本發(fā)明涉及菝葜屬植物治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的有效部位，尤其涉及小葉菝葜和三脈菝葜兩種中草藥治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的有效部位。本發(fā)明和涉及所述有效部位的提取方法，屬于中藥治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎(gouty arthritis)是由于尿酸鈉微結(jié)晶在關(guān)節(jié)周圍組織沉積引發(fā)的急性炎癥反應(yīng)。臨床以關(guān)節(jié)紅腫熱痛反復(fù)發(fā)作及尿尿酸、血尿酸增高為主要表現(xiàn)，日久痛風(fēng)石在關(guān)節(jié)軟骨沉積，關(guān)節(jié)畸形，甚至可并發(fā)腎結(jié)石。本病屬祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的痹證范疇，俗稱頑痹、血痹等。目前對(duì)痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的治療還沒有什么特效藥，臨床主要用秋水仙堿、別嘌呤醇和非甾體類抗炎藥等藥冶療，療效尚可，但毒副作用較大（致白細(xì)胞減少、再生障礙性貧血、肝腎損傷、糖尿病、高血壓等癥），給患者帶來(lái)極大的痛苦。因此，尋找更有效，毒性更低的治療藥物是迫切需要解決的重要問(wèn)題。
小葉菝葜（Smilax macrophyllaVers.）和三脈菝葜（Smalix trinervula Miq.），主產(chǎn)于華東及華南各省，在江西省境內(nèi)野生資源非常豐富。其味甘、苦，性平，《全國(guó)中草藥匯編》、《江西草藥》、《湖南藥物志》、《貴州草藥》、《陜西中草藥》均記載有祛風(fēng)活絡(luò)，祛痰止咳的功效，臨床主要用于治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、筋骨疼痛、跌打損傷、腰肌勞損、支氣管炎、肺結(jié)核咳嗽咯血等疾患。
現(xiàn)有的治療痛風(fēng)藥僅對(duì)關(guān)節(jié)炎具有抗炎鎮(zhèn)痛的療效，如果既能降低尿酸，又能減緩局部的炎癥反應(yīng)，那么才是治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的真正意義所在。本發(fā)明提供兩種菝葜屬中草藥有效部位提取物，既能降低患者血中的尿酸，又能減緩患者局部關(guān)節(jié)周圍的炎癥反應(yīng)，將具有重要的臨床意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供兩種既能降低患者血中的尿酸，又能減緩患者局部關(guān)節(jié)周圍的炎癥反應(yīng)菝葜屬中草藥（小葉菝葜和三脈菝葜）有效部位提取物。
本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：
兩種治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的菝葜屬有效部位提取物，包括以下步驟制備得到：
將小葉菝葜或者三脈菝葜粉碎后用水煎煮提取，收集水煎液，過(guò)濾，即得；或者將小葉菝葜或三脈菝葜粉碎后用10-90%乙醇提取，收集醇提液，回收乙醇，即得。
其中，將小葉菝葜或者三脈菝葜水煎煮時(shí)，優(yōu)選用藥材4-10倍重量的水煎煮2-5小時(shí)，為了達(dá)到更好的提取效果，可以將水煎液濃縮后用大孔吸附樹脂柱吸附，用蒸餾水和10-90%的乙醇梯度洗脫。更優(yōu)選的，用50%的乙醇進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，即得。
所述的大孔吸附樹脂柱選自D101型大孔吸附樹脂。
優(yōu)選的，將小葉菝葜或三脈菝葜粉碎后用10-90%乙醇提取時(shí)，用70%乙醇提取所得到的有效部位具有更好的治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥理活性。
本發(fā)明治療痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的兩種中草藥有效部位富含活性成分，具有降低尿酸、抗炎、鎮(zhèn)痛的藥理作用。本發(fā)明有效部位不但能緩解急性期關(guān)節(jié)紅腫熱痛的炎癥反應(yīng)，而且能夠針對(duì)病機(jī)降低血中的尿酸水平，對(duì)于痛風(fēng)標(biāo)本兼治。因此可以用來(lái)制備療效好，安全可靠的治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的藥物。
