一種治療激素性股骨頭壞死的中藥制劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種治療激素性股骨頭壞死的中藥制劑，是由以下原料藥制成的：淫羊藿25～35g，杜仲10～20g，丹參25～35g，川芎10～20g，白芍10～20g，茯苓10～15g，牛膝10～15g，鹿角膠8～12g，香附6～12g，甘草6～12g。制備方法為：取除鹿角膠外的各原料藥，混合，加入水，煎煮，過濾，向?yàn)V液中加入烊化的鹿角膠，然后加入乙醇，靜置，過濾，干燥，加入糊精進(jìn)行干法制粒，即得。本發(fā)明具有以下特點(diǎn)：(1)溫補(bǔ)與活血并用，標(biāo)本兼治，正本清源；(2)溫補(bǔ)藥與行血、斂陰藥合用，使全方溫而不燥，剛?cè)嵯酀?jì)，祛瘀而不傷正，補(bǔ)虛而不雍滯，以達(dá)溫養(yǎng)、通絡(luò)之效。(3)組方嚴(yán)謹(jǐn)，方義明確，搭配合理，通補(bǔ)并用，氣血兼顧。
【專利說明】一種治療激素性股骨頭壞死的中藥制劑
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種治療激素性股骨頭壞死的中藥制劑。
【背景技術(shù)】
[0002]中醫(yī)典籍對股骨頭壞死的記載不多，但其對骨病的總體把握至今仍具有重大的指導(dǎo)意義。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為:“腎藏精”、“腎主骨生髓”?！夺t(yī)精經(jīng)義》曰:“腎藏精，精生髓，髓生骨。髓者，腎精所生，精足則髓足，髓在骨內(nèi)，髓足則骨強(qiáng)”。腎精的充足是骨骼的生長發(fā)育及其生理功能的基礎(chǔ)。若先天稟賦不足，腎精虧虛，腎氣不足，則骨失所養(yǎng)。故有古代醫(yī)家將股骨頭壞死歸為“骨蝕”。根據(jù)髖關(guān)節(jié)疼痛、活動(dòng)受限等臨床表現(xiàn)，也有醫(yī)家將之歸為“骨痹”?！端貑?痹論》曰:“風(fēng)寒濕三氣雜至，合而為痹也……以冬遇此者為骨痹?！栽谟诠莿t重。骨痹不己，復(fù)感于邪，內(nèi)舍于腎”。指出外邪的侵入，阻滯經(jīng)絡(luò)，氣血不暢為發(fā)病的外因。顧松園《醫(yī)鏡》曰:“邪郁病久，風(fēng)變?yōu)榛穑優(yōu)闊?，濕變?yōu)樘怠！惫潜曰颊?，病久不愈，風(fēng)寒濕則化為痰熱，致骨枯而髓弱。然而“骨痹”易將股骨頭壞死與髖骨性關(guān)節(jié)炎相混淆。亦有將之歸于“骨萎”?！端貑?痿論篇》云:“腎氣熱則腰脊不舉，骨枯而髓減發(fā)為骨痿?！I者，水藏也，今水不勝火，則骨枯而髓虛故足不任身發(fā)為骨痿”。指出骨痿的發(fā)病原因?yàn)殛幗蚩萁?，陽氣過盛，傷于腎，腎不生精則骨髓失養(yǎng)，也強(qiáng)調(diào)了腎的生理功能在骨痿發(fā)病中的重要性。
[0003]當(dāng)代中醫(yī)學(xué)者對本病進(jìn)行了廣泛、深入的研究，對SANHl有了更全面更系統(tǒng)的認(rèn)識(shí)。鄧沂等指出“骨痹”、“骨痿”、“骨蝕”是股骨頭壞死的不同發(fā)展階段，不同病理改變，不同證候表現(xiàn)的相應(yīng)病名。即早期以瘀血、氣血閉阻為基本病機(jī)，可稱為“骨痹”;晚期股骨頭失去正常形態(tài)、局部缺損，可稱為“骨蝕”;早期與晚期之間髓減骨枯而筋骨痿軟，則可稱為“骨痿”。內(nèi)因?yàn)闅庋蛔恪⒏文I虛衰，外因?yàn)楦惺芡庑岸舅?、郁而化熱致濕熱蘊(yùn)結(jié)等，病機(jī)為氣血不足，熱劫血瘀、氣血閉阻而筋骨受損、骨骼失養(yǎng)；或肝腎虧虛，筋骨失養(yǎng)，以血瘀、肝腎虧虛為關(guān)鍵。糖皮質(zhì)激素為辛熱燥烈之品，大劑量或久用可耗傷陰精，陰虧血滯，經(jīng)脈不通，而腎精虧虛，骨髓失充，發(fā)為本病。
