一種治療子宮肌瘤的藥物組合物及其制備方法與應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥領域，具體涉及一種治療子宮肌瘤的藥物組合物。該藥物組合物是由以下重量份的原料制成的：小茴香1～3，蒲黃1～3，桃仁1～3，鴉跖花1～3。該藥物組合物采用藥學中常規(guī)的制藥方法制備成片劑、丸劑、硬膠囊劑、顆粒劑、口服液。該藥物組合物可用于制備治療子宮肌瘤以及子宮內膜異位癥的藥物。
【專利說明】一種治療子宮肌瘤的藥物組合物及其制備方法與應用

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥領域，涉及一種由小茴香、蒲黃、桃仁、鴉跖花組成的具有治療子 宮肌瘤作用的藥物組合物。
[0002]

【背景技術】
[0003] 子宮肌瘤是發(fā)生在女性生殖器官中的一種常見良性腫瘤，也叫做子宮平滑肌瘤， 癥狀不明顯，中醫(yī)里認為是由于氣滯血瘀，臟腑功能失調而引起。
[0004] 子宮肌瘤有無癥狀及其輕重，主要決定于肌瘤的部位、大小、數(shù)目以及并發(fā)癥。有 的肌瘤小、生長緩慢、無癥狀，可以終生未被發(fā)現(xiàn)。近年由于B型超聲檢查的廣泛應用，不少 患者是因常規(guī)查體，經(jīng)B超檢查發(fā)現(xiàn)有子宮肌瘤，而其本人并無癥狀。多數(shù)患者是因有癥狀 而來就醫(yī)。子宮肌瘤常見的癥狀有子宮出血、腹部腫塊、陰道溢液、壓迫癥狀等。
[0005] 子宮肌瘤是雌激素敏感性腫瘤，多見于性激素功能活躍的育齡婦女，少見于絕經(jīng) 后婦女。臨床往往發(fā)現(xiàn)當外源性給予雌激素或妊娠時，子宮肌瘤迅速增大；絕經(jīng)后出現(xiàn)的低 雌二醇（E2)低孕酮（P)狀態(tài)可以引起肌瘤的縮小、甚至消失。故長期以來，雌激素一直被認 為是子宮肌瘤發(fā)生和發(fā)展的促進劑，即傳統(tǒng)的"雌激素假說"。然而目前許多研究表明，子宮 肌瘤患者外周血循環(huán)中的E2、P水平與正常人并無顯著性差別，而局部肌瘤組織內E2、P含 量卻高于同一子宮正常平滑肌組織內的含量。因此不能確定血清E2、P水平與子宮肌瘤發(fā) 生發(fā)展的直接關系，而可能在于肌瘤組織局部對激素的敏感性。激素主要的生物學效應靠 與受體結合后才能得以實現(xiàn)。靶組織保留激素的多少取決于其細胞內相應受體的含量；在 同一激素水平下，激素在靶組織中產(chǎn)生生物學效應的強弱也取決于靶細胞受體的含量，說 明肌瘤的生長與ER、PR的水平密切相關，即所謂受體效應。
[0006] 本發(fā)明提供了一種治療子宮肌瘤的藥物組合物，研究對雌、孕激素負荷法造模的 實驗性子宮肌瘤大鼠的子宮肌組織進行ER、PR表達水平的測定。結果顯示：本發(fā)明提供藥 物組合物組大鼠子宮肌層ER、PR表達水準較模型組大鼠有所下降。
[0007] 細胞凋亡也稱程式性細胞死亡，是細胞衰老、死亡過程的主要形式。細胞凋亡是體 內細胞的一個生理性調節(jié)機制。Bcl-2和Bax在體內通常以二聚體形式發(fā)揮作用。若其中 Bcl-2蛋白同聚體形成則抑制細胞凋亡，Bax蛋白同聚體形成則促進細胞凋亡。本研究發(fā) 現(xiàn)：在空白組大鼠子宮中，Bcl-2呈低表達，Bax呈高表達。這提示在正常大鼠子宮肌層組 織中Bax占優(yōu)勢，Bcl-2表達弱，可能使之對凋亡更敏感，更易發(fā)生凋亡。模型組大鼠子宮 中Bcl-2表達增加，Bax的表達減少，提示Bcl-2高表達可能是肌瘤的特征，導致肌瘤不斷 增大。本發(fā)明藥物組合物能夠增加子宮肌瘤大鼠 Bax的表達，降低大鼠大鼠子宮平滑肌細 胞的胞漿中Bcl-2蛋白陽性細胞數(shù)量。


【發(fā)明內容】

[0008] 本發(fā)明的目的是提供一種治療子宮肌瘤的藥物組合物。
[0009] 本發(fā)明的另一目的是提供藥物組合物的制備方法。
[0010] 本發(fā)明的還提供該藥物組合物在制備治療子宮肌瘤以及子宮內膜異位癥藥物中 的應用。
[0011] 本發(fā)明的目的是通過以下方式實現(xiàn)的： 一種治療子宮肌瘤的藥物組合物，是由以下重量份的原料制成的：小茴香1?3,蒲黃 1?3,桃仁1?3,鴉跖花1?3。
