本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域中一種具有鎮(zhèn)痛作用的藥物。

背景技術(shù)：

阿片類鎮(zhèn)痛藥是目前臨床應(yīng)用最廣泛的鎮(zhèn)痛藥，其代表性藥物為嗎啡、可待因(甲基嗎啡)、哌替啶(杜冷丁)、曲馬多等。阿片類鎮(zhèn)痛藥的鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)大，但它引發(fā)的不良反應(yīng)較多，如產(chǎn)生便秘、惡心、呼吸抑制及中樞神經(jīng)毒性反應(yīng)等。此外，在反復(fù)應(yīng)用阿片類鎮(zhèn)痛藥后會使使用者產(chǎn)生耐受性及依賴性，從而易造成該類藥物的濫用，故又稱為成癮性鎮(zhèn)痛藥。阿片類鎮(zhèn)痛藥的上述毒副作用大大限制了此類藥物在臨床上的使用。因此，研發(fā)不具有耐受性和成癮性的鎮(zhèn)痛藥是迫切需要的。目前國內(nèi)外研究機(jī)構(gòu)和制藥公司正努力研發(fā)新型不具有耐受性和成癮性的鎮(zhèn)痛藥。

曲古抑素A(trichostatin-A,簡稱TSA；分子式：C₁₇H₂₂N₂O₃，分子量：302.4，CAS：58880-19-6，別名:曲古柳菌素A)，源自鏈霉菌代謝產(chǎn)物，具有明顯的抑制組蛋白去乙酰化酶活性，對肝癌、胃癌、口腔癌及神經(jīng)母細(xì)胞瘤等具有明顯的細(xì)胞毒性作用。

5-氮雜胞嘧啶核苷(5-azacytidine，簡稱5-Aza；分子式：C₈H₁₂N₄O₅，分子量：244.20，CAS：320-67-2，別名:5-氮胞苷；5-氮雜胞苷；阿托胞苷；阿扎胞苷；氮胞苷；氮雜胞苷)，可摻入DNA，抑制DNA甲基化，影響基因的表達(dá)，臨床上用于治療乳腺癌、腸癌、黑色素瘤、急性粒細(xì)胞性白血病等。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何更有效地預(yù)防和/或治療臨床的各類疼痛。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明首先提供了預(yù)防和/或治療臨床的各類疼痛的藥物。

本發(fā)明所提供的預(yù)防和/或治療臨床的各類疼痛的藥物，其活性成分由組分A和組分B組成，所述組分A為5-氮雜胞嘧啶核苷，所述組分B為曲古抑素A。

上述藥物中，所述組分A和所述組分B可以按照一定的比例混和在一起使用；所述組分A和所述組分B也可以獨(dú)立包裝，使用時(shí)，可先給予所述組分A，然后再給予所述組分B，也可先給予所述組分B，然后再給予所述組分A。

上述藥物中，所述活性成分中所述組分A和所述組分B的質(zhì)量比可為10:(1-8)，如10:1,10:2.5，10:3，10:5或10:8。

上述藥物中，所述預(yù)防和/或治療臨床的各類疼痛可體現(xiàn)為抑制和/或緩解臨床的各類疼痛；所述抑制和/或緩解臨床的各類疼痛可為抑制和/或緩解臨床的各類急性和/或慢性痛；所述抑制和/或緩解臨床的各類急性和/或慢性痛可體現(xiàn)為抑制和/或緩解臨床的各類急慢性炎性痛、臨床的各類急慢性神經(jīng)性痛、臨床的各類急慢性內(nèi)臟痛和臨床的各類癌癥痛中的任一種。

上述藥物中，所述藥物可為注射液、皮下埋植劑、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊、緩釋劑或口服液。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。

需要的時(shí)候，在上述藥物中還可以加入一種或多種藥學(xué)上可接受的輔料，所述輔料包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、緩釋劑、潤滑劑等。

本發(fā)明所提供的組合物在制備用于預(yù)防和/或治療臨床的各類疼痛藥物中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍；所述組合物由所述組分A和所述組分B組成，所述組分A為5-氮雜胞嘧啶核苷，所述組分B為曲古抑素A。

上述應(yīng)用中，所述組合物中，所述組分A和所述組分B可以按照一定的比例混和在一起使用；所述組分A和所述組分B也可以獨(dú)立包裝，使用時(shí)，可先給予所述組分A，然后再給予所述組分B，也可先給予所述組分B，然后再給予所述組分A。

上述應(yīng)用中，所述組合物中，所述組分A和所述組分B的質(zhì)量比可為10:(1-8)，如10:1,10:2.5，10:3，10:5或10:8。

上述應(yīng)用中，所述預(yù)防和/或治療臨床的各類疼痛可體現(xiàn)為抑制和/或緩解臨床的各類疼痛；所述抑制和/或緩解臨床的各類疼痛可為抑制和/或緩解臨床的各類急性和/或慢性痛；所述抑制和/或緩解臨床的各類急性和/或慢性痛可體現(xiàn)為抑制和/或緩解臨床的各類急慢性炎性痛、臨床的各類急慢性神經(jīng)性痛、臨床的各類急慢性內(nèi)臟痛和臨床的各類癌癥痛中的任一種。