[0004]因當(dāng)代各醫(yī)家辨證分型尚不統(tǒng)一，治則治法各有側(cè)重，治療激素性股骨頭壞死的方藥眾多。許多學(xué)者通過科學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了大量的中藥方劑的研究，探索其作用機(jī)制。張弛通過對活血通絡(luò)方(雞內(nèi)金、丹參、紅花、當(dāng)歸、川芎、黃芪、白芍、桑寄生、懷牛膝等)的實(shí)驗(yàn)研究，證實(shí)活血通絡(luò)方能夠促進(jìn)PGI2合成，抑制TXA2的產(chǎn)生，緩解激素引起的血管內(nèi)皮損害，保護(hù)血管內(nèi)皮，抑制血管內(nèi)凝血，改善壞死股骨頭局部的血供，阻斷導(dǎo)致股骨頭壞死的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，改善了激素性股骨頭壞死的血瘀狀態(tài)。楊俊興等觀察通絡(luò)生骨膠囊對實(shí)驗(yàn)性激素性股骨頭壞死模型大鼠 血清骨鈣素(BGP)、降鈣素(CT)水平及骨密度的影響。研究結(jié)果顯示通絡(luò)生骨膠囊可升高血清BGP、CT水平及骨密度，認(rèn)為通絡(luò)生骨膠囊對股骨頭壞死的治療作用與其促進(jìn)骨鈣素、降鈣素合成，改善骨密度有關(guān)。齊振熙通過實(shí)驗(yàn)觀察桃紅四物湯(桃仁、紅花、熟地、當(dāng)歸、白芍、川芎)對激素性股骨頭壞死堿性成纖維細(xì)胞生長因子表達(dá)的影響。研究表明桃紅四物湯能促進(jìn)激素性股骨頭缺血壞死模型兔體內(nèi)堿性成纖維細(xì)胞生長因子的表達(dá)，明顯減少股骨頭局部空骨陷窩數(shù)，促進(jìn)壞死股骨頭的修復(fù)。崔省珍對處于臨床觀察階段的中成藥仙靈骨葆膠囊的研究證實(shí):該藥具有提高體內(nèi)鈣、磷水平，提高骨密度，降低血液粘度，擴(kuò)張毛細(xì)血管，改善微循環(huán)及增加雌激素樣作用，還具有抗骨吸收、促進(jìn)骨形成等藥理作用。張弛等用家兔造模對活血通絡(luò)方的進(jìn)一步研究表明，活血通絡(luò)方可明顯改善激素性股骨頭壞死的血液流變學(xué)狀態(tài)，其防治激素性股骨頭壞死的機(jī)理可能是該方具有改善血液流變性和骨微循環(huán)，重建股骨頭血液供應(yīng)，促進(jìn)骨形成等作用。
[0005]綜合上述眾多醫(yī)家對激素性股骨頭壞死的認(rèn)識(shí)、不同治法及實(shí)驗(yàn)研究成果，本申請的發(fā)明人認(rèn)為:激素性股骨頭壞死的發(fā)生以正虛為本，邪實(shí)為標(biāo)。先天不足，或后天失養(yǎng)造成肝腎虧虛，而致生骨充髓能力降低，出現(xiàn)髓枯骨痿，成為激素性股骨頭壞死的內(nèi)在根源；在外邪(激素)襲入的致病因素作用下，造成經(jīng)脈氣血阻塞不暢，髓海瘀滯，髓死骨枯。另加肝腎虧虛，腎精匱乏，脾胃失養(yǎng)，推動(dòng)血行能力降低，致血行遲緩瘀滯，股骨頭失去氣血溫煦、濡養(yǎng)而壞死。虛、瘀兩大病機(jī)在激素性股骨頭壞死的發(fā)病中貫穿始終。由此確立了補(bǔ)腎益精、活血祛瘀的治則治法。其中補(bǔ)虛重在補(bǔ)腎，補(bǔ)腎又重在溫腎壯陽，并提供了一種治療激素性股骨頭壞死的中藥制劑——補(bǔ)腎活血膠囊。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供了一種治療激素性股骨頭壞死的中藥制劑(補(bǔ)腎活血膠囊)。本發(fā)明的補(bǔ)腎活血膠囊，具有以下功效:活血化瘀，補(bǔ)腎壯骨?；钛c補(bǔ)腎兼顧，標(biāo)本同治。與發(fā)明人對激素性股骨頭壞死的病機(jī)認(rèn)識(shí)及治則治法相一致，且大量的臨床結(jié)果顯示補(bǔ)腎活血膠囊對激素性股骨頭壞死早期的病例療效顯著，具有堅(jiān)實(shí)的臨床實(shí)踐基礎(chǔ)。探討研究其主要作用機(jī)制為中藥臨床治療激素性股骨頭壞死提供理論依據(jù)具有重要的意義。
