天然降壓素的處方組成：人參、鹿茸、枸杞子、何首烏、天麻、鉤藤、地骨皮、葛根、靈芝草、遠志、夏枯草、銀杏葉、菊花、茯苓、甘草。天然降壓素的制?。簩⑻幏街械?5味中草藥分別篩制干凈，60目粉碎機分別粗粉，分別放入超臨界CO2流體萃取器。流體萃取的壓力最佳是41mpa.流體萃取的最佳溫度是55℃.流體動態(tài)萃取的最佳時間是32分鐘。流體萃取中最優(yōu)的夾帶劑是乙醇。流體萃取中的夾帶劑用量是整體提取量的20分之一。動態(tài)流體萃取32分鐘，進行界面提取，分別提出各味中藥的有效成分，如降壓素素、人參甙、亞油酸、牛磺酸、枸杞多糖。上述提取的各種中藥有效成分，混合之后即為天然降壓素。天然降壓素療效的基礎(chǔ)研究原發(fā)性高血壓的實質(zhì)，是血管內(nèi)皮細胞的功能障礙。體內(nèi)氧化應(yīng)激條件下所產(chǎn)生的自由基損傷，是造成血管內(nèi)皮細胞功能障礙的重要機制。自由基可以滅活NO[1]，抑制NOS的活性[2]，導(dǎo)致NO的生成大大減少，ET-1的合成與釋放大大增加，表現(xiàn)出持久的縮血管效應(yīng)，使原發(fā)性高血壓得以起動和維持。根據(jù)這一理論認識，為有效的治療原發(fā)性高血壓，將研究發(fā)現(xiàn)的可治愈原發(fā)性高血壓的天然中草藥，如葛根、遠志、靈芝草[3]，應(yīng)用超臨界流體萃取技術(shù)，提取各味植物藥草的主要有效成分，制成中藥新藥----天然降壓素，經(jīng)高效液相色普技術(shù)純化，配成一定濃度的試驗用藥液，進行原發(fā)性高血壓大鼠的基礎(chǔ)實驗研究。一、材料與方法1、實驗動物：雄性原發(fā)性高血壓大鼠(SHR)，購于北京利華實驗動物中心。體重200-220克，血壓(176.6±3.4)。主要儀器：定量PCR儀(美國ABI公司)；流式細胞儀(美國BD公司FACSC-alibur)；透射電子顯微鏡(日立7500型)；RBP-1型大鼠血壓計(中日友好醫(yī)院醫(yī)學(xué)研究所)；生化分析儀lisa3000plus(法國HYEL)；酶標儀(美國Bio-Tec生物科技公司產(chǎn)品)；主要試劑：逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)試劑盒，購自美國QIAGEN公司；NO、NOS、MDA、SOD試劑盒，購于南京建成生物工程研究所；ET-1試劑盒，由北京華美生物工程有限公司提供。2、實驗藥物：靈芝草，購于北京同仁堂藥店，經(jīng)超臨界流體萃取技術(shù)萃取，萃取壓力30千帕，萃取溫度65℃，夾帶劑為60％乙醇，萃取時間60分鐘。所提膏狀提取物，經(jīng)高效液相色譜技術(shù)純化，冷凍干燥后，粉碎裝入膠囊，每粒0.3g，相當于原生藥6g。實驗時取膠囊內(nèi)容物加蒸餾水溶化，配成60g/L的劑量。陽性對照藥卡托普利片，常州制藥廠生產(chǎn)，批號312731，每片25mg，研末加蒸餾水配成含量為2.5g/L。二、實驗方法：1.動物分組和治療：雄性原發(fā)性高血壓大鼠(SHR)30只，血壓(176.6±3.4)mmHg，隨機分成對照組、天然降壓素治療組(簡稱天然降壓素組)、陽性藥物卡托普利對照組(簡稱陽性組)。各組SHR在正常飼養(yǎng)的基礎(chǔ)上，對照組給以蒸餾水灌胃治療，天然降壓素組給以天然降壓素0.6g/kg灌胃治療，陽性組給以卡托普利0.03g/kg，每天1次灌胃治療。2.大鼠血壓測量：治療8周后，測量SHR大鼠的血壓，重復(fù)測定3次。3.生化指標檢測：各組大鼠治療后，空腹6h，麻醉后左頸總動脈插管取血5ml，離心后取上清液，按照試劑盒說明，測定NO、NOS、ET-1、SOD、MDA的含量，及血脂的變化。用考馬斯亮藍比色法進行蛋白定性，測定SOD、NOS的活性。5.分子生物學(xué)指標的測定采用NorthernBlotting方法、免疫組化、Western印跡和RT-PCR法檢測SOD、NOS、HDL的基因表達，用流式細胞術(shù)檢測內(nèi)皮細胞的凋亡。