[0012] 所述藥物組合物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的：小茴香1，蒲黃2,桃仁3,鴉 跖花1。
[0013] 所述藥物組合物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的：小茴香2,蒲黃3,桃仁2,鴉 跖花2。
[0014] 所述藥物組合物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的：小茴香3,蒲黃1，桃仁1，鴉 跖花3。
[0015] 所述藥物組合物優(yōu)選是由以下重量份的原料制成的：小茴香1，蒲黃1，桃仁1，鴉 跖花1。
[0016] 所述藥物組合物采用藥學中常規(guī)的制藥方法制備成口服制劑。
[0017] 所述藥物組合物制備成的口服制劑為片劑、丸劑、硬膠囊劑、顆粒劑、口服液。
[0018] 所述藥物組合物優(yōu)選采用如下方法制備：取小茴香、蒲黃、桃仁、鴉跖花，混合，力口 入5?10倍量的水煎煮2?4次，每次0. 5?2小時，提取液合并，濾過，濾液濃縮，干燥， 粉碎成細粉，加入輔料，混勻，裝入硬膠囊，即得。
[0019] 所述藥物組合物可用于制備治療子宮肌瘤的藥物。
[0020] 所述藥物組合物還可用于制備治療子宮內膜異位癥的藥物。
[0021] 本發(fā)明藥物組合物中的小茴香為傘形科茴香屬植物茴香Foeniculumvulgare Mill.的干燥果實。蒲黃為香蒲科香蒲屬植物狹葉香蒲Typha angustifolia L.、東方香蒲 T.orientalis Presl、寬葉香蒲 T.latifolia L·、長荀香蒲 T.angustata Bory et Chaub. 的干燥花粉。桃仁為薔薇科桃屬植物桃Amygdalus persica L. [Prunus persica (L.) Batsch.]或山桃 A. davidiana (Carr. ) C. de Vos ex Henry [Prunus davidiana (Carr.) Franch.]的干燥種子。鴉妬花為毛茛科植物鴉妬花屬植物鴉妬花Oxygraphis glacialis (Fisch. ) Bunge的干燥花及全草。
[0022] 通過如下實驗研究驗證本發(fā)明的技術效果： 實驗例1 :本發(fā)明藥物組合物治療子宮內膜異位癥的實驗研究 本研究以雌、孕激素負荷法建立大鼠實驗性子宮肌瘤模型。研究本發(fā)明藥物組合物對 其的干預，觀察子宮形態(tài)學改變，并用免疫組化法檢測雌激素受體（ER)、孕激素受體（PR)、 Bcl-2/Bax蛋白在子宮肌層組織中的表達情況，探討本發(fā)明藥物組合物治療子宮肌瘤的作 用效果與作用機制。
[0023] -、材料與方法 1.動物雌性未孕SD大鼠，體質量200?250g，由南京中醫(yī)藥大學二級動物實驗室 飼養(yǎng)（SPF級)，飼養(yǎng)條件：室溫（200±20) °C，相對濕度（60±5)%。實驗飼料：湯山龍泉牌 實驗鼠顆粒飼料。
[0024] 2.受試藥物與試劑 2. 1本發(fā)明藥物組合物：取干燥的小茴香250g、蒲黃250g、桃仁250g、鴉跖花250g，力口 5000mL水煎煮，煎煮2次，每次1小時，提取液合并，濾過，濾液濃縮，干燥，加入蒸餾水中，制 成l.Og生藥/mL濃度的溶液。
[0025] 2. 2對比藥物組合物A :取干燥的小茴香333g、蒲黃333g、桃仁333g，加5000mL 水煎煮，煎煮2次，每次1小時，提取液合并，濾過，濾液濃縮，干燥，加入蒸餾水中，制成1. 0g 生藥/mL濃度的溶液。
[0026] 2. 3對比藥物組合物B ::取干燥的蒲黃333g、桃仁333g、鴉跖花333g，加5000mL 水煎煮，煎煮2次，每次1小時，提取液合并，濾過，濾液濃縮，干燥，加入蒸餾水中，制成1. 0g 生藥/mL濃度的溶液。
[0027] 2. 4對比藥物組合物C :取干燥的桃仁333g、鴉跖花333g、小茴香333g，加5000mL 水煎煮，煎煮2次，每次1小時，提取液合并，濾過，濾液濃縮，干燥，加入蒸餾水中，制成1. 0g 生藥/mL濃度的溶液。