實(shí)驗(yàn)證明，由5-氮雜胞嘧啶核苷和曲古抑素A組成的組合物對預(yù)防和/或治療臨床的各類疼痛具有協(xié)同增效的作用，顯示出明顯的鎮(zhèn)痛效果，與阿片類鎮(zhèn)痛藥的代表性藥物嗎啡的鎮(zhèn)痛作用相似，而且多次使用后沒有產(chǎn)生耐受性與成癮性，并且不影響動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)能力；由5-氮雜胞嘧啶核苷和曲古抑素A組成的組合物對于急性痛、神經(jīng)性痛和炎癥痛均具有與嗎啡相似的鎮(zhèn)痛效果，具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：

1)急性痛大鼠實(shí)驗(yàn)證明，5-Aza和TSA組合在一起對急性痛產(chǎn)生了協(xié)同作用。在聯(lián)合注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA 30min時(shí)，大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為100％-110％；在單獨(dú)注射劑量為1mg/kg體重5-Aza30min時(shí)，大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為40％；在單獨(dú)注射劑量為0.25mg/kg體重TSA 30min時(shí)，大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為30％。在聯(lián)合注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA 30min時(shí)，大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為90％-100％；在單獨(dú)注射劑量為1mg/kg體重5-Aza 30min時(shí)，大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為40％；在單獨(dú)注射劑量為0.25mg/kg體重TSA 30min時(shí)，大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為30％。腹腔注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA和注射劑量為 1mg/kg體重嗎啡均能夠產(chǎn)生明顯的鎮(zhèn)痛作用,但是二者的鎮(zhèn)痛效果沒有明顯差異。

2)神經(jīng)性痛實(shí)驗(yàn)證明，聯(lián)合注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA使神經(jīng)性痛大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為102.21±14.43％，注射劑量為1mg/kg體重嗎啡使神經(jīng)性痛大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度為123.15±26.07％；聯(lián)合注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.5mg/kg體重TSA使神經(jīng)性痛大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為150.43±13.78％，注射劑量為1mg/kg體重嗎啡使神經(jīng)性痛大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度為148.78±24.53％。

3)炎癥痛實(shí)驗(yàn)證明，聯(lián)合注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA使炎癥痛大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為156.08±16.39％，注射劑量為1mg/kg體重嗎啡使炎癥痛大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度為72.05±10.24％；聯(lián)合注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA使炎癥痛大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為136.00±11.67％，注射劑量為1mg/kg體重嗎啡使炎癥痛大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度為109.68±9.06％。

附圖說明

圖1為在大鼠腹腔內(nèi)注射5-氮雜胞嘧啶核苷(5-Aza)的鎮(zhèn)痛效果。5-Aza的注射劑量分別為0.1mg/kg體重,0.5mg/kg體重,1mg/kg體重,2mg/kg體重的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。其中圖1中A(左側(cè)HWL)和B(右側(cè)HWL)為注射后10、30和60min時(shí)間點(diǎn)的壓板測試結(jié)果，腹腔注射各個(gè)劑量的5-Aza溶液后60min內(nèi)，大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期(HWL)最大升高了約40％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza)。圖1中C(左側(cè)HWL)和D(右側(cè)HWL)為注射后10、30和60min時(shí)間點(diǎn)的熱板測試的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，腹腔注射各個(gè)劑量的5-Aza溶液后60min內(nèi)，大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期(HWL)最大升高了約40％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza)。

圖2為在大鼠腹腔內(nèi)注射曲古抑素A(TSA)的鎮(zhèn)痛效果。TSA的注射劑量為0.1mg/kg體重,0.25mg/kg體重,0.5mg/kg體重的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。其中圖2中A(左側(cè)HWL)和B(右側(cè)HWL)為注射后10、30和60min時(shí)間點(diǎn)的壓板測試結(jié)果，腹腔注射各個(gè)劑量的TSA溶液后60min內(nèi)，大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期最大升高了約40％-60％(注射劑量為0.5mg/kg體重TSA)。圖2中C(左側(cè)HWL)和D(右側(cè)HWL)為注射后10、30和60min時(shí)間點(diǎn)的熱板測試的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，腹腔注射各個(gè)劑量的TSA溶液后60min內(nèi)，大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期最大升高了約36％(注射劑量為0.5mg/kg體重TSA)。

圖3為在大鼠腹腔內(nèi)聯(lián)合注射5-氮雜胞嘧啶核苷(5-Aza)和曲古抑素A(TSA)組成的組合物的鎮(zhèn)痛效果。圖3中A(左側(cè)HWL)和B(右側(cè)HWL)為注射后10、30 和60min時(shí)間點(diǎn)的壓板測試結(jié)果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腹腔注射各個(gè)劑量的5-Aza+TSA后60min內(nèi)，大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期最大升高了約90％-100％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.1mg/kg體重TSA),100％-110％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA)或80％-90％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.5mg/kg體重TSA)。圖3中C(左側(cè)HWL)和D(右側(cè)HWL)為注射后10、30和60min時(shí)間點(diǎn)的熱板測試的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腹腔注射各個(gè)劑量的5-Aza+TSA后60min內(nèi)，大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期最大升高了約80％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.1mg/kg體重TSA),90％-100％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA)或60％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.5mg/kg體重TSA)。

圖4為5-氮雜胞嘧啶核苷(5-Aza)和曲古抑素A(TSA)組成的組合物與嗎啡鎮(zhèn)痛效果的比較。包括在大鼠腹腔內(nèi)注射生理鹽水組(對照組)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，腹腔注射嗎啡(注射劑量為1mg/kg體重)組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,腹腔注射5-Aza+TSA(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA)組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖4中A(左側(cè)HWL)和B(右側(cè)HWL)為注射后10、30和60min時(shí)間點(diǎn)的壓板測試結(jié)果，圖4中C(左側(cè)HWL)和D(右側(cè)HWL)為注射后10、30和60min時(shí)間點(diǎn)的熱板測試的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腹腔注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA和注射劑量為1mg/kg體重嗎啡對急性痛大鼠的鎮(zhèn)痛效果沒有明顯差異。

