藥劑緩釋載體的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種使用了絲纖蛋白多孔質(zhì)體的藥劑緩釋載體，其藥劑緩釋率高、藥劑緩釋速度可控、強(qiáng)度高、容易處理，還由于生物親和性高從而對(duì)皮膚溫和，且保水性高，能夠有效保持藥劑。
【專利說(shuō)明】藥劑緩釋載體

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藥劑緩釋載體。

【背景技術(shù)】
[0002] -直以來(lái)，作為對(duì)患者給予藥劑的方法，已知有經(jīng)口給藥。但是經(jīng)口給藥具有以下 缺點(diǎn)：胃腸損害等副作用，無(wú)法繞過(guò)肝臟從而無(wú)法避免最初通過(guò)時(shí)的代謝，或者治療濃度和 毒性濃度間狹窄區(qū)域內(nèi)的給藥控制困難等。
[0003] 作為解決上述缺點(diǎn)的手段，正在嘗試以經(jīng)皮用制劑形式來(lái)使用藥劑。為了長(zhǎng)期穩(wěn) 定地經(jīng)皮吸收藥效成分，經(jīng)皮用制劑使用具有藥理學(xué)活性的活性物質(zhì)控制向皮膚的滲透。 作為前述活性物質(zhì)，也考慮過(guò)使用表面活性劑或其它滲透劑。但是這些活性物質(zhì)大多存在 實(shí)質(zhì)上損傷皮膚組織、此外產(chǎn)生不良的副作用的可能。
[0004] 此外，還存在泥罨劑這樣的、在油劑等基材中混煉藥劑從而控制緩釋速度的包覆 材料，但其保水性、吸水性差，存在悶捂患部而影響皮膚、難以用于存在滲出液的創(chuàng)面的問(wèn) 題。
[0005] 作為控制藥劑的緩釋性的其它方法，提出了通過(guò)使藥效成分保持在合成高分子、 天然高分子的凝膠或多孔質(zhì)體等藥劑載體中從而控制藥劑的經(jīng)皮滲透的方法（專利文獻(xiàn)1 及2)。
[0006] 此外，還提出了通過(guò)載體分解而具有緩釋性的緩釋載體（專利文獻(xiàn)3?5)。另外， 已知蠶絲是天然高分子中生物親和性高的物質(zhì)，一直以來(lái)用作縫合線等，安全性高。蠶絲 由絲膠、絲心蛋白形成，已經(jīng)提出了多種加工方法，例如提出了使用絲纖蛋白獲得的水凝膠 (專利文獻(xiàn)6)。
[0007] 專利文獻(xiàn)1 :日本特開(kāi)平8-175981號(hào)公報(bào)
[0008] 專利文獻(xiàn)2 :日本特表2007-520614號(hào)公報(bào) [0009] 專利文獻(xiàn)3 :日本特開(kāi)平5-43453號(hào)公報(bào) [0010] 專利文獻(xiàn)4 :日本特開(kāi)平9-192211號(hào)公報(bào)
[0011] 專利文獻(xiàn)5 :日本特開(kāi)平2004-123576號(hào)公報(bào)
[0012] 專利文獻(xiàn)6 :日本專利第3412014號(hào)公報(bào)

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0013] 圖1為實(shí)施例1中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0014] 圖2為實(shí)施例2中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0015] 圖3為實(shí)施例3中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0016] 圖4為實(shí)施例4中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0017] 圖5為實(shí)施例5中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0018] 圖6為實(shí)施例6中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0019] 