本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石的藥物及其制備方法和質(zhì)量檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：泌尿系統(tǒng)結(jié)石是一種常見的泌尿系統(tǒng)疾病，也稱為尿石癥，包括腎臟、輸尿管、膀胱和尿道結(jié)石，其中以腎臟和輸尿管結(jié)石最為常見。有很多因素影響結(jié)石形成，主要有性別，年齡、種族、遺傳、飲食習(xí)慣，環(huán)境因素、和職業(yè)等[1]。在人類一生中泌尿系統(tǒng)結(jié)石的發(fā)病概率約為10％-15％，一些中東國(guó)家甚至達(dá)到20％-25％，而且患病率逐年上升[2]。我國(guó)泌尿結(jié)石疾病也很常見，好發(fā)于青壯年，且近年來(lái)發(fā)病率逐漸上升。據(jù)文獻(xiàn)資料報(bào)道，我國(guó)泌尿系結(jié)石發(fā)病率為1％-5％，南方地區(qū)泌尿系結(jié)石發(fā)病率更是高達(dá)5-10％[3]。而且，復(fù)發(fā)率高更是泌尿系結(jié)石的一個(gè)非常顯著的特點(diǎn)。據(jù)報(bào)道，在沒有采取任何預(yù)防措施的情況下，泌尿系結(jié)石1年的復(fù)發(fā)率接近10％，5年的復(fù)發(fā)率是33％，10年的復(fù)發(fā)率是50％，15年的復(fù)發(fā)率則高達(dá)75％[4]。至今沒有有效方法預(yù)防泌尿系結(jié)石的復(fù)發(fā)。結(jié)石一旦生成，常會(huì)造成尿路梗阻，繼發(fā)感染和上皮病變，這些都是它對(duì)腎臟產(chǎn)生繼發(fā)性損害的表現(xiàn)。結(jié)石很小時(shí)常常不被病人所察覺，有在正常運(yùn)動(dòng)時(shí)可以從身體排出的結(jié)石。然而，隨著結(jié)石體積的增大，大多數(shù)患者會(huì)伴有腎區(qū)鈍、血尿等癥狀，也有一些結(jié)石會(huì)進(jìn)入輸尿管導(dǎo)致腎積水或腎絞痛，使患者疼痛難忍[5]。此外，盡管石頭通常被認(rèn)為是一種急性疾病，但是越來(lái)越多的證據(jù)表明結(jié)石是一種可以導(dǎo)致終末期腎病[6]，并可造成患高血壓[7]、冠心病[8]、代謝綜合征[9]及糖尿病[10]的風(fēng)險(xiǎn)升高的系統(tǒng)性功能失調(diào)疾病。因此，泌尿結(jié)石要引起高度重視，并在結(jié)石尚未發(fā)病及發(fā)病初期，結(jié)石尚未變大之時(shí)就應(yīng)及時(shí)進(jìn)行預(yù)防及治療。目前，體外沖擊波碎石術(shù)(ESWL)和腔內(nèi)泌尿技術(shù)可以通過(guò)微創(chuàng)技術(shù)治愈大多數(shù)泌尿系結(jié)石患者，然而，接受ESWL和泌尿外科腔內(nèi)手術(shù)的患者的腎臟功能可能會(huì)發(fā)生損傷，泌尿系結(jié)石的復(fù)發(fā)率也會(huì)上升[11]。因此，尋找有效預(yù)防和治療泌尿系結(jié)石的藥物具有重要意義，也是該領(lǐng)域主要的研究方向和共同致力于解決的重要課題。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的任務(wù)是提供一種預(yù)防和治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石的澤瀉排石防石顆粒劑及其制備方法。本發(fā)明的另一個(gè)任務(wù)是提供所述排石防石顆粒劑的質(zhì)量檢測(cè)方法。實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案是：本發(fā)明提供的預(yù)防和治療泌尿系統(tǒng)結(jié)石的澤瀉排石防石顆粒劑，是以澤瀉、車前草、廣金錢草、茯苓和桂枝五味藥材為原料，按以下方法制成的藥劑：取上述五味藥材，加8倍量水，煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至80℃下得相對(duì)密度約1.30的浸膏，加入1.5倍糊精作為填充劑、0.004倍的甜菊素為矯味劑，以80％濃度的乙醇為濕潤(rùn)劑，乙醇用量為10％倍浸膏量，混勻，按常法制成顆粒，干燥，整粒即得。本發(fā)明提供的排石防石顆粒劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，是以藥劑中廣金錢草和/或桂枝的薄層色譜作為鑒別方法，具體是對(duì)藥劑中德大車前苷和/或夏佛塔苷兩種有效成分含量進(jìn)行測(cè)定。經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和臨床研究證明本發(fā)明提供的澤瀉排石防石顆粒劑在動(dòng)物體內(nèi)、體外及人體內(nèi)均具有明顯的抑制草酸鈣結(jié)石形成的作用。本發(fā)明劑型選擇為顆粒劑，其優(yōu)點(diǎn)在于：①中藥顆粒劑既不會(huì)出現(xiàn)湯劑在使用過(guò)程中的問(wèn)題，比如：湯劑的服用的劑量較大、湯劑煎煮不方便、湯劑易發(fā)生霉敗變質(zhì)，又能擁有一些優(yōu)勢(shì)，比如湯劑吸收快、湯劑作用迅速等；②顆粒劑的制備工藝適于工業(yè)生產(chǎn)；③顆粒劑在攜帶、儲(chǔ)藏、運(yùn)輸、服用等方面都非常便利。此外，本方的一日處方量為54g，干膏收率約為10％，從服用量來(lái)考慮，選擇顆粒劑比較合適。本發(fā)明澤瀉排石防石顆粒劑為無(wú)糖型顆粒，縮小了輔料的比例，使服用量大幅減少，使產(chǎn)品的等級(jí)得到了提高。另外，在中醫(yī)藥理論方面，甘味過(guò)濃，會(huì)滋膩礙邪，不利于疾病的治療，胃腸功能弱的人群尤為不適。在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)方面，現(xiàn)代研究已經(jīng)證明尿石癥病人如果攝入的糖份過(guò)量，不利于結(jié)石的治療，而且會(huì)使促進(jìn)結(jié)石的生長(zhǎng)，使結(jié)石變大。無(wú)糖型顆粒劑的糖粉含量低，更加適宜于患有糖尿病、高脂血或者年老體弱的患者服用。本項(xiàng)目選擇無(wú)糖型顆粒劑，減少了患者對(duì)糖份的攝取，特別適合泌尿系統(tǒng)結(jié)石患者使用，解決了上述問(wèn)題，擴(kuò)大了臨床應(yīng)用范圍，創(chuàng)造更大的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益，使本處方的醫(yī)療價(jià)值得到更大的發(fā)揮和利用，同時(shí)在同類產(chǎn)品中更具有競(jìng)爭(zhēng)力。實(shí)驗(yàn)資料提取工藝研究?jī)x器：硅膠G薄層板(上?？婆d商貿(mào)有限公司)；聚酰胺薄膜(浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠出品)；玻璃點(diǎn)樣毛細(xì)管(華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠生產(chǎn))；雙量程電子分析天平AUW-220D型；Agilent1100series高效液相色譜儀；島津LC-20A型高效液相色譜儀；AgilentTC-C18(4.6×250mm)色譜柱；RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(鞏義市英峪予華儀器廠)；DZF-6020型真空干燥箱(上海索譜儀器有限公司)；粉碎機(jī)(HY-02，河北匯博云?？