[0007]本發(fā)明是通 過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0008]一種治療激素性股骨頭壞死的中藥制劑，是由以下原料藥制成的:淫羊藿25~35g，杜仲10~20g，丹參25~35g，川芎10~20g，白芍10~20g，茯苓10~15g，牛膝10~15g,鹿角膠8~12g,香附6~12g,甘草6~12g。
[0009]優(yōu)選的，是由以下原料藥制成的:淫羊藿30g,杜仲15g,丹參30g,川彎15g,白茍15g，茯苓12g，牛膝12g，鹿角膠10g，香附9g，甘草9g。
[0010]所述治療激素性股骨頭壞死的中藥制劑的制備方法為:取除鹿角膠外的各原料藥，混合，加入12~16倍量的水(重量倍數(shù))，煎煮130~140min，過濾除去濾渣，向?yàn)V液中加入烊化的鹿角膠，濃縮濾液至相對密度為1.1，然后加入濃度為80~100%的乙醇(體積百分?jǐn)?shù))，調(diào)整乙醇含量為70% (體積百分?jǐn)?shù))，靜置10~15h，過濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠膏，60°C減壓干燥，加入10%的糊精(質(zhì)量百分?jǐn)?shù))進(jìn)行干法制粒，即得，裝入膠囊制成膠囊劑。
[0011]本發(fā)明的治療激素性股骨頭壞死的中藥制劑，配方中，鹿角膠溫腎壯陽，益精補(bǔ)血，補(bǔ)虛兼祛瘀，針對肝腎虧虛之本，為君藥。丹參活血祛瘀，主治氣滯血瘀之標(biāo)，與川芎、杜仲、淫羊藿協(xié)助君藥發(fā)揮活血通絡(luò)、補(bǔ)益肝腎之功效，合為臣藥。香附、白芍、茯苓具有散瘀消腫、緩急止痛之功，可改善局部疼痛、活動(dòng)受限等癥狀，共為佐藥。牛膝活血通經(jīng)，引火下行，助藥效抵達(dá)患處，為本方中的使藥。甘草能清熱解毒，潤肺止咳，調(diào)和諸藥性。[0012]本發(fā)明的治療激素性股骨頭壞死的中藥制劑，各原料藥簡介如下:
[0013]鹿角膠:甘、咸，溫。歸腎、肝經(jīng)。鹿角膠成分很多，有氨基酸類成分，包括甘氨酸、谷氨酸、精氨酸等。糖類化合物，有蛋白多糖等以及堿基成分尿嘧啶尿苷等。生物胺類精瞇、腐胺和精胺。還有留體化合物，激素和激素樣物質(zhì)。功效:溫補(bǔ)肝腎，益精養(yǎng)血。用于肝腎不足而致的腰膝酸冷，陽痿遺精，虛勞羸瘦，崩漏下血，便血尿血，陰疽腫痛。鹿角膠具有抗氧化、延緩衰老的作用。研究表明鹿茸精能使小鼠肝、腦組織中脂褐質(zhì)和丙二醛(MDA)的含量明顯降低，超氧歧化酶(SOD)活性顯著增強(qiáng)，其對羥基自由基有明顯的抑制作用。防治骨質(zhì)疏松作用，研究發(fā)現(xiàn)鹿角膠及鹿茸對骨質(zhì)疏松癥能起到拮抗的效果。此外，總鹿茸多肽外涂抹于大鼠皮膚損傷組織，能加速創(chuàng)傷的修復(fù)愈合。王志超等發(fā)現(xiàn)應(yīng)用鹿角膠丸后，可增加骨密度，調(diào)節(jié)AKP、BGP、H0P含量，為鹿角膠丸治療骨質(zhì)疏松提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。對心血管系統(tǒng)的作用，鹿茸可以減輕心肌細(xì)胞損傷，增加心肌的血液供應(yīng)，擴(kuò)張冠脈血管及保護(hù)心肌細(xì)胞膜來恢復(fù)心肌的功能。可以一定程度的保護(hù)缺血心肌的繼發(fā)性損傷。對神經(jīng)系統(tǒng)作用，在鹿鸞多肽對Bax、BCl_2、caspase-3的影響中發(fā)現(xiàn)，鹿鸞多肽能對福射誘導(dǎo)脊髓神經(jīng)細(xì)胞凋亡起到抑制作用。