圖7為實(shí)施例7中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0020] 圖8為實(shí)施例8中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0021] 圖9為實(shí)施例9中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0022] 圖10為實(shí)施例10中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0023] 圖11為實(shí)施例11中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0024] 圖12為實(shí)施例12中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0025] 圖13為實(shí)施例13中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0026] 圖14為實(shí)施例14中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0027] 圖15為實(shí)施例15中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0028] 圖16為實(shí)施例16中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0029] 圖17為實(shí)施例17中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0030] 圖18為實(shí)施例18中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0031] 圖19為實(shí)施例19中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0032] 圖20為實(shí)施例20中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0033] 圖21為實(shí)施例21中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0034] 圖22為實(shí)施例22中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0035] 圖23為實(shí)施例23中制造的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片。
[0036] 圖24為表示實(shí)施例28中的在平面培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)皿中靜置絲纖蛋白多孔 質(zhì)體的情況的圖。
[0037] 圖25為表示實(shí)施例28中的在絲纖蛋白多孔質(zhì)體的表面接種成纖維細(xì)胞并將細(xì)胞 培養(yǎng)2周后的情況的圖。
[0038] 圖26為表示實(shí)施例28中的在明膠海綿中接種成纖維細(xì)胞并將細(xì)胞培養(yǎng)2周后的 情況的圖。
[0039] 圖27為表示實(shí)施例28中的粘連性試驗(yàn)結(jié)果的圖像。
[0040] 圖28為表示實(shí)施例29?32的緩釋率的圖。
[0041] 圖29為表示實(shí)施例33的血小板源性生長(zhǎng)因子（PDGF)對(duì)培養(yǎng)液的緩釋率的圖。
[0042] 圖30為表示實(shí)施例34的堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（b-FGF)對(duì)培養(yǎng)液的緩釋率的 圖。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0043] 發(fā)明要解決的課題
