氧化苦參堿聚乳酸微球的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種氧化苦參堿聚乳酸微球的制備方法，包括以下步驟：1）取明膠在水中溶解得明膠溶液；2）將氧化苦參堿、聚乳酸用二氯甲烷溶解；3）在攪拌條件下將步驟2）所得溶液緩慢加入明膠溶液中，繼續(xù)攪拌得微球溶液；4）離心，所得沉淀用水清洗得固體沉淀；5）將步驟4）所得固體沉淀冷凍干燥即得氧化苦參堿微球。采用本發(fā)明的方法制備得到的氧化苦參堿聚乳酸微球的平均粒徑為8～11μm，被肺部的毛細血管截留濃集于肺，裝載其中的氧化苦參堿隨聚乳酸的分解逐漸釋放到肺部的毛細血管，使得肺部的氧化苦參堿始終保持較高濃度，避免因氧化苦參堿半衰期短導致的有效濃度維持時間短，達到對肺部疾病持續(xù)、靶向治療作用。
【專利說明】氧化苦參堿聚乳酸微球的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及靶向治療藥物領(lǐng)域，尤其涉及一種氧化苦參堿聚乳酸微球的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]氧化苦參堿(Oxymatrine)是苦參等豆科槐屬植物中生物堿的主要成分。大量的藥理和臨床研究發(fā)現(xiàn)，氧化苦參堿具有抗病毒、抗肝纖維化、強心、降壓、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛等多種藥理作用，對肺癌、胃癌細胞誘導的血管內(nèi)皮細胞增殖具有抑制作用，近年的研究揭示，氧化苦參堿對于哮喘、肺損傷、肺纖維化、慢性阻塞性肺疾病的發(fā)展均具有良好的治療效果，具有減輕肺部炎癥、抑制成纖維細胞增殖、降低自由基產(chǎn)生等多種功效，顯示了該種藥物在治療多種肺部疾病方面的應用前景。
[0003]但根據(jù)現(xiàn)有資料發(fā)現(xiàn)，氧化苦參堿有如下藥動學不足:
[0004]1.半衰期短:氧化苦參堿注射給藥后，大鼠的消除半衰期約5min，健康人的消除半衰期僅為130.4min，導致氧化苦參堿有效濃度維持時間短，難以長時間作用肺部。
[0005]2.不具有靶向性:給藥后，氧化苦參堿在體內(nèi)隨血液全身分布，原型藥物及其代謝物主要分布在腎臟，極少量進入肺臟，有效作用于肺臟的劑量過小。而哮喘、肺纖維化、慢性阻塞性肺疾病等均為慢性疾病，長期使用，可能增加藥物對其它器官毒性反應發(fā)生率，降低患者依從性。
[0006]微球(Microsphere)是指藥物分子分散或被吸附在高分子聚合物載體中而形成的微粒分散系統(tǒng)，其微粒直徑在I?300 μ m，可用于動脈栓塞、口服和注射給藥。藥物制成微球后，主要特點是:
[0007]1.靶向性:微球在體內(nèi)的分布情況主要取決于微球的粒徑大小，微球粒徑在
2.5?10 μ m的毫微粒會濃集于單核巨噬系統(tǒng)；大于7 μ m的微球?qū)环尾康拿氀芙亓魸饧诜?；粒?0 μ m以上的濃集于動脈栓塞。
[0008]2.緩釋性:微球中的藥物釋放需依賴載體材料的降解，釋放有一個潤濕、溶解、擴散的過程，使藥物釋放緩慢，達到藥物長久發(fā)揮功效的目的。
