治療疼痛和瘙癢的方法、組合物和試劑盒的制作方法【專利摘要】本發(fā)明涉及治療疼痛和瘙癢的方法、組合物和試劑盒。本發(fā)明的特征在于一種通過將細(xì)胞與以下物質(zhì)接觸來抑制細(xì)胞中的一個(gè)或多個(gè)電壓門控離子通道電壓門控性離子通道的方法：(i)第一化合物，其激活存在于傷害感受器和／或瘙癢感受器上的通道形成受體；和(ii)第二化合物，其施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制所述離子通道，但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道，其中，當(dāng)所述受體被激活時(shí)，所述第二化合物能夠通過所述通道形成受體進(jìn)入傷害感受器或瘙癢感受器。本發(fā)明的特征還在于化合物的季胺衍生物或其他永久帶電或瞬時(shí)帶電的衍生物，所述化合物施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制所述離子通道，但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道。【專利說明】治療疼痛和瘙癢的方法、組合物和試劑盒[0001]本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮?00780050131.9(國際申請(qǐng)?zhí)枮镻CT/US2007/024174)、申請(qǐng)日為2007年11月19日、發(fā)明名稱為“治療疼痛和瘙癢的方法、組合物和試劑盒”的中國專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。【
技術(shù)領(lǐng)域：
】[0002]本發(fā)明涉及通過小分子量藥物分子選擇性抑制疼痛-和癢感(itch)感覺神經(jīng)元(sensingneuron)(傷害感受器(nociceptors)和瘙癢感受器(pruriceptors)),同時(shí)將對(duì)非疼痛(non-pain)感覺神經(jīng)元或其它類型細(xì)胞的影響最小化的方法、組合物和試劑盒。根據(jù)本發(fā)明方法，小的親水性藥物分子通過進(jìn)入穿過存在于疼痛-和癢感-感覺神經(jīng)元但在其他類型神經(jīng)元或其它類型組織中存在較少或根本不存在的受體而進(jìn)入到疼痛-感覺神經(jīng)元的細(xì)胞內(nèi)隔室中?！?br>背景技術(shù)：
】[0003]局部麻醉藥(例如利多卡因和阿替卡因)通過抑制神經(jīng)元中的電壓依賴性(voltage-dependent)鈉通道而發(fā)揮作用。這些麻醉藥阻滯鈉通道并由此阻滯所有神經(jīng)元的興奮性，而不僅僅是疼痛感覺神經(jīng)元(傷害感受器)。因此，雖然局部或區(qū)域麻醉的目的是阻滯傷害感受器中的信號(hào)傳遞以防止疼痛，但施用局部麻醉藥還會(huì)產(chǎn)生不希望有的或不良的(deletrious)影響,例如由低閾壓和觸覺感受器的阻滯造成的全身麻木、由運(yùn)動(dòng)軸突(motoraxons)的阻滯造成的運(yùn)動(dòng)缺陷以及由自主纖維的阻滯造成的其他并發(fā)癥。局部麻醉藥是相對(duì)疏水性的分子，通過擴(kuò)散進(jìn)入或擴(kuò)散透過細(xì)胞膜而進(jìn)入它們在鈉通道上的阻滯位點(diǎn)。這些化合物的永久帶電(Permanently-charged)衍生物(例如QX-314,利多卡因的季氮(quaternarynitrogen)衍生物)不可透過細(xì)胞膜，當(dāng)施用于神經(jīng)膜的外表面時(shí)對(duì)神經(jīng)元鈉通道無影響，但如果以某種方式(例如通過用于對(duì)分離的神經(jīng)元進(jìn)行全細(xì)胞電生理學(xué)記錄的微量移液管)將其引入細(xì)胞內(nèi)部則可阻滯鈉通道。疼痛感覺神經(jīng)元在受到痛苦的熱或辣椒素(辣椒中的刺激性成分)激活而表達(dá)(大多數(shù)情況下)TRPVl受體/通道方面與其他類型的神經(jīng)元不同。在多種類型的疼痛感覺和瘙癢感覺(瘙癢感受器)神經(jīng)元中選擇性表達(dá)的其它類型的受體包括但不限于TRPA1、TRPM8和P2X(2/3)受體。[0004]神經(jīng)病性疼痛、炎性疼痛和傷害感受性(nociceptive)疼痛在病因?qū)W、病理生理學(xué)、診斷和治療方面均不同。響應(yīng)于強(qiáng)烈的或傷害性的刺激物對(duì)特定亞組(subset)的外周感覺神經(jīng)元(傷害感受器)的激活而出現(xiàn)傷害感受性疼痛。這種疼痛一般是急性和自我限制性的，通過警告可能的或正在進(jìn)行的組織損害來發(fā)揮保護(hù)性生物學(xué)功能。通常這種疼痛限于局部(well-localized)。傷害感受性疼痛的例子包括但不限于創(chuàng)傷(traumatic)或手術(shù)疼痛、分娩痛、扭傷、骨折、燒傷、撞擊痛(bumps)、挫傷(bruises)、注射造成的疼痛(injections)、牙科程序造成的疼痛(dentalprocedures)、皮膚活檢造成的疼痛(skinbiopsies)和阻塞造成的疼痛(obstructions)。[0005]炎性疼痛是存在組織損傷或炎癥時(shí)發(fā)生的疼痛，包括手術(shù)后疼痛、創(chuàng)傷后疼痛、關(guān)節(jié)炎(類風(fēng)濕性或骨關(guān)節(jié)炎)疼痛和與關(guān)節(jié)、肌肉和肌腱的損傷相關(guān)的疼痛(例如軸向下腰痛(axiallowbackpain)。[0006]神經(jīng)病性疼痛是一種常見的慢性、非惡性疼痛，其是由外周或中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的損傷或功能障礙造成的，這種疼痛沒有保護(hù)性生物學(xué)功能。據(jù)估計(jì)，這種疼痛在美國影響超過160萬人。神經(jīng)病性疼痛有多種不同的病因?qū)W，并可以由于以下原因而發(fā)生這種疼痛，例如創(chuàng)傷、手術(shù)、椎間盤突出、脊髓損傷、糖尿病、帶狀皰疹感染、HIV/AIDS、晚期癌癥、切斷術(shù)(包括乳房切除術(shù))、腕管綜合征、長期飲酒(chronicalcoholuse)、暴露于輻射，也可能是毒害神經(jīng)的治療藥劑(例如某些抗-HIV的藥物和化療藥物)的非有意的(unintended)副作用。