[0028] 2. 5對比藥物組合物D :取干燥的鴉跖花333g、小茴香333g、蒲黃333g，加5000mL 水煎煮，煎煮2次，每次1小時，提取液合并，濾過，濾液濃縮，干燥，加入蒸餾水中，制成1. 0g 生藥/mL濃度的溶液。
[0029] 2.6對比藥物組合物E:取干燥的小茴香 200g、蒲黃 200g、桃仁 200g、鴉跖花 200g、川楝子200g，加5000mL水煎煮，煎煮2次，每次1小時，提取液合并，濾過，濾液濃縮， 干燥，加入蒸餾水中，制成1. 〇g生藥/mL濃度的溶液。
[0030] 2. 7對比藥物組合物F:取干燥的小茴香200g、蒲黃200g、桃仁200g、鴉跖花 200g、當歸200g，加5000mL水煎煮，煎煮2次，每次1小時，提取液合并，濾過，濾液濃縮，干 燥，加入蒸餾水中，制成1. 〇g生藥/mL濃度的溶液。
[0031] 2.8對比藥物組合物6:取干燥的小茴香20(^、蒲黃20(^、桃仁20(^、鴉跖花 200g、木香200g，加5000mL水煎煮，煎煮2次，每次1小時，提取液合并，濾過，濾液濃縮，干 燥，加入蒸餾水中，制成1. 〇g生藥/mL濃度的溶液。
[0032] 2.9陽性對照藥物桂枝茯苓膠囊：江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，規(guī)格： 〇. 31g。將桂枝茯苓膠囊內藥物加入蒸餾水中制成0. 04g/mL濃度的溶液。
[0033] 2. 10兔抗大鼠 ER、PR、Bcl-2、Bax多克隆抗體：購自北京博奧森生物技術有限公 司。
[0034] 3.造模與分組 3. 1造模 以雌、孕激素負荷法建立大鼠實驗性子宮肌瘤模型，選用SD大鼠，隨機分為子宮肌瘤 造模組及空白對照組兩組。造模方法參照文獻報導（易明娟.宮寧口服液治療子宮肌瘤 的實驗研究.中藥藥理與臨床，1996,12 (4) :41-43)，造模組給予肌肉注射苯甲酸雌二醇 0. 06mL/只（含藥量0. 12mg)，3次/周（周一、三、五)，共16周，第10周起加黃體酮0. 05mL/ 只（含藥量lmg)，2次/周（周二、四），共7周?？瞻讓φ战M給與肌肉注射高溫滅菌花生油 0.05mL/只，3次/周，共16周。與空白對照組相比，模型組大鼠的子宮平滑肌增生明顯，兩 者有顯著差異（P < 〇. 001)，說明該方案造模成功。
[0035] 3.2 分組 造模結束后，隨機分為模型組12只、桂枝茯苓膠囊組12只，本發(fā)明藥物組合物組12 只、對比藥物組合物A組12只、對比藥物組合物B組12只、對比藥物組合物C組12只、對 比藥物組合物D組12只，對比藥物組合物E組12只，對比藥物組合物F組12只，對比藥物 組合物G組12只，另設空白對照組(滅菌花生油造模）12只。
[0036] 4.給藥 造模結束后灌胃給藥。本發(fā)明藥物組合物給予本發(fā)明藥物組合物l〇g生藥/kg，對比藥 物組合物A組給予對比藥物組合物A 10g生藥/kg,對比藥物組合物B組給予對比藥物組合 物B 10g生藥/kg，對比藥物組合物C組給予對比藥物組合物C 10g生藥/kg，對比藥物組 合物D給予對比藥物組合物D 10g生藥/kg，對比藥物組合物E給予對比藥物組合物E 10g 生藥/kg，對比藥物組合物F給予對比藥物組合物F 10g生藥/kg，對比藥物組合物G給予 對比藥物組合物G 10g生藥/kg,桂枝獲茶膠囊組給桂枝獲茶膠囊溶液0. 6g/kg，模型組、對 照組給予飲用水。各組給藥體積均為2mL/100g，l次/日（上午10:00)，共4周。末次給藥 后晚20點各組大鼠禁食14h，次日晨各組大鼠10%水合氯醛靜脈麻醉后頸動脈取血，取血 后采用頸椎脫白方法處死大鼠并取子宮，10%磷酸緩沖福爾馬林固定。
[0037] 5.觀察指標 5.1子宮組織形態(tài)學觀察以10%福爾馬林固定子宮，石蠟包埋切片，HE染色，顯微鏡 下觀察子宮組織學形態(tài)變化。平滑肌細胞增生程度評分標準： (-):子宮肌層未見增厚，未見有炎性浸潤，結構正常。
[0038] ( + ):子宮肌層增厚不明顯，輕度炎性浸潤。