[0009]國外已有多種微球制劑上市，如曲普瑞林微球注射劑(triptorelin, Decapeptyl)、戈舍瑞林微球注射劑(goserelin, Zoladex),亮丙瑞林微球注射劑(leuprorelin, Enantone)等。也有多種肺祀向抗結(jié)核或抗腫瘤藥物微球研制成功,如利福平明膠微球、卡鉬明膠微球、依托泊苷白蛋白微球等，顯示了微球制劑在肺部腫瘤、肺結(jié)核以及肺部感染治療中良好的應用前景。但是，由于氧化苦參堿水溶性高，難以溶于有機溶劑，導致微球中氧化苦參堿中含量極低。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種氧化苦參堿聚乳酸微球及其制備方法，通過特定輔料的選擇，最佳配比、濃度的篩選，制備得到的氧化苦參堿聚乳酸微球粒徑、含藥量較為理想，靶向濃集于肺部，且具有良好的生物相容性和生物可降解性，氧化苦參堿釋放緩慢，能長久發(fā)揮治療肺部疾病的功效。
[0011]本發(fā)明的技術(shù)方案是:一種氧化苦參堿聚乳酸微球的制備方法，包括以下步驟:
[0012]I)取明膠在水中溶解得明膠溶液；
[0013]2)將氧化苦參堿、聚乳酸用二氯甲烷溶解；
[0014]3)在攪拌條件下將步驟2)所得溶液緩慢加入明膠溶液中，繼續(xù)攪拌得微球溶液；
[0015]4)離心，所得沉淀用水清洗得固體沉淀；
[0016]5)將步驟4)所得固體沉淀冷凍干燥即得氧化苦參堿微球；
[0017]所述氧化苦參堿、聚乳酸和明膠的質(zhì)量比為1:0.8-1.2:0.8-1.2，所述明膠溶液的濃度為0.5g/100ml。
[0018]步驟2)氧化苦參堿的濃度為4g/100ml。
[0019]作為優(yōu)選技術(shù)方案，步驟2)為超聲溶解。
[0020]作為優(yōu)選技術(shù)方案，步驟3)中氧化苦參堿溶解液和明膠溶解液的體積比為1:8。
[0021]作為優(yōu)選技術(shù)方案，步驟3)的具體操作為:在1650-1750rpm/min攪拌下，將步驟
2)所得溶液緩慢加入明膠溶液中，攪拌1min,于900rpm/min下攪拌2_3小時,得微球溶液。
[0022]作為進一步優(yōu)選，氧化苦參堿、聚乳酸和明膠的質(zhì)量比為1:1:1。
[0023]采用上述技術(shù)方案，以生物可降解高分子材料聚乳酸為載體，聚乳酸在體內(nèi)分解的終產(chǎn)物為水和二氧化碳，故制得的氧化苦參堿聚乳酸微球具有良好的生物相容性和生物可降解性；氧化苦參堿聚乳酸微球的平均粒徑為8?11 μ m，被肺部的毛細血管截留濃集于肺，裝載其中的氧化苦參堿隨聚乳酸的分解逐漸釋放到肺部的毛細血管，使得肺部的氧化苦參堿始終保持較高濃度，避免因氧化苦參堿半衰期短導致的有效濃度維持時間短，達到對肺部疾病持續(xù)、靶向治療作用。因此，本發(fā)明還提供一種氧化苦參堿聚乳酸微球在制備肺部疾病靶向治療藥物中的用途。
[0024]本發(fā)明所用試劑中，氧化苦參堿為陜西慧科植物開發(fā)有限公司產(chǎn)品，聚乳酸山東濟南岱罡生物工程有限公司產(chǎn)品，明膠購于山東淄博歐昌明膠銷售有限公司，下面結(jié)合【具體實施方式】作進一步的說明。

【具體實施方式】
[0025]實施例1:氧化苦參堿微球制備
[0026]處方:
[0027]氧化苦參堿:1.0g
[0028]聚乳酸:1.0g
[0029]二氯甲烷:25ml
[0030]明膠:0.5% (g/ml), 200ml
[0031]①稱取明膠5.0g于100ml純化水中溶解，得0.5%的明膠溶液，待用；
[0032]②稱取氧化苦參堿l.0g，聚乳酸1.0g，于25ml 二氯甲烷中溶解，超聲I小時，待用；
[0033]③量取200ml 0.5%的明膠溶液于500ml燒杯中，1700rpm/min下緩慢加入超聲過后的氧化苦參堿和聚乳酸溶液，攪拌1min,于900rpm/min下攪拌2_3小時,得微球溶液；
[0034]④用50ml離心管離心微球溶液:于4000rpm/min下離心15min,棄上清液,用純化水20ml清洗沉淀固體，重復清洗共3次，得固體沉淀；