[0007]與傷害感受性疼痛相反，神經(jīng)病性疼痛常常被描述為性質(zhì)上有“灼燒感(burning)”、“電擊感(electric)”、“麻刺感”或“刺痛感(shooting)”。其特征常常是慢性的異常性疼痛(定義為由通常不引起疼痛反應(yīng)的刺激(例如輕觸)引起的疼痛)和痛覺過敏(定義為對(duì)正常的疼痛刺激的敏感性增加)，在任何受損組織外觀痊愈之后還可持續(xù)數(shù)月或數(shù)年。[0008]由于多種原因，疼痛可發(fā)生在癌癥患者中:炎癥、壓迫(compression)、侵襲、轉(zhuǎn)移性擴(kuò)散到骨或其它組織中。[0009]有一些病癥，在沒有有害刺激物、組織損傷或神經(jīng)系統(tǒng)損害的情況下發(fā)生疼痛，這些病癥稱為功能障礙性(dysfunctional)疼痛，包括但不限于纖維肌痛、壓力型頭痛、腸易激紊亂(irritableboweldisorders)和紅斑性肢痛。[0010]偏頭痛是與支配腦膜活動(dòng)(innervatingthemeningesofthebrain)的感覺纖維活化相關(guān)的頭疼。[0011]癢感(瘙癢)是一種皮膚學(xué)病癥，其可以是局部或全身性的，可與皮膚損害(皮疹、特應(yīng)性濕疹、風(fēng)團(tuán))相關(guān)。癢感伴隨著多種病癥，包括但不限于，應(yīng)激、焦慮、陽光紫外輻射、代謝和內(nèi)分泌紊亂(例如，肝臟或腎臟疾病，甲狀腺功能亢進(jìn))、癌癥(例如淋巴瘤)、對(duì)藥物或食品的反應(yīng)、寄生蟲和真菌感染、過敏性反應(yīng)、血液疾病(例如真性紅細(xì)胞增多癥)和皮膚學(xué)病癥。癢感是由一亞組小直徑初級(jí)感覺神經(jīng)元(瘙癢感受器)介導(dǎo)的，這些神經(jīng)元具有傷害感受器神經(jīng)元的很多特點(diǎn)，包括但不限于表達(dá)TRPVl通道。某些癢感介質(zhì)(mediators)-例如花生酸類物質(zhì)、組胺、緩激肽、ATP和各種神經(jīng)營養(yǎng)蛋白具有內(nèi)源性香草素(endovanilloid)功能。局部施用辣椒素抑制組胺誘導(dǎo)的癢感。因此，像傷害感受器一樣，瘙癢感受器是遞送離子通道阻斷劑的本方法的合適靶標(biāo)。[0012]盡管已開展了針對(duì)疼痛和癢感的多種療法，仍然需要另外的藥劑?！?br/>發(fā)明內(nèi)容】[0013]第一方面，本發(fā)明的特征是通過給予患者第一化合物和任選的第二化合物治療患者的疼痛和癢感(itch)(例如神經(jīng)病性疼痛、炎性疼痛、傷害感受性疼痛、特發(fā)性疼痛、癌癥疼痛、偏頭痛、功能障礙性疼痛或操作性疼痛(proceduralpain)(例如由牙科操作、注射、骨折固定(settingfractures)、活檢造成的疼痛))以及瘙癢的方法,所述第一化合物施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面(internalface)時(shí)抑制所述離子通道，但施加于所述通道的外表面(externalface)時(shí)基本上不抑制所述通道,其中當(dāng)受體被激活時(shí)，第一化合物能夠通過膜結(jié)合受體/離子通道進(jìn)入神經(jīng)元；所述第二化合物激活所述第一化合物可通過的受體。某些實(shí)施方式中，第二化合物激活選自TRPV1、P2X(2/3)、TRPAl和TRPM8的受體，所述第一化合物可通過這些受體?？墒褂萌魏螛?biāo)準(zhǔn)疼痛或癢癥指標(biāo)(例如本文描述的那些)來確定疼痛或癢癥的治療，或可基于患者的主觀疼痛或癢感評(píng)價(jià)來確定疼痛或癢癥的治療。如果報(bào)告疼痛減少、或?qū)δ芤鹛弁吹拇碳さ姆磻?yīng)減少以及癢感減少，則認(rèn)為患者得到了“治療”。某些實(shí)施方式中，希望給予第二化合物以確保受體(例如TRPV1、P2X(2/3),TRPAl和/或TRPM8受體)被激活，從而允許第一化合物進(jìn)入。其它實(shí)施方式中，由于受體(例如TRPVUP2X(2/3)、TRPAl和/或TRPM8受體)已經(jīng)被激活，不給予第二化合物。因此，第一化合物僅進(jìn)入具有內(nèi)源性激活的受體的神經(jīng)元。其它實(shí)施方式中，受體(例如TRPVl、P2X(2/3),TRPAl和/或TRPM8受體)通過感應(yīng)激活這些受體的生理狀態(tài)而被激活，從而允許第一化合物進(jìn)入。[0014]如果需要，可使用激活TRPVl、P2X(2/3)、TRPAl和/或TRPM8受體的兩種或更多種化合物，也可使用抑制一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的兩種或更多種化合物。理想地，第一化合物(一種或多種)和第二化合物(一種或多種)可在彼此(間隔)4小時(shí)內(nèi)、2小時(shí)內(nèi)、1小時(shí)內(nèi)、30分鐘內(nèi)或15分鐘內(nèi)給予患者，或基本上同時(shí)給藥。重要的是，這兩種化合物中的每一種均可首先給藥。因此,一種實(shí)施方式中，首先給予激活TRPVl、P2X(2/3)、TRPAl和/或TRPM8受體的一種或多種化合物，而另一種實(shí)施方式中，首先給予當(dāng)施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制所述通道，但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道的一種或多種化合物。這些化合物可共同配制入單一組合物中或可分別配制?？赏ㄟ^例如以下方式給予各化合物:口服給藥、胃腸外給藥、靜脈內(nèi)給藥、肌內(nèi)給藥、直腸給藥、皮膚(cutaneous)給藥、皮下給藥、局部給藥、透皮給藥、舌下給藥、經(jīng)鼻給藥、陰道給藥、鞘內(nèi)給藥、硬膜外給藥、或眼部給藥，或通過注射、吸入或與鼻粘膜或口腔粘膜直接接觸。