[0044] 但是，將專利文獻(xiàn)1及2所述那樣的合成高分子作為藥劑載體時(shí)，存在與皮膚的親 和性差以及保水性差、緩釋速度難以控制、緩釋效率低等問(wèn)題。此外，將天然高分子作為藥 劑載體時(shí)，雖然具有與皮膚的親和性高的優(yōu)點(diǎn)，但存在強(qiáng)度低這一問(wèn)題。因此，天然高分子 的情況下，需要通過(guò)利用交聯(lián)劑形成的交聯(lián)體、使用補(bǔ)強(qiáng)材料、用紗布等包裹來(lái)確保強(qiáng)度。 但是在為了確保強(qiáng)度而使用交聯(lián)劑時(shí)，有殘存的交聯(lián)劑對(duì)皮膚帶來(lái)不良影響之擔(dān)憂。此外， 使用補(bǔ)強(qiáng)材料時(shí)，有結(jié)構(gòu)復(fù)雜、剝離時(shí)藥劑載體的一部分殘留在皮膚上之擔(dān)憂。進(jìn)而，用紗 布等包裹而確保強(qiáng)度時(shí)，與皮膚接觸的是紗布等現(xiàn)有類(lèi)型的包覆材料，生物親和性高、保水 性高的凝膠、多孔質(zhì)體并不接觸皮膚，因此存在無(wú)法充分發(fā)揮效果的問(wèn)題。
[0045] 如專利文獻(xiàn)3?5所述的緩釋載體存在載體在體外難以分解、對(duì)皮膚等難以適用 的問(wèn)題。此外，在使用如專利文獻(xiàn)6所述的水凝膠作為藥劑緩釋載體時(shí)，存在藥劑緩釋速度 不可控的問(wèn)題。
[0046] 因此，本發(fā)明的目的在于，提供一種藥劑緩釋率高、藥劑緩釋速度可控、強(qiáng)度高、容 易處理，還由于生物親和性高從而對(duì)皮膚溫和，且保水性高，能夠有效保持藥劑的藥劑緩釋 載體。
[0047] 用于解決課題的手段
[0048] 本發(fā)明人等為了解決前述課題反復(fù)進(jìn)行了深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過(guò)下述發(fā)明可以 解決所述課題。
[0049] BP，本發(fā)明的主旨如下。
[0050] 1. -種藥劑緩釋載體，其使用了絲纖蛋白多孔質(zhì)體。
[0051] 2.根據(jù)前述1所述的藥劑緩釋載體，其中，所述絲纖蛋白多孔質(zhì)體用水溶性高分 子處理過(guò)。
[0052] 3.根據(jù)前述2所述的藥劑緩釋載體，其中，所述水溶性高分子為包含選自多糖類(lèi) 及聚氨基酸中的至少一種的材料。
[0053] 4.根據(jù)前述3所述的藥劑緩釋載體，其中，所述多糖類(lèi)包含選自肝素及硫酸軟骨 素中的至少一種。
[0054] 5.根據(jù)前述1?4中任一項(xiàng)所述的藥劑緩釋載體，其中，所負(fù)載的藥劑包含生長(zhǎng)因 子。
[0055] 6.根據(jù)前述5所述的藥劑緩釋載體，其中，所述生長(zhǎng)因子為選自成纖維細(xì)胞生長(zhǎng) 因子（FGF)、血小板源性生長(zhǎng)因子（PDGF)及表皮生長(zhǎng)因子（EGF)中的至少一種。
[0056] 7.根據(jù)前述1?6中任一項(xiàng)所述的藥劑緩釋載體，其中，所述多孔質(zhì)體的拉伸強(qiáng)度 為 0· 1 ?400kPa。
[0057] 發(fā)明的效果
[0058] 根據(jù)本發(fā)明，可以提供藥劑緩釋率高、藥劑緩釋速度可控、強(qiáng)度高、容易處理，還由 于生物親和性高從而對(duì)皮膚溫和，且保水性高，能夠有效保持藥劑的藥劑緩釋載體。

【具體實(shí)施方式】
[0059]〔藥劑緩釋載體〕
[0060] 本發(fā)明的藥劑緩釋載體的特征在于使用了絲纖蛋白多孔質(zhì)體。
[0061] 這里，絲纖蛋白多孔質(zhì)體是指含有絲纖蛋白的優(yōu)選具有1?300 μ m的平均細(xì)孔徑 的多孔質(zhì)體。
[0062] 構(gòu)成本發(fā)明的藥劑緩釋載體的絲纖蛋白多孔質(zhì)體具有優(yōu)異的緩釋性，不實(shí)施處理 即可直接使用，但為了控制緩釋速度優(yōu)選進(jìn)行表面處理后使用。作為表面處理方法，沒(méi)有特 別限定，可以列舉Y射線、電子束、等離子體處理等物理性處理。