[0035]⑤將清洗干凈的固體沉淀于_80°C冰箱冷凍30min，放入凍干機冷凍干燥48小時，即得氧化苦參堿微球。
[0036]實施例2:氧化苦參堿微球制備
[0037]處方:
[0038]氧化苦參堿:1.0g
[0039]聚乳酸:0.8g
[0040]二氯甲烷:20ml
[0041]明膠:0.5%(g/ml), 200ml
[0042]①稱取明膠5.0g于100ml純化水中溶解，得0.5%的明膠溶液，待用；
[0043]②稱取氧化苦參堿1.(^，聚乳酸0.88，于20!111 二氯甲烷中溶解，超聲I小時，待用；
[0044]③量取200ml 0.5%的明膠溶液于500ml燒杯中，1700rpm/min下緩慢加入超聲過后的氧化苦參堿和聚乳酸溶液，攪拌1min,于900rpm/min下攪拌2_3小時,得微球溶液；
[0045]④用50ml離心管離心微球溶液:于4000rpm/min下離心15min,棄上清液,用純化水20ml清洗沉淀固體，重復清洗共3次，得固體沉淀；
[0046]⑤將清洗干凈的固體沉淀于_80°C冰箱冷凍30min，放入凍干機冷凍干燥48小時，即得氧化苦參堿微球。
[0047]實施例3:氧化苦參堿微球制備
[0048]處方:
[0049]氧化苦參堿:1.0g
[0050]聚乳酸:1.2g
[0051]二氯甲烷:30ml
[0052]明膠:0.5% (g/ml), 200ml
[0053]①稱取明膠5.0g于100ml純化水中溶解，得0.5%的明膠溶液，待用；
[0054]②稱取氧化苦參堿l.0g，聚乳酸1.2g，于30ml 二氯甲烷中溶解，超聲I小時，待用；
[0055]③量取200ml 0.5%的明膠溶液于500ml燒杯中，1700rpm/min下緩慢加入超聲過后的氧化苦參堿和聚乳酸溶液，攪拌1min,于900rpm/min下攪拌2_3小時,得微球溶液；
[0056]④用50ml離心管離心微球溶液:于4000rpm/min下離心15min,棄上清液,用純化水20ml清洗沉淀固體，重復清洗共3次，得固體沉淀；
[0057]⑤將清洗干凈的固體沉淀于_80°C冰箱冷凍30min，放入凍干機冷凍干燥48小時，即得氧化苦參堿微球。
[0058]對比例1:
[0059]處方:
[0060]氧化苦參堿:Ig
[0061]聚乳酸:0.5ml
[0062]二氯甲烷:5ml
[0063]聚乙烯醇:0.5ml, I % (g/ml)
[0064]①稱取聚乙烯醇1.0g于10ml純化水中溶解，得I %的明膠溶液，待用；
[0065]②稱取氧化苦參堿1.(^，聚乳酸0.51111，于51111 二氯甲烷中溶解，超聲I小時，待用；
[0066]③量取0.5ml I %的聚乙烯醇溶液于10ml燒杯中，1700rpm/min下緩慢加入超聲過后的氧化苦參堿和聚乳酸溶液，攪拌1min,于900rpm/min下攪拌2_3小時,得微球溶液；
[0067]④用50ml離心管離心微球溶液:于4000rpm/min下離心15min,棄上清液,用純化水20ml清洗沉淀固體，重復清洗共3次，得固體沉淀；
[0068]⑤將清洗干凈的固體沉淀于_80°C冰箱冷凍30min，放入凍干機冷凍干燥48小時，即得氧化苦參堿微球。
[0069]氧化苦參堿微球載藥量的測定
[0070]①色譜條件
[0071]流動相:乙腈:乙醇:3%磷酸液=85:10:5
[0072]流速:1.0ml/min ；
[0073]檢測波長:220nm；
[0074]進樣體積:20 μ I。
[0075]②檢測結(jié)果
[0076]用高效液相色譜儀檢測樣品，計算得到氧化苦參堿聚乳酸微球平均載藥量:實施例I為6.08% ;實施例2為5.94% ;實施例3為5.96% ;對比例I為3.29%.
