本發(fā)明屬于獸藥制劑領(lǐng)域。具體涉及一種用于治療雞肺炎的中藥組合物。
背景技術(shù)：
雞肺炎是以呼吸加快和氣喘為特征的嚴(yán)重的呼吸道疾病。該病通常由多種病原及環(huán)境應(yīng)激等諸多因素相互作用引起的呼吸道感染傳入肺部引起的疾病。多發(fā)生于3～10日齡雛雞，急性患雞無明顯癥狀，突然死亡。病程慢的病雞伸頸張口、呼吸困難、咳嗽、食欲減退或不食，最后因肺充血而死。剖解病死雞可見肺水腫、充血。通常給家禽養(yǎng)殖者帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
目前國內(nèi)尚無治療雞肺炎的的專用特效藥物，大多數(shù)養(yǎng)殖戶采用大量抗生素和抗病毒藥物進(jìn)行治療，不僅達(dá)不到治療目的，還會造成嚴(yán)重的肝腎損傷，雞群成活率降低、整齊度差、飼料報(bào)酬降低、用藥成本大幅增加、養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)效益明顯降低。同時在畜產(chǎn)品中殘留的大量抗生素、存在食品安全隱患、嚴(yán)重危害人類健康。而采用本發(fā)明公布的中藥治療可以達(dá)到標(biāo)本兼治的目的，不僅可以快速緩解臨床癥狀，而且可以調(diào)動機(jī)體的防御機(jī)能，提高機(jī)體免疫力。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明涉及一種專用于治療雞肺炎的中藥組合物。特點(diǎn)在于對環(huán)境應(yīng)激及病原菌混合感染引起的雞肺炎療效高、無藥殘、綠色、安全。
本發(fā)明的技術(shù)方案是：公開了一種用于治療雞肺炎的中藥組合物。它是由以下質(zhì)量份數(shù)的原藥制成的藥劑：滿山紅2～6份、桔梗2～6份、浙貝母1～4份、魚腥草2～4份、板藍(lán)根2～4份、葶藶子2～4份、甘草1～3份。
本發(fā)明按照優(yōu)選的藥材質(zhì)量配比制成了一種用于治療雞肺炎的中藥組合物口服液。滿山紅6份、桔梗4份、浙貝母1、魚腥草4份、板藍(lán)根2份、葶藶子2份、甘草2份。制成每1ml相當(dāng)于原生藥2g的中藥組合物口服液。
本發(fā)明涉及的各味中藥材的藥理作用如下：
滿山紅又名映山紅，味苦，性寒，入肺經(jīng)，可肅降肺氣，清熱化痰，常用于風(fēng)熱咳嗽，痰熱郁肺等證。在長江流域各省，東至臺灣、西南達(dá)四川、云南、北至長白山區(qū)及大興安嶺、小興安嶺地區(qū)等都有大量分布，藥物來源豐富。其葉中含有多種藥用活性成分。如大牻牛兒酮、杜鵑素、槲皮素、金絲桃苷、愈創(chuàng)木奧、丁香酸和香草酸等。
現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明：滿山紅具有鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘、抗炎抑菌的作用。小鼠口服5mg大牻牛兒酮其鎮(zhèn)咳作用相當(dāng)可待因2mg，同時大牻牛兒酮有對抗組胺引起的豚鼠支氣管痙攣的作用。杜鵑素、槲皮素為滿山紅治療氣管炎的主要有效成分。家兔活體氣管纖毛運(yùn)送粘液速度試驗(yàn)可以證實(shí)臨床祛痰的結(jié)論。同時家兔靜脈注射滿山紅醇浸水溶液，可對抗乙酰膽堿引起的支氣管痙攣。葉中所含愈創(chuàng)木奧、可用作抗炎劑。杜鵑素對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌有抑菌活性。丁香酸和香草酸亦有抗細(xì)菌和真菌的作用。滿山紅中含有的金絲桃苷具有解痙鎮(zhèn)痛、增強(qiáng)免疫力的作用。
桔梗，辛開宣散，苦以瀉，體輕升浮，性味平和，宣肺止咳，疏邪達(dá)表，外感六淫，皆為所宜?？尚谓獗怼⑸岱螝?、祛痰平喘、利氣散結(jié)、清咽開音。而滿山紅苦寒入肺，降逆祛痰，破結(jié)散熱。二藥合用，一升一降，梳理氣機(jī)，可開通郁滯，開胸順氣。宣肺止咳，適用于肺氣郁滯之喘咳，胸膈滿悶等證。
