一種丹參酮包合液及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種丹參酮包合液，所述丹參酮包合液的主體分子為β-環(huán)糊精，客體分子為丹參酮，并提供了其制備方法和其在制備奶牛乳房注入劑中的應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明制備了丹參酮β-環(huán)糊精包合物溶液并優(yōu)化其制備工藝參數(shù)，通過(guò)對(duì)丹參酮理化性質(zhì)的考察，借助單因素試驗(yàn)及正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，著重研究影響包合物溶液包合效果的各項(xiàng)工藝參數(shù)，得到環(huán)糊精用量最小，丹參酮包合率最高，增溶效果較好，質(zhì)量較穩(wěn)定的丹參酮環(huán)糊精包合溶液。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種丹參酮包合液及其制備方法和應(yīng)用
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及一種丹參酮包合液及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0003]奶牛乳房炎是對(duì)奶牛養(yǎng)殖業(yè)危害非常大的傳染性疾病，可分為臨床型急性乳房炎、臨床型亞急性乳房炎和隱性型乳房炎，各不同類(lèi)型乳房炎病例適應(yīng)不同治療藥物和方案。臨床型急性及亞急性乳房炎，易診斷、發(fā)病急、癥狀明顯，治療效果往往也較快速、明顯；隱性型乳房炎無(wú)肉眼明顯可見(jiàn)臨床癥狀從而不易診斷、病程長(zhǎng)，治療效果不佳。病癥易惡化，久治不愈，轉(zhuǎn)化成頑固型乳房炎，則很難徹底治愈。
[0004]針對(duì)各類(lèi)奶牛乳房炎病例，近幾十年來(lái)國(guó)內(nèi)研發(fā)的治療奶牛乳房炎的藥物層出不窮。早期利用抗生素結(jié)合對(duì)癥治療奶牛乳房炎，效果很好。但隨著抗菌素的無(wú)限制性地使用，使諸多病原菌對(duì)抗生素已產(chǎn)生耐藥性，繼續(xù)用藥，則只有大幅度加大用藥劑量以維持療效，而大劑量藥物的使用會(huì)導(dǎo)致在牛奶中大量抗生素的殘留，嚴(yán)重影響人類(lèi)健康，因此，抗生素不再是治療 奶牛乳房炎的最佳選擇。同時(shí)，研發(fā)新的抗生素難度增大、節(jié)奏變緩及其應(yīng)用上的限制，為配合臨床生產(chǎn)，目前迫切需要開(kāi)發(fā)出安全、環(huán)保新型藥物，十一五規(guī)劃以來(lái)，該領(lǐng)域一直被視為影響國(guó)家農(nóng)業(yè)發(fā)展，生態(tài)安全的重要環(huán)節(jié)。因此，行業(yè)內(nèi)專(zhuān)家學(xué)者已經(jīng)將目光投向了毒副作用低，不致產(chǎn)生耐藥性的中藥藥物，但中藥成分復(fù)雜，療效緩慢，療程長(zhǎng)等因素也制約了應(yīng)用中藥治療奶牛乳房炎的發(fā)展速度，但相對(duì)于化藥對(duì)環(huán)境、人體健康的危害程度來(lái)說(shuō)，中藥更傾向于被選擇。
[0005]丹參酮是從中藥丹參中提取出的脂溶性成分，其藥理作用廣泛，如心血管藥理作用、抗腫瘤活性、抗菌及抗病毒活性等。在獸醫(yī)臨床研究上，人們主要利用其較強(qiáng)抑菌活性開(kāi)發(fā)治療畜禽感染性疾病的抗菌藥物。丹參酮對(duì)以金黃色葡萄球菌為主的急性感染，特別是對(duì)耐藥金葡球菌株感染有顯著療效，但丹參酮水溶性差，理化性質(zhì)不穩(wěn)定等特點(diǎn)大大限制了它的應(yīng)用，國(guó)內(nèi)前前后后研究應(yīng)用丹參酮治療奶牛乳房炎已有二、三十年歷史，但由于丹參酮脂水兩難溶的性質(zhì)，其溶解度問(wèn)題一直是很難攻克的技術(shù)難題。
[0006]β_環(huán)糊精水溶性很大、毒副作用非常低、具有包載藥物的獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)，是一種常用藥用包載材料，應(yīng)用β -環(huán)糊精將藥物包絡(luò)起來(lái)，可以增加藥物溶解度、提高藥物溶出速度、延長(zhǎng)藥物釋放時(shí)間、提高藥物生物利用度。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的就是針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)中丹參酮溶解度低的缺陷，提供了一種利用環(huán)糊精包合辦法提高丹參酮溶解度，增大釋藥速率，提高其生物利用度從而增大療效的丹參酮包合液。