[0077]微球性質(zhì)分析:氧化苦參堿聚乳酸微球形態(tài)和粒徑分布觀察
[0078]I)氧化苦參堿聚乳酸微球形態(tài)觀察:
[0079]氧化苦參堿聚乳酸微球的掃描電子顯微鏡圖顯示成球性良好，均勻。
[0080]2)氧化苦參堿聚乳酸微球粒徑檢測:
[0081]將所制氧化苦參堿微球粒徑在10 μ m左右(8-11 μ m)所占百分比作為考察指標，實施例1-3分別為78%，75%和72%，符合肺靶向要求，制得氧化苦參堿聚乳酸微球富集于肺部的毛細血管；對比例I為55%。
[0082]3)氧化苦參堿聚乳酸微球穩(wěn)定性實驗:
[0083]將制得的氧化苦參堿聚乳酸微球置于4°C的冰箱，分別于3個月、6個月后取出觀察，實施例1-3制備氧化苦參堿聚乳酸微球形態(tài)如初，穩(wěn)定性良好；對比例I制備的微球3個月時形態(tài)變化明顯。
[0084]4.氧化苦參堿聚乳酸微球藥物緩釋性和靶向?qū)嶒?br> [0085]I)氧化苦參堿聚乳酸微球體外釋藥的實驗
[0086]采用透析法進行微球體外釋藥試驗。精密取氧化苦參堿或氧化苦參堿聚乳酸微球，加入Iml生理鹽水使氧化苦參堿溶解或微球混懸后，分別裝入透析袋中，將袋口扎緊，置于盛有50ml生理鹽水的溶出杯中，于37土 1°C恒溫，50r/min的轉(zhuǎn)速下持續(xù)轉(zhuǎn)動，定時取釋放液lmL，立即補加等量的生理鹽水。將取出的釋放液采用HPLC檢測，計算藥物的累積釋放百分率(％)。
[0087]未經(jīng)包裹的OM在體外的釋藥很快，15分鐘時藥物已達42.9%，Ih釋放92.8%。實施例1-3制備的氧化苦參堿聚乳酸微球以較恒定的速度緩慢釋放藥物，12h時累積釋藥量達86.5%左右，以后基本保持在88-89%，具有明顯的緩釋效應。對比例I制備的微球2h時釋放藥物75.2%，緩釋效應不明顯。
[0088]2)聚乳酸微球體內(nèi)分布實驗
[0089]6?8周齡SPF級BALB/C小鼠(20?22g，由第三軍醫(yī)大學實驗動物中心提供)。Super FLuor750, SE (cy7_SE，購自北京泛博生物化學有限公司)。
[0090](I) cy7-SE-氧化苦參堿聚乳酸微球制備方法:
[0091]①稱取明膠0.5g于10ml純化水中溶解，得0.5%的明膠溶液，待用；
[0092]②稱取氧化苦參堿50mg，聚乳酸(聚乳酸)50mg，cy7_SE10mg，于Iml 二氯甲烷中溶解，超聲I小時，待用；
[0093]③量取1ml 0.5%的明膠溶液于20ml燒杯中，緩慢加入超聲過后的氧化苦參堿、cy7-SE和聚乳酸溶液，高剪切乳化機6000rpm/min攪拌5min，然后用磁力攪拌器攪拌2_3小時，得微球溶液；
[0094]④用1ml離心管離心微球溶液:于4000rpm/min下離心15min,棄上清液,用5ml
純水清洗沉淀固體，重復清洗共3次，得固體沉淀；
[0095]⑤將清洗干凈的固體沉淀于_80°C冰箱冷凍30min，放入凍干機冷凍干燥48小時，即得cy7-SE_氧化苦參堿聚乳酸微球。
[0096](2) cy7-SE-氧化苦參堿聚乳酸微球體內(nèi)分布觀察