[0014]丹參:苦，微寒。歸心、肝經(jīng)。功效:祛瘀止痛，活血通經(jīng)。用于血瘀證及風(fēng)濕痹痛。丹參的有效成分主要分為脂溶性和水溶性兩類。脂溶性成分包括多種菲醌衍生物，如丹參酮、隱丹參酮、二氫丹參酮、異丹參酮、異隱丹參酮、丹參新酮等。水溶性成分有原兒茶醛及丹參素等。脂溶性的丹參酮類以改善血液循環(huán)、抗菌和抗炎為主，而水溶性的丹酚類則以抗氧化、抗凝血、抗血栓形成、調(diào)血脂和細(xì)胞保護(hù)作用明顯。藥理學(xué)研究顯示丹參具有調(diào)節(jié)血液流變學(xué)的作用，能夠擴(kuò)張外周血管，改善微循環(huán)；因丹參所含的丹參酮、丹參素等物質(zhì)能強(qiáng)有力地使纖維蛋白裂解，促進(jìn)纖維蛋白原溶解，使毛細(xì)血管網(wǎng)開放數(shù)目增多，調(diào)節(jié)微血管口徑[9]。丹參對血小板聚集有抑制作用，可降低血液粘度，加速紅細(xì)胞電泳，從而促進(jìn)血液的流動(dòng)性，對瘀血狀態(tài)起到清除作用[9]。另外，丹參具有清除氧自由基，防治脂質(zhì)過氧化的作用?？蓽p輕自由基對線粒體膜流動(dòng)的影響，保護(hù)線粒體。還具有抗炎、鎮(zhèn)痛、降血脂，增強(qiáng)細(xì)胞對缺氧的耐受力，提高超氧化物歧化酶的活性，減輕缺血再灌注損傷的作用。
[0015]杜仲:甘，溫。歸肝、腎經(jīng)。功效:補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨，安胎。用于肝腎不足，腰膝酸痛，筋骨無力，頭暈?zāi)垦?，妊娠漏血，胎?dòng)不安。目前從杜仲皮中分離得到的化合物主要是木脂素類、環(huán)烯醚萜類和苯丙素類及黃酮和多糖類。其中木脂素類雙環(huán)氧木質(zhì)素類、單環(huán)氧木質(zhì)素類、新木質(zhì)素類、和倍半木質(zhì)素等類型。
[0016]杜仲主要有降壓作用、預(yù)防肌肉骨骼老化、抗骨質(zhì)疏松、抗癌防癌、保肝利膽及利尿作用，并且其可以抗氧化、抗衰老。
[0017]淫羊藿:甘、辛，溫。歸肝、腎經(jīng)。功效:溫腎壯陽，強(qiáng)筋骨，祛風(fēng)濕。用于肝腎不足的筋骨痹痛，風(fēng)濕拘攣等證。本品主要含淫羊藿苷等黃酮苷以及留醇、多糖、生物堿、揮發(fā)油、維生素E等成分。其中多糖和黃酮類成分為淫羊藿的主要有效成分。其中黃酮類有朝藿素、朝藿苷、朝鮮淫羊藿苷、朝藿菲苷A、朝藿酮A、異槲皮素、Icariin — 3 — O — α —rhamnoside、金絲桃苷、箭葉淫羊藿苷等成分。研究證明淫羊藿水煎液可顯著提高小鼠DNA的合成率并能促進(jìn)大鼠的骨生長；還能預(yù)防醋酸潑尼松所致的骨質(zhì)疏松；淫羊藿煎劑能降低實(shí)驗(yàn)性高脂血癥家兔的β_脂蛋白及膽固醇水平；淫羊藿煎劑可明顯降低ADP誘導(dǎo)的血小板聚集率并可促進(jìn)血小板解聚。[0018]香附:辛、微苦、微甘，平。歸肝、脾、三焦經(jīng)。功效:疏肝解郁，理氣寬中，調(diào)經(jīng)止痛。用于肝郁氣滯，胸脅脹痛，疝氣疼痛，脾胃氣滯，脘腹痞滿，脹滿疼痛，月經(jīng)不調(diào)，經(jīng)閉痛經(jīng)。香附中主要含有揮發(fā)油類成分，此外還有糖類、生物堿。香附主要有大黃素甲醚、十六烷酸、谷留醇、豆留醇、Catenarin、胡蘿卜苷。以及山柰酚，木犀草素，槲皮素，西黃松黃酮，穗花杉雙黃酮，去甲基銀杏雙黃酮，銀杏雙黃酮，異銀杏雙黃酮，金松雙黃酮等黃酮類成分。香附有中樞神經(jīng)系統(tǒng)的作用，香附醇提物有安定作用，使小鼠自發(fā)活動(dòng)減少，遲緩，并可消除大鼠的條件性回避反射，對去水嗎啡引起的嘔吐有保護(hù)作用。對心血管系統(tǒng)的作用，香附水提醇沉物對貓和兔等都具有強(qiáng)心和減慢心率作用。對消化系統(tǒng)的作用，香附水煎液十二指腸給藥對正常大鼠有較強(qiáng)利膽作用，可促進(jìn)膽汁分泌，提高膽汁流量，同時(shí)對肝損傷大鼠的肝細(xì)胞有保護(hù)功能。
[0019]白芍:苦、酸、甘，微寒。歸肝、脾經(jīng)。功效:養(yǎng)肝陰，調(diào)肝氣，平肝陽，緩急止痛?！侗静輦湟氛撌霭咨衷?“補(bǔ)血，瀉肝，益脾，斂肝陰。”白芍中主要含芍藥苷、白芍苷、沒食子酰芍藥苷、6-0-沒食子?；?D-吡喃葡萄糖、鄰苯三酚、沒食子酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯、兒茶素等。白芍甙具有降低紅細(xì)胞粘度，抑制血小板聚集，降低紅細(xì)胞壓積及抗凝血酶的作用。白芍總甙可抑制人紅細(xì)胞滲透性溶血，能顯著抑制H2O2引起的溶血反應(yīng)。