[0015]TRPVl受體的激活劑包括但不限于辣椒素(capsaicin)、丁香酹、arvanil(N_花生四烯酰香草胺(arachidonoyIvaniIIamine))、花生四烯乙醇胺(anandamide)、2_氨基乙氧基二苯基砸酸酷(aminoethoxydiphenylborate)(2APB)、AM404、樹脂毒素(resiniferatoxin)、佛波醇12-苯基乙酸酯13-乙酸酯20-高香草酸酯(phorboll2_phenyIacetate13-acetate20-homovaniIlate)(PPAHV)、奧伐尼(NE19550)、OLDA(N-油酸多巴胺)、N-花生四烯酸基多巴胺(Brachidonyldopamine)(NADA)W-碘代樹脂毒素(iodoresiniferatoxin)(6'-1RTX)、C18N-酸基乙醇胺(acylethanolamines)、脂氧合酶衍生物例如12-氫過氧化廿碳四烯酸(hydroperoxyeicosatetraenoicacid)、抑制劑半胱氨酸結(jié)(inhibitorcysteineknot)(ICK)肽(香草毒素(vanillotoxins))、胡椒堿、MSK195(N-[2-(3，4-二甲基芐基-3-(新戊酰氧基(pivaloyloxy))丙基]_2-[4-(2_氨基乙氧基)_3_甲氧苯基]乙酸胺)、JYL79(N-[2-(3,4-二甲基芐基-3-(新戍酸氧基)丙基]-N'-(4-羥基-3-甲氧芐基)硫脲)、羥基-α-山椒素(sanshool)、2_氨基乙氧基二苯基硼酸酯、10-姜烯酹(shogaol)、油烯基姜辣素(oleylgingerol)、油烯基姜烯酹(oleylshogaol)和SU200(N-(4_叔丁基芐基)-N'_(4_羥基-3-甲氧芐基)硫脲)。TRPVl受體的其他激活劑描述于O'Dell等，BioorgMedChem(2007)15:6164-6149和Sexton等，F(xiàn)ASEBJ(2007)21:2695-2703中。[0016]TRPAl受體的激活劑包括但不限于肉桂醛、異硫氰酸烯丙酯、二硫化二烯丙基、icilin、肉桂油、冬青油、丁香油、丙烯醛、羥基-α-山椒素、2-氨基乙氧基二苯基硼酸酯、4_羥基壬烯醒(hydroxynonenal)、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、芥子油和3'-氨基甲酰聯(lián)苯_3_基環(huán)己基氨基甲酸酯(URB597)。TRPAl受體的其它激活劑描述于Taylor-Clark等，MolPharmacol(2007)PMID:18000030;Macpherson等，Nature(2007)445:541-545;和Hill等，JBiolChem(2007)282:7145-7153中。[0017]P2X受體的激活劑包括但不限于ATP、2_甲硫基-ATP、2'和:V-0-(4-苯甲?；郊柞；?-ATP以及ATP5'-O-(3-硫代三磷酸鹽(thiotriphosphate))。[0018]TRPM8受體的激活劑包括但不限于薄荷醇、iciIin、桉樹腦、芳樟醇、香葉醇和羥基香茅醛。[0019]某些實(shí)施方式中，第一化合物抑制電壓門控性鈉通道。該類的示例性抑制劑是QX-314、N-甲基-普魯卡因、QX-222、N-辛基-胍、9-氨基吖啶和泮庫溴銨(pancuronium)。[0020]其它實(shí)施方式中，第一化合物抑制電壓門控性鈣通道。該類的示例性抑制劑是D-890(季甲氧維拉帕米(quaternarymethoxyverapamiI))和CERM11888(季節(jié)普地爾(quaternarybepridil))。[0021]其它實(shí)施方式中，第一化合物是選自以下的化合物的季胺(quarternaryamine)衍生物或其他帶電衍生物:利魯唑、美西律(mexilitine)、苯妥英、卡馬西平、普魯卡因、阿替卡因、布比卡因(bupivicaine)、甲哌卡因(mepivicaine)、妥卡尼、丙胺卡因、雙異丙批胺(diisopyramide)、節(jié)環(huán)燒、奎尼丁、溴節(jié)銨(bretylium)、利法利嗪、拉莫三嗪、氟桂利嗪(flunarizine)和氟司必林(fluspirilene)。本文描述了示例性衍生物。[0022]本發(fā)明的特征還在于選自以下的化合物的季胺衍生物或其他帶電衍生物:利魯唑、美西律、苯妥英、卡馬西平、普魯卡因、阿替卡因、布比卡因、甲哌卡因、妥卡尼、丙胺卡因、雙異丙吡胺、芐環(huán)烷、奎尼丁、溴芐銨、利法利嗪、拉莫三嗪、氟桂利嗪和氟司必林。[0023]在相關(guān)方面，本發(fā)明的特征是藥物組合物，其包含藥學(xué)上可接受的賦形劑和選自以下的化合物的季銨衍生物或其他帶電衍生物:利魯唑、美西律、苯妥英、卡馬西平、普魯卡因、阿替卡因、布比卡因、甲哌卡因、妥卡尼、丙胺卡因、雙異丙吡胺、芐環(huán)烷、奎尼丁、溴芐銨、利法利嗪、拉莫三嗪、氟桂利嗪和氟司必林。[0024]本發(fā)明的特征還在于組合物，其包含:(i)第一化合物，其激活選自TRPV1、P2X(2/3)、TRPA1和TRPM8的受體；和(ii)第二化合物，其施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制這些離子通道，但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道，其中，當(dāng)TRPVl、P2X(2/3)、TRPAl和/或TRPM8受體被激活時(shí)，第二化合物能夠通過這些受體進(jìn)入疼痛感覺神經(jīng)元。一種實(shí)施方式中，所述第二化合物在施加于外表面時(shí)活性或部分活性降低，但在施加于內(nèi)表面時(shí)活性更大?？膳渲平M合物以用于例如:口服給藥、靜脈內(nèi)給藥、肌內(nèi)給藥、直腸給藥、皮膚給藥、皮下給藥、局部給藥、透皮給藥、舌下給藥、經(jīng)鼻給藥、陰道給藥、鞘內(nèi)給藥、硬膜外給藥、或眼部給藥，或通過注射、吸入或與鼻粘膜或口腔粘膜直接接觸給藥。如果需要，該組合物可含有激活TRPV1、P2X(2/3)、TRPAl和/或TRPM8受體的兩種或更多種化合物，和/或抑制一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的兩種或更多種化合物。[0025]本發(fā)明的特征還在于通過將細(xì)胞與以下物質(zhì)接觸來抑制該細(xì)胞中的一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的方法:(i)第一化合物，其激活選自TRPV1、P2X(2/3)、TRPAl和TRPM8的受體；和(ii)第二化合物，其施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制所述離子通道，但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道，其中，當(dāng)所述受體被激活時(shí)，所述第二化合物能夠通過所述受體進(jìn)入疼痛感覺神經(jīng)元。上文提供了合適的化合物。[0026]本發(fā)明的特征還在于鑒定有用于治療疼痛和癢感的化合物的方法。