4、統(tǒng)計方法：各組實驗所得數(shù)據(jù)用(X±S)表示，采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行成組設(shè)計的t檢驗和方差分析，比較各組之間的差異。三.實驗結(jié)果1.血壓的變化：各組大鼠治療8周后，天然降壓素組大鼠的血壓趨于正常水平，和對照組比較，P＜0.01，和陽性組比較，P＜0.01。動性觀察可見，天然降壓素有增強大鼠體能的作用。具體數(shù)據(jù)見表1。表1各組大鼠治療8周后的血壓變化(x±S，mmHg)注：天然降壓素組、陽性組分別與對照組比較，#：P＜0.05，##：P＜0.01；天然降壓素組與陽性組比較，*：P＜0.05，**：P＜0.01。下同2.各組大鼠治療后血清NO、NOS、ET-1的變化：天然降壓素組大鼠的NO的含量顯著升高，ET-1的水平顯著下降，和對照組比較，P＜0.01。詳細數(shù)據(jù)見表2。表2各組大鼠治療前NO、NOS、NOS、ET的變化(x±s，n＝10)3.各組大鼠治療后抗氧化指標的變化：天然降壓素組大鼠MDA的含量明顯下降，SOD的活性明顯上升，和對照組比較，P＜0.01，詳細數(shù)據(jù)見表3。表3各組大鼠治療后MDA及SOD的變化(x±s，n＝10)4.各組大鼠治療后基因表達的檢測結(jié)果：天然降壓素組大鼠主動脈SOD、NOS的基因表達明顯上調(diào)，肝臟HDL的基因表達也明顯上調(diào)，和對照組比較，P＜0.01。內(nèi)皮細胞的凋亡率也明顯降低，和對照組比較，P＜0.01。表4各組大鼠治后主動脈SOD、NOS、肝臟HDL基因表達的變化及EC的凋亡率(x±s)5.各組大鼠治療后血脂的變化：各組大鼠治療8周后，天然降壓素組大鼠的血清TC、TG、LDL均明顯降低，而HDL的水平顯著上升，和對照組比較，P＜0.01。詳細數(shù)據(jù)見表5。表5各組大鼠冶療后血清脂類代謝的變化(x±s，n＝10)討論氧化應(yīng)激條件下所產(chǎn)生的自由基，是內(nèi)皮細胞功能障礙的重要機制，是原發(fā)性高血壓的實質(zhì)。高血壓狀態(tài)時，NO的生成量顯著降低，而NO是體內(nèi)重要的信使分子和效應(yīng)分子，為血管的舒張、神經(jīng)信號的傳遞，起著重要的調(diào)控作用[4]。NOS是催化NO合成的主要物質(zhì)[5]。自由基可以滅活NO，并加速一氧化氮的降解。從而導(dǎo)致內(nèi)皮細胞功能障礙的發(fā)生，導(dǎo)致ET-1的合成和釋放增加，表現(xiàn)出持久的縮血管效應(yīng)。因此，高血壓的藥物治療研究，應(yīng)以清除自由、增加NO的生成，改善和恢復(fù)內(nèi)皮細胞的功能為靶點。體內(nèi)過高的LDL，可進入內(nèi)皮細胞，刺激內(nèi)皮細胞產(chǎn)生活性氧，它可作為信號傳導(dǎo)通路的第二信使，誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞的損傷[6]，又可抑制內(nèi)皮細胞中NOS的活性，并加速NO的降解，導(dǎo)致內(nèi)皮細胞的凋亡[7]。本研究結(jié)果表明，天然降壓素組大鼠的SOD的基因表達明顯上調(diào)，活性明顯增強，MDA的含量明顯降低，同時內(nèi)皮細胞的凋亡率也明顯降低，和對照組比較，差異都十分顯著。由此證明，天然降壓素可有效地促進SOD的基因表達，增強SOD的含量與活性，清除自由基，減少MDA的生成，又可抑制內(nèi)皮細胞的凋亡，從抗氧化、抗凋亡的角度，改善和恢復(fù)內(nèi)皮細功能，從而使高血壓得到有效的治療。NO和ET-1是內(nèi)皮細胞分泌的一對相互拮抗的活性物質(zhì)。正常情況下，兩者的拮抗效應(yīng)處于動態(tài)平衡之中，從而維持著血管的正常舒張和收縮功能，以及血壓的穩(wěn)定。