圖5為在大鼠腹腔內(nèi)聯(lián)合注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.5mg/kg體重TSA后的斜板測試，檢測藥物對動(dòng)物運(yùn)動(dòng)功能的影響。在大鼠腹腔內(nèi)給予實(shí)驗(yàn)中所用最高劑量5-Aza(1mg/kg體重)+最高劑量TSA(0.5mg/kg體重)注射前和注射后30min時(shí)對大鼠進(jìn)行斜板測試，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合注射5-Aza(1mg/kg體重)+TSA(0.5mg/kg體重)后對大鼠的運(yùn)動(dòng)功能(肌張力和后爪收縮力)沒有明顯的影響。

圖6為在神經(jīng)性痛大鼠腹腔內(nèi)聯(lián)合注射5-氮雜胞嘧啶核苷(5-Aza)和曲古抑素A(TSA)組成的組合物的鎮(zhèn)痛效果。圖6中A為注射后30min時(shí)壓板測試結(jié)果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腹腔注射各個(gè)劑量的5-Aza+TSA后30min時(shí)，神經(jīng)性痛大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高了約72.12±13.12％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.1mg/kg體重TSA)，102.21±14.43％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA)和95.43±5.23％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.5mg/kg體重TSA)；神經(jīng)性痛大鼠注射嗎啡后30min時(shí)對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高了123.15±26.07％(注射劑量為1mg/kg體重嗎啡)。

圖6中B為注射后30min時(shí)熱板測試結(jié)果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腹腔注射各個(gè)劑量的5-Aza+TSA后30min時(shí)，神經(jīng)性痛大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高了約115.52±

14.59％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.1mg/kg體重TSA),130.20±19.03％(注 射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA)和150.43±13.78％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.5mg/kg體重TSA)；神經(jīng)性痛大鼠注射嗎啡后30min時(shí)對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高了148.78±24.53％(注射劑量為1mg/kg體重嗎啡)。

圖7為在炎癥痛大鼠腹腔內(nèi)聯(lián)合注射5-氮雜胞嘧啶核苷(5-Aza)和曲古抑素A(TSA)組成的組合物的鎮(zhèn)痛效果。圖7中A為注射后30min時(shí)壓板測試結(jié)果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腹腔注射各個(gè)劑量的5-Aza+TSA后30min時(shí)，炎癥痛大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高了約106.80±12.68％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.1mg/kg體重TSA),156.08±16.39％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA)和107.36±21.37％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.5mg/kg體重TSA)；炎癥痛大鼠注射嗎啡后30min時(shí)對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高了72.05±10.24％(注射劑量為1mg/kg體重嗎啡)。

圖7中B為注射后30min時(shí)的熱板測試結(jié)果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腹腔注射各個(gè)劑量的5-Aza+TSA后30min時(shí)，炎癥痛大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高了114.29±17.31％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.1mg/kg體重TSA),136.00±11.67％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA)和111.75±12.95％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.5mg/kg體重TSA)；炎癥痛大鼠注射嗎啡后30min時(shí)對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高了109.68±9.06％(注射劑量為1mg/kg體重嗎啡)。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。

下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。

下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。

下述實(shí)施例中大鼠為SD雄性大鼠(體重在240-300g范圍內(nèi))，為中國軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心的產(chǎn)品。

下述實(shí)施中的鹽酸嗎啡注射液(沈陽第一制藥廠生產(chǎn)，原液濃度為10mg/mL，使用時(shí)用無菌生理鹽水稀釋到所需濃度的溶液)，5-Aza(Sigma，使用時(shí)用無菌生理鹽水稀釋到所需濃度，得到5-Aza溶液),TSA(Cell signaling technology,使用時(shí)先用50μL無水酒精溶解后再用無菌生理鹽水稀釋到所需濃度，得到TSA溶液)。

實(shí)驗(yàn)采用壓力測痛儀(Randall Selitto Test)和熱板測痛儀分別測量大鼠對傷害性機(jī)械刺激和傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期，作為衡量痛覺水平的指標(biāo)。在進(jìn)行行為藥理實(shí)驗(yàn)前，首先對受試實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行熱板和壓板測試訓(xùn)練，使受試實(shí)驗(yàn)大鼠熟悉測試環(huán)境和實(shí)驗(yàn)方法，從而避免因緊張?jiān)斐傻膶?shí)驗(yàn)誤差。熱板和壓板測試訓(xùn)練共進(jìn)行4天,每天訓(xùn)練3輪，每輪3次。

熱板測試：使用熱板(XZC-2B，山東醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備供應(yīng)維修站)測量受試實(shí)驗(yàn)大鼠對傷害性熱刺激反應(yīng)的潛伏期，熱板溫度維持在52℃。實(shí)驗(yàn)者一手抓握大鼠，另一手控制大鼠后肢使其足底面與熱板表面充分接觸，從開始接觸時(shí)開始計(jì)時(shí)，后爪回縮離開熱板表面時(shí)停止計(jì)時(shí)，作為其對傷害性熱刺激的后爪的縮爪反應(yīng)潛伏期(Hindpaw withdrawal latency,HWL)。