該方法包括以下步驟:(a)使表達(dá)TRPVl、TRPAl、TRPM8和/或P2X(2/3)的神經(jīng)元的外表面接觸:(i)第一化合物，其激活TRPV1、TRPA1、TRPM8*P2X(2/3)受體；和(ii)第二化合物，其施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制所述離子通道，但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道，以及(b)確定所述第二化合物是否抑制這些神經(jīng)元中的電壓門控性離子通道。第二化合物對(duì)電壓門控性離子通道的抑制將所述第二化合物鑒定為有用于治療疼痛和/或癢癥的化合物。[0027]這些方法、組合物和試劑盒還可用來選擇性阻滯表達(dá)TRPV、TRPA、TRPM和P2X受體家族中的不同成員的其它類型神經(jīng)元中的神經(jīng)元活性，其中第一化合物是存在于那些類型的神經(jīng)元中的具體TRPV、TRPA、TRPM和P2X受體的激動(dòng)劑，第二化合物是正常情況下不可透過膜的鈉或鈣通道阻斷劑。[0028]應(yīng)理解，可存在其他受體，其允許化合物進(jìn)入(神經(jīng)元細(xì)胞)，如果沒有該受體則所述化合物不能進(jìn)入。激活這些受體中的一種或多種的化合物聯(lián)合施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制所述通道但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道的一種或多種化合物的共同給藥也是本發(fā)明的一個(gè)方面。[0029]本發(fā)明的方法、組合物和試劑盒能夠阻抑疼痛或癢感而不改變輕觸或運(yùn)動(dòng)控制。例如，接受硬膜外給藥的患者將不會(huì)完全喪失感覺輸入。[0030]術(shù)語“疼痛”在本文使用其廣義含義，指所有類型的疼痛，包括急性和慢性疼痛，例如傷害感受性疼痛，如軀體疼痛(somatic)和內(nèi)臟疼痛；炎性疼痛；功能障礙性疼痛；特發(fā)性疼痛；神經(jīng)病性疼痛，例如中樞產(chǎn)生的疼痛和外圍產(chǎn)生的疼痛，偏頭痛和癌癥疼痛。[0031]術(shù)語“傷害感受性疼痛”用于包括所有由威脅或?qū)嶋H傷害身體組織的有害刺激引起的疼痛，所述有害刺激包括但不限于割傷(cut)、擦傷、骨折、擠壓傷害(crushinjury)、燒傷等等。組織傷害的疼痛受體(傷害感受器)主要位于皮膚、肌骨胳系統(tǒng)或內(nèi)臟中。[0032]術(shù)語“軀體疼痛”用于指骨、關(guān)節(jié)、肌肉、皮膚或結(jié)締組織產(chǎn)生的疼痛。通常這類疼痛限于局部(well-localized)。[0033]術(shù)語“內(nèi)臟疼痛”在本文用于指內(nèi)臟器官(例如呼吸器官、胃腸道和胰腺、泌尿道和生殖器官)產(chǎn)生的疼痛。內(nèi)臟疼痛包括由器官囊(capsule)的腫瘤牽涉(tumorinvolvement)而引起的疼痛。通常由中空內(nèi)臟的阻塞引起的另一種類型的內(nèi)臟疼痛，其特征為間歇疫攣性(cramping)并且不太限于局部的(poorlylocalized)疼痛。內(nèi)臟疼痛可與炎癥相關(guān)，如在膀胱炎或反流性食管炎中那樣。[0034]術(shù)語炎性疼痛包括與活動(dòng)性炎癥相關(guān)的疼痛，所述炎癥可由創(chuàng)傷、手術(shù)、感染和自身免疫疾病引起。[0035]術(shù)語“神經(jīng)病性疼痛”在本文用于指源自外周或中樞神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)由對(duì)這些系統(tǒng)的損害所引起的感覺輸入的異常加工的疼痛。[0036]術(shù)語“操作性疼痛”在本文用于指由醫(yī)療(medical)、牙科或手術(shù)操作引起的疼痛，其中所述操作通常預(yù)期有急性創(chuàng)傷或與急性創(chuàng)傷相關(guān)。[0037]術(shù)語“癢感”在本文用其廣義含義，指所有類型的局部和全身(generalized)性、急性間歇性和持久性的癢和刺痛(stinging)的感覺。癢感可以是由于肝病、腎病或癌癥而引起的原發(fā)性、過敏性、代謝性、傳染性、藥物誘導(dǎo)性癢感?！梆W(pruritus)”是嚴(yán)重的癢感。[0038]“患者”指任何動(dòng)物。一種實(shí)施方式中，患者是人?？墒褂帽景l(fā)明的方法、組合物和試劑盒治療的其他動(dòng)物包括但不限于非人靈長類動(dòng)物(例如，猴子、大猩猩、黑猩猩)、家畜(例如馬、豬、山羊、兔、綿羊、牛、羊騎)和伴侶動(dòng)物(例如豚鼠、大鼠、小鼠、蜥蜴、蛇、狗、貓、魚、倉鼠和鳥)。[0039]有用于本發(fā)明的化合物包括但不限于任何藥學(xué)上可接受形式的本文所述化合物，所述藥學(xué)上可接受的形式包括本文所述化合物的異構(gòu)體(例如非對(duì)映體和對(duì)映體)、鹽、酯、酰胺、硫酯、溶劑合物和多晶形，以及外消旋混合物和純的異構(gòu)體。[0040]“低分子量”指小于約500道爾頓。[0041]術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”表示在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)，適合用于與人和較低等動(dòng)物的組織接觸而無過度毒性、刺激、過敏反應(yīng)等并與合理的利益/風(fēng)險(xiǎn)比相稱的鹽。藥學(xué)上可接受的鹽是本領(lǐng)域熟知的?？稍诒景l(fā)明化合物的最后分離和純化期間原位制備所述鹽，或通過將游離堿官能團(tuán)與合適的有機(jī)酸反應(yīng)來單獨(dú)制備所述鹽。代表性的酸加成鹽包括但不限于乙酸鹽、己二酸鹽、海藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬氨酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽(camphorate)、樟腦磺酸鹽(camphersulfonate)、檸檬酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽(digluconate)、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽(hemisulfate)、庚酸鹽(heptonate)、己酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基-乙磺酸鹽、羥乙基磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲磺酸鹽(mesylate)、甲磺酸鹽(methanesulfonate)、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、撲酸鹽(pamoate)、果膠酯酸鹽(pectinate)、過硫酸鹽、3_苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、新戍酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一酸鹽、戊酸鹽等等。