魚腥草，味辛性寒，辛能發(fā)散、寒能清熱、入肺經(jīng)，既能清熱解毒，又能排膿消癰。常用治肺癰、肺炎等證。配桔?？汕鍩峤舛境伟b，宣肺托膿祛潰瘍。治肺膿瘍及癰腫膿出不暢。二藥均入肺經(jīng)，同為療肺癰要藥。魚腥草清熱解毒作用頗強(qiáng)，長于解毒排膿而消癰；桔梗長于宣通肺氣，祛痰，排膿消腫以治癰。二藥配對，相使為用，同奏宣肺祛痰，消熱排膿，解毒療癰之功。
浙貝母為百合科貝母屬植物?！侗静菡罚骸宕笾畏伟b肺萎，咳喘，吐血，衄血，最降痰氣，善開郁結(jié)，止疼痛，消脹滿，清肝火，明耳目。有止咳化痰、清熱散結(jié)之作用。主治上呼吸道感染，咽喉腫痛、支氣管炎、肺膿瘍、痰多、肺熱咳嗽。
葶藶子是常用的中藥之一。《本草正義》：葶藶子苦降辛散，而性寒涼，故能破滯開結(jié)，定逆止喘，利水消腫。
板藍(lán)根，苦，寒，無毒。歸肝經(jīng)、胃經(jīng)。清熱，解毒，涼血，利咽?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究：板藍(lán)根含靛甙、靛紅、β-谷甾醇、板藍(lán)根乙素、丙素和丁素。亦含植物性蛋白、樹脂狀物、糖類、芥子甙、多種氨基酸及微量元素。板藍(lán)根對多種細(xì)菌有抑制作用。水浸液對枯草桿菌、金黃色葡萄球菌、八聯(lián)球菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、副傷寒桿菌、痢疾(志賀、弗氏)桿菌、腸炎桿菌等都有不同程度的抑制作用，對流感病毒PR8株和京科68-1株有明顯抑制作用。
甘草，性味甘、平、無毒。具有補(bǔ)脾益氣、清熱解毒、潤肺止咳之功效。同時甘草藥性平和，通行十二經(jīng)脈，可升可降，能和能緩，又解又補(bǔ)，故有調(diào)和藥性之功。在各類藥方中，能使諸藥彼此和諧而無相爭之弊。
本發(fā)明的突出特點(diǎn)在于依據(jù)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)古方、結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論及流行病學(xué)調(diào)查，將滿山紅、桔梗、浙 貝母、魚腥草、葶藶子、板藍(lán)根、甘草進(jìn)行科學(xué)組方，用于治療雞肺炎，藥物來源豐富、成本低廉、生產(chǎn)工藝簡單、質(zhì)量可控。通過大量的臨床試驗(yàn)驗(yàn)證，對環(huán)境應(yīng)激及病原菌混合感染引起的雞肺炎均有較好的治療效果，快速緩解臨床癥狀，有效率達(dá)到90％以上。純中藥制劑、可廣泛用于肉雞及蛋雞，無休藥期、無藥物殘留、確保動物性食品的安全。同時可根據(jù)生產(chǎn)條件、市場需求制備成散劑、顆粒劑、口服液、注射液、片劑等各種藥物劑型。
具體實(shí)施方式
為更好的說明本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)及實(shí)施效果，列舉本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施例1個，但不限制本發(fā)明。所用原輔料均為市售醫(yī)藥級原輔料。
具體實(shí)施例1中藥組合物制備方法
中藥組合物口服劑制備方法如下：
取滿山紅6份、桔梗4份、浙貝母1份、板藍(lán)根2份、葶藶子2份、甘草2份，除去雜質(zhì)洗凈，加入藥材總質(zhì)量10倍、8倍、8倍體積量的濃度為60％的乙醇回流提取3次、溫度為80℃、每次提取時間為60min，合并三次提取液并轉(zhuǎn)入濃縮罐，進(jìn)行濃縮回收乙醇。濃縮至相對密度1.25-1.3g/ml備用。另取魚腥草4份，除去雜質(zhì)洗凈，加水蒸餾，收集蒸餾液(收集量相當(dāng)于投藥量的一半)。將收集的蒸餾液加入上述濃縮備用的浸膏中，攪拌混合均勻，后加入40％的乙醇溶液稀釋至每毫升藥液相當(dāng)于原生藥2g。灌封即得。
中藥組合物還可以根據(jù)生產(chǎn)條件、市場需求制備成其他多種劑型，如散劑、顆粒劑、注射液、片劑等各種藥物劑型。
具體實(shí)施例2質(zhì)量檢驗(yàn)
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)如下：
性狀：本品為棕黃色澄明液體，味辛，微甜。