壓板測試(Randall Selitto Test)：使用壓力測痛儀(UGO Basile,Type 7200,Italy)測量受試實(shí)驗(yàn)大鼠對傷害性機(jī)械刺激反應(yīng)的潛伏期。實(shí)驗(yàn)者一手抓握大鼠，另一手控制大鼠后肢保證其足底穩(wěn)定地置于壓力測痛儀的小楔形有機(jī)玻璃與小平面之間，使小楔形有機(jī)玻璃壓在大鼠的足背上，然后以30克/秒的速度增加壓力，從開始接觸時(shí)開始計(jì)時(shí)，后爪回縮離開小平面時(shí)停止計(jì)時(shí)，作為其對傷害性機(jī)械刺激的后爪的縮爪反應(yīng)潛伏期(Hindpaw withdrawal latency,HWL)。

訓(xùn)練后受試實(shí)驗(yàn)大鼠對傷害性熱刺激的HWL多在4-5秒之間，對傷害性機(jī)械刺激的HWL多在4-6秒之間。使用訓(xùn)練的受試實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行藥物鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)，注射藥物前測試受試實(shí)驗(yàn)大鼠的HWL，作為基礎(chǔ)值；注射藥物后各時(shí)間點(diǎn)測的HWL以相對于基礎(chǔ)值的變化百分比表示。為了避免對組織的損傷，設(shè)定HWL最大測定時(shí)間在20秒以內(nèi)。

下述實(shí)施例中的大鼠為受試實(shí)驗(yàn)大鼠的簡稱。

下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤的方式表示；行為學(xué)實(shí)驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)方法采用方差分析(two-way ANOVA)，并用Bonferroni post-tests進(jìn)行檢驗(yàn)，或t-test檢驗(yàn)，以p<0.05作為在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性差異的標(biāo)準(zhǔn)。

下述實(shí)施例中的F是方差分析得到的統(tǒng)計(jì)值，F(xiàn)_left/left為給藥組與對照組左側(cè)后肢縮爪反應(yīng)潛伏期經(jīng)方差分析得到的F值，同樣F_right/right為給藥組與對照組右側(cè)后肢縮爪反應(yīng)潛伏期經(jīng)方差分析得到的F值。

實(shí)施例1、由5-氮雜胞嘧啶核苷(5-Aza)和曲古抑素A(TSA)組成的組合物在急性痛大鼠的鎮(zhèn)痛效果

一、大鼠腹腔注射不同劑量的5-氮雜胞嘧啶核苷(5-Aza)溶液的鎮(zhèn)痛作用

給正常大鼠腹腔注射等體積的不同劑量的5-Aza溶液，分別獲得注射劑量為0.1mg/kg體重、0.5mg/kg體重、1mg/kg體重和2mg/kg體重的四組大鼠(圖1中分別標(biāo)記為0.1mg/kg 5-Aza、0.5mg/kg 5-Aza、1mg/kg 5-Aza和2mg/kg 5-Aza)，對照組注射等體積的無菌生理鹽水(圖1中標(biāo)記為saline)，每組大鼠8只。實(shí)驗(yàn)測試方法同上述熱板測試和壓板測試的操作方法，注射藥物前測試受試大鼠的HWL值作為基礎(chǔ)值，在注射各劑量的5-Aza溶液后的10、30和60min時(shí)間點(diǎn)測定各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的大鼠左右兩側(cè)后爪對傷害性機(jī)械刺激和傷害性熱刺激的縮爪反應(yīng)潛伏期(Hindpawwithdrawal latency,HWL)。HWL的變化的計(jì)算公式為：HWL的變化(％)＝(注射藥物 后測量的HWL值-注射藥物前測量的HWL值)/(注射藥物前測量的HWL值)×100％。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示，其中圖1中A(左側(cè)HWL)和B(右側(cè)HWL)為注射后10、30和60min時(shí)間點(diǎn)的壓板測試結(jié)果，腹腔注射各個(gè)劑量的5-Aza溶液后60min內(nèi)，大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期(HWL)最大升高了約40％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza)，在注射劑量為1mg/kg體重5-Aza 30min時(shí)，大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為40％。圖1中C(左側(cè)HWL)和D(右側(cè)HWL)為注射后10、30和60min時(shí)間點(diǎn)的熱板測試的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，腹腔注射各個(gè)劑量的5-Aza溶液后60min內(nèi)，大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期(HWL)最大升高了約40％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza)，在注射劑量為1mg/kg體重5-Aza 30min時(shí)，大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為40％。

與對照組相比，腹腔注射劑量為0.1mg/kg體重的5-Aza溶液后大鼠左側(cè)后爪對機(jī)械性刺激和熱刺激引起的HWL升高較明顯(壓板測試:F_left/left＝4.97,P<0.05；熱板測試:F_left/left＝21.09,P<0.001)；腹腔注射劑量為0.1mg/kg體重的5-Aza溶液后大鼠右側(cè)后爪對機(jī)械性刺激和熱刺激引起的HWL沒有變化(壓板測試:F_right/right＝2.99,P＝0.11；熱板測試:F_right/right＝4.13,P＝0.07)。

與對照組相比，腹腔注射劑量為0.5mg/kg體重的5-Aza溶液后大鼠左側(cè)后爪對機(jī)械性刺激和熱刺激引起的HWL升高較明顯(壓板測試:F_left/left＝6.37,P<0.05；熱板測試:F_left/left＝17.43,P<0.05)；腹腔注射劑量為0.5mg/kg體重的5-Aza溶液后大鼠右側(cè)后爪對機(jī)械性刺激和熱刺激引起的HWL沒有變化(壓板測試:F_right/right＝6.35,P＝0.29；熱板測試:F_right/right＝3.91,P＝0.07)。