[0020]茯苓:甘、淡，平。歸心、脾、腎經(jīng)。功效:利水滲濕，健脾安神。茯苓中主要含有茯苓多糖和三萜類化合物，各種氨基酸和微量元素、蛋白質(zhì)。用于各種濕證。茯苓具有良好的利尿作用。其利尿作用與影響腎小管對Na+的重吸收有關(guān)。大鼠注射茯苓提取液對四氯化碳引起的肝細(xì)胞損傷及丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶升高有良好防治效果。茯苓還可提高消化系功能，給大鼠口服茯苓水浸膏，可預(yù)防輕度胃潰瘍的發(fā)生。
[0021]牛膝:苦、甘、酸，平。歸肝、腎經(jīng)。功效:活血通經(jīng)，補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨，利脈通淋，引火下行。牛膝中的主要成分有齊墩果酸型三萜皂苷類化合物、留酮類化合物有牛膝留酮、蛻皮甾酮、旌節(jié)花留酮A'podecdysone C、旌節(jié)花留酮D、漏蘆留酮B、水龍骨留酮B等。另外還有多糖類化合物以及杜鵑花酸、琥珀酸等有機(jī)酸；小檗堿、巴馬丁等生物堿還有蘆丁等黃酮類成分。藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)，牛膝具有抗骨質(zhì)疏松作用。牛膝可增加骨小梁密度、面積、總體積及密質(zhì)骨面積，減小骨髓腔面積。牛膝有顯著的活血作用，其煎液對大鼠的血液粘度、紅細(xì)胞壓積及紅細(xì)胞聚集指數(shù)均有顯著的降低作用，可延長兔體外凝血時(shí)間，對血液流變學(xué)除纖維蛋白原含量外的各項(xiàng)指標(biāo)均有一定的降低作用。牛膝還能降低高膽固醇飼喂所致兔總膽固醇及游離膽固醇的升高，對肝臟脂肪沉著也有改善作用。
[0022]甘草:甘，平。歸心、肺、脾、胃經(jīng)。功效:補(bǔ)脾益氣，清熱解毒，祛痰止咳，緩急止痛，調(diào)和諸藥。用于脾胃虛弱，倦怠乏力，心悸氣短，咳嗽痰多，脘腹、四肢攣急疼痛，癰腫瘡毒，緩解藥物毒性、烈性。甘草中的有效成分包括三萜皂苷類、黃酮類、多糖類、香豆素類、生物堿類和氨基酸等。其中三萜皂苷類有甘草酸、甘草次酸、甘草甜素、甘草內(nèi)酯及異甘草內(nèi)酯等。黃酮類成份主要包括甘草苷、甘草苷元、異甘草苷、異甘草苷元。多糖化合物，包括:葡聚糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖等。其藥理作用主要有抗炎作用、抗腫瘤作用、抗病毒作用。
[0023]以上方藥分析可以發(fā)現(xiàn):補(bǔ)腎活血膠囊中的多數(shù)藥物經(jīng)現(xiàn)代藥理學(xué)證實(shí)具有諸多如調(diào)節(jié)微血管口徑、降低血液粘度、抗血小板聚集、增加鈣磷的沉積、抗骨質(zhì)疏松作用、促進(jìn)組織愈合、促進(jìn)骨再生等作用。補(bǔ)腎活血膠囊的作用不僅是其組成藥物的作用的簡單集合，而是通過藥物間的相互作用，相互促進(jìn)而發(fā)揮更顯著的效力，使得氣血通暢、肝腎得養(yǎng)，骨髓得充，共奏活血補(bǔ)腎、化瘀止痛之功。本方的配伍特點(diǎn):(I)溫補(bǔ)與活血并用，標(biāo)本兼治，正本清源；(2)溫補(bǔ)藥與行血、斂陰藥合用，使全方溫而不燥，剛?cè)嵯酀?jì)，祛瘀而不傷正，補(bǔ)虛而不雍滯，以達(dá)溫養(yǎng)、通絡(luò)之效。(3)組方嚴(yán)謹(jǐn)，方義明確，搭配合理，通補(bǔ)并用，氣血兼顧。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0024]圖1:股骨頭HE染色的組織形態(tài)學(xué)觀察(X200)示意圖(正常組第4周)。
[0025]圖2:股骨頭HE染色的組織形態(tài)學(xué)觀察(X200)示意圖(正常組第8周)。
[0026]圖3:股骨頭HE染色的組織形態(tài)學(xué)觀察(X200)示意圖(正常組第12周)。
