一種海馬斷尾采血方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種海馬斷尾采血方法，包括：(1)配制魚(yú)類血液抗凝劑；(2)取步驟(1)中所述的魚(yú)類血液抗凝劑置于離心管；(3)取鮮活海馬，紗布吸干體表水分，解剖剪剪去一段尾柄；(4)剪尾后，剩余的尾柄立即插入到步驟(2)中所述的離心管的液面以下；(5)一手持尾柄，另一手持離心管，采集血液1-2min；(6)采血結(jié)束后，海馬用消毒藥浸泡，之后放回海水繼續(xù)養(yǎng)殖。本發(fā)明無(wú)需注射器或毛細(xì)管，而是直接將血液引流到了含抗凝劑的離心管中，有效地解決了血液易凝固的難點(diǎn)，采血量大幅度提升；除了有效克服常規(guī)斷尾采血法的缺點(diǎn)外，也很好地保留了其優(yōu)點(diǎn)，同樣具有操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性強(qiáng)、斷尾海馬可存活等特點(diǎn)。
【專利說(shuō)明】一種海馬斷尾采血方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于采集魚(yú)類血液領(lǐng)域，特別涉及一種海馬斷尾采血方法。

【背景技術(shù)】
[0002]血液是動(dòng)物體內(nèi)一種極其重要的組織，具有運(yùn)輸養(yǎng)分、參與體液調(diào)節(jié)、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)和抵御有害物質(zhì)的作用。正常血液指標(biāo)值能反映動(dòng)物的正常生理狀態(tài)。魚(yú)類血液與機(jī)體的代謝、營(yíng)養(yǎng)、免疫狀況有著密切的關(guān)系，當(dāng)魚(yú)體受到外界因子的刺激而發(fā)生生理變化時(shí)，必定會(huì)在血液指標(biāo)中反映出來(lái)。因而，血液指標(biāo)被廣泛地用來(lái)評(píng)價(jià)魚(yú)類的健康狀況、營(yíng)養(yǎng)狀況及對(duì)環(huán)境的適應(yīng)狀況，是重要的生理學(xué)指標(biāo)。
[0003]海馬(Hippocampus)隸屬于魚(yú)綱，海龍目，是一種近陸淺海小型魚(yú)類，具很高的藥用和觀賞價(jià)值，又具很高的繁殖進(jìn)化研宄價(jià)值，深受廣大醫(yī)藥、科研和水產(chǎn)工作者的青睞。目前關(guān)于海馬的研宄多數(shù)集中于保護(hù)生物學(xué)、養(yǎng)殖生態(tài)學(xué)、基礎(chǔ)行為學(xué)和臨床藥理學(xué)等方面，而關(guān)于生理學(xué)的研宄，特別是受水中污染物、病原微生物及人為干擾源的影響時(shí)生殖生理、免疫生理、內(nèi)分泌生理，甚至遺傳生理的響應(yīng)，相對(duì)甚少。宄其原因，主要是由于海馬血液不易米集。
[0004]由于尾動(dòng)脈注射器采血法普遍適用于尾動(dòng)脈較為粗大的中大型魚(yú)類，不適合海馬等小型魚(yú)類，因此，目前海馬采血的方法主要是心臟采血法和斷尾采血法，但這兩者仍存在很大的弊端。海馬的心臟較小，且位于頭頸部，即鰓蓋后緣，軀干上端最細(xì)窄處，加之海馬經(jīng)常處于頭部向下的姿勢(shì)，給圍心腔的解剖帶來(lái)了很大的難度。即使經(jīng)驗(yàn)豐富的解剖者也經(jīng)常容易誤傷到心臟，導(dǎo)致血液散流至體腔中。海馬心臟采血不穩(wěn)定，一尾海馬成功采集血液，另一尾則沒(méi)有的情況時(shí)有發(fā)生，給實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析帶來(lái)了困擾。此外，心臟采血后的海馬已經(jīng)死亡，無(wú)法做到對(duì)同一海馬的長(zhǎng)期實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。