與對照組相比，腹腔注射劑量為1mg/kg體重的5-Aza溶液后大鼠后爪對機(jī)械性刺激和熱刺激引起的HWL顯著升高(壓板測試:F_left/left＝10.73,P<0.01；F_right/right＝5.98,P<0.05；熱板測試:F_left/left＝40.04,P<0.001；F_right/right＝16.73,P<0.01)。

與對照組相比，腹腔注射劑量為2mg/kg體重的5-Aza溶液后大鼠后爪對機(jī)械性刺激和熱刺激引起的HWL顯著升高(壓板測試:F_left/left＝4.99,P<0.05；F_right/right＝5.63,P<0.05；熱板測試:F_left/left＝43.20,P<0.001；F_right/right＝26.04,P<0.01)。

二、腹腔注射不同劑量的曲古抑素A(TSA)溶液的鎮(zhèn)痛作用

給正常大鼠腹腔注射等體積的不同劑量的TSA溶液，分別獲得注射劑量為0.1mg/kg體重,0.25mg/kg體重和0.5mg/kg體重的三組大鼠(在圖2中分別標(biāo)記為0.1mg/kg TSA、0.25mg/kg TSA和0.5mg/kg TSA)，對照組注射等體積的無菌生理鹽水(圖2中標(biāo)記為saline)，每組大鼠8只。實(shí)驗(yàn)測試方法同上述熱板測試和壓板測試的操作方法，注射藥物前測試受試大鼠的HWL值作為基礎(chǔ)值，在注射各劑量的TSA溶液后的10、30和60min時(shí)間點(diǎn)測定各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的大鼠左右兩側(cè)后爪對傷害性機(jī)械刺激 和傷害性熱刺激的縮爪反應(yīng)潛伏期(Hindpaw withdrawal latency,HWL)。HWL的變化的計(jì)算公式為：HWL的變化(％)＝(注射藥物后測量的HWL值-注射藥物前測量的HWL值)/(注射藥物前測量的HWL值)×100％。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示，其中圖2中A(左側(cè)HWL)和B(右側(cè)HWL)為注射后10、30和60min時(shí)間點(diǎn)的壓板測試結(jié)果，腹腔注射各個(gè)劑量的TSA溶液后60min內(nèi)，大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為40％-60％(注射劑量為0.5mg/kg體重TSA)，在注射劑量為0.25mg/kg體重TSA 30min時(shí)，大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為30％。圖2中C(左側(cè)HWL)和D(右側(cè)HWL)為注射后10、30和60min時(shí)間點(diǎn)的熱板測試的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，腹腔注射各個(gè)劑量的TSA溶液后60min內(nèi)，大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為36％(注射劑量為0.5mg/kg體重TSA)，在注射劑量為0.25mg/kg體重TSA 30min時(shí)，大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為30％。

與對照組相比，腹腔注射劑量為0.1mg/kg體重的TSA溶液后大鼠后爪對機(jī)械性刺激和熱刺激引起的HWL顯著升高(壓板測試:F_left/left＝7.87,P<0.05；F_right/right＝12.57,P<0.001；熱板測試:F_left/left＝29.75,P<0.001；F_right/right＝10.88,P<0.01)。

與對照組相比，腹腔注射劑量為0.25mg/kg體重的TSA溶液后大鼠左側(cè)后爪對機(jī)械性刺激和熱刺激引起的HWL升高較明顯(壓板測試:F_left/left＝4.53,P＝0.057；熱板測試:F_left/left＝27.45,P<0.001)；腹腔注射劑量為0.25mg/kg體重TSA溶液后大鼠右側(cè)后爪對機(jī)械性刺激和熱刺激引起的HWL有顯著性變化(壓板測試:F_right/right＝11.20,P<0.05；熱板測試:F_right/right＝11.24,P<0.01)。

與對照組相比，腹腔注射劑量為0.5mg/kg體重的TSA溶液后大鼠后爪對機(jī)械性刺激和熱刺激引起的HWL顯著升高(壓板測試:F_left/left＝11.20,P<0.01；F_right/right＝17.32,P<0.01；熱板測試:F_left/left＝20.38,P<0.001；F_right/right＝7.89,P<0.05)。

三、腹腔注射不同劑量的5-氮雜胞嘧啶核苷(5-Aza)和曲古抑素A(TSA)組成的組合物的鎮(zhèn)痛作用

給正常大鼠腹腔注射劑量為1mg/kg體重的5-Aza溶液和分別注射等體積的不同劑量的TSA溶液，分別獲得注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.1mg/kg體重TSA,1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA和1mg/kg體重5-Aza+0.5mg/kg體重TSA的三組大鼠(圖3中分別標(biāo)記為5-Aza 1mg+TSA 0.1mg、5-Aza 1mg+TSA 0.25mg和5-Aza 1mg+TSA 0.5mg)，對照組注射等體積的無菌生理鹽水(圖3中標(biāo)記為saline)，每組大鼠8只。實(shí)驗(yàn)測試方法同上述熱板測試和壓板測試的操作方法，注射藥物前測試受試大鼠的HWL值作為基礎(chǔ)值，在注射各個(gè)劑量的5-Aza+TSA后的10、30和60min時(shí)間點(diǎn)測定各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的大鼠左右兩側(cè)后爪對傷害性機(jī)械刺激和傷害性熱刺激的縮爪反應(yīng)潛伏期 (Hindpaw withdrawal latency,HWL)。HWL的變化的計(jì)算公式為：HWL的變化(％)＝(注射藥物后測量的HWL值-注射藥物前測量的HWL值)/(注射藥物前測量的HWL值)×100％。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示，圖3中A(左側(cè)HWL)和B(右側(cè)HWL)為注射后10、30和60min時(shí)間點(diǎn)的壓板測試結(jié)果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腹腔注射各個(gè)劑量的5-Aza+TSA后60min內(nèi)，大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期最大升高了約90％-100％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.1mg/kg體重TSA),100％-110％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA)或80％-90％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.5mg/kg體重TSA)。圖3中C(左側(cè)HWL)和D(右側(cè)HWL)為注射后10、30和60min時(shí)間點(diǎn)的熱板測試的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腹腔注射各個(gè)劑量的5-Aza+TSA后60min內(nèi)，大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期最大升高了約80％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.1mg/kg體重TSA),90％-100％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA)或60％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.5mg/kg體重TSA)。