[0039] (++):子宮肌層輕度增厚，炎細胞浸潤較明顯。
[0040] (+++):子宮肌層明顯增厚，炎細胞浸潤較重。
[0041] 5.2免疫組織學觀察 用免疫組化法檢測子宮肌瘤細胞內ER、PR、Bcl-2/Bax在子宮肌瘤組織中的表達情況。 ER :雌激素是子宮肌瘤生長的主要刺激因素，并發(fā)現(xiàn)雌激素是通過其受體而發(fā)揮作用的。 PR :孕激素在子宮肌瘤的發(fā)病中有重要作用，與雌激素起協(xié)調作用。孕激素受體介入與肌瘤 的生長有關。Bcl-2和Bax :Bcl-2是一種原癌基因，可阻止凋亡并延長細胞壽命，Bax基因 能對抗Bcl-2的活性，有直接促進凋亡的功能。
[0042] 分級標準：綜合陽性細胞所占比例和染色強度進行半定量判定。染色強度按下列 標準評定： 陰性為0分； 染色雖弱但明顯強于陰性對照者為1分； 染色強度中等者為2分； 染色強者為3分。
[0043] 染色的陽性細胞所占比只評定標準為： 陽性細胞數(shù)〈5%為陰性：0分； 6%?15%為弱陽性：1分； 16%?30%者為陽性：2分； >31%者為強陽性：3分。
[0044] 綜合評分：兩種評分相加，將結果分為4個等級： 〇?1分為（-); 2分為（+ ); 3?4分為（++); 5?6分為（+++)。
[0045] 按綜合評分的等級來評價切片指標變化情況。
[0046] 6.統(tǒng)計學方法 資料的統(tǒng)計分析應用SPSS13.0統(tǒng)計軟體進行統(tǒng)計，計量資料0

【權利要求】
1. 一種治療子宮肌瘤的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原 料制成的：小茴香1?3,蒲黃1?3,桃仁1?3,鴉跖花1?3。
2. 如權利要求1藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原料制成 的：小茴香1，蒲黃2,桃仁3,鴉妬花1。
3. 如權利要求1藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原料制成 的：小茴香2,蒲黃3,桃仁2,鴉跖花2。
4. 如權利要求1藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原料制成 的：小茴香3,蒲黃1，桃仁1，鴉妬花3。
5. 如權利要求1藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物是由以下重量份的原料制成 的：小茴香1，蒲黃1，桃仁1，鴉妬花1。
6. 如權利要求1?5任意一項所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物采用藥學 中常規(guī)的制藥方法制備成口服制劑。
7. 如權利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物采用藥學中常規(guī)的制 藥方法制備成片劑、丸劑、硬膠囊劑、顆粒劑、口服液。
8. 如權利要求7所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物采用如下方法制備：取 小茴香、蒲黃、桃仁、鴉妬花，混合，加入5?10倍量的水煎煮2?4次，每次0. 5?2小時， 提取液合并，濾過，濾液濃縮，干燥，粉碎成細粉，加入輔料，混勻，裝入硬膠囊，即得。
9. 如權利要求1?5任意一項所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物在制備治 療子宮肌瘤藥物中的應用。
10. 如權利要求1?5任意一項所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物在制備 治療子宮內膜異位癥藥物中的應用。
【文檔編號】A61K36/88GK104096011SQ201410343913
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年7月19日 優(yōu)先權日:2014年7月19日
【發(fā)明者】吳修紅 申請人:吳修紅