而斷尾采血，雖然操作簡(jiǎn)單，并且能確保被采血的海馬繼續(xù)存活，但是斷尾瞬間血液滲出量有限，大概30-40 μ 1，之后血液會(huì)凝固在斷尾橫截面處，無(wú)法再被注射器或毛細(xì)管吸?。辉偻蠑辔惨淮?，又能滲出20-30 μ I ;這樣連續(xù)斷尾2-3次后，基本就沒(méi)血了。斷尾法采集的血量有限，并且連續(xù)斷尾增加了海馬死亡的危險(xiǎn)，并給海馬帶來(lái)了連續(xù)的應(yīng)激，可能使得第一次斷尾和第二次斷尾的血液成分發(fā)生了變化，不利于研宄的進(jìn)展。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種海馬斷尾采血方法，該方法解決了血液易凝固，采血量少，連續(xù)斷尾刺激的問(wèn)題。
[0006]本發(fā)明的一種海馬斷尾采血方法，包括:
[0007](I)配制魚(yú)類血液抗凝劑；
[0008](2)取步驟⑴中所述的魚(yú)類血液抗凝劑置于離心管；
[0009](3)取鮮活海馬，紗布吸干體表水分，解剖剪剪去一段尾柄；
[0010](4)剪尾后，剩余的尾柄立即插入到步驟(2)中所述的離心管的液面以下；
[0011](5) 一手持尾柄，另一手持離心管，采集血液l_2min ；
[0012](6)采血結(jié)束后，海馬用消毒藥浸泡，之后放回海水繼續(xù)養(yǎng)殖。
[0013]所述步驟(I)中的魚(yú)類血液抗凝劑的組成為:檸檬酸0.48g，檸檬酸鈉1.32g，葡萄糖1.47g，蒸飽水10mlo
[0014]所述步驟(2)中的魚(yú)類血液抗凝劑的體積為0.5ml，離心管的體積為1.5ml。
[0015]所述步驟(3)中的解剖剪經(jīng)75%醫(yī)用酒精浸泡5min。
[0016]所述步驟(3)中剪去尾柄的長(zhǎng)度占尾柄全長(zhǎng)的30-40%。
[0017]所述步驟(6)中的消毒藥為1%的醫(yī)用碘伏。
[0018]所述步驟(6)中的浸泡時(shí)間為30min。
[0019]有益效果
[0020](I)本發(fā)明無(wú)需注射器或毛細(xì)管，而是直接將血液引流到了含抗凝劑的離心管中，有效地解決了血液易凝固的難點(diǎn)，采血量大幅度提升；
[0021 ] (2)斷尾的尾柄一插入到抗凝劑中，尾動(dòng)脈中的血液直流而下，短時(shí)間內(nèi)就能采集足量的血液，并且血液純凈無(wú)其他組織液摻雜；以一條成年的海馬(體高1cm)為例，僅需斷尾I次，l-2min內(nèi)就能采集200-300 μ I的血量，是常規(guī)連續(xù)斷尾采血量的3倍以上；
[0022](3)本發(fā)明除了有效克服常規(guī)斷尾采血法的缺點(diǎn)外，也很好地保留了其優(yōu)點(diǎn)，同樣具有操作簡(jiǎn)單、穩(wěn)定性強(qiáng)、斷尾海馬可存活等特點(diǎn)。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0023]圖1為本發(fā)明方法的示意圖。

【具體實(shí)施方式】
[0024]下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。
[0025]實(shí)施例1
[0026](I)配制魚(yú)類血液抗凝劑:取檸檬酸0.48g，檸檬酸鈉1.32g，葡萄糖1.47g，蒸餾水100ml，充分溶解后置于4°C保存。
[0027](2)用移液器取0.5ml抗凝劑于1.5ml離心管中。
[0028](3)從養(yǎng)殖缸中取雌雄灰海馬(Hippocampus erectus)各一尾，用紗布吸干體表水分，測(cè)量體高和濕重后，用75%醫(yī)用酒精消毒過(guò)的解剖剪剪去一段尾柄，剪去尾柄的長(zhǎng)度占尾柄全長(zhǎng)的1/3。
[0029](4)剪尾后，立即將斷尾的海馬的剩余尾柄插入到含0.5ml抗凝劑的離心管中，尾柄位于抗凝劑液面以下。
[0030](5) 一手持離心管，另一手固定海馬尾柄使其不脫離液面，采血持續(xù)2min。
[0031](6)采血結(jié)束后，斷尾海馬用1%的醫(yī)用碘伏消毒30min，之后放回海水繼續(xù)養(yǎng)殖。