萍及l(fā)展有限公司)；HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市陽(yáng)光儀器廠)；電子天平(JD1000-2，沈陽(yáng)龍騰電子稱量?jī)x器有限公司)；可見紫外光譜掃描儀(UV-1601PC型，島津國(guó)際貿(mào)易有限公司)。試劑：乙腈(美國(guó)TEDIA公司，色譜純)、甲醇(美國(guó)TEDIA公司，色譜純)、純化水；甲醇、甲苯、乙醇、丁酮、三氯甲烷、正丁醇、乙醚、石油醚、乙酸乙醋、環(huán)己烷、甲酸、冰醋酸、硫酸、香草醛、三氯化鋁、硅鎢酸、二硝基苯肼(均為分析純)；中性氧化鋁(青島碩遠(yuǎn)化工有限公司，層析用)；23-乙酰澤瀉醇B(批號(hào)為：111846)、大車前苷(批號(hào)為：111914)、桂皮醛(批號(hào)為：110710)、廣金錢草對(duì)照藥材(批號(hào)為：121248)、車前草對(duì)照藥材(批號(hào)為：110710)、茯苓對(duì)照藥材(批號(hào)為：121117)、桂枝對(duì)照藥材(批號(hào)為：121191)，均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所；夏佛塔苷(批號(hào)為：110227)，購(gòu)于成都蒲菲德生物制品有限公司。藥材：澤瀉(批號(hào)為：130212)、車前草：(批號(hào)為：130123)、廣金錢草：(批號(hào)為：121209)、茯苓(批號(hào)為：130712)、桂枝(批號(hào)為：130110)，以上藥材均購(gòu)于湖北康圣醫(yī)藥有限公司。鑒定人：華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院尹春萍副教授。藥材藥材檢驗(yàn)：1.藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：澤瀉是2010年版《中國(guó)藥典》一部收載的澤瀉科植物澤瀉Alismaorientalis(Sam.)Juzep.的塊莖。所購(gòu)買的澤瀉藥材應(yīng)該符合2010年版《中國(guó)藥典》一部澤瀉品種項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定。廣金錢草是2010年版《中國(guó)藥典》一部收載的豆科植物廣金錢草Desmodiumstyracifolium(Osb.)Merr.的干燥地上部分[43]。所購(gòu)買的廣金錢草藥材應(yīng)該符合2010年版《中國(guó)藥典》一部廣金錢草品種項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定。車前草是2010年版《中國(guó)藥典》一部收載的車前科植物車前PlantagoasiaticaL.或平車前PlantagodepressaWilld.的干燥全草。所購(gòu)買的車前草藥材應(yīng)該符合2010年版《中國(guó)藥典》一部車前草品種項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定。茯苓是2010年版《中國(guó)藥典》一部收載的多孔菌科真菌茯苓Poriacocos(Schw.)Wolf的干燥菌核[43]。所購(gòu)買的茯苓藥材應(yīng)該符合2010年版《中國(guó)藥典》一部茯苓品種項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定。桂枝是2010年版《中國(guó)藥典》一部收載的樟科植物肉桂CinnamomumcassiaPresl的干燥嫩枝[43]。所購(gòu)買的桂枝藥材應(yīng)該符合2010年版《中國(guó)藥典》一部桂枝品種項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定。2.藥材的定性鑒別：澤瀉按照《中國(guó)藥典》2010年版一部澤瀉品種鑒別項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定進(jìn)行薄層鑒別。澤瀉供試品與23-乙酰澤瀉醇B及澤瀉對(duì)照藥材在相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點(diǎn)，符合規(guī)定。車前草按照《中國(guó)藥典》2010年版一部車前草品種鑒別項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定進(jìn)行薄層鑒別。紫外燈下，車前草供試品與車前草對(duì)照藥材及車前草對(duì)照品大車前苷在相應(yīng)位置上顯相同顏色熒光斑點(diǎn)，符合規(guī)定。廣金錢草按照《中國(guó)藥典》2010年版一部廣金錢草品種鑒別項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定進(jìn)行薄層鑒別。紫外燈下，廣金錢草供試品與廣金錢草對(duì)照品夏佛塔苷及廣金錢草對(duì)照藥材在相應(yīng)位置上顯相同顏色熒光斑點(diǎn)，符合規(guī)定。茯苓按照《中國(guó)藥典》2010年版一部茯苓品種鑒別項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定進(jìn)行薄層鑒別。茯苓供試品與茯苓對(duì)照藥材在相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點(diǎn)，符合規(guī)定。桂枝按照《中國(guó)藥典》2010年版一部桂枝品種鑒別項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定進(jìn)行薄層鑒別。桂枝供試品與桂枝對(duì)照品桂皮醛及桂枝對(duì)照藥材在相應(yīng)位置上顯相同顏色斑點(diǎn)，符合規(guī)定。2.2.2.3藥材的含量測(cè)定：1.澤瀉按照《中國(guó)藥典》2010年版一部澤瀉品種含量測(cè)定項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定進(jìn)行含量測(cè)定。測(cè)得澤瀉藥材中23-乙酰澤瀉醇B的含量為0.059％，大于0.050％，符合規(guī)定。2.車前草按照《中國(guó)藥典》2010年版一部車前草品種含量測(cè)定項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定進(jìn)行含量測(cè)定。測(cè)得車前草藥材中大車前苷的含量為0.72％，大于0.10％，符合規(guī)定。3.廣金錢草按照《中國(guó)藥典》2010年版一部廣金錢草品種含量測(cè)定項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定進(jìn)行含量測(cè)定。測(cè)得廣金錢草藥材中夏佛塔苷的含量為0.14％，大于0.13％，符合規(guī)定。4.茯苓《中國(guó)藥典》2010年版一部茯苓品種項(xiàng)下無(wú)含量測(cè)定要求。5.