[0008]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為:一種丹參酮包合液，所述丹參酮包合液的主體分子為β-環(huán)糊精，客體分子為丹參酮。
[0009]進(jìn)一步的，上述的一種丹參酮包合液，所述包合物中，丹參酮與環(huán)糊精的投料質(zhì)量比為1:5或1:10或1:20或1:40或1:80。
[0010]進(jìn)一步的，上述的一種丹參酮包合液，所述包合物中，丹參酮與β-環(huán)糊精的投料質(zhì)量比為1:80。
[0011]本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供了上述的一種丹參酮包合液的制備方法，是采用R-β -環(huán)糊精不飽和水溶液法制備丹參酮包合液，即稱(chēng)取適量R-β -環(huán)糊精，置于圓底燒瓶中，加入適量蒸餾水，加熱溶解，制成質(zhì)量百分濃度為20%的不飽和R- β -環(huán)糊精溶液，水浴保溫；另取適量丹參酮原料藥粉，用少量無(wú)水乙醇溶解并緩慢滴加進(jìn)入R-β -環(huán)糊精溶液中，同時(shí)加熱攪拌3h后冷卻，經(jīng)0.22 μ m濾膜過(guò)濾除菌，收集濾液。
[0012]進(jìn)一步的，上述的一種丹參酮包合液的制備方法，所述攪拌溫度為23°C、40°C或60。。。
進(jìn)一步的，上述的一種丹參酮包合液的制備方法，所述攪拌速度為300rmp、500rmp或700rmpo
[0013]進(jìn)一步的，上述的一種丹參酮包合液的制備方法，所述丹參酮包合液中無(wú)水乙醇的含量為5%、10%或15%。
[0014]進(jìn)一步的，上述的一種丹參酮包合液的制備方法，所述丹參酮包合液的pH值為6.5、7.5、8.5 或 9.5。
[0015]進(jìn)一步的，上述的一種丹參酮包合液的制備方法，所述攪拌溫度為60°C ;攪拌速度為300rmp ;無(wú)水乙醇的含量為5% ；pH值為7.5。
[0016]本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供了上述的丹參酮包合液在制備奶牛乳房注入劑中的應(yīng)用。
[0017]本發(fā)明的有益效果為:
本發(fā)明制備了丹參酮β -環(huán)糊精包合物溶液并優(yōu)化其制備工藝參數(shù)，通過(guò)對(duì)丹參酮理化性質(zhì)的考察，借助單因素試驗(yàn)及正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，著重研究影響包合物溶液包合效果的各項(xiàng)工藝參數(shù)，得到環(huán)糊精用量最小，丹參酮包合率最高，增溶效果較好，質(zhì)量較穩(wěn)定的丹參酮環(huán)糊精包合溶液。
[0018]通過(guò)對(duì)丹參酮理化性質(zhì)的考察，丹參酮在水中溶解度極低，光照及加熱對(duì)丹參酮也有一定影響，需要避光貯存。建立了丹參酮包合液含量測(cè)定方法，為包合物溶液制備工藝參數(shù)篩選、質(zhì)量評(píng)價(jià)及質(zhì)量控制提供了依據(jù)，丹參酮II A質(zhì)量濃度在9.18~45.92 μ g/mL范圍內(nèi)，線(xiàn)性關(guān)系良好(R2=0.9997)，方法平均回收率為97.53%，RSD值為1.74%，精密度良好，RSD值為1.21%;隱丹參酮質(zhì)量濃度在3.54~17.68 μ g/mL范圍內(nèi)，線(xiàn)性關(guān)系良好(R2=0.9996)，平均回收率為96.86%，RSD值為1.14%，精密度良好，RSD值為0.75%。單因素試驗(yàn)考察了制備丹參酮包合物溶液各項(xiàng)工藝參數(shù)(如環(huán)糊精與藥物投料比、溫度、乙醇含量、攪拌時(shí)間、攪拌速度及PH)，結(jié)果顯示對(duì)丹參酮包合效果有顯著影響的主要因素包括:環(huán)糊精與藥物投料比、溫度、乙醇含量、攪拌時(shí)間，以及對(duì)它們進(jìn)行進(jìn)一步優(yōu)化的指導(dǎo)條件分別為80:l、60°C、5%、6h。