[0097]稱取9mg cy7-SE_氧化苦參堿聚乳酸微球，加Iml無菌生理鹽水，2000rpm離心，去上清，沉淀加0.4ml無菌生理鹽水重懸，尾靜脈注射，在預定時相點活殺動物，活體成像系統(tǒng)觀察微球組織分布情況。
[0098]實驗結(jié)果顯示，注射后cy7-SE_氧化苦參堿聚乳酸微球主要分布于肺組織，其它組織幾乎未見熒光，肺組織的熒光強度從30min、2h、24h、168h逐漸降低。說明本方法制備的微球具有肺靶向性，并具有緩釋性。
[0099]結(jié)論:
[0100]1.本發(fā)明制備的氧化苦參堿聚乳酸微球，成球性良好，均勻，其平均粒徑為8-11 μ m，符合肺靶向要求。
[0101]2.本發(fā)明制備的微球在小鼠體內(nèi)分布具有肺靶向性，體外釋放具有明顯緩釋性。
[0102]上述實施例僅例示性說明本發(fā)明的原理及其功效，而非用于限制本發(fā)明。任何熟悉此技術(shù)的人士皆可在不違背本發(fā)明的精神及范疇下，對上述實施例進行修飾或改變。因此，舉凡所屬【技術(shù)領(lǐng)域】中具有通常知識者在未脫離本發(fā)明所揭示的精神與技術(shù)思想下所完成的一切等效修飾或改變，仍應由本發(fā)明的權(quán)利要求所涵蓋。
【權(quán)利要求】
1.一種氧化苦參堿聚乳酸微球的制備方法，包括以下步驟: 1)取明膠在水中溶解得明膠溶液； 2)將氧化苦參堿、聚乳酸用二氯甲烷溶解； 3)在攪拌條件下將步驟2)所得溶液緩慢加入明膠溶液中，繼續(xù)攪拌得微球溶液； 4)離心，所得沉淀用水清洗得固體沉淀； 5)將步驟4)所得固體沉淀冷凍干燥即得氧化苦參堿微球； 所述氧化苦參堿、聚乳酸和明膠的質(zhì)量比為1:0.8-1.2:0.8-1.2，所述明膠溶液的濃度為 0.5g/100ml。
2.如權(quán)利要求1所述氧化苦參堿聚乳酸微球的制備方法，其特征在于步驟2)氧化苦參堿的濃度為4g/100ml。
3.如權(quán)利要求1或2所述氧化苦參堿聚乳酸微球的制備方法，其特征在于步驟2)為超聲溶解。
4.如權(quán)利要求1或2所述氧化苦參堿聚乳酸微球的制備方法，其特征在于步驟3)中氧化苦參堿溶解液和明膠溶解液的體積比為1:8。
5.如權(quán)利要求1或2所述氧化苦參堿聚乳酸微球的制備方法，其特征在于步驟3)的具體操作為:在1650-1750rpm/min攪拌下，將步驟2)所得溶液緩慢加入明膠溶液中，攪拌lOmin,于900rpm/min下攪拌2_3小時,得微球溶液。
6.如權(quán)利要求1-5中任意方法制備得到的氧化苦參堿聚乳酸微球在制備肺部疾病靶向治療藥物中的用途。
【文檔編號】A61K9/16GK104382858SQ201410590100
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年10月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月28日
【發(fā)明者】陳曉紅, 蘇敏, 馮川東, 陳波, 楊曉洪, 劉濤, 陳鑫 申請人:中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學