鑒別：①取藥液10ml，加乙醚振搖提取2次，每次15ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)秩渭?0％乙醇各10ml，置水浴上溶解，趁熱濾過，合并濾液，置水浴上蒸去乙醇，水溶液加乙醚振搖提取2次，每次15ml，合并乙醚液，蒸干，殘?jiān)勇确?ml使溶解，作為供試品溶液。另取滿山紅對照藥材5g，加乙醚50ml，超聲處理15分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)?0％乙醇30ml，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯-甲醇(5∶5∶0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
②取本品10ml，置分液漏斗中，加稀鹽酸2ml，用氯仿振搖提取2次，每次5ml，分取氯仿液，揮干， 殘?jiān)託溲趸c試液3ml使溶解，加二硝基苯肼試液1ml，振搖，即生成橙紅色沉淀。
③取藥液10ml，加濃氨溶液2ml與三氯甲烷20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。另取浙貝母對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液(17∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
④取藥液10ml，加三氯甲烷40ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?ml使溶解，作為供試品溶液。另取靛玉紅對照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-三氯甲烷-丙酮(5∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同德淺紫色斑點(diǎn)。
⑤取藥液10ml，加乙醚10ml，密塞，超聲處理30分鐘，濾過，濾液揮去乙醚，加正丁醇提取兩次，每次10ml，合并正丁醇液，加水10ml洗滌，取正丁醇層水浴蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘草藥材1g，加水50ml，回流提取30分鐘，濾過，濾液用正丁醇振搖提取3次，每次30ml，合并正丁醇液，用水30ml洗滌，取正丁醇層水浴蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一含有1％氫氧化鈉的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開劑，展開，取出，熱風(fēng)吹干，，噴以10％硫酸乙醇溶液，與105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
⑥取藥液10ml，加鹽酸3ml與水30ml，加熱回流1小時，冷卻，濾過，濾液用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，用鋪有無水硫酸鈉的濾紙濾過，濾液水浴蒸干，殘?jiān)蛹状?ml，使溶解，作物供試品溶液。另取桔梗對照藥材1g，加70％乙醇回流提取3次，每次20ml，每次1小時，合并提取液并揮去乙醇至無醇味，加鹽酸3ml、水30ml，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙醚(1∶1)為展開劑，展開，取出，熱風(fēng)吹干，，噴以10％硫酸乙醇溶液，與105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
檢查：
本品相對密度應(yīng)不低于1.02；
含量測定：
①總黃酮含量測定
對照品溶液的制備取蘆丁對照品適量，精密稱定，加60％乙醇制成每1ml含蘆丁60μg的溶液，即得。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備：精密量取對照品溶液0.5ml、1ml、2ml、3ml、4ml與5ml，分別置10ml量瓶中，各 加0.1mol/L三氯化鋁溶液2ml、1mol/L醋酸鉀溶液3ml，加60％乙醇至刻度，搖勻，放置30分鐘；以相應(yīng)試劑為空白。照紫外一可見分光光度法(《中國獸藥典2010版二部附錄》)，在420nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