通過(guò)L9 (34)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)制備工藝各參數(shù)組合進(jìn)行優(yōu)化，最終確定制備最優(yōu)工藝條件為:環(huán)糊精與丹參酮投料比80: 1、加熱溫度為60°C (lh)、乙醇含量為5%、攪拌時(shí)間為3小時(shí)。【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0019]圖1為丹參酮II A質(zhì)量濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
[0020]圖2為丹參酮II A及隱丹參酮色譜圖。
[0021]圖3為包合后的丹參酮II A及隱丹參酮色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022]實(shí)施例1:
1、丹參酮乳房注入劑制備工藝:
1.1試驗(yàn)材料:
1.1.1藥品與試劑:
丹參酮II A對(duì)照品(批號(hào)110766-200619)，隱丹參酮對(duì)照品(批號(hào)110852-200806)購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；
丹參酮原料藥粉(丹參酮含量41.7%，丹參酮II A含量11.57%，隱丹參酮含量3.16%)由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所實(shí)驗(yàn)室自行提?。?br> R- β -環(huán)糊精，購(gòu)自山東淄博千匯生物科技有限公司，含量≥98% ；
丹參酮灌注液，中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所生產(chǎn)(批號(hào)20130722、20130725,20130728)；
乙酸乙酯為分析純、石油醚(60-90°C)、甲醇為色譜純無(wú)水乙醇、正磷酸為分析純；乙腈為色譜純。
[0023]1.1.2 儀器:
Waters2695高效液相色譜儀一紫外檢測(cè)器；磁力加熱攪拌器(德國(guó)Heidolph公司，MR3001型)；電子分析天平(德國(guó)Sartor1us公司，BT25S型)；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海鴻都電子科技有限公司，DHG-9070型)；循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)； 0.22 μ m微孔濾膜(天津津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，G00DL00K-1000型薄層色譜成像系統(tǒng)(上?？普苌萍加邢薰?；硅膠G板(青島海洋化工廠(chǎng))；
1.2試驗(yàn)方法:
1.2.1丹參酮含量測(cè)定方法的建立:
檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇:
精密稱(chēng)取丹參酮II A對(duì)照品11.48mg，置于25mL棕色容量瓶中，加無(wú)水甲醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密吸取對(duì)照品貯備液lmL，置于1mL棕色容量瓶中，加無(wú)水甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成45.92 μ g/mL的溶液備用。另取R- β -環(huán)糊精適量，制成輔料溶液。用HPLC法在200-400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描對(duì)照品貯備液及輔料溶液。
[0024]色譜條件:
以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈為流動(dòng)相A，以0.026%磷酸溶液為流動(dòng)相B，按下表中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm ;柱溫為25V ;流速為每分鐘1.2 mL。理論板數(shù)按丹參酮II A峰計(jì)算應(yīng)不低于20000。