[0027]圖4:股骨頭HE染色的組織形態(tài)學(xué)觀察(X200)示意圖(模型組第4周)。
[0028]圖5:股骨頭HE染色的組織形態(tài)學(xué)觀察(X200)示意圖(模型組第8周)。
[0029]圖6:股骨頭HE染色的組織形態(tài)學(xué)觀察(X200)示意圖(模型組第12周)。
[0030]圖7:股骨頭HE染色的組織形態(tài)學(xué)觀察(X200)示意圖(治療組第4周)。
[0031]圖8:股骨頭HE染色的組織形態(tài)學(xué)觀察(X200)示意圖(治療組第8周)。
[0032]圖9:股骨頭HE染色的組織形態(tài)學(xué)觀察(X200)示意圖(治療組第12周)。
[0033]圖10:技術(shù)路線圖。 [0034]圖11:大鼠成骨細(xì)胞培養(yǎng)的倒置相差顯微鏡觀察(X100)示意圖，其中，A:原代成骨細(xì)胞培養(yǎng)第2天；B:原代成骨細(xì)胞培養(yǎng)第5天；C:原代成骨細(xì)胞培養(yǎng)第7天；D第2代成骨細(xì)胞培養(yǎng)第2天；E:第3代成骨細(xì)胞培養(yǎng)第2天；F:第3代成骨細(xì)胞培養(yǎng)第3天。
[0035]圖12:大鼠第3代成骨細(xì)胞培養(yǎng)的HE染色觀察(X200)示意圖，其中，A:第3代成骨細(xì)胞培養(yǎng)第2天；B:第3代成骨細(xì)胞培養(yǎng)第3天。
[0036]圖13:大鼠第3代成骨細(xì)胞培養(yǎng)的堿性磷酸酶染色染色觀察(X200)示意圖，其中，A:第3代成骨細(xì)胞培養(yǎng)第2天；B:第3代成骨細(xì)胞培養(yǎng)第3天。
[0037]圖14:含藥血清干預(yù)后成骨細(xì)胞形態(tài)的相差顯微鏡觀察(X100)示意圖，其中，A:生理鹽水組培養(yǎng)第3天；B:低劑量組培養(yǎng)第3天；C:中劑量組培養(yǎng)第3天；D:高劑量組培養(yǎng)第3天。
[0038]圖15 =MTT法測各組成骨細(xì)胞的OD值。
[0039]圖16:各組大鼠成骨細(xì)胞OPG、RANKL mRNA表達(dá)值。
[0040]圖17:各組大鼠成骨細(xì)胞0PG、RANKLmRNA表達(dá)電泳圖，其中，A:各組大鼠成骨細(xì)胞β-actin mRNA表達(dá)電泳圖；B:各組大鼠成骨細(xì)胞OPGmRNA表達(dá)電泳圖；(:各組大鼠成骨細(xì)胞RANKLmRNA表達(dá)電泳圖(圖中a:生理鹽水組，b:低劑量組，c:中劑量組，d:高劑量組)。
[0041]圖18:星點(diǎn)設(shè)計(jì)優(yōu)化立體圖。
【具體實(shí)施方式】
[0042]下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[0043]實(shí)施例1制備補(bǔ)腎活血膠囊
[0044]配方為:淫羊藿3000g,杜仲1500g,丹參3000g,川芎1500g,白芍1500g,茯苓1200g，牛膝 1200g,鹿角膠 1000g,香附 900g,甘草 900g。
[0045]制備方法為:取除鹿角膠外的各原料藥，混合，加入14倍量的水(重量倍數(shù))，煎煮136min，過濾除去濾渣，向?yàn)V液中加入烊化的鹿角膠，濃縮濾液至相對密度為1.1，然后加入無水乙醇，調(diào)整乙醇含量為70% (體積百分?jǐn)?shù))，靜置12h，過濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至稠膏，60°C減壓干燥，加入10%的糊精(質(zhì)量百分?jǐn)?shù))進(jìn)行干法制粒，即得，裝入膠囊制成膠囊劑。
[0046]實(shí)施例2制備補(bǔ)腎活血膠囊
[0047]配方為:淫羊藿25g，杜仲20g，丹參25g，川芎20g,白芍10g，茯苓15g，牛膝IOg,鹿角膠12g，香附6g，甘草12g。
[0048]制備方法同實(shí)施例1。
[0049]實(shí)施例3制備補(bǔ)腎活血膠囊