代表性的堿金屬鹽或堿土金屬鹽包括但不限于鈉、鋰、鉀、鈣、鎂等，以及無毒的銨、季銨和胺陽離子，包括但不限于銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙肢寸寸。[0042]在本發(fā)明化合物的一般描述中，取代基中具體類型的原子的數(shù)目通常以某一范圍給出，例如，含有1-4個(gè)碳原子的烷基或Cy烷基。提及此類范圍時(shí)，意在包括具體提及具有指定范圍內(nèi)的各整數(shù)原子的基團(tuán)。例如，1-4個(gè)碳原子的烷基包括CpC2,C3和C4中的每一個(gè)。Ch2雜烷基例如包括1-12個(gè)碳原予以及一個(gè)或多個(gè)雜原子?？梢园搭愃品绞奖硎驹雍推渌愋驮拥钠渌麛?shù)目。[0043]本文所用的術(shù)語“烷基”和前綴“烷(alk_)”包括直鏈和支鏈基團(tuán)以及環(huán)狀基團(tuán)，即環(huán)烷基。環(huán)狀基團(tuán)可以是單環(huán)或多環(huán)的，優(yōu)選具有3-6(包括3和6在內(nèi))個(gè)環(huán)碳原子。示例性環(huán)狀基團(tuán)包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、和環(huán)己基。[0044]“(V4烷基”指具有1-4個(gè)碳原子的支鏈或直鏈的烴基。CV4烷基可以是取代或未取代的。不例性的取代基包括烷氧基、芳氧基、疏基、燒硫基、芳硫基、1?素(halide)、羥基、氣代烷基、全氟烷基、氨基、氨基烷基、二取代的氨基、季氨基(quaternaryamino)、輕烷基、羧基烷基和羧基。CV4烷基包括但不限于甲基、乙基、正-丙基、異丙基、環(huán)丙基、環(huán)丙基甲基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基和環(huán)丁基。[0045]“C2_4烯基”指含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵并具有2-4個(gè)碳原子的支鏈或直鏈的烴基。C2_4烯基可任選地包括單環(huán)或多環(huán)，其中各環(huán)理想地為3-6元。C2_4烯基可以是取代或未取代的。不例性的取代基包括烷氧基、芳氧基、疏基、燒硫基、芳硫基、鹵素、羥基、氣代烷基、全氣烷基、氣基、氣基烷基、二取代的氣基、季氣基、輕烷基、竣基烷基和竣基。C2_4烯基包括但不限于乙烯基、烯丙基、2-環(huán)丙基-1-乙烯基、1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2_甲基-1-丙烯基和2_甲基_2_丙烯基。[0046]“C2_4炔基”指含有一個(gè)或多個(gè)三鍵并具有2-4個(gè)碳原子的支鏈或直鏈的烴基。C2_4炔基可任選地包括單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)，其中各環(huán)理想地為5或6元。C2_4炔基可以是取代或未取代的。不例性的取代基包括烷氧基、芳氧基、疏基、燒硫基、芳硫基、鹵素、羥基、氣代燒基、全氣烷基、氣基、氣基烷基、二取代的氣基、季氣基、輕烷基、竣基烷基和竣基。C2_4炔基包括但不限于乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基和3-丁炔基。[0047]“C2_6雜環(huán)基”指穩(wěn)定的5-7元單環(huán)或7-14元雙環(huán)雜環(huán)，其為飽和、部分不飽和或不飽和(芳族)的，由2-6個(gè)碳原子和獨(dú)立地選自N、O和S的1、2、3或4個(gè)雜原子組成，包括其中任何以上定義的雜環(huán)與苯環(huán)融合的任何二環(huán)基團(tuán)。雜環(huán)基可以是取代或未取代的。不例性的取代基包括烷氧基、芳氧基、疏基、燒硫基、芳硫基、鹵素、羥基、氣代烷基、全氣烷基、氣基、氣基烷基、二取代的氣基、季氣基、輕烷基、竣基烷基和竣基。氣和硫雜原子可任選地被氧化。雜環(huán)可經(jīng)由產(chǎn)生穩(wěn)定結(jié)構(gòu)的任何雜原子或碳原子而共價(jià)連接，例如，咪唑啉基環(huán)可在環(huán)碳原子位置或氮原子處連接。雜環(huán)中的氮原子可任選地季銨化。優(yōu)選當(dāng)雜環(huán)中S和O原子的總數(shù)超過1時(shí)，這些雜原子不彼此毗鄰。雜環(huán)包括但不限于IH-吲唑、2-吡咯烷酮基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、2H-吡咯基、3H-吲哚基、4-哌啶酮基、4aH_咔唑、4H-喹嗪基、6H-1，2，5-噻二嗪基(thiadiazinyl)、吖啶基、吖辛因基(azocinyl)、苯并咪唑基、苯并咲喃基、苯并喔吩基(benzothiofuranyl)、苯并苯硫基(benzothiophenyl)、苯并嚼唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并異嚼唑基、苯并異噻唑基、苯并咪唑麗基(benzimidazalonyl)、咔唑基、4aH_咔唑基、b_咔琳基(carbolinyl)、苯并二氧吡喃基、苯并吡喃基、噌啉基、十氫喹啉基、2H，6H-1，5，2—二噻嗪基、二氫呋喃并[2，3-b]四氫呋喃、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、IH-吲唑基、亞吲哚基(indolenyl)、二氫11引哚基、中氮卻基、11引哚基、異苯并呋喃基(isobenzofuranyl)、異苯并二氫批喃基、異11引唑基、異二氫氮雜卻基(isoindolinyl)、異氮雜卻基(isoindolyl)、異喹啉基、異噻唑基、異囉唑基、嗎啉基、1，5二氮雜萘基、八氫異喹啉基(octahydroisoquinolinyl)、噁二唑基、I，2，3-囉二唑基、1，2，4-囉二唑基、I，2，5-_二唑基、1，3，4_噁二唑基、噁唑烷基、喔唑基、囉唑烷基萘嵌間二氮雜苯基(oxazolidinylperimidinyl)、菲唳基、菲咯啉基、吩舭嗪基、吩嗪基、吩噻嗪基、phenoxathiiny1、吩1?