[0063] 此外，可以列舉臭氧、鹽酸等氧化劑處理；利用氫氧化鈉水溶液等進(jìn)行的堿處理； 使用具有醛基、環(huán)氧基等反應(yīng)性基團(tuán)的試劑的化學(xué)修飾處理；使用水溶性高分子、低分子材 料的處理等。這些中，為了保持絲纖蛋白多孔質(zhì)體的性質(zhì)，能夠在溫和條件下進(jìn)行處理的方 法是理想的，優(yōu)選用水溶性高分子進(jìn)行處理。
[0064] 作為前述水溶性高分子，優(yōu)選對(duì)生物體的安全性高的材料，具體而言優(yōu)選多糖類(lèi)、 聚氨基酸。作為多糖類(lèi)，可以優(yōu)選列舉淀粉、纖維素、幾丁質(zhì)、殼聚糖、瓊脂糖、卡拉膠、肝素、 硫酸軟骨素、透明質(zhì)酸、果膠等。此外，也可以使用對(duì)這些多糖類(lèi)進(jìn)行化學(xué)修飾而得的羧甲 基纖維素等。
[0065] 此外，作為聚氨基酸，可以優(yōu)選列舉聚賴氨酸、聚海藻酸、聚天冬氨酸、聚谷氨酸 等。本發(fā)明中，這些多糖類(lèi)、聚氨基酸可以單獨(dú)使用或者將多種組合使用。
[0066] 本發(fā)明中，通過(guò)使用實(shí)施了表面處理等的絲纖蛋白多孔質(zhì)體，能夠維持高藥劑緩 釋率并使緩釋速度容易控制。此外，通過(guò)使用前述多糖類(lèi)或聚氨基酸等的濃度高的材料作 為水溶性高分子，能夠獲得具有更快的緩釋速度的藥劑緩釋載體。
[0067] 這些多糖類(lèi)或聚氨基酸優(yōu)選溶解于例如水、緩沖液、生理鹽水等中來(lái)使用，此時(shí)的 濃度優(yōu)選為〇. 05?50U/ml，更優(yōu)選為0. 1?45U/ml，進(jìn)而優(yōu)選為0. 2?35U/ml。當(dāng)濃度在 前述范圍內(nèi)時(shí)，隨著濃度增大，能夠有效地獲得更快的緩釋速度。此外，通過(guò)調(diào)整該濃度還 能夠容易地控制緩釋速度。
[0068] 絲纖蛋白多孔質(zhì)體的拉伸強(qiáng)度優(yōu)選為0. lkPa?400kPa。當(dāng)為0. lkPa以上時(shí)，具 有充分的強(qiáng)度，作為藥劑緩釋載體時(shí)容易處理，藥劑緩釋載體在皮膚上的殘留變少。另一方 面，當(dāng)為400kPa以下時(shí)，與皮膚的密合性得以保持。從以上觀點(diǎn)出發(fā)，拉伸強(qiáng)度更優(yōu)選為 lkPa ?300kPa，進(jìn)而優(yōu)選為 5kPa ?200kPa。
[0069] 本發(fā)明的藥劑緩釋載體優(yōu)選保持所吸收的水分的保水率高。保水率高則吸收的滲 出液不易流出。更具體而言，通過(guò)下述方法計(jì)算的保水率優(yōu)選為85?100%。當(dāng)保水率為 85%以上時(shí)，滲出液被保持而不會(huì)流出。從以上觀點(diǎn)出發(fā)，絲纖蛋白多孔質(zhì)體的保水率更優(yōu) 選為87?100%，進(jìn)而優(yōu)選為90?100%。
[0070] (保水率的計(jì)算方法）
[0071] 保水率為按照下述方式計(jì)算而得到的值。將多孔質(zhì)體成形為60X30X20mm作為 測(cè)定試樣，測(cè)定在純水中充分浸漬后的試樣的重量（Wc)。將其再次在純水中充分浸漬，將表 面被純水潤(rùn)濕的玻璃制平板（松浪玻璃制，MSA coat microslide glass，76X52mm)傾斜 45度地設(shè)置，在其上按照面積最大的面（60X30mm的面）處于下方且長(zhǎng)度方向沿著上下方 向的方式放置試樣，靜置10分鐘。然后，測(cè)定試樣的重量（Wd)，用試樣的重量（Wc)及（Wd) 通過(guò)下述式計(jì)算，將獲得的值作為保水率。
[0072] 保水率（％ ) = lOO-(Wc-Wd) X10(V(Wc)