[0050]配方為:淫羊藿35g,杜仲IOg,丹參35g,川彎IOg,白茍20g,獲茶IOg,牛膝15g,鹿角膠8g，香附12g，甘草6g。
[0051]制備方法同實(shí)施例1。
[0052]實(shí)驗(yàn)一、補(bǔ)腎活血膠囊對兔激素性股骨頭壞死BGP、IL-6、血管內(nèi)皮四項(xiàng)含量測定
[0053]1.實(shí)驗(yàn)材料
[0054](I)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0055]健康的新西蘭大白兔20只，體重2.5~3.0Kg，雌雄各半，由山東中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物房提供，合格證號(hào):scxk(魯)20030004。標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，室溫15~25°C，相對濕度45%~60%，每日正常光照，空氣流通，自由攝食、飲水。
[0056](2)實(shí)驗(yàn)藥品
[0057]1.補(bǔ)腎活血膠囊:實(shí)施例1制備。
[0058]2.仙靈骨葆膠囊:由貴州同濟(jì)堂制藥有限公司生產(chǎn)(國藥準(zhǔn)字Z20025337)。
[0059]3.地塞米松注射液:由山東魯抗辰欣藥業(yè)有限公司提供(國藥準(zhǔn)字H37021969)。
[0060](3)實(shí)驗(yàn)儀器及試劑
[0061 ] 1.GMJ型全自動(dòng)放射免疫r計(jì)數(shù)器(江蘇省醫(yī)療電子研究所)、DDL_5冷凍離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)、721分光光度計(jì)(上海第三分析儀器廠)、0LYMPAS光學(xué)顯微鏡等。
[0062]2.NO試劑盒由南京建成生物工程研究所提供；BGP、IL-6、ET、TXB2、6-Keto_PGFla放免藥盒由解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免研究所(北京東亞免疫技術(shù)研究所公司)提供。
[0063]2.實(shí)驗(yàn)方法
[0064](I)動(dòng)物分組及模型制作
[0065]隨機(jī)將20只新 西蘭大白兔分為四組，A正常組、B模型組、C對照組、D治療組，每組各5只。所有家兔均在同一條件下單籠飼養(yǎng)，飼養(yǎng)一周后，參照賀式造模法(張弛，何洪陽，楊志偉，等.活血通絡(luò)法防治激素性股骨頭壞死的作用及機(jī)制研究[J].成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，30(1):39-42.)給模型組、對照組、治療組家兔臀部肌肉注射地塞米松注射液的方法，每次10mg/kg/只，每周2次，共4周，正常組皮下注射生理鹽水2ml/kg/只，所有動(dòng)物肌注青霉素8萬U/只，每周I次，以預(yù)防感染。
[0066](2)給藥劑量設(shè)置
[0067]根據(jù)Meeh-Rubner公式A (體表面積)=K (系數(shù)).W (體重g)2/3.I(T4及相關(guān)文獻(xiàn)的參考，計(jì)算出兔服用補(bǔ)腎活血膠囊的劑量為IOg/日/只，其濃度為lg/ml ;仙靈骨葆膠囊的劑量為5g/日/只，使用時(shí)用溫開水溶化，含0.5g/ml。[0068](3)給藥方法
[0069]造模成功后，一周后起對照組給予IOml/日仙靈骨葆膠囊水溶液灌胃，治療組給予IOml/日補(bǔ)腎活血膠囊灌胃，正常組、模型組給以生理鹽水5ml/kg/日體重灌胃飼養(yǎng)，連續(xù)給藥8周(兩個(gè)療程)后取材。
[0070](4)觀察指標(biāo)
[0071]1.肉眼觀察包括動(dòng)物的一般情況，如精神、飲食、體重、毛發(fā)光澤度及股骨頭大體形態(tài)。
[0072]2.光學(xué)顯微鏡觀察股骨頭組織形態(tài)。
[0073]3.血清骨鈣素(BGP)含量測定。