嗪基、2，3—二氮雜萘基、哌嗪基、哌啶基、蝶啶基(pteridinyl)、哌啶酮基、4-哌啶酮基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、批唑啉基、吡唑基、噠嗪基、吡啶并囉唑基(pyridooxazoIe)、吡啶并咪唑基、吡啶并噻唑基、吡啶基(pyridinyl)、吡啶基(pyridyl)、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎寧環(huán)基、咔啉基、四氫呋喃基、四氫異喹啉基、四氫喹啉基、6H-1，2，5-噻二嗪基、I，2，3-噻二唑基、I，2，4-噻二唑基、I，2，5-噻二唑基、I，3，4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并囉唑基、噻吩并咪唑基、苯硫基、三嗪基、I，2，3-三唑基、I，2，4-三唑基、I，2，5-三唑基、I，3，4-三唑基、咕噸基。優(yōu)選的5_10元雜環(huán)包括但不限于吡啶基、嘧啶基、三嗪基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、異噁唑基、四唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、剛噪基、苯并咪唑基、IH-吲唑基、噁挫烷基、異噁唑烷基、苯并三唑基、苯并異噁唑基、羥吲哚基(oxindolyl)、苯并嗤唑啉基、喹啉基和異喹啉基。優(yōu)選的5-6元雜環(huán)包括但不限于吡啶基、嘧啶基、三嗪基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯基、哌嗪基、哌啶基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、異嚷唑基和四唑基。[0048]“C6_12芳基”指具有由帶有共軛π電子的碳原子組成的環(huán)狀系統(tǒng)的芳基(例如苯基)。芳基具有6-12個(gè)碳原子。芳基可任選地包括單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)，其中各環(huán)理想地具有5或6個(gè)成員。芳基可以是取代或未取代的。示例性的取代基包括烷基、羥基、烷氧基、芳氧基、巰基、烷硫基、芳硫基、鹵素、氟代烷基、羧基、羥烷基、羧基烷基、氨基、氨基烷基、單取代的氨基、二取代的氨基和季氨基。[0049]“C7_14烷芳基”指被芳基(例如芐基、苯乙基或3，4—二氯苯乙基)取代的烷基，其具有7-14個(gè)碳原子。[0050]“C3_1(l烷雜環(huán)基”指被雜環(huán)基取代的烷基，其具有3-10個(gè)碳原予以及一個(gè)或多個(gè)雜原子(例如3-呋喃基甲基、2-呋喃基甲基、3-四氫呋喃基甲基或2-四氫呋喃基甲基)。[0051]“(V7雜烷基”指支鏈或直鏈的烷基、烯基或炔基基團(tuán)，其具有1-7個(gè)碳原予以及1、2、3或4個(gè)獨(dú)立地選自N、O、S和P的雜原子。雜烷基包括但不限于叔胺、仲胺、醚、硫醚、酰胺、硫代酰胺、氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯、腙、亞胺、磷酸二酯、氨基磷酸酯(phosphoramidates)、氨磺酰和二硫化物。雜烷基可任選地包括單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)，其中各環(huán)理想地具有3-6個(gè)成員。雜烷基可以是取代或未取代的。示例性的取代基包括烷氧基、芳氧基、疏基、燒硫基、芳硫基、鹵素、羥基、氣代烷基、全氣烷基、氣基、氣基烷基、~取代的氣基、季氣基、輕烷基、輕烷基、竣基烷基和竣基。Cu雜烷基的例子包括但不限于甲氧基甲基和乙氧基乙基。[0052]“鹵素”指溴、氯、碘或氟。[0053]“氟代烷基”指被氟原子取代的烷基。[0054]“全氟烷基”指僅由碳和氟原子組成的烷基。[0055]“羧基烷基”指具有式-(R)-COOH的化學(xué)部分，其中R選自C^7烷基、C2_7烯基、C2_7炔基、c2_6雜環(huán)基、C6_12芳基、C7_14烷芳基、C3,烷雜環(huán)基或Cu雜烷基。[0056]“羥基烷基”指具有式-(R)-OH的化學(xué)部分，其中R選自Cm烷基、C2_7烯基、C2_7炔基、C2_6雜環(huán)基、C6_12芳基、C7_14烷芳基、C3,烷雜環(huán)基或C1^雜烷基。[0057]“烷氧基”指具有式-OR的化學(xué)取代基，其中R選自Cw烷基、C2_7烯基、C2_7炔基、c2_6雜環(huán)基、C6_12芳基、C7_14烷芳基、C3,烷雜環(huán)基或CV7雜烷基。[0058]“芳氧基”指式-OR的化學(xué)取代基，其中R是C6_12芳基。[0059]“烷硫基”指式-SR的化學(xué)取代基，其中R選自C^7烷基、C2_7烯基、C2_7炔基、C2_6雜環(huán)基、c6_12芳基、c7_14烷芳基、c3_1(l烷雜環(huán)基或CV7雜烷基。[0060]“芳硫基”指式-SR的化學(xué)取代基，其中R是C6_12芳基。[0061]“季氨基”指式-(R)-N(R’)(R”)(R”’)+的化學(xué)取代基，其中R、R’、R”和R”’各自獨(dú)立地是烷基、烯基、炔基或芳基基團(tuán)。R可以是烷基，其將作為取代基的季氨基氮原子與另一部分連接。氮原子N共價(jià)連接于烷基、雜烷基、雜芳基和/或芳基基團(tuán)的四個(gè)碳原子，導(dǎo)致氮原子處帶一個(gè)正電荷。[0062]“帶電部分”指在生理pH下獲得質(zhì)子從而變?yōu)閹д姾傻牟糠?例如銨、胍錄(guanidinium)或脈鐵(amidinium))或包含凈正電荷形式(netformalpositivecharge)而無質(zhì)子化的部分(例如季銨)。所述帶電部分可以是永久帶電的或瞬時(shí)帶電的。[0063]本文所用和術(shù)語“母體(parent)”指通道阻斷化合物，其可通過存在于母體化合物中的胺氮原子的季銨化或鳥苷酸化(guanylation)作用而被修飾。季銨化和鳥苷酸化的化合物是母體化合物的衍生物。本文所述的胍基衍生物以它們的不帶電的堿形式存在。這些化合物可作為鹽(即，酸加成鹽)施用，或以其不帶電的堿形式(經(jīng)原位質(zhì)子化而形成帶電部分)施用。