桂枝按照《中國(guó)藥典》2010年版一部桂枝品種含量測(cè)定項(xiàng)下有關(guān)規(guī)定進(jìn)行含量測(cè)定。測(cè)得的桂枝藥材中桂皮醛含量為0.10％，等于0.10％，符合規(guī)定。2.2.3藥材吸水率與浸泡時(shí)間考察：中藥藥材提取工藝是提高浸膏質(zhì)量的基礎(chǔ)，提取工藝必須以制備的浸膏在保證療效的前提下，盡可能的提高質(zhì)量和收率，縮短工時(shí)，降低成本，減少物耗能耗。根據(jù)有效成分或有效部位的理化性質(zhì)設(shè)計(jì)提取工藝，以水煎煮提取。為保證本方有穩(wěn)定的療效，提高有效成分的提取量，應(yīng)先進(jìn)行浸泡，由于浸泡時(shí)間與其他因素交互作用較小，對(duì)其進(jìn)行單因素考察。浸泡時(shí)間與吸水率對(duì)提取很有影響。但因此項(xiàng)考查可以直觀評(píng)價(jià)，不用測(cè)有效成分含量，未列入正式篩選項(xiàng)目中。2.2.3.1實(shí)驗(yàn)方法：分別準(zhǔn)確稱取一日處方量(54g)的中藥材，共9份，置于500ml燒杯中，編號(hào)，再分別加入水300ml，開始浸泡，9份藥材的浸泡時(shí)間依次為10、20、30、40、50、60、70、80、90(min)，然后濾過(guò)至盡，將藥渣稱重，最后計(jì)算吸水率。計(jì)算公式：吸水率(％)＝(藥渣濕重-藥材干重)/藥材干重×100％。2.2.3.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果：結(jié)果如下，見表1，圖1。表1藥材吸水率和浸泡時(shí)間考察表2.2.3.3結(jié)果分析：藥材在浸泡40min之后，吸水量基本達(dá)到平衡，說(shuō)明在40分鐘時(shí)藥材的吸水量已經(jīng)達(dá)到最大值，此時(shí)的吸水量為藥材總量的179.63％。從生產(chǎn)實(shí)際出發(fā)，為了讓藥材充分浸泡，利于提取，最終選擇藥材的浸泡時(shí)間為40min。2.2.4提取正交試驗(yàn)研究2.2.4.1正交因素水平表：應(yīng)用“正交設(shè)計(jì)助手3.1”軟件，以夏佛塔苷、大車前苷提取量和干膏收率為三個(gè)考察指標(biāo)，以提取次數(shù)、加水量、提取時(shí)間為考察因素，進(jìn)行正交試驗(yàn)，其因素水平見表2。表2水提取因素水平表2.2.4.2試驗(yàn)方法：在確定浸泡時(shí)間為40min以后，還需要考查提取次數(shù)、提取時(shí)間、加水量等影響因素對(duì)藥材的提取率的影響。因此設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，以干膏收率、有效成分提取量為指標(biāo)對(duì)其進(jìn)行考察，篩選最佳提取工藝。本方水提工藝中有五味藥材，根據(jù)五味藥的成分及劑型要求，選用干膏收率、大車前苷、夏佛塔苷三項(xiàng)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。干膏收率：a作為選擇劑型的參考指標(biāo)，若其太高，難以制成顆粒；b影響除雜方法的選擇、干燥的程度、成品的穩(wěn)定性；c是顆粒劑日服量及包裝規(guī)格確定的依據(jù)。因此必須以干膏收率作為評(píng)價(jià)指標(biāo)之一，但其與療效強(qiáng)度不成量效關(guān)系，故綜合評(píng)價(jià)時(shí)權(quán)重系數(shù)應(yīng)較小，以0.1較為合適。大車前苷、夏佛塔苷分別是車前草、廣金錢草的指標(biāo)成分及排石防石的有效成分之一，權(quán)重系數(shù)應(yīng)相對(duì)較大，各以0.45為宜。根據(jù)上述設(shè)計(jì)的因素水平表，選擇L9(34)正交實(shí)驗(yàn)表安排實(shí)驗(yàn)：取0.2倍處方量藥材，共720g，按正交實(shí)驗(yàn)表的要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)(第一次加水時(shí)，按藥材吸水率180％補(bǔ)加1296ml水)，將濾液合并后濃縮至500ml(1.44g生藥/ml)，備用。另根據(jù)大車前苷、夏佛塔苷的含量測(cè)定方法來(lái)測(cè)定大車前苷及夏佛塔苷在濃縮液中的含量，并計(jì)算0.2倍處方量藥材的提取量；測(cè)定干膏收率。2.2.4.2.1大車前苷的含量測(cè)定方法(參見3.2.7)：1.色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)：以乙腈-水(18:82)為流動(dòng)相；以十八烷基硅膠為填充劑；紫外檢測(cè)器。理論板數(shù)按大車前苷計(jì)算不低于3000。2.對(duì)照品溶液的制備：精密稱取大車前苷對(duì)照品適量，記錄，加60％的甲醇溶液制成每1ml約含15μg的溶液，計(jì)算，即得。3供試品溶液的制備：精密量取正交水煎煮提取液1ml，將它置于蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘?jiān)?0％的甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10ml的容量瓶中，加60％的甲醇溶液至容量瓶刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，即得。4測(cè)定法：精密吸取大車前苷對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀中，測(cè)定，然后計(jì)算大車前苷的含量，即得。2.2.4.2.2夏佛塔苷含量測(cè)定的方法(參見3.2.7)：1.色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)：以乙腈-水(16:84)為流動(dòng)相；以十八烷基硅膠為填充劑；紫外檢測(cè)器。理論板數(shù)按夏佛塔苷計(jì)算不低于3000。2.對(duì)照品溶液的制備：精密稱取夏佛塔苷對(duì)照品適量，記錄，加50％甲醇制成每1ml約含30μg的溶液，計(jì)算，即得。3.供試品溶液的制備：精密量取正交水煎煮提取液1ml，將它置于蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，殘?jiān)?0％的甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10ml的容量瓶中，再加50％的甲醇溶液至容量瓶刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò)，即得。4.測(cè)定法：精密吸取夏佛塔苷對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀中，進(jìn)行測(cè)定，然后計(jì)算夏佛塔苷的含量，即得。2.2.4.2.3干膏收率測(cè)定方法：分別精密量取各組正交水煎煮濃縮液各50ml，再分別置于已經(jīng)干燥至恒重的干凈蒸發(fā)皿中，將其水浴蒸干，然后，放置烘箱中于105℃干燥3h，取出，置于干燥器中放置30min，稱量，計(jì)算干膏收率。2.2.4.3試驗(yàn)結(jié)果：試驗(yàn)結(jié)果見表3、表4。表3.