[0025]標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制:
精密吸取對(duì)照品貯備液lmL，置于1mL棕色容量瓶中，加無(wú)水甲醇稀釋至刻度，搖勻，備用。另分別精密吸取該濃度溶液0.4mL、0.8mL、l.2mL、l.6mL、2mL于2mL離心管中，加無(wú)水甲醇稀釋至刻度，配制成濃度分別為9.18 μ g/mL、18.37 μ g/mL、27.55 μ g/mL、36.74 μ g/mL、45.92 μ g/mL的系列對(duì)照品溶液備用，以甲醇溶液作空白對(duì)照，在選擇的波長(zhǎng)處測(cè)定上述對(duì)照品。以峰面積對(duì)進(jìn)樣質(zhì)量濃度進(jìn)行回歸分析。
[0026]供試品樣品的制備:
取10mL灌注液樣品，加入等體積無(wú)水乙醇解包合，超聲15min，靜置12h，旋蒸除去乙醇，再用乙酸乙酯萃取3次，收集乙酸乙酯層溶液，旋蒸濃縮，甲醇溶解并定容至10mL容量瓶中，精密稱(chēng)取該溶液適量并用甲醇稀釋10倍，即得。
[0027]定量測(cè)定與丹參酮II A利用率的計(jì)算:
取供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定峰面積，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)回歸方程計(jì)算樣品中丹參酮II A含量，并計(jì)算利用率。丹參酮II A利用率=灌注液中丹參酮II A量/投入原料藥中丹參酮II A量(投入原料藥中丹參酮II A量=投入原藥量X 11.57%)。
[0028]回收率試驗(yàn): 取適量R- β -環(huán)糊精加蒸餾水至刻度，共9份，分3組，每組3份，每組分別加入丹參酮II A對(duì)照品溶液適量，分別配制成質(zhì)量濃度為10，15，20 μ g/mL高、中、低3種濃度樣品溶液，渦旋混合均勻后按照供試品樣品制備方法進(jìn)行處理，按色譜條件測(cè)定峰面積并分別計(jì)算回收率及RSD值。
[0029]精密度試驗(yàn):
取回收率試驗(yàn)項(xiàng)下同一濃度丹參酮II A對(duì)照品溶液，按照色譜條件連續(xù)測(cè)定6次，記錄峰面積，計(jì)算RSD值。
[0030]重復(fù)性試驗(yàn):
取同一樣品，按供試品制備方法制備5份供試品，按色譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積，計(jì)算RSD值。
[0031]穩(wěn)定性試驗(yàn):
取回收率試驗(yàn)項(xiàng)下15 μ g/mL溶液，分別放置0，6，12，24，48，72h后進(jìn)樣，記錄峰面積，計(jì)算RSD值。
[0032]1.2.2丹參酮β -環(huán)糊精包合液的制備:
采用R-β -環(huán)糊精不飽和水溶液法制備丹參酮包合液，即稱(chēng)取適量R-β -環(huán)糊精，置于圓底燒瓶中，加入適量蒸餾水，加熱溶解，制成濃度為20%的不飽和R- β -環(huán)糊精溶液，水浴保溫。另取適量丹參酮原料藥粉，用少量無(wú)水乙醇溶解并緩慢滴加進(jìn)入R-β_環(huán)糊精溶液中，同時(shí)加熱攪拌一定時(shí)間后冷卻，經(jīng)0.22 μ m濾膜過(guò)濾除菌，收集濾液。
[0033]1.2.3丹參酮β -環(huán)糊精包合液制備工藝單因素試驗(yàn):
投料比單因素試驗(yàn):
試驗(yàn)考察β -環(huán)糊精與丹參酮的投料質(zhì)量比為5:1、10:1、20:1、40:1、80:1，60O (加熱Ih)磁力攪拌6小時(shí)，對(duì)各組樣品溶液丹參酮II A利用率進(jìn)行比較。
[0034]溫度單因素試驗(yàn):
試驗(yàn)考察攪拌溫度分別為23°C、40°C、60°C (加熱lh)、60°C (加熱6h)，投料比為80:1，磁力攪拌6小時(shí)，對(duì)各組樣品溶液丹參酮II A利用率進(jìn)行比較。
[0035]攪拌時(shí)間單因素試驗(yàn):試驗(yàn)考察攪拌時(shí)間為3h、6h、12h、24h，投料比為80:1，60°C (加熱Ih)下磁力攪拌，對(duì)各組樣品溶液丹參酮II A利用率進(jìn)行比較。
[0036]乙醇含量單因素試驗(yàn):
試驗(yàn)考察乙醇含量為5%、10%、15%，投料比為80:1，600C (加熱Ih)磁力攪拌6小時(shí)，對(duì)各組樣品溶液丹參酮II A利用率進(jìn)行比較。