本發(fā)明有效部位的提取工藝簡(jiǎn)單，不需要高溫高壓和特殊設(shè)備，安全，易于操作且成本低。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施范例來(lái)進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而更為清楚。但是這些實(shí)施例子僅是范例性的，并不對(duì)本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對(duì)本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或者替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
實(shí)施例1
將小葉菝葜干燥根及根莖1000g，粉碎，加70%乙醇5倍重量，回流提取2次，合并提取液，回收乙醇，得到小葉菝葜醇浸膏。
實(shí)施例2
將小葉菝葜干燥根及根莖1000g，粉碎，加水6倍重量，浸泡1h，煎煮2h，得到水煎液；水煎液濃縮至1g/mL，上D101型大孔吸附樹脂柱，用蒸餾水洗脫至無(wú)色，收集洗脫液，濃縮得組分 ；再用30%乙醇洗脫至無(wú)色，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮得組分；再用50%乙醇洗脫至無(wú)色，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮得組分；再用70%乙醇洗脫至無(wú)色，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮得組分；
實(shí)施例3
將三脈菝葜干燥根及根莖1000g，粉碎，加70%乙醇5倍重量，回流提取2次，合并提取液，回收乙醇，得到三脈菝葜醇浸膏。
實(shí)施例4
將三脈菝葜干燥根及根莖1000g，粉碎，加水6倍重量，浸泡1h，煎煮2h，得到水煎液；水煎液濃縮至1g/mL，上D101型大孔吸附樹脂柱，用蒸餾水洗脫至無(wú)色，收集洗脫液，濃縮得組分；再用30%乙醇洗脫至無(wú)色，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮得組分；再用50%乙醇洗脫至無(wú)色，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮得組分；再用70%乙醇洗脫至無(wú)色，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮得組分；
實(shí)驗(yàn)例1 小葉菝葜和三脈菝葜提取物的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)
供試藥物：小葉菝葜和三脈菝葜的醇浸膏（實(shí)施例1和3所制備）
實(shí)驗(yàn)方法：將120只小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為8組（n=15），空白對(duì)照組灌胃等量的1%吐溫-80溶液，陽(yáng)性藥物組（阿司匹林0.2 g/kg），小葉菝葜和三脈菝葜組（高：6 g·kg-1生藥，中：3 g·kg-1生藥，低：1.5 g·kg-1生藥）。各組動(dòng)物每天分別灌胃給藥一次，連續(xù)7 d，末次給藥0.5 h后將0.1 mL二甲苯均勻涂抹于小鼠左耳廓兩面致炎，以右耳作對(duì)照，1 h后頸椎脫臼處死小鼠，沿耳廓剪下兩耳，用打孔器(直徑9 mm)分別在左右相同部位取下圓耳片，稱重，記錄耳殼質(zhì)量，計(jì)算耳腫脹度和抑制率。計(jì)算公式：腫脹抑制率（%）=（對(duì)照組平均腫脹度—給藥組平均腫脹度）/ 對(duì)照組平均腫脹度×100%
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：小葉菝葜和三脈菝葜醇浸膏抗二甲苯所致小鼠耳腫脹結(jié)果表明，小葉菝葜和三脈菝葜總浸膏均具有一定的抗炎效果，且抗炎效果與給藥劑量有關(guān)；與阿司匹林組的腫脹抑制率（60%）相比從高到低依次為三脈菝葜中劑量組（57%）、小葉菝葜中劑量組（48%）、三脈菝葜高劑量組（43%）、小葉菝葜高劑量組(43%)、小葉菝葜低劑量組（43%）、三脈菝葜低劑量組（29%）。由此實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，三脈菝葜高劑量組、中劑量組以及小葉菝葜中劑量組具有較好的抗炎效果。