水提工藝正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果注：干膏收率評(píng)分＝(10/最大干膏收率)×干膏收率大車前苷評(píng)分＝(45/最大大車前苷量)×大車前苷量夏佛塔苷評(píng)分＝(45/最大夏佛塔苷量)×夏佛塔苷量綜合評(píng)分＝干膏收率評(píng)分+大車前苷評(píng)分+夏佛塔苷評(píng)分表4方差分析方差來(lái)源偏差平方自由度方差F比顯著性A119.20259.602.21B208.422104.213.86C2579.2021289.6047.82*D53.95226.97F0.05(2，2)＝19，*顯著性由上表直觀分析可知，影響提取效果的實(shí)驗(yàn)因數(shù)順序?yàn)椋禾崛r(shí)間>提取次數(shù)>加水量，其中以提取時(shí)間影響最大。然后又經(jīng)上述方差分析可知，提取次數(shù)、加水量對(duì)提取效果均無(wú)顯著性影響，提取時(shí)間有顯著性影響，最佳的提取時(shí)間為2h，綜合考慮提取效率及成本。最終確定的水煎煮最佳工藝為：A1B2C3，即：8倍量水，提取2次，每次提取時(shí)間為2h。2.2.4.4提取工藝驗(yàn)證：稱取藥材，共三份，按A1B2C3進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，平行操作，結(jié)果見表5。表5水提工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，該工藝穩(wěn)定、可行。2.3分離、純化、濃縮工藝研究2.3.1分離、純化工藝研究：中藥藥材經(jīng)煎煮后的煎液中會(huì)有很多泥沙、藥渣碎片和無(wú)效物的大分子雜質(zhì)，這些物質(zhì)是影響中藥制劑服用量及口感的主要因素。根據(jù)工業(yè)化生產(chǎn)的設(shè)備條件和工藝要求，選擇過(guò)濾法和沉降法進(jìn)行處理。過(guò)濾法：使用不銹鋼板框過(guò)濾機(jī)。將藥液從提取罐通過(guò)板框過(guò)濾器過(guò)濾可以除去大多數(shù)固體雜質(zhì)。沉降法：經(jīng)過(guò)板框過(guò)濾器過(guò)濾后的藥液貯藏于立式沉降罐中靜置過(guò)夜，在沉降罐的底部有許多沉淀，沉淀主要是藥材的碎片和不溶性的雜質(zhì)。工業(yè)化操作中，考慮到實(shí)際情況，確定按下列順序除雜：2.3.2濃縮與干燥工藝研究：濃縮條件：經(jīng)過(guò)過(guò)濾、沉降處理后的藥液，使用減壓濃縮罐，將藥液濃縮至相對(duì)密度為1.30(80℃)。干燥條件：顆粒的干燥采用60℃～80℃干燥。2.4.制劑成型工藝研究：中藥浸膏與適量的賦形劑混合，制軟材后，過(guò)篩，干燥，整粒之后就可以制備成顆粒劑。應(yīng)用比較廣泛的中藥制劑賦形劑有蔗糖、淀粉、糊精、乳糖等。據(jù)報(bào)道，泌尿系結(jié)石病人吃糖過(guò)多，不僅有礙結(jié)石治療，還會(huì)促進(jìn)結(jié)石進(jìn)一步生長(zhǎng)[44，45]，故本品的輔料不能用蔗糖。而且，本顆粒劑是水溶性顆粒劑，故也不能選用淀粉為賦形劑。中藥無(wú)糖型顆粒劑，目前比較常用的賦形劑有糊精、可溶性淀粉、乳糖、微晶纖維素等。加入不同種類的賦形劑，會(huì)對(duì)中藥顆粒的質(zhì)量產(chǎn)生很大影響。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)資料和預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)糊精、可溶性淀粉、及乳糖等進(jìn)行比較分析。以成型率、水分、溶化性為考察指標(biāo)，進(jìn)行綜合性評(píng)價(jià)。2.4.1儀器與試藥2.4.1.1儀器：篩子(一號(hào)、四號(hào)，藥典篩)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(DHG-914，上海一恒科技有限公司)。2.4.1.2試劑：可溶性淀粉(天津市天力化學(xué)試劑有限公司)；糊精、甘露醇、微晶纖維素(MCC)(北京奧博星生物技術(shù)責(zé)任有限公司)；乳糖(上海試劑三廠)；酒精(天津市化學(xué)試劑三廠)；甜菊素(曲阜香州甜菊制品有限責(zé)任公司)。2.4.2輔料篩選2.4.2.1最小輔料用量考察2.4.2.1.1實(shí)驗(yàn)方法：稱取2.3.2項(xiàng)下的浸膏l(xiāng)0g，共12份，分別與可溶性淀粉、糊精、乳糖、甘露醇、微晶纖維素按表6中的比例混勻，以85％的乙醇溶液為濕潤(rùn)劑，至“手捏成團(tuán)，壓之即散”，制成軟材，再用一號(hào)的篩子制成顆粒，及時(shí)放置于烘箱中，于80℃干燥5小時(shí)，將顆粒取出，最后用四號(hào)的篩子整粒，即得。2.4.2.1.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果：結(jié)果見表6。表6輔料最小用量考察表2.4.2.1.3結(jié)果分析：從上表6可以得出以下結(jié)論，浸膏與輔料可溶性淀粉、糊精的最小用量比例為1:1.5；浸膏與輔料乳糖、甘露醇的最小比例為1:3；浸膏與微晶纖維素的最小比例為1:1。2.4.2.2單一輔料的考察2.4.2.2.1試驗(yàn)方法：稱取2.3.2項(xiàng)下的浸膏10g，共5份，分別與輔料可溶性淀粉、糊精、乳糖、甘露醇、微晶纖維素混勻，輔料的用量均為30g，以85％的乙醇溶液為濕潤(rùn)劑，制成軟材，用一號(hào)篩制成顆粒，將顆粒置于烘箱中，80℃干燥5小時(shí)，取出放涼，再用12目的篩子整粒，即得。分別用以下方法測(cè)定已經(jīng)制備的五份顆粒樣品的成型率、溶化性、吸濕性。成型率的測(cè)定：將已經(jīng)制備好的澤瀉排石防石顆粒稱重，記錄，然后先過(guò)一號(hào)篩，收集通過(guò)一號(hào)篩的顆粒，這部分顆粒再過(guò)四號(hào)篩，收集不能通過(guò)四號(hào)篩的顆粒，稱重，記錄。再用下面的公式分別計(jì)算各組顆粒成型率。成型率＝過(guò)篩后顆粒質(zhì)量/過(guò)篩前顆粒質(zhì)量×100％。溶化性的測(cè)定：依照《中國(guó)藥典》2010版一部附錄IC顆粒劑“溶化性”所規(guī)定，取已經(jīng)制備好的顆粒劑10g，加入熱水200ml，攪拌至全部，記錄時(shí)間，觀察。吸濕性的測(cè)定：稱取一定量的澤瀉排石防石顆粒樣品，置于30℃的烘箱中恒重48小時(shí)。在底部放有NaCl飽和溶液的玻璃干燥器中定時(shí)放入NaCl，直到形成NaCl的過(guò)飽和溶液，此時(shí)放有NaCl飽和溶液的玻璃干燥器內(nèi)的相對(duì)濕度是75％。在已恒重的扁稱量瓶底部放入約2mm厚的顆粒，準(zhǔn)確稱重后置于上述干燥器中(扁稱量瓶打開)48個(gè)小時(shí)后再次稱量，計(jì)算吸濕百分率，各做兩組，計(jì)算其平均值。再用下面的公式分別計(jì)算各組顆粒的吸濕率。吸濕百分率％＝(吸濕后重量－吸濕前重量)/吸濕前重量×100％2.4.2.2.2試驗(yàn)結(jié)果：結(jié)果見表7。表7顆粒性能指標(biāo)測(cè)定表輔料成型率(％)溶化時(shí)間(S)72h吸濕率(％)糊精91.4012519.16乳糖92.308012.74甘露醇91.609011.96可溶性淀粉87.20150(呈混懸狀)19.86Mcc92.10有沉淀14.35成型率：乳糖>MCC>甘露醇>糊精>可溶性淀粉。