[0037]攪拌速度單因素試驗(yàn):
試驗(yàn)考察攪拌速度為300rmp、500rmp、700rmp,投料比為80:1, 60°C (加熱Ih)攪拌6小時(shí)，對(duì)各組樣品溶液丹參酮II A利用率進(jìn)行比較。
[0038]PH單因素試驗(yàn):
試驗(yàn)考察PH為6.5、7.5、8.5、9.5，投料比為80:1，60。。(加熱Ih)攪拌6小時(shí)，對(duì)各組樣品溶液丹參酮II A利用率進(jìn)行比較。
[0039]1.2.4丹參酮-β -環(huán)糊精包合液制備工藝優(yōu)化:
采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，因素及水平見(jiàn)表，以丹參酮II A利用率為指標(biāo)，按照正交表L9(34)設(shè)計(jì)方案，進(jìn)行試驗(yàn)，丹參酮一 R-β -環(huán)糊精包合液正交試驗(yàn)的因素和水平如表1所示。
[0040]表1
【權(quán)利要求】
1.一種丹參酮包合液，其特征在于，所述丹參酮包合液的主體分子為β-環(huán)糊精，客體分子為丹參酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種丹參酮包合液，其特征在于，所述包合物中，丹參酮與β -環(huán)糊精的投料質(zhì)量比為1:5或1:10或1:20或1:40或1:80。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種丹參酮包合液，其特征在于，所述包合物中，丹參酮與β-環(huán)糊精的投料質(zhì)量比為1:80。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的一種丹參酮包合液的制備方法，其特征在于，是采用R-β -環(huán)糊精不飽和水溶液法制備丹參酮包合液，即稱(chēng)取適量R-β -環(huán)糊精，置于圓底燒瓶中，加入適量蒸餾水，加熱溶解，制成質(zhì)量百分濃度為20%的不飽和R- β -環(huán)糊精溶液，水浴保溫；另取適量丹參酮原料藥粉，用少量無(wú)水乙醇溶解并緩慢滴加進(jìn)入R-β-環(huán)糊精溶液中，同時(shí)加熱攪拌3h后冷卻，經(jīng)0.22 μ m濾膜過(guò)濾除菌，收集濾液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種丹參酮包合液的制備方法，其特征在于，所述攪拌溫度為 23°C、40°C或 60°C。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種丹參酮包合液的制備方法，其特征在于，所述攪拌速度為 300rmp、500rmp 或 700rmp。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種丹參酮包合液的制備方法，其特征在于，所述丹參酮包合液中無(wú)水乙醇的含量為5%、10%或15%。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種丹參酮包合液的制備方法，其特征在于，所述丹參酮包合液的PH值為6.5,7.5,8.5或9.5。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種丹參酮包合液的制備方法，其特征在于，所述攪拌溫度為60°C ;攪拌速度為300rmp ;無(wú)水乙醇的含量為5% ；pH值為7.5。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的丹參酮包合液在制備奶牛乳房注入劑中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K47/48GK104027815SQ201410259837
【公開(kāi)日】2014年9月10日 申請(qǐng)日期:2014年6月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月12日
【發(fā)明者】梁劍平, 郭文柱, 盧超, 強(qiáng)哲, 尚若鋒, 王學(xué)紅, 陶蕾, 劉宇, 郝寶成, 趙鳳舞, 郭志廷, 賈忠 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所