[0073] 多孔質(zhì)體的吸水速度優(yōu)選為0. 1?1000 μ 1/s，更優(yōu)選為1?100 μ 1/s，進(jìn)而優(yōu)選 為20?30 μ Ι/s。當(dāng)吸水速度為0. 1 μ Ι/s以上時(shí)，能夠迅速吸收滲出液，因此向藥劑緩釋 載體之外的泄露少。當(dāng)吸水速度為1000μ ι/s以下時(shí)，能夠防止藥劑緩釋載體過(guò)度吸收滲 出液，能夠保持接觸部的濕潤(rùn)狀態(tài)。
[0074] 此外，蒸發(fā)速度優(yōu)選為0· 01?0· 2g/m2/s，更優(yōu)選為0· 03?0· 15g/m2/s，進(jìn)而優(yōu)選 為0. 06?0. lg/m2/s。當(dāng)蒸發(fā)速度為0. 01以上時(shí)，可以保持藥劑緩釋載體能夠持續(xù)吸收滲 出液的狀態(tài)。另一方面，當(dāng)蒸發(fā)速度為〇.2g/m2/s以下時(shí)，能夠使本發(fā)明的藥劑緩釋載體有 效地保持濕潤(rùn)狀態(tài)。在此，吸水速度及蒸發(fā)速度為按照下述方式獲得的值。當(dāng)多孔質(zhì)層的 吸水速度及蒸發(fā)速度在前述范圍內(nèi)時(shí)，可以獲得優(yōu)異的本發(fā)明效果。
[0075](吸水速度的計(jì)算方法）
[0076] 將純水100 μ 1滴加至絲纖蛋白多孔質(zhì)體，測(cè)定直至純水被吸收為止的時(shí)間。吸水 速度為用測(cè)得的時(shí)間通過(guò)下述式計(jì)算出的值。進(jìn)行5次測(cè)定，將其平均值作為吸水速度。
[0077] 吸水速度（μ Ι/s)=純水滴加量/吸水所需要的時(shí)間
[0078] 對(duì)本發(fā)明的藥劑緩釋載體的形狀沒(méi)有限制，可以根據(jù)需要適當(dāng)選擇，從易于使用 的觀點(diǎn)出發(fā)優(yōu)選為片狀。此外，其尺寸可以任意設(shè)定，片的厚度可以根據(jù)藥劑的給藥量設(shè)定 任意厚度。
[0079] 對(duì)可包含于本發(fā)明的藥劑緩釋載體中的藥劑沒(méi)有特別限定，例如優(yōu)選列舉出動(dòng)物 體內(nèi)的促進(jìn)特定細(xì)胞的增殖、分化的內(nèi)源性蛋白質(zhì)，即，表皮生長(zhǎng)因子（EGF)、胰島素樣生長(zhǎng) 因子（IGF)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF)、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子（VEGF)、血 小板源性生長(zhǎng)因子（PDGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（b-FGF)、酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子 (a-FGF)等成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGF)、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（HGF)等生長(zhǎng)因子，以及鹽酸苯海 拉明、氯苯那敏、二苯基咪唑等抗組胺劑；氫化可的松、潑尼松龍、對(duì)氟米松、丙酸倍氯米松、 氟米松、倍他米松、丙酸倍氯米松、地塞米松、去炎松、曲安奈德、氟輕松、膚輕松、膚輕松醋 酸酯、丙酸氯倍他索等皮質(zhì)類(lèi)固醇類(lèi)；對(duì)乙酰氨基酚、甲芬那酸、氟芬那酸、吲哚美辛、雙氯 芬酸、阿氯芬酸、羥布宗、保泰松、布洛芬、氟比洛芬、水楊酸、水楊酸甲酯、L-薄荷醇、樟腦等 鎮(zhèn)痛消炎劑；青霉素、土霉素、硫酸新霉素、紅霉素、氯霉素、頭孢氨芐、四環(huán)素等抗生素；維 生素 A、麥角鈣化醇、膽鈣化醇、奧托硫胺、核黃素丁酸酯等維生素劑；苯佐卡因、利多卡因、 氨基苯甲酸乙酯等麻醉劑等。這些藥劑可以單獨(dú)使用或?qū)⒍喾N組合使用。