精密量取本品2g，置50ml量瓶中，加60％乙醇至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加0.1mol/L三氯化鋁溶液”起依法操作，制成供試品溶液。另精密量取本品2g，置50ml量瓶中，加60％乙醇稀釋至刻度，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加60％乙醇至刻度，搖勻，作空白，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中蘆丁的質(zhì)量，計(jì)算。本品每1g含總黃酮以蘆丁(C27H30O16)計(jì)，不得少于2.0mg。
②桔梗皂苷D含量測定
照高效液相色譜法以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈一水(25∶75)為流動相；蒸發(fā)光散射檢測器檢測。理論板數(shù)按桔梗皂苷D峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。
取桔梗皂苷D對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。取本品約5ml，精密稱定，精密加入50％甲醇至50ml，稱定質(zhì)量，超聲處理30分鐘，放冷，用50％甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量；搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，置水浴上蒸干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液50ml洗滌，棄去氨液，再用正丁醇飽和的水50ml洗滌，棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，加硅膠0.5g拌勻，置水浴上蒸干，加于硅膠柱[100～120目，10g，內(nèi)徑為2cm，用三氯甲烷-甲醇(9∶1)混合溶液濕法裝柱]上，以三氯甲烷-甲醇(9∶1)混合溶液50ml洗脫，棄去洗脫液，再用三氯甲烷-甲醇-水(60∶20∶3)混合溶液100ml洗脫，棄去洗脫液，繼用三氯甲烷-甲醇-水(60∶29∶6)混合溶液100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液5μl、10μl，供試品溶液10～15μl，注入液相色譜儀，測定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算，含桔梗皂苷D(C57H92O28)不得少于0.08％。
其他項(xiàng)應(yīng)符合獸藥店規(guī)定的口服液標(biāo)準(zhǔn)。
具體實(shí)施例3藥效學(xué)研究
1.體外抑菌試驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)中所用的大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。試驗(yàn)選用紙片法進(jìn)行測定。供試藥液為實(shí)例制備的液態(tài)中藥復(fù)合物。
菌液制備：將大腸埃希菌的新鮮培養(yǎng)物置于10ml營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)18～24h；取培養(yǎng)液1ml加入0.9％無菌氯化鈉溶液，采用10倍遞增稀釋法，稀釋至105～106cfu/ml，備用。
含藥紙片的制作：選用定性濾紙用打孔器制成直徑6mm的圓紙片放入清潔干燥的空瓶中，瓶口密封， 121℃高壓滅菌30min，保存?zhèn)溆谩Ｔ跓o菌條件下分別將100片紙片浸泡于相當(dāng)于1g生藥的中藥復(fù)合物藥液中1～2h，待藥液完全被紙片吸收后，取出濾紙片，50℃烘干制成藥敏片備用。此時每片紙片上含生藥量是0.01g/片。