與對照組相比，腹腔注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.1mg/kg體重TSA后大鼠后爪對機(jī)械性刺激和熱刺激引起的HWL顯著升高(壓板測試:F_left/left＝69.93,P<0.001；F_right/right＝59.54,P<0.001；熱板測試:F_left/left＝46.65,P<0.001；F_right/right＝41.69,P<0.001)。

與對照組相比，腹腔注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA后大鼠后爪對機(jī)械性刺激和熱刺激引起的HWL顯著升高(壓板測試:F_left/left＝76.17,P<0.001；F_right/right＝93.30,P<0.001；熱板測試:F_left/left＝44.31,P<0.001；F_right/right＝60.57,P<0.001)。

與對照組相比，腹腔注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.5mg/kg體重TSA后大鼠后爪對機(jī)械性刺激和熱刺激引起的HWL顯著升高(壓板測試:F_left/left＝146.50,P<0.001；F_right/right＝60.68,P<0.001；熱板測試:F_left/left＝65.25,P<0.001；F_right/right＝105.10,P<0.001)。

上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，5-Aza和TSA組合在一起對急性痛產(chǎn)生了協(xié)同鎮(zhèn)痛作用。在聯(lián)合注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA 30min時(shí)，大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為100％-110％；在單獨(dú)注射劑量為1mg/kg體重5-Aza30min時(shí)，大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為40％；在單獨(dú)注射劑量為0.25mg/kg體重TSA 30min時(shí)，大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為30％。在聯(lián)合注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA 30min時(shí)，大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為90％-100％；在單獨(dú)注射劑量為1mg/kg體重5-Aza 30min時(shí)，大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為40％；在單獨(dú) 注射劑量為0.25mg/kg體重TSA 30min時(shí)，大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為30％。

四、由5-氮雜胞嘧啶核苷(5-Aza)和曲古抑素A(TSA)組成的組合物與嗎啡鎮(zhèn)痛效果的比較

給正常大鼠腹腔注射劑量為1mg/kg體重的5-Aza溶液后注射TSA溶液，獲得注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA的實(shí)驗(yàn)組大鼠(圖4中標(biāo)記為5-Aza1mg+TSA 0.25mg)，給正常大鼠腹腔注射等體積的鹽酸嗎啡注射液，獲得注射劑量為1mg/kg體重嗎啡的陽性藥物對照組(圖4中標(biāo)記為morphine 1mg)，對照組注射等體積的無菌生理鹽水(圖4中標(biāo)記為saline)，每組大鼠8只。實(shí)驗(yàn)測試方法同上述熱板測試和壓板測試的操作方法，注射藥物前測試受試大鼠的HWL值作為基礎(chǔ)值，在注射藥物后的10、30和60min時(shí)間點(diǎn)測定各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的大鼠左右兩側(cè)后爪對傷害性機(jī)械刺激和傷害性熱刺激的縮爪反應(yīng)潛伏期(Hindpaw withdrawal latency,HWL)。HWL的變化的計(jì)算公式為：HWL的變化(％)＝(注射藥物后測量的HWL值-注射藥物前測量的HWL值)/(注射藥物前測量的HWL值)×100％。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖4所示，圖4中A(左側(cè)HWL)和B(右側(cè)HWL)為注射后10、30和60min時(shí)間點(diǎn)的壓板測試結(jié)果，圖4中C(左側(cè)HWL)和D(右側(cè)HWL)為注射后10、30和60min時(shí)間點(diǎn)的熱板測試的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

與對照組相比，腹腔注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA后大鼠后爪對機(jī)械性刺激或熱刺激引起的HWL顯著升高(壓板測試:F_left/left＝76.17,P<0.001；F_right/right＝93.30,P<0.001；熱板測試:F_left/left＝44.31,P<0.001；F_right/right＝60.57,P<0.001)。與對照組相比，腹腔注射劑量為1mg/kg體重的嗎啡后大鼠后爪對機(jī)械性刺激或熱刺激引起的HWL顯著升高(壓板測試:F_left/left＝58.82,P<0.001；F_right/right＝10.02,P<0.01；熱板測試:F_left/left＝11.63,P<0.01；F_right/right＝14.14,P<0.01)。

以上結(jié)果表明，腹腔注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA和注射劑量為1mg/kg體重嗎啡均能夠產(chǎn)生明顯的鎮(zhèn)痛作用,但是二者的鎮(zhèn)痛效果沒有明顯差異。

五、由5-氮雜胞嘧啶核苷(5-Aza)和曲古抑素A(TSA)組成的組合物的耐藥性實(shí)驗(yàn)