[0064]通過下文的發(fā)明詳述和權(quán)利要求書，本發(fā)明的其它特征和優(yōu)點(diǎn)將非常明顯?！緦＠綀D】【附圖說明】[0065]圖1.共同給予胞外QX_314(5mM)和辣椒素(IμM)來選擇性阻斷辣椒素響應(yīng)性(capsaicin-responsive)背根神經(jīng)節(jié)(DRG)感覺神經(jīng)元中的鈉電流。(a)左欄:在培養(yǎng)的小的(24μπι)辣椒素-敏感性成人(adult)DRG神經(jīng)元中，單獨(dú)的5mMQX-314、單獨(dú)的IμM辣椒素以及共同施用的5mMQX-314和IμM辣椒素的10分鐘洗進(jìn)(wash_in)對(duì)鈉電流(通過-70至-5mV的步驟來引發(fā))的影響。上欄(toppanel):短暫(brief)施用辣椒素在該神經(jīng)元中誘導(dǎo)了延長的向內(nèi)電流(保持電壓-70mV)。右欄:相同系列的藥物施用對(duì)大的(52μm)辣椒素-不敏感性神經(jīng)元的鈉電流的影響。(b)作為試驗(yàn)脈沖的函數(shù)的峰值向內(nèi)電流，所述試驗(yàn)脈沖在對(duì)照(□方塊)、僅存在5mMQX-314(?圓)、僅IμM辣椒素(▲正三角形)和共同施用的5mMQX-314和IμM辣椒素(▼倒三角形)中記錄。符號(hào)顯示對(duì)25個(gè)小的辣椒素敏感性神經(jīng)元的試驗(yàn)的平均值土SEM。通過20ms去極化步驟，即以5mV增量從-70mV的保持電位(holdingpotential)(變化)至測試電位范圍，引發(fā)電流。(c)辣椒素和QX-314的組合對(duì)峰值鈉電流影響的時(shí)間過程。柱形代表相對(duì)于對(duì)照歸一化的峰值鈉電流的平均值土SEM(n=25)。[0066]圖2.共同施用QX-314和辣椒素阻斷傷害感受樣(nociceptive-like)DRG神經(jīng)元的興奮性。(a)施加于小的(23μm)DRG神經(jīng)元的去極化電流步驟(250pA,4ms)引發(fā)傷害感受器樣寬泛動(dòng)作電位，在下降階段有突出的偏轉(zhuǎn)(deflection)(箭頭)。QX_314(5mM)的2分鐘洗進(jìn)沒有影響(第二欄)。辣椒素(ΙμΜ)減少了動(dòng)作電位振幅(第三欄)，這可能是如圖1中所示的辣椒素對(duì)鈉電流的適度降低和辣椒素產(chǎn)生的去極化作用繼發(fā)的鈉電流鈍化的組合的結(jié)果(probablyduetoacombinationofthemodestreductionofsodiumcurrentproducedbycapsaicinasinFigurelandinactivationofsodiumcurrentsecondarytothedepolarizationproducedbycapsaicin)。即使用大得多的剌激電流注入，共同施用的QX-314和辣椒素仍然完全消除了動(dòng)作電位的產(chǎn)生。(b)動(dòng)作電位振幅的平均值土SEM(對(duì)QX-314而言，n=25;對(duì)辣椒素和辣椒素+QX-314而言，n=15)。[0067]圖3.足底內(nèi)注射辣椒素(IOyg/IOyL)連通QX_314(2%，10μL)導(dǎo)致對(duì)機(jī)械(vonFrey絲(vonFreyfilaments))和熱有害刺激的延長的局部麻醉。(a)足底內(nèi)僅注射0乂-314(2%，101^;綠色符號(hào))、僅注射辣椒素(IOyg/10μL;黑色符號(hào))或QX-314和辣椒素一起施用(紅色符號(hào))之后，響應(yīng)于增加強(qiáng)度的vonFrey絲(hairs)的縮爪機(jī)械閾。對(duì)最大效果時(shí)間點(diǎn)示出了對(duì)最高值(57g，箭頭)根本不應(yīng)答的動(dòng)物數(shù)目。(*=p〈0.05，各組n=6)。(b)與(a)中相同組別的縮爪熱(輻射熱)閾值(Sameforthermal(radiantheat)thresholdforpawwithdrawal)。箭頭指示截?cái)嘀?cutoff),對(duì)最大效果時(shí)間點(diǎn)示出了對(duì)最強(qiáng)刺激不應(yīng)答的動(dòng)物數(shù)目。(*=P〈0.05，各組n=6)。[0068]圖4.鄰近坐骨神經(jīng)注射QX-314然后注射辣椒素麻醉了動(dòng)物的后肢對(duì)有害機(jī)械和熱刺激(的反應(yīng))而沒有產(chǎn)生任何運(yùn)動(dòng)缺陷。(a)對(duì)坐骨神經(jīng)僅注射QX_314(0.2%，100μL)、僅注射辣椒素(0.5μg/μL，100μL)或在注射辣椒素之前10分鐘注射QX-314之后，響應(yīng)于增加強(qiáng)度的vonFrey絲的縮爪機(jī)械閾。對(duì)最大效果時(shí)間點(diǎn)示出了對(duì)最高值(57g，箭頭)根本不應(yīng)答的動(dòng)物數(shù)目。(*=ρ〈0.05,**=ρ〈0.01,各組n=6)。(b)與(a)中相同組別的縮爪熱(輻射熱)閾值。(c)坐骨神經(jīng)注射利多卡因(2%;0.2%)、QX-314(0.2%),辣椒素(5yg/10μL)和注射QX-314然后注射辣椒素之后評(píng)價(jià)的運(yùn)動(dòng)功能變化(評(píng)分:2=完全麻痹；1=部分麻痹；0=沒有損害)。各柱上示出了受注射影響的動(dòng)物數(shù)目。[0069]圖5.小的背根神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中鈉通道電流的電壓鉗(Voltageclamp)記錄。數(shù)據(jù)說明，單獨(dú)的丁香酚對(duì)鈉電流有適度的抑制效果(10-20%抑制)。共同施用丁香酚和QX-314產(chǎn)生累進(jìn)性阻斷，可在7分鐘后完成。示出了兩個(gè)例子，其代表結(jié)果類似的10個(gè)試驗(yàn)。[0070]圖6.共同施用TRPA激動(dòng)劑芥子油(MO)(50μΜ)和QX-314(5mM)。單獨(dú)的MO使鈉電流減少了20-30%，約在3分鐘后達(dá)到平臺(tái)期(plateau)。共同施用MO和QX-314顯著減少了鈉電流。【具體實(shí)施方式】[0071]目前在開發(fā)治療疼痛的藥物中對(duì)疼痛感覺神經(jīng)元中的電壓依賴性離子通道十分感興趣。