[0032]離心管內(nèi)液體的總體積減去0.5ml抗凝劑，即為海馬采血量。采血結(jié)果顯示:一尾體高為11.5cm，濕重為5.68g的雄性灰海馬采血量為320 μ I，而一尾體高為10.5cm，濕重為5.23g的雌性灰海馬采血量為280 μ 1，足夠滿足常規(guī)分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等研宄所需的血液量。
[0033]實(shí)施例2
[0034](I)配制魚(yú)類血液抗凝劑:取檸檬酸0.48g，檸檬酸鈉1.32g，葡萄糖1.47g，蒸餾水100ml，充分溶解后置于4°C保存。
[0035](2)用移液器取0.5ml抗凝劑于1.5ml離心管中。
[0036](3)從養(yǎng)殖缸中取2尾三斑海馬(Hippocampus trimaculatus)，用紗布吸干體表水分，測(cè)量體高和濕重后，用75%醫(yī)用酒精消毒過(guò)的解剖剪剪去一段尾柄，剪去尾柄的長(zhǎng)度占尾柄全長(zhǎng)的1/3。
[0037](4)剪尾后，立即將斷尾的海馬的剩余尾柄插入到含0.5ml抗凝劑的離心管中，尾柄位于抗凝劑液面以下。
[0038](5) 一手持離心管，另一手固定海馬尾柄使其不脫離液面，采血持續(xù)2min。
[0039](6)采血結(jié)束后，斷尾海馬用I %的醫(yī)用碘伏消毒30min，之后放回海水繼續(xù)養(yǎng)殖。
[0040]離心管內(nèi)液體的總體積減去0.5ml抗凝劑，即為海馬采血量。采血結(jié)果顯示:一尾體高為8.7cm，濕重為2.77g的三斑海馬采血量為190 μ 1，而另一尾體高為8.4cm，濕重為2.40g的三斑海馬采血量為170 μ 1，足夠滿足常規(guī)分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等研宄所需的血液量。
【權(quán)利要求】
1.一種海馬斷尾采血方法，包括: (1)配制魚(yú)類血液抗凝劑； (2)取步驟(1)中所述的魚(yú)類血液抗凝劑置于離心管； (3)取鮮活海馬，紗布吸干體表水分，解剖剪剪去一段尾柄； (4)剪尾后，剩余的尾柄立即插入到步驟(2)中所述的離心管的液面以下； (5)一手持尾柄，另一手持離心管，采集血液l_2min ； (6)采血結(jié)束后，海馬用消毒藥浸泡，之后放回海水繼續(xù)養(yǎng)殖。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海馬斷尾采血方法，其特征在于:所述步驟(1)中的魚(yú)類血液抗凝劑的組成為:檸檬酸0.48g，檸檬酸鈉1.32g，葡萄糖1.47g，蒸餾水100ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海馬斷尾采血方法，其特征在于:所述步驟(2)中的魚(yú)類血液抗凝劑的體積為0.5ml，離心管的體積為1.5ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海馬斷尾采血方法，其特征在于:所述步驟(3)中的解剖剪經(jīng)75%醫(yī)用酒精浸泡5min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海馬斷尾采血方法，其特征在于:所述步驟(3)中剪去尾柄的長(zhǎng)度占尾柄全長(zhǎng)的30-40%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海馬斷尾采血方法，其特征在于:所述步驟(6)中的消毒藥為1%的醫(yī)用碘伏。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海馬斷尾采血方法，其特征在于:所述步驟(6)中的浸泡時(shí)間為30min。
【文檔編號(hào)】A61B5/153GK104434137SQ201410641836
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月14日
【發(fā)明者】林聽(tīng)聽(tīng), 張東, 席寅峰, 劉鑫 申請(qǐng)人:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所