融化時(shí)間：可溶性淀粉>糊精>甘露醇>乳糖。吸濕率：可溶性淀粉>糊精>MCC>乳糖>甘露醇。2.4.2.2.3結(jié)果分析：綜合各項(xiàng)結(jié)果，MCC不溶于水，不可用；乳糖、甘露醇成型率高、溶化時(shí)間短、吸濕率小，但是輔料用量較大，價(jià)格較貴，也不適用；糊精、可溶性淀粉最小輔料用量較小，可以考慮。2.4.2.3混合輔料的考察2.4.2.3.1試驗(yàn)方法：稱取2.3.2項(xiàng)下的浸膏10g，共6份，按表8分別與不同比例的混合輔料混合，混合輔料的用量均為30g，以85％的乙醇溶液為濕潤(rùn)劑，制成軟材，用一號(hào)篩制成顆粒，將顆粒置于烘箱中，80℃干燥5小時(shí)，取出放涼，再用一號(hào)篩整粒，即得。按2.4.2.2.1中的方法分別測(cè)定已經(jīng)制備的六份顆粒樣品的成型率、溶化性、吸濕性。2.4.2.3.2試驗(yàn)結(jié)果：結(jié)果見表8。表8不同比例混合輔料優(yōu)選輔料比例溶化時(shí)間(s)成型率(％)糊精：可溶性淀粉5:012095.264:113093.383:213093.262:313093.351:414089.830:515087.222.4.2.3.3結(jié)果分析：?jiǎn)为?dú)用糊精制粒的效果明顯優(yōu)于糊精可溶性淀粉混合輔料混合制粒；最終選擇以糊精為稀釋劑；用量取其最小輔料用量1:1.5。2.4.2.4矯味劑的選擇及用量的篩選:澤瀉排石防石顆粒原藥液較苦，口服難以下咽，需要對(duì)其口感進(jìn)行改善。根據(jù)澤瀉排石防石顆粒所含藥物成分及劑型的特點(diǎn)，選擇加入矯味劑較為合適。為掩蓋藥液的苦味應(yīng)加入甜味劑。甜菊素又稱作甜菊糖，是甜葉菊葉子提取物，不含糖分和熱量；色澤白色至微黃色，口感適宜、無(wú)異味，其天然低熱值并且非常接近蔗糖口味，甜度約為蔗糖的150～300倍，是發(fā)展前景廣闊的新糖源。甜菊素屬非發(fā)酵性物質(zhì)，性質(zhì)穩(wěn)定，不易霉變，長(zhǎng)期食用不會(huì)引起齲齒，同時(shí)有利于降低粘稠度，抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，延長(zhǎng)產(chǎn)品保質(zhì)期。甜菊素是目前世界已發(fā)現(xiàn)并經(jīng)我國(guó)衛(wèi)生部批準(zhǔn)使用的甜味劑，是繼甘蔗、甜菜糖之外第三種有開發(fā)價(jià)值和健康推崇的天然甜味劑，被國(guó)際上譽(yù)為“世界第三糖源”?？傊鹁账鼐哂袃r(jià)格低廉、受熱穩(wěn)定、安全性強(qiáng)、甜度高、低熱量、口感純正等優(yōu)點(diǎn)，是理想的甜味劑。故選擇甜菊素代替蔗糖作為甜味劑。2.4.2.4.1試驗(yàn)方法:取2.3.2項(xiàng)下的浸膏30g，加入1.5倍的糊精(45g)，以85％的酒精為濕潤(rùn)劑，制成顆粒。取制得的顆粒30g，平均分為6份，每份5g，按表9比例加入甜菊素，混勻，分別加入100ml開水溶化后，多人品嘗。2.4.2.4.2試驗(yàn)結(jié)果:結(jié)果見表9。表9甜菊素用量?jī)?yōu)選試驗(yàn)結(jié)果取樣量(g)甜菊素用量比例(％)口感50.1苦50.2苦50.3略苦50.4適中50.5過(guò)甜50.6過(guò)甜2.4.2.4.3結(jié)果分析:從上表可知，甜菊素用量在0.4％時(shí)，口感適中，最為合適。2.4.3制粒正交試驗(yàn)研究:目前工業(yè)化生產(chǎn)中應(yīng)用最廣泛的一種制粒方法就是濕法制粒，主要原因的它對(duì)設(shè)備要求不高，操作簡(jiǎn)便。因此澤瀉排石防石顆粒亦選擇濕法制粒。即浸膏中加入1.5倍糊精與0.004倍的甜菊素，制成顆粒，干燥。并用正交實(shí)驗(yàn)法篩選最佳制粒工藝條件。2.4.3.1試驗(yàn)方法:由預(yù)實(shí)驗(yàn)及文獻(xiàn)資料可知，浸膏相對(duì)密度，濕潤(rùn)劑酒精的用量與濃度為影響顆粒成型率的主要因素，各取三個(gè)水平，進(jìn)行正交試驗(yàn)，表頭設(shè)計(jì)見表10。表10因素水平表根據(jù)上述因素水平表，選擇L9(34)正交實(shí)驗(yàn)表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，即：取100g清膏，加入1.5倍的糊精，0.4％倍的甜菊素，按設(shè)計(jì)的正交表要求進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。另分別計(jì)算顆粒的成型率。2.4.3.2試驗(yàn)結(jié)果:試驗(yàn)結(jié)果如下表11、12中所示。表11.正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果表12方差分析方差來(lái)源偏差平方和自由度F比顯著性A684.14219*B71.28219C79.20219D33.95219“*”表示顯著性。2.4.3.3結(jié)果分析:對(duì)表11、表12數(shù)據(jù)進(jìn)行處理及方差分析，以合格顆粒的百分率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，結(jié)果表明因素A有顯著性：A2>A3>A1，應(yīng)取最佳值A(chǔ)2，因素B、C不具有顯著性；實(shí)驗(yàn)選定最佳工藝條件組合為A2B2C2，即浸膏相對(duì)密度為1.30，噴入10％倍量80％乙醇制粒。2.4.3.4試驗(yàn)驗(yàn)證:按已經(jīng)選定的實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證3次，分別計(jì)算顆粒的成型率，結(jié)果見表13。表13驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果以上結(jié)果表明，澤瀉排石防石顆粒成型工藝的驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果與正交試驗(yàn)結(jié)果一致，說(shuō)明本工藝穩(wěn)定、可行。本發(fā)明藥劑制法及工藝流程圖見圖2和實(shí)施例。3.2澤瀉排石防石顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定及起草說(shuō)明3.2.1名稱：澤瀉排石防石顆粒：本方由澤瀉、車前草、廣金錢草、茯苓和桂枝五味藥組成。臨床上可用于膀胱氣化不利，濕熱蘊(yùn)結(jié)下焦，尿液受濕熱煎熬，濁質(zhì)凝結(jié)，阻礙氣機(jī)，氣血運(yùn)行不暢所致的砂淋、石淋。方中“利水第一良品”澤瀉為君藥，組方具有清熱利濕、通淋排石之功效，故名“澤瀉排石防石”。顆粒劑具有方便，穩(wěn)定，口感好，可以沖入水中飲入，應(yīng)用和攜帶比較方便，溶出和吸收速度較快等優(yōu)點(diǎn)，故劑型選擇為顆粒劑。根據(jù)《中國(guó)藥品通用名稱》命名原則中的相關(guān)規(guī)定“制劑藥品的命名，藥品名稱列前，劑型名列后”、“制劑藥品名稱中說(shuō)明用途或特點(diǎn)等的形容詞宜列于藥名之前”、“采用主要藥材名和功能結(jié)合并加劑型命名”，將本品命名為“澤瀉排石防石顆?！?.2.2處方：同正文，見前文。3.2.3制法：同正文，見前文。