源自增殖的干細(xì)胞的外泌體的脂質(zhì)體。表5組合物含量(wt％)封裝根據(jù)本發(fā)明實施例2-1的外泌體的脂質(zhì)體0.01甘油5礦物油4蜂蠟4聚山梨醇酯-601.5羧乙烯基聚合物0.1丁二醇3異三十烷5三乙胺0.15防腐劑、調(diào)味劑、著色劑0.1純水余量當(dāng)前第1頁12