[0074]4.血清白介素-6 (IL-6)含量測定。
[0075]5.血管內(nèi)皮四項(xiàng)含量測定。
[0076](5)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0077]實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SAS統(tǒng)計(jì)軟件處理，采用單因素方差分析及q檢驗(yàn)。
[0078]3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0079](I) 一般情況觀察及股骨頭大體形態(tài)
[0080]1.一般情況觀察:在所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，B組、C組、D組在注射激素后出現(xiàn)精神萎糜，飲食減少，大便稀塘，表現(xiàn)營養(yǎng)不良，消瘦，毛發(fā)干枯，無光澤。A組精神飽滿，飲食及二便正常，體重增加，毛發(fā)光澤，至造模結(jié)束所有動(dòng)物均無死亡。治療開始后，B組(模型組)精神差，飲食尚可，大便較稀，體重變化不大，C組和D組精神逐漸變好，飲食增加，大便逐漸正常，體重增加，毛發(fā)逐漸變得有光澤。A組精神良好，飲食及二便正常，體重較前增加，毛發(fā)光澤。各組動(dòng)物治療后無死亡。如表1所示。
[0081]表1各組動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過程中體重變化情況(了土S) (kg)
[0082]
【權(quán)利要求】
1.一種治療激素性股骨頭壞死的中藥制劑，其特征在于:是由以下原料藥制成的:淫羊藿25~35g，杜仲10~20g，丹參25~35g，川芎10~20g，白芍10~20g，茯苓10~15g,牛膝10~15g,鹿角膠8~12g,香附6~12g,甘草6~12g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療激素性股骨頭壞死的中藥制劑，其特征在于:是由以下原料藥制成的:淫羊藿30g，杜仲15g，丹參30g，川芎15g，白芍15g，茯苓12g，牛膝12g，鹿角膠10g，香附9g，甘草9g。
3.權(quán)利要求1或2所述的治療激素性股骨頭壞死的中藥制劑的制備方法，其特征在于:取除鹿角膠外的各原料藥，混合，加入12~16倍量的水，煎煮130~140min，過濾除去濾渣，向?yàn)V液中加入烊化的鹿角膠，濃縮濾液，然后加入濃度為80~100%的乙醇，調(diào)整乙醇含量為70%，靜置10~15h，過濾，濾液減壓濃縮至稠膏，干燥，加入糊精進(jìn)行干法制粒，SP得。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于:所述濃縮濾液具體為:濃縮濾液至相對密度為1.1。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于:所述干燥為60°C減壓干燥。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于:所述糊精的加入量為稠膏干燥后所得物料的10%。
7.根據(jù)權(quán)利要求3~6中任一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于:所述治療激素性股骨頭壞死的中藥制劑的劑型為膠囊劑，干法制粒后，裝入膠囊制成膠囊劑。
【文檔編號(hào)】A61K36/8905GK103989878SQ201410268593
【公開日】2014年8月20日 申請日期:2014年6月16日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月16日
【發(fā)明者】李剛, 彭偉, 傅春升, 孫德舜, 顏冰, 李越, 于福義, 任維龍, 孫彬, 劉彬 申請人:山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院