3.2.4性狀同正文。中試各批成品均與正文描述一致。3.2.5鑒別3.2.5.1儀器與試劑：硅膠G薄層板(上?？婆d商貿(mào)有限公司)、聚酰胺薄膜(浙江省臺(tái)州市路橋四甲生化塑料廠出品)、玻璃點(diǎn)樣毛細(xì)管(華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠生產(chǎn))、HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市陽(yáng)光儀器廠)、超聲波清洗機(jī)(MP5200H，陜西鵬展科技有限公司)、十萬(wàn)分一電子分析天平(沈陽(yáng)龍騰電子有限公司)；甲醇、水、乙酸、丁酮、甲酸、三氯甲烷、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、、硫酸、香草醛、三氯化鋁；夏佛塔苷對(duì)照品(批號(hào)為：110227)購(gòu)于成都蒲菲德生物制品有限公司；廣金錢草對(duì)照藥材(供鑒別用，批號(hào)為：121248)、桂枝對(duì)照藥材(供鑒別用，批號(hào)為：121191)，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所；澤瀉排石防石顆粒(20130912、20130916、20130920，自制)。3.2.5.2廣金錢草的薄層鑒別：供試品溶液的制備取澤瀉排石防石顆粒樣品1g，研細(xì)，置具塞錐形瓶中，加入80％的甲醇25ml，超聲處理20min，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)?0ml50％的甲醇溶液溶解，既得。同法制備3批樣品。對(duì)照藥材溶液的制備：取廣金錢草對(duì)照藥材粉末0.2g，與供試品同法制備。對(duì)照品溶液的制備：取廣金錢草對(duì)照品夏佛塔苷適量，加50％甲醇制得約75ug/ml的夏佛塔苷對(duì)照品溶液。陰性對(duì)照溶液的制備：按照處方量稱取除廣金錢草以外的各味藥材，按澤瀉排石防石顆粒的制備方法制得陰性顆粒樣品，再取1g，按照供試品溶液的制備方法制備缺廣金錢草陰性對(duì)照溶液。薄層層析：取三批供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性樣品溶液、對(duì)照藥材溶液各1ul，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲醇-水-乙酸(10:10:0.5)溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1％AlCl3顯色劑，吹干，置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜、對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同淡藍(lán)色熒光斑點(diǎn)。陰性對(duì)照溶液無(wú)相應(yīng)的斑點(diǎn)，無(wú)干擾，見圖3。收入本品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)正文中。3.2.5.3桂枝的薄層鑒別：1、供試品溶液的制備取澤瀉排石防石顆粒樣品5g，研細(xì)，置于具塞錐形瓶中，加入乙醚30ml，浸泡20min，時(shí)時(shí)振搖，過(guò)濾，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml，使溶解，即得。同法制備3批樣品。2、對(duì)照藥材溶液的制備取桂枝對(duì)照藥材粉末5g，加200ml水煎煮30min，濾過(guò)，藥渣再加200ml水煎煮30min，合并煎煮液濃縮至20ml，用乙醚20ml振搖提取2次，合并乙醚層，水浴蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml，使溶解，即得。3、陰性樣品溶液的制備取處方量除桂枝以外的各味藥材按成品的制備方法制得陰性樣品，再取5g，按制備供試品溶液的制備方法同法制備缺桂枝陰性樣品溶液。4、薄層層析取供試品溶液、陰性樣品溶液、對(duì)照藥材溶液各10ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60-90℃)-乙酸乙酯(15:5)溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2％香草醛硫酸溶液顯色劑，105℃加熱至顯色均勻。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同黃色主斑點(diǎn)。陰性對(duì)照溶液則無(wú)相應(yīng)斑點(diǎn)，沒有干擾見圖4。收入本品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)正文中。3.2.5.4澤瀉的薄層鑒別:采用各種方法，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜、對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，都無(wú)相應(yīng)的斑點(diǎn)。故沒有收入本品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)正文中。3.2.5.5車前草的薄層鑒別:采用各種方法，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜、對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，都無(wú)相應(yīng)的斑點(diǎn)。故沒有收入本品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)正文中。3.2.5.6茯苓的薄層鑒別:采用各種方法，都無(wú)法排除陰性干擾。故沒有收入本品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)正文中。3.2.6檢查3.2.6.1粒度:依照2010年版《中國(guó)藥典》一部附錄IC顆粒劑項(xiàng)下“粒度”中所規(guī)定的測(cè)定方法：采用雙篩分法對(duì)澤瀉排石防石顆粒的粒度進(jìn)行檢查，取供試品30g(取單劑量包裝顆粒6包)，稱定其重量，置于一號(hào)篩中，下放四號(hào)篩上。左右往返，保持水平狀態(tài)過(guò)篩，邊篩動(dòng)邊輕叩3分鐘，取不能過(guò)一號(hào)篩和能通過(guò)四號(hào)篩的顆粒及粉末，稱定總重量，計(jì)算其所占顆?？傊氐陌俜直?，不得過(guò)15％[43]。結(jié)果見表14。表14粒度檢查結(jié)果表結(jié)果表明，澤瀉排石防石顆粒的粒度符合規(guī)定。3.2.6.2水分:依照2010年版《中國(guó)藥典》一部附錄IC顆粒劑項(xiàng)下“水分”中所規(guī)定的測(cè)定方法：取顆粒2-5g，精密稱定，平鋪于已經(jīng)干燥至恒重的扁形稱量瓶中，其厚度不超過(guò)5mm，精密稱定，打開蓋子，在105℃烘箱中干燥5小時(shí)，將瓶蓋蓋好，移于干燥器中，冷卻0.5小時(shí)后，精密稱定，再在上述溫度條件下干燥1小時(shí)，至恒重為止，根據(jù)顆粒減輕的重量，計(jì)算顆粒的含水量(％)，不得過(guò)6.0％[43]。