給正常大鼠連續(xù)腹腔注射本發(fā)明的劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA一周以上，經(jīng)過壓板測試和熱板測試沒有發(fā)現(xiàn)由5-Aza和TSA組成的組合物的鎮(zhèn)痛作用有明顯下降。

六、由5-氮雜胞嘧啶核苷(5-Aza)和曲古抑素A(TSA)組成的組合物的成癮性實(shí)驗(yàn)

本發(fā)明注射的藥物(5-Aza和TSA)在人體已經(jīng)使用，沒有報(bào)道有成癮性。

七、大鼠運(yùn)動(dòng)功能實(shí)驗(yàn)

利用斜板實(shí)驗(yàn)測量大鼠在腹腔給予實(shí)驗(yàn)室中所用最高劑量5-Aza(注射劑量為1mg/kg體重)后注射最高劑量TSA(注射劑量為0.5mg/kg體重)30min后，臨界角度沒有明顯變化(圖5)(Paired t-test,P＝0.8733,N＝6)，說明5-Aza和TSA并不影響大鼠的運(yùn)動(dòng)功能(肌張力和后爪所縮力)。

實(shí)施例2、由5-氮雜胞嘧啶核苷(5-Aza)和曲古抑素A(TSA)組成的組合物在神經(jīng)性痛大鼠的鎮(zhèn)痛效果

實(shí)驗(yàn)采用坐骨神經(jīng)輕度結(jié)扎制作大鼠神經(jīng)性痛模型，具體步驟參照Bennett和Xie的方法(Bennett&Xie 1988)。大鼠在用戊巴比妥鈉(50mg/kg體重)完全麻醉后側(cè)臥，結(jié)扎側(cè)(左側(cè))在上。剃去結(jié)扎側(cè)大腿至股部鼠毛，充分暴露大腿外側(cè)皮膚并用碘酒消毒，酒精脫碘。沿股骨外輪廓后方切開皮膚和皮下組織。將股筋膜擴(kuò)延暴露內(nèi)收肌，將內(nèi)收肌向后方牽拉暴露深層的坐骨神經(jīng)。坐骨神經(jīng)為白色粗大的神經(jīng)，用玻璃分針將周圍結(jié)締組織剝離以游離坐骨神經(jīng)。用4號絲線自坐骨神經(jīng)自中樞端向外周端每隔約1毫米做一外科結(jié)結(jié)扎，共四次結(jié)扎。保證結(jié)扎強(qiáng)度為僅令神經(jīng)有輕度縮窄，結(jié)扎時(shí)可以看到脛部肌肉輕微顫動(dòng)。輕度結(jié)扎只為減緩而不是截?cái)嗌窠?jīng)表面的血流造成有髓神經(jīng)纖維的髓鞘變性。結(jié)扎完成后將神經(jīng)復(fù)位，并常規(guī)縫合肌肉和皮膚。手術(shù)后對大鼠腹腔注射16萬單位青霉素鈉以預(yù)防感染。術(shù)后7-28天大鼠表現(xiàn)出較穩(wěn)定的神經(jīng)性痛,在此期間實(shí)驗(yàn)組通過腹腔注射劑量分別為1mg/kg體重5-Aza+0.1mg/kg體重TSA、1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA和1mg/kg體重5-Aza+0.5mg/kg體重TSA的組合物(圖6中分別標(biāo)記為1mg 5-Aza+0.1mg TSA、1mg 5-Aza+0.25mg TSA和1mg5-Aza+0.5mg TSA)；陽性對照組注射等體積的鹽酸嗎啡注射液，注射劑量為1mg/kg體重(圖6中標(biāo)記為morphine)；對照組注射等體積的無菌生理鹽水(圖6中標(biāo)記為saline)，每組大鼠為8只。實(shí)驗(yàn)測試方法同上述熱板測試和壓板測試的操作方法，注射藥物前測試受試大鼠的HWL值作為基礎(chǔ)值，在注射藥物組溶液后的30min時(shí)測定各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的大鼠左右兩側(cè)后爪對傷害性機(jī)械刺激和傷害性熱刺激的縮爪反應(yīng)潛伏期(Hindpaw withdrawal latency,HWL)。HWL的變化的計(jì)算公式為：HWL的變化(％)＝(注射藥物后測量的HWL值-注射藥物前測量的HWL值)/(注射藥物前測量的HWL值)×100％。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖6所示，圖6中A為注射后30min時(shí)壓板測試的結(jié)果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，腹腔注射各個(gè)劑量的5-Aza+TSA后30min時(shí)，神經(jīng)性痛大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期顯著升高，分別升高了約72.12±13.12％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.1mg/kg體重TSA，t＝3.65,P<0.01),102.21±14.43％(注射劑量為1mg/kg 體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA，t＝4.97,P<0.001)和95.43±5.23％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.5mg/kg體重TSA，t＝8.41,P<0.0001)；與對照組相比，神經(jīng)性痛大鼠注射嗎啡后30min時(shí)對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期也顯著升高，升高了123.15±26.07％(注射劑量為1mg/kg體重嗎啡，t＝3.94,P<0.01)。

圖6中B為注射后30min時(shí)熱板測試結(jié)果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，腹腔注射各個(gè)劑量的5-Aza+TSA后30min時(shí)，神經(jīng)性痛大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期顯著升高，分別升高了約115.52±14.59％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.1mg/kg體重TSA，t＝5.73,P<0.001),130.20±19.03％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA，t＝5.24,P<0.001)和150.43±13.78％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.5mg/kg體重TSA，t＝7.69,P<0.001)；與對照組相比，神經(jīng)性痛大鼠注射嗎啡后30min時(shí)對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期也顯著升高，升高了148.78±24.53％(1mg/kg體重嗎啡，t＝5.02,P<0.001)。