實(shí)驗(yàn)操作：在超凈工作臺中，將濃度為105～106cfu/ml的試驗(yàn)菌液用平均涂抹于營養(yǎng)瓊脂平板表面，制成含菌平板。室溫2～5min后，平鋪藥物紙片2片，其中一片為無菌生理鹽水陰性對照，培養(yǎng)18～24h后，測量各藥敏片的抑菌圈直徑(mm)。共設(shè)置3個重復(fù)，測3次求平均值。以上操作均為無菌操作。
試驗(yàn)結(jié)果，通過測量3個重復(fù)實(shí)驗(yàn)組的抑菌圈直徑后求得平均值為16mm屬于高度敏感。
2.靶動物實(shí)驗(yàn)室藥效學(xué)試驗(yàn)
選取10日齡健康白羽肉雞200只，平均分成四組，每組50只，籠養(yǎng)，自由采食飲水，并進(jìn)行人工感染，具體處理方法見表1。
病料上清液制備：選取具有典型肺炎癥狀的病雞肺臟，經(jīng)偉嘉集團(tuán)健康養(yǎng)殖與評價云中心實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病料處理及細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定為感染大腸桿菌，即大腸桿菌性肺炎。后取剩余病雞肺臟，無菌條件下剪碎，加少量的生理鹽水研磨后2000r/min離心5分鐘后取上清液備用。
表1試驗(yàn)分組及處理
在初次攻毒后的第二天，試驗(yàn)組、陽性治療組、陽性非治療組的雞陸續(xù)開始出現(xiàn)呼吸困難、咳嗽、氣管啰音，食欲減退，陰性對照組無異常。故判定建模成功。
試驗(yàn)組按每1L水添加試驗(yàn)樣品5ml，飲水給藥，連續(xù)給藥3天；陽性治療組按產(chǎn)品使用說明書投以某廠家生產(chǎn)的清肺顆粒，采取飲水給藥，連續(xù)5天。陽性非治療組及陰性對照組不進(jìn)行治療。
試驗(yàn)組與陽性治療組、陽性非治療組的病死雞分別進(jìn)行剖解，病雞可見肺水腫、少量充血、雞氣囊渾濁。取病雞肺臟經(jīng)細(xì)菌分離鑒定為大腸桿菌。故判定病雞死于大腸桿菌性肺炎。
表2試驗(yàn)中治療效果統(tǒng)計(jì)(單位/只)
療效判斷標(biāo)準(zhǔn)：
治愈 給藥5日后，無喘息、咳嗽、伸頸，食欲、精神狀態(tài)恢復(fù)正常；
有效 給藥5日后，無喘息、伸頸，咳嗽癥狀有所緩解、食欲、精神狀態(tài)有所改善；
無效 給藥5日后，喘息、伸頸、咳嗽、食欲、精神狀態(tài)等癥狀無減輕甚至加重或死亡。
給藥5天后的試驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表明，大腸桿菌性肺炎在人工感染后的自然耐過率僅為8％，死亡率高達(dá)60％。而本專利發(fā)明的中藥復(fù)合物在治療雞肺炎上具有見效快，治愈率高的特點(diǎn)，有效率達(dá)到92％。五天內(nèi)對雞肺炎的治愈率比普通中藥顆粒高出20個百分點(diǎn)。
3.臨床效果驗(yàn)證
應(yīng)用實(shí)例1：遼寧省某蛋雞飼養(yǎng)廠10日齡雛雞5000只，臨床表現(xiàn)精神萎靡、咳嗽、呼吸困難伴濕性啰音、呆力、不食，排黃綠色稀便，剖檢個別雞只肺部水腫，充血、出血，氣囊渾濁、有干酪樣物，囊壁增厚經(jīng)專業(yè)獸醫(yī)診斷為細(xì)菌感染引發(fā)氣囊炎。采用本專利實(shí)例1制備的中藥組合物制劑每只雞0.2ml飲水。連續(xù)給藥5天，并進(jìn)行觀察記錄雞只給藥前后精神狀態(tài)、采食量變化。給藥后第三天，精神狀態(tài)好轉(zhuǎn)；無咳嗽、無喘息，氣管呼吸音減輕，稀便減少，到給藥后第5天痊愈。據(jù)統(tǒng)計(jì)總有效率約為90％。據(jù)獸醫(yī)及養(yǎng)殖戶反應(yīng)，本研究開發(fā)的中藥組合物在治療雞肺炎上具有良好的臨床效果，呼吸道癥狀快速緩解，不影響采食量及日增重，價格低廉，一個療程的藥費(fèi)為0.03元/只，沒有休藥期和藥物殘留，在保障動物性食品安全的同時給廣大養(yǎng)殖戶創(chuàng)造更可觀的經(jīng)濟(jì)收益。市場應(yīng)用前景良好。