結(jié)果見表15。表15水分檢查察結(jié)果表批號(hào)123Mean(％)RSD(％)1309124.374.344.514.412.061309163.953.954.083.991.881309204.184.124.264.191.68結(jié)果表明，澤瀉排石防石顆粒的水分符合規(guī)定。3.2.6.3溶化性：依照《中國(guó)藥典》2010版一部附錄IC顆粒劑“溶化性”中所規(guī)定的測(cè)定方法：取供試品顆粒劑一袋，加熱水200ml，攪拌五分鐘，立即觀察[43]；結(jié)果見表16。表16溶化性檢查結(jié)果表批號(hào)溶化性130912全部溶解130916全部溶解130920全部溶解結(jié)果表明，澤瀉排石防石顆粒的溶化性符合規(guī)定。3.2.6.4裝量差異：按照《中國(guó)藥典》2010版一部附錄IC顆粒劑“裝量差異”中所規(guī)定的測(cè)定方法[43]：取供試品10袋，分別稱定每袋內(nèi)容物的重量，每袋裝量與標(biāo)示裝量相比較。對(duì)澤瀉排石防石顆粒的裝量差異進(jìn)行檢查，結(jié)果見表17。表17裝量差異檢查結(jié)果表批號(hào)重量差異130912符合規(guī)定130916符合規(guī)定130920符合規(guī)定結(jié)果表明，澤瀉排石防石顆粒的裝量差異符合規(guī)定。3.2.6.5微生物限度：依照《中國(guó)藥典》2010版一部附錄IC顆粒劑“微生物限度”中所規(guī)定的檢測(cè)方法[43]：細(xì)菌的數(shù)目應(yīng)≤1000個(gè)/g；霉菌、酵母菌的數(shù)目≤100個(gè)/g；大腸桿菌不得檢出。用常規(guī)法對(duì)澤瀉排石防石顆粒進(jìn)行檢查。結(jié)果見表18。表18微生物限度檢查結(jié)果表明，澤瀉排石防石顆粒的微生物限度符合規(guī)定。綜上所述，澤瀉排石防石顆粒的相關(guān)檢查項(xiàng)目均符合規(guī)定，可以執(zhí)行上述標(biāo)準(zhǔn)。3.2.7含量測(cè)定3.2.7.1儀器與試藥：十萬(wàn)分之一電子分析天平(沈陽(yáng)龍騰電子有限公司)、雙量程電子分析天平AUW-220D型(SHIMADZUCORPORATIONJAPAN)、Agilent1100series高效液相色譜儀、AgilentTC-C18(4.6mm×250mm)色譜柱；乙腈(美國(guó)TEDIA公司，色譜純)、重蒸水；大車前苷對(duì)照品(批號(hào)為：111914)，供含測(cè)用，購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所；夏佛塔苷對(duì)照品(批號(hào)為：110227)供含測(cè)用，購(gòu)于成都蒲菲德生物制品有限公司。3.2.7.2大車前苷含量測(cè)定方法的建立3.2.7.2.1色譜條件：確定UV檢測(cè)波長(zhǎng)為330nm，進(jìn)樣量為10μl，通過(guò)改變流動(dòng)相比例，以及流速等，以目標(biāo)峰保留時(shí)間T、峰型、分離度以及對(duì)稱度等作為考察指標(biāo)，選擇最佳色譜條件，最終確定的色譜條件為：色譜柱：AgilentTC-C18(4.6mm×250mm)色譜柱；流動(dòng)相：乙腈-水(18：82)；流速：0.7ml/min；UV檢測(cè)波長(zhǎng)：330nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10μl。在選定的條件下，大車前苷與其他組分色譜峰可達(dá)到基線分離，大車前苷色譜峰與相鄰色譜峰分離度大于1.5；理論塔板數(shù)按大車前苷計(jì)算大于3000。3.2.7.2.2對(duì)照品溶液的配制：精密稱取大車前苷對(duì)照品適量，加60％甲醇制成對(duì)照品溶液(0.0212mg/ml)，0.45um濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。3.2.7.2.3供試品溶液的配制：取裝量差異項(xiàng)下的本品，混勻，取適量，研細(xì)，取約2.5g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密量取50ml60％甲醇溶液，稱重，超聲(功率250W，頻率50KHZ)30min，放冷，稱重，用60％甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，用0.45μm濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。3.2.7.2.4專屬性試驗(yàn)：制備缺車前草陰性顆粒樣品，按供試品溶液的配制方法配制。分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10μl，注入液相色譜儀中測(cè)定，結(jié)果表明：車前草陰性樣品溶液沒有干擾。見圖5、圖6、圖7。3.2.7.2.5線性關(guān)系的考察：分別精密移取0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml對(duì)照品溶液于1ml容量瓶中，60％甲醇定容為系列濃度的對(duì)照品。在已確定的色譜條件下測(cè)定各組濃度大車前苷對(duì)照品的峰面積，以進(jìn)樣量(C)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。求得回歸方程為：y＝35456x–18.539，r＝0.9992；結(jié)果表明大車前苷進(jìn)樣量在0.0212～0.212μg內(nèi)呈線性(見表19、圖8)。表19線性關(guān)系考察結(jié)果3.2.7.2.6精密度試驗(yàn)：精密吸取大車前苷對(duì)照品溶液，在確定的色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，求RSD值。表20大車前苷精密度試驗(yàn)(n＝6)3.2.7.2.7穩(wěn)定性試驗(yàn)：取一定濃度大車前苷對(duì)照品溶液，在HPLC條件下于0、1、2、4、6、8h分別進(jìn)樣，記錄峰面積，求RSD值。結(jié)果見下表所示。表21大車前苷穩(wěn)定性試驗(yàn)3.2.7.2.8重復(fù)性試驗(yàn)：按供試品處理方法，精密稱取同一批次樣品6份，按確定的色譜條件測(cè)定各組峰面積，計(jì)算含量及RSD值結(jié)果如下表所示表22大車前苷重復(fù)性試驗(yàn)(n＝6)3.2.7.2.9準(zhǔn)確度試驗(yàn)(回收率試驗(yàn))：分別精密稱取0.25g本品粉末于6個(gè)10ml具塞錐形瓶中，分別吸取0.212mg/ml的夏佛塔苷溶液1.5ml加入，另加入8ml60％甲醇溶液，另取1.5ml夏佛塔苷溶液，不加樣品，設(shè)為空白組，按供試品制備方法處理定容后，按建立的HPLC方法測(cè)定各組峰面積，計(jì)算大車前苷的含量，計(jì)算回收率。因在重復(fù)性試驗(yàn)中已經(jīng)測(cè)定樣品中大車前苷的平均含量為0.1296％，則加入樣品的已知量(mg)＝稱取粉末質(zhì)量(mg)×0.1296％，其結(jié)果見下表。表23大車前苷回收率結(jié)果(n＝6)回收率試驗(yàn)結(jié)果表明：大車前苷回收率在95％～100％之間，加樣回收良好。