以上結(jié)果表明，由5-Aza和TSA組成的組合物對神經(jīng)性痛大鼠具有明顯的鎮(zhèn)痛效果。聯(lián)合注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA使神經(jīng)性痛大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度最大為102.21±14.43％，注射劑量為1mg/kg體重嗎啡使神經(jīng)性痛大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度為123.15±26.07％，兩者的鎮(zhèn)痛效果相當(dāng)。聯(lián)合注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.5mg/kg體重TSA使神經(jīng)性痛大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度為150.43±13.78％，注射劑量為1mg/kg體重嗎啡使神經(jīng)性痛大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度為148.78±24.53％，兩者的鎮(zhèn)痛效果相當(dāng)。

實(shí)施例3、由5-氮雜胞嘧啶核苷(5-Aza)和曲古抑素A(TSA)組成的組合物在炎癥痛大鼠的鎮(zhèn)痛效果

首先制作大鼠炎癥痛模型。將大鼠左側(cè)后肢固定，快速向大鼠左側(cè)足底肉墊中注射新配置的2％的carrgeenan 0.1ml誘發(fā)局部炎癥，對照組注射同體積生理鹽水。一小時(shí)后能夠觀察到由炎癥引發(fā)的局部水腫。在注射致炎劑后，大鼠后足明顯紅腫，局部皮溫升高，大鼠反復(fù)舔舐后足，對傷害性熱刺激和傷害性機(jī)械刺激呈現(xiàn)痛敏癥狀。局部炎癥反應(yīng)可以持續(xù)8-10小時(shí)，在3-4小時(shí)表現(xiàn)得最嚴(yán)重，因此給藥和測痛實(shí)驗(yàn)在大鼠足墊中注射carrgeenan后3小時(shí)開始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)組通過腹腔注射劑量分別為1mg/kg體重5-Aza+0.1mg/kg體重TSA、1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA和1mg/kg體重5-Aza+0.5mg/kg體重TSA的組合物(圖7中分別標(biāo)記為1mg 5-Aza+0.1mg TSA、1mg 5-Aza+0.25mg TSA和1mg 5-Aza+0.5mg TSA)，陽性對照組注射等體積的鹽酸嗎啡注射液，注射嗎啡劑量為1mg/kg體重(圖7中標(biāo)記為morphine)，對照組注射等體積的無菌生理鹽水(圖7中標(biāo)記為saline)，每組大鼠為8只。實(shí)驗(yàn)測試方法同 上述熱板測試和壓板測試的操作方法，注射藥物前測試受試大鼠的HWL值作為基礎(chǔ)值，在注射藥物組溶液后的30min時(shí)測定各個(gè)實(shí)驗(yàn)組的大鼠左右兩側(cè)后爪對傷害性機(jī)械刺激和傷害性熱刺激的縮爪反應(yīng)潛伏期(Hindpaw withdrawal latency,HWL)。HWL的變化的計(jì)算公式為：HWL的變化(％)＝(注射藥物后測量的HWL值-注射藥物前測量的HWL值)/(注射藥物前測量的HWL值)×100％。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖7所示，圖7中A為注射后30min時(shí)的壓板測試的結(jié)果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，腹腔注射各個(gè)劑量的5-Aza+TSA后30min時(shí)，炎癥痛大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期顯著升高，升高了約106.80±12.68％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.1mg/kg體重TSA，t＝6.71,P<0.0001),156.08±16.39％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA，t＝8.21,P<0.0001)和107.36±21.37％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.5mg/kg體重TSA，t＝4.50,P<0.001)；與對照組相比，炎癥痛大鼠注射嗎啡后30min時(shí)對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期顯著升高，升高了72.05±10.24％(注射劑量為1mg/kg體重嗎啡，t＝5.09,P<0.001)。

圖7中B為注射后30min時(shí)的熱板測試結(jié)果，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，腹腔注射各個(gè)劑量的5-Aza+TSA后30min時(shí)，炎癥痛大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期顯著升高，升高了114.29±17.31％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.1mg/kg體重TSA，t＝6.71,P<0.0001),136.00±11.67％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA，t＝11.05,P<0.0001)和111.75±12.95％(注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.5mg/kg體重TSA，t＝8.23,P<0.0001)；與對照組相比，炎癥痛大鼠注射嗎啡后30min時(shí)對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期顯著升高，升高了109.68±9.06％(注射劑量為1mg/kg體重嗎啡，t＝14.42,P<0.0001)。

結(jié)果表明，由5-Aza和TSA組成的組合物對炎癥痛大鼠具有明顯的鎮(zhèn)痛效果。聯(lián)合注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA使炎癥痛大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度為156.08±16.39％，注射劑量為1mg/kg體重嗎啡使炎癥痛大鼠對傷害性機(jī)械刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度為72.05±10.24％，前者高于嗎啡的鎮(zhèn)痛效果。聯(lián)合注射劑量為1mg/kg體重5-Aza+0.25mg/kg體重TSA使炎癥痛大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度為136.00±11.67％，注射劑量為1mg/kg體重嗎啡使炎癥痛大鼠對傷害性熱刺激的反應(yīng)潛伏期升高幅度為109.68±9.06％，兩者的鎮(zhèn)痛效果相當(dāng)。