高血壓狀態(tài)時，NOS的活性被抑制，NO的生成大大減少，導(dǎo)致ET-1的過度合成和釋放。這一活性物質(zhì)的水平升高，表現(xiàn)為持久的縮血管效應(yīng)，進一步促使高血壓的形成和發(fā)展。本研究結(jié)果表明，天然降壓素組大鼠NOS的基因表達明顯上調(diào)，NO的生成顯著上升，ET的水平顯著下降。由此證明，天然降壓素可有效地促進NOS的基因表達，增加NOS的含量與活性，促進NO的生成，降低ET-1的水平，在改善內(nèi)皮細胞的功能上，使血壓穩(wěn)定在正常狀態(tài)。LDL在血管內(nèi)皮下的沉積，是氧化應(yīng)激反應(yīng)的基礎(chǔ)，是高血壓形成的重要始動環(huán)節(jié)之一[8]，氧化應(yīng)急的原因，是脂類的代謝異常所致。而HDL在脂類代謝中起著非常重要的作用。HDL的主要功能，是將血漿中激離的膽固醇轉(zhuǎn)化成膽固醇酯，阻止激離的膽固醇在血管壁的沉積，阻止內(nèi)皮細胞功能障礙的發(fā)生。有研究證明，HDL在脂類的代謝機制中，表現(xiàn)為一個HDL分子可以轉(zhuǎn)運5--6個LDL分子或TG分子至肝臟進行分解代謝。然而，由于HDL的分子體積特別小，可穿行于動脈內(nèi)膜，將沉積在動脈內(nèi)膜里面的膽固醇帶出血管壁，從而修復(fù)了血管內(nèi)皮，恢復(fù)了血管的彈性，使內(nèi)皮細胞發(fā)揮正常的舒縮血管、調(diào)控血壓的功能。因此，調(diào)節(jié)或升高血漿HDL的水平，也是治療原發(fā)性高血壓的一個重要方向。本研究結(jié)果顯示，天然降壓素組大鼠HDL的基因表達明顯上調(diào)，其含量明顯升高，LDL的蓄積明顯減少，和對照組比較，具有明顯之差異，由此可見，天然降壓素可準確地調(diào)控HDL的基因表達，提高HDL的水平，加速膽固醇的代謝，降低LDL堆積，減少氧化應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生，阻止內(nèi)皮細胞功能障礙形成與發(fā)展，恢復(fù)內(nèi)皮細胞舒張血管、調(diào)控血壓的功能，使血壓趨于平衡狀態(tài)。參考文獻1TaiMH，WangLL，WukL，et.al.Increasdsuperoxidanioninrostralventrolateralmedullacontributestohypertensioninspontaneouslyhypertensiveratsviainteractionswirhnitricoxide[J].FadicBiolMed，2005，38：450-462.2黎鍵.氧化應(yīng)激在周圍動脈硬化疾病發(fā)生過程中的作用[J]。中華老年醫(yī)學(xué)雜志，2007，26：328.3LeeSY.CardiovasculareffectsofmyceliumextractofGanodermalucidum：Inhibitionofsympathelicoutflowasamechanismofitshypotensiveaction[J].ChemPharmBull，1990，38：1395.4StoyanovoII，LazarovNE.LocaliztionofintricoxidesynthaseinrattrigeminalprimaryafferentneuronsusingNATPH-diaphorasehistochmistry[J]MolHistol，2005，36(3)：187.5BrittenMBZeiherAM，SchahingerV.Chinicalimportanceofcoronaryendothelialvasodilatordysfunctionandtherapeuticoptions[J].Int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