3.2.7.2.10含量限度的確定：對(duì)澤瀉排石防石顆粒十批樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表24。表24樣品中大車前苷含量測(cè)定結(jié)果據(jù)上述測(cè)定結(jié)果，綜合考慮車前草藥材的實(shí)際含量及制備工藝、大生產(chǎn)等因素，暫定本品每袋(每袋裝5g顆粒)，以大車前苷(C29H36O16)計(jì)，不得少于5.0mg。3.2.7.3夏佛塔苷含量測(cè)定方法的建立3.2.7.3.1色譜條件：確定UV檢測(cè)波長(zhǎng)為272nm，進(jìn)樣量為10μl，通過(guò)改變流動(dòng)相比例，以及流速等，以目標(biāo)峰保留時(shí)間T、峰型、分離度以及對(duì)稱度等作為考察指標(biāo)，選擇最佳色譜條件，最終確定的色譜條件為：色譜柱：AgilentTC-C18(4.6mm×250mm)色譜柱；流動(dòng)相：乙腈-水(16:84)；流速：0.8ml/min；UV檢測(cè)波長(zhǎng)：272nm；進(jìn)樣量：10μl。在選定的條件下，夏佛塔苷與其他組分色譜峰可達(dá)到基線分離，夏佛塔苷色譜峰與相鄰色譜峰分離度大于1.5；理論塔板數(shù)按夏佛塔苷計(jì)算大于3000。3.2.7.3.2對(duì)照品溶液的配制：精密稱取夏佛塔苷對(duì)照品適量，加50％甲醇制成對(duì)照品溶液(0.01288mg/ml)，0.45μm濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。3.2.7.3.3供試品溶液的配制：取裝量差異項(xiàng)下的本品，混勻，取適量，研細(xì)，取約1g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密量取50ml50％甲醇溶液，稱重，超聲(功率250W，頻率50KHZ)30min，放冷，稱重，用50％甲醇溶液補(bǔ)足減失的重量，用0.45μm濾膜過(guò)濾，取續(xù)濾液，即得。3.2.7.3.4專屬性試驗(yàn)：制備缺廣金錢草陰性顆粒樣品，按照供試品溶液的配制方法進(jìn)行配制。分別吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10μl，注入液相色譜儀中進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明：陰性樣品溶液沒有產(chǎn)生干擾(見圖9、圖10、圖11)。3.2.7.3.5線性關(guān)系考察：取夏佛塔苷對(duì)照品溶液(0.01288mg/ml)，分別精密移取0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml對(duì)照品溶液于1ml容量瓶中，50％甲醇定容為系列濃度的對(duì)照品。在已確定的色譜條件下測(cè)定各組濃度對(duì)照品的峰面積，以各組溶液夏佛塔苷的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。求得回歸方程為：y＝37299X-16.1114，r＝0.9995。結(jié)果表明夏佛塔苷進(jìn)樣量在0.01288～0.1288μg內(nèi)呈線性(見表25，圖12)。表25線性關(guān)系考察結(jié)果3.2.7.3.6精密度考察精密吸取夏佛塔苷對(duì)照品溶液，在確定的色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，求RSD值。表26夏佛塔苷精密度試驗(yàn)(n＝6)3.2.7.3.7穩(wěn)定性試驗(yàn)：取一定濃度夏佛塔苷對(duì)照品溶液，在HPLC條件下于0、1、2、4、6、8h分別進(jìn)樣，記錄峰面積，求RSD值。結(jié)果見下表所示。表27夏佛塔苷穩(wěn)定性試驗(yàn)3.2.7.3.8重復(fù)性試驗(yàn)：按供試品處理方法，精密稱取同一批次樣品6份，按確定的色譜條件測(cè)定各組峰面積，計(jì)算含量及RSD值結(jié)果如下表所示表28夏佛塔苷重復(fù)性試驗(yàn)(n＝6)3.2.7.3.9準(zhǔn)確度試驗(yàn)(回收率)：分別精密稱取0.1g本品粉末于6個(gè)10ml具塞錐形瓶中，移液管吸取0.1288mg/ml夏佛塔苷對(duì)照品溶液2ml，另加入7ml50％甲醇溶液，另取2ml對(duì)照品溶液，不加樣品，設(shè)為空白組，按供試品制備方法處理定容后，按建立的HPLC方法測(cè)定各組峰面積，計(jì)算夏佛塔苷的含量，計(jì)算回收率。因在重復(fù)性試驗(yàn)中已經(jīng)測(cè)定樣品中夏佛塔苷含量為0.2581％，則加入樣品的已知量(mg)＝稱取粉末質(zhì)量(mg)×0.2581％，其結(jié)果見下表。表29夏佛塔苷回收率結(jié)果(n＝6)3.2.7.3.10含量限度的確定：對(duì)澤瀉排石防石顆粒的十批樣品進(jìn)行含量測(cè)定，測(cè)定的結(jié)果見表30。表30樣品中夏佛塔苷含量測(cè)定表?yè)?jù)上述測(cè)定結(jié)果，綜合考慮廣金錢草藥材的實(shí)際含量及制備工藝、大生產(chǎn)等因素，暫定本品每袋(每袋裝5g)以夏佛塔苷(C26H28O14)計(jì)算，不得少于8.0mg。3.2.7.4小結(jié)：澤瀉排石防石顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中建立了廣金錢草、桂枝的薄層鑒別方法；建立了大車前苷、夏佛塔苷的高效液相色譜含量測(cè)定方法。經(jīng)驗(yàn)證，方法科學(xué)、穩(wěn)定、可靠。附圖說(shuō)明圖1藥材吸水率考察圖。圖2澤瀉排石防石顆粒的工藝流程圖。圖3薄層層析圖。圖4薄層層析圖。圖5大車前苷對(duì)照品HPLC圖。圖6澤瀉排石防石顆粒樣品HPLC圖。圖7陰性樣品溶液HPLC圖。圖8大車前苷標(biāo)準(zhǔn)曲線。圖9夏佛塔苷對(duì)照品HPLC圖。圖10澤瀉排石防石顆粒樣品HPLC圖。圖11陰性樣品溶液HPLC圖。圖12夏佛塔苷標(biāo)準(zhǔn)曲線。具體實(shí)施方式實(shí)施例1：取澤瀉、車前草、廣金錢草、茯苓和桂枝五味藥材，加8倍量水，煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至適量相對(duì)密度約1.30(80℃)，加入1.5倍糊精、0.004倍的甜菊素及10％倍量的80％乙醇，混勻，制成顆粒，干燥，整粒，制成1000g，即得。本發(fā)明提供的澤瀉排石防石顆粒劑的工藝流程圖見圖2。本發(fā)明提供的澤瀉排石防石顆粒劑的功能主治:清熱利尿，排石防石。主治下焦?jié)駸崴碌臒崃?、石淋，癥見尿黃尿痛，腰腹疼痛；尿路結(jié)石(腎結(jié)石、輸尿管結(jié)石)，見上述癥候者。預(yù)防泌尿系結(jié)石的形成及復(fù)發(fā)。建議的用法用量：開水沖服。一次1袋，一日3次。建議規(guī)格：每袋裝5g。密封貯藏，有效期暫定12個(gè)月。工藝流程圖見圖2。本顆粒一個(gè)處方量(54g)的藥材能出膏6g左右，以每日服用三次計(jì)算，每次需服用干膏量為2g。藥物與輔料的比例為1:1.5。因此本品顆粒規(guī)格約為每袋裝5g。按1000個(gè)制劑單位即(l000g)計(jì)算，澤瀉排石防石顆粒一個(gè)制劑處方生藥量為3600g，制成顆粒l000g。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3