阻斷疼痛感覺神經(jīng)元中的電壓依賴性鈉通道可通過妨礙動(dòng)作電位的起始和傳送來阻斷疼痛信號(hào)，阻斷鈣通道可阻止疼痛信號(hào)神經(jīng)傳遞至脊髓中的二級(jí)(thesecondorder)神經(jīng)元。迄今，設(shè)計(jì)阻斷鈉通道或鈣通道的小有機(jī)分子的局限是當(dāng)這些分子外部施加于靶細(xì)胞時(shí)必須有活性。這些外部施加的分子絕大多數(shù)是疏水性的并可穿過膜。因此，它們將進(jìn)入所有細(xì)胞并因此沒有僅影響疼痛感覺神經(jīng)元這種選擇性。然而，已知一些阻斷劑，例如QX-314，僅當(dāng)存在于細(xì)胞內(nèi)時(shí)有效。迄今為止，主要用電生理學(xué)記錄技術(shù)(例如通過以機(jī)械方式使膜破裂而允許細(xì)胞內(nèi)部透析的完整細(xì)胞膜片鉗技術(shù))來研究此類阻斷劑。機(jī)械破裂而不殺死細(xì)胞的難度以及后續(xù)將阻斷劑可逆性施加于細(xì)胞內(nèi)部的難度排除了發(fā)展對(duì)可能在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用的藥物分子的高通量篩選試驗(yàn)(的可能性)。[0072]我們已發(fā)現(xiàn)了將電壓門控性離子通道的抑制劑遞送入傷害感受性神經(jīng)元的方法。通過為這些抑制劑提供進(jìn)入傷害感受性神經(jīng)元的手段，本發(fā)明允許在篩選和治療中使用在細(xì)胞內(nèi)部有活性作為藥物阻斷劑，但不必可透過膜的所有類型的分子。此外，限制此類阻斷劑僅進(jìn)入到處于治療狀況下的疼痛感覺神經(jīng)元中，允許使用未必對(duì)疼痛感覺神經(jīng)元(相對(duì)于其他類型的細(xì)胞)中的離子通道具有固有選擇性的藥物，而是通過允許這些阻斷劑相對(duì)于神經(jīng)和心血管系統(tǒng)中的其他細(xì)胞優(yōu)先進(jìn)入疼痛感覺神經(jīng)元，來獲得對(duì)疼痛感覺神經(jīng)元的選擇性作用。另外，由于特別是TRPVl受體往往在與疼痛(例如炎癥)相關(guān)的組織狀況中活性更大，因此更有利于進(jìn)入與產(chǎn)生疼痛的組織最為相關(guān)的特定感覺神經(jīng)元中。癢感敏感性初級(jí)感覺神經(jīng)元也表達(dá)TRP通道，特別是TRPV1，也可適應(yīng)于本方法。[0073]下文更詳細(xì)地描述了本發(fā)明。[0074]電壓門控性離子通道的抑制劑[0075]適合用于本發(fā)明的方法、組合物和試劑盒的電壓門控性離子通道的抑制劑理想地是帶正電荷的親水性化合物。一種實(shí)施方式中，所述化合物是永久性帶電的(即，帶有的電荷不是瞬時(shí)的)。另一種實(shí)施方式中，所述化合物是瞬時(shí)帶電的。電壓門控性鈉通道的合適抑制劑包括但不限于QX-314、N-甲基-普魯卡因(QX-222)、N_辛基-胍、9-氨基吖啶和泮庫溴銨。電壓門控性鈣通道的合適抑制劑包括但不限于D-890(季甲氧維拉帕米)和CERMl1888(季芐普地爾)。[0076]另外，有多種大小適用于本發(fā)明方法(例如約100-4，OOODa,100-3，OOODa,100-2，OOODa、150-1，500Da、或甚至200-1，200Da)并具有胺基團(tuán)或可被修飾以具有胺基團(tuán)的電壓門控性離子通道的已知抑制劑，所述胺基團(tuán)容易被修飾而帶電荷(例如帶正電的季胺，或瞬時(shí)帶電的鳥苷酸化化合物)。此類抑制劑包括但不限于利魯唑、美西律、苯妥英、卡馬西平、普魯卡因、妥卡尼、丙胺卡因、雙異丙吡胺、芐環(huán)烷、奎尼丁、溴芐銨、利法利嗪、拉莫三嗪、氟桂利嗪、阿替卡因、布比卡因、甲哌卡因和氟司必林。[0077]可用于本發(fā)明組合物、試劑盒和方法中的化合物包括如下式1-X的化合物。[0078]【權(quán)利要求】1.體外抑制傷害感受器細(xì)胞或瘙癢感受器細(xì)胞中的一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的方法，所述方法包括使所述細(xì)胞與以下物質(zhì)接觸:(i)第一化合物，其激活存在于所述細(xì)胞上的TRPVl受體；和(?)第二化合物，其施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性鈉離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制所述通道，但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道，其中，當(dāng)所述TRPVl受體被激活時(shí)，所述第二化合物能夠通過所述受體進(jìn)入所述細(xì)胞。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述第二化合物是QX-314、N-甲基-普魯卡因、QX-222、N-辛基-胍、9-氨基吖啶或泮庫溴銨。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述第二化合物具有式(I)-(X)中的任意一種。4.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述第二化合物是選自以下的化合物的含季胺衍生物:普魯卡因、阿替卡因、布比卡因、甲哌卡因、妥卡尼、和丙胺卡因。5.化合物在制備用于治療患者的疼痛或癢感的藥物中的用途，所述化合物施加于一個(gè)或多個(gè)電壓門控性離子通道的內(nèi)表面時(shí)抑制所述離子通道，但施加于所述通道的外表面時(shí)基本上不抑制所述通道，其中，當(dāng)TRPVl受體被激活時(shí)，所述化合物能夠通過所述受體進(jìn)入傷害感受器或瘙癢感受器。6.如權(quán)利要求5所述的用途，其中所述化合物是QX-314、N-甲基-普魯卡因、QX-222、N-辛基-胍、9-氨基吖啶或泮庫溴銨。7.如權(quán)利要求5所述的用途，其中所述化合物具有式(I)-(X)中的任意一種。8.如權(quán)利要求5所述的用途，其中所述化合物是選自以下的化合物的含季胺衍生物:普魯卡因、阿替卡因、布比卡因、甲哌卡因、妥卡尼、和丙胺卡因?！疚臋n編號(hào)】A61K31/473GK103933572SQ201410034926【公開日】2014年7月23日申請(qǐng)日期:2007年11月19日優(yōu)先權(quán)日:2006年11月20日【發(fā)明者】B.P.比恩,C.J.伍爾夫申請(qǐng)人:哈佛大學(xué)校長及研究員協(xié)會(huì),綜合醫(yī)院公司