實(shí)驗(yàn)例2 小葉菝葜和三脈菝葜提取物的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)
供試藥物：小葉菝葜水煎液上大孔樹脂后乙醇洗脫液，組分~（實(shí)施例2所制備），以及三脈菝葜水煎液上大孔樹脂后乙醇洗脫液，組分~（實(shí)施例4所制備）。
實(shí)驗(yàn)方法：將150只小鼠，雌雄各半，隨機(jī)分為10組（n=15），空白對(duì)照組灌胃等量的1%吐溫-80溶液，陽(yáng)性藥物組（阿司匹林0.2 g/kg），小葉菝葜和三脈菝葜組（3 g·kg-1生藥）。各組動(dòng)物每天分別灌胃給藥一次，連續(xù)7 d，末次給藥0.5 h后將0.1 mL二甲苯均勻涂抹于小鼠左耳廓兩面致炎，以右耳作對(duì)照，1 h后頸椎脫臼處死小鼠，沿耳廓剪下兩耳，用打孔器(直徑9 mm)分別在左右相同部位取下圓耳片，稱重，記錄耳殼質(zhì)量，計(jì)算耳腫脹度和抑制率。計(jì)算公式：腫脹抑制率（%）=（對(duì)照組平均腫脹度—給藥組平均腫脹度）/ 對(duì)照組平均腫脹度×100%
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，不同組分均有抑制耳腫脹作用，其中組分III和組分的作用最為顯著。
實(shí)驗(yàn)例3 小葉菝葜和三脈菝葜提取物的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)
供試藥物：小葉菝葜和三脈菝葜的醇浸膏（實(shí)施例1和3所制備）
實(shí)驗(yàn)方法：昆明種小鼠80 只隨機(jī)分為8組, 即空白對(duì)照組, 布洛芬組, 小葉菝葜和三脈菝葜高、中、低劑量組(相當(dāng)于生藥量6. 0、3. 0、1. 5g /kg)。按組別連續(xù)灌胃7天, 空白組給予等量的0. 5%羧甲基纖維素鈉溶液, 末次給藥30m in 后腹腔注射體積分?jǐn)?shù)0. 7%的冰醋酸0. 01m l/g, 觀察記錄10分鐘內(nèi)小鼠的扭體次數(shù), 伸展后肢、腹部?jī)?nèi)凹和臀抬高, 計(jì)算鎮(zhèn)痛率。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與空白對(duì)照組相比, 布洛芬組、小葉菝葜和三脈菝葜醇浸膏各劑量組均能明顯的抑制醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng), 并且抑制作用呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系, 提示小葉菝葜和三脈菝葜醇浸膏對(duì)外周化學(xué)性刺激引起的疼痛具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。
實(shí)驗(yàn)例4 小葉菝葜和三脈菝葜提取物的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)
供試藥物：小葉菝葜和三脈菝葜的醇浸膏（實(shí)施例1和3所制備）
實(shí)驗(yàn)方法：迪法克種鵪鶉，雄性，170～220 g。動(dòng)物按體質(zhì)量隨機(jī)分為9組：空白對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥物組、小葉菝葜和三脈菝葜高、中、低劑量組(相當(dāng)于生藥量6. 0、3. 0、1. 5g /kg)，每組10只。除空白對(duì)照組予以正常飲食外，其余各組均按文獻(xiàn)方法予以酵母飼料?？瞻讓?duì)照組和模型組予蒸餾水灌胃，用藥組分別給予苯溴馬龍和小葉菝葜及三脈菝葜高、中、低劑量灌胃，1次／d，飼養(yǎng)21 d。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前，動(dòng)物禁食12h，于頸靜脈取血1～1.5 mL，離心3 000 r／min，分離血清，用酶比色法測(cè)定血清中尿酸（UA）和甘油三酯（TG）含量。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：模型組血清中UA和TG含量明顯升高，與空白對(duì)照組相比有顯著性差異(P<0.01)；除三脈菝葜中劑量組外，各用藥組均可使模型動(dòng)物血清中的UA和TG有不同程度的降低，與模型組相比有顯著性差異(P<0.01或0.05)；三脈菝葜中劑量組可降低模型動(dòng)物血清中TG的含量，與模型組相比有顯著性差異(P<0.01)，但對(duì)尿酸無(wú)明顯影響。