[0080] 此外，除了前述藥劑以外還可以根據(jù)需要配合吸收助劑，例如肉豆蘧酸異丙酯、棕 櫚酸異丙酯、N-甲基吡咯烷酮、N-乙基吡咯烷酮、N，N-二乙基間三酰胺、N，N-二乙基乙酰 胺、透明質(zhì)酸、水楊酸、克羅他米通（crotamiton)、癸二酸二乙酯、月桂醇、二甲基亞砜、去甲 基亞砜（desmethyl sulfoxide)等。通過(guò)配合這些吸收助劑，能夠促進(jìn)皮膚本身所形成的 屏障膜的藥劑吸收，并對(duì)藥劑賦予促進(jìn)向血液中滲透的功能。
[0081] 前述藥劑的添加量根據(jù)所選擇的藥劑適當(dāng)確定，作為標(biāo)準(zhǔn)，按照使藥劑緩釋載體 吸收約1 μ g?300mg/12cm2 (厚度2mm)的藥劑的方式進(jìn)行添加。
[0082] 前述藥劑通過(guò)浸滲或涂布于絲纖蛋白多孔質(zhì)體從而可以保持于其中。此外，這些 藥劑可以使用1種或組合2種以上而使用。
[0083] 前述藥劑的配方中，可以使用溶劑。作為其中使用的溶劑，優(yōu)選對(duì)人體無(wú)害且相對(duì) 于所使用的藥劑為化學(xué)惰性的溶劑，只要能夠溶解或分散所使用的藥劑則沒(méi)有特別限定。 具體而言，可以單獨(dú)使用水、多元醇，或使用將2種以上組合而成的混合體系溶劑。從對(duì)人 體的安全性的觀點(diǎn)出發(fā)，最優(yōu)選水。作為多元醇，可以優(yōu)選列舉例如甘油、丙二醇、山梨糖醇 等。
[0084] 此外，為了提高藥劑在溶解于溶劑中的溶解性，可以添加水溶性聚合物。作為水溶 性聚合物，可以優(yōu)選列舉例如明膠、海藻酸鈉、黃芪膠、淀粉類(lèi)、甲基纖維素、乙基纖維素、羥 乙基纖維素、羧甲基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯酸鈉等。
[0085] 本發(fā)明的藥劑緩釋載體如前所述優(yōu)選為片狀，作為其使用形態(tài)，可以優(yōu)選列舉例 如：將片狀的絲纖蛋白多孔質(zhì)體用敷料膜（dressing film)、繃帶、粘合帶等固定的形態(tài)。通 過(guò)使用敷料膜等，能夠防止在對(duì)絲纖蛋白多孔質(zhì)體施加壓力時(shí)以及與其接觸時(shí)與體液的接 觸和漏出等，能夠提供適合于濕潤(rùn)療法的環(huán)境。此外，也可以用作消化管內(nèi)、體內(nèi)的藥劑緩 釋載體。
[0086]為了使藥劑從藥劑緩釋載體緩慢釋放，優(yōu)選使該藥劑緩釋載體、即絲纖蛋白多孔 質(zhì)體預(yù)先呈濕潤(rùn)狀態(tài)。例如在有滲出液的創(chuàng)面進(jìn)行濕潤(rùn)療法時(shí)，可以借助滲出液使緩慢釋 放出的藥劑滲透患部。在無(wú)滲出液時(shí)，可以通過(guò)生理鹽水等使其呈濕潤(rùn)狀態(tài)后使用。
[0087]〔絲纖蛋白多孔質(zhì)體的制造方法〕
[0088] 以下說(shuō)明絲纖蛋白多孔質(zhì)體的制造方法。
[0089] 本發(fā)明中使用的絲纖蛋白多孔質(zhì)體例如可以通過(guò)在絲纖蛋白水溶液中添加特定 的添加劑、使該水溶液凍結(jié)后再融解而制造。
[0090] 這里使用的絲纖蛋白可以是家蠶、野蠶、天蠶等蠶所產(chǎn)生的任一者，對(duì)其制造方法 沒(méi)有特別限制。絲纖蛋白溶解性差，難以直接溶解于水。為了獲得絲纖蛋白水溶液，可以使 用公知的任何方法，將絲纖蛋白溶解于高濃度的溴化鋰水溶液后，經(jīng)歷透析脫鹽、風(fēng)干濃縮 的方法由于簡(jiǎn)便而優(yōu)選。
[0091] 絲纖蛋白多孔質(zhì)體的制造方法中，優(yōu)選絲纖蛋白的濃度在添加后述添加劑等而成 的絲纖蛋白水溶液中為〇. 1?40質(zhì)量％，更優(yōu)選為0. 5?20質(zhì)量％，進(jìn)而優(yōu)選為1. 0?12 質(zhì)量％。通過(guò)設(shè)定在該范圍內(nèi)，能夠高效地制造具有充分強(qiáng)度的多孔質(zhì)體。
[0092] 作為前述添加劑，可以優(yōu)選列舉例如有機(jī)溶齊IJ、脂肪族羧酸、氨基酸等。對(duì)添加劑 沒(méi)有特別限制，優(yōu)選為水溶性的添加劑，更優(yōu)選在水中的溶解度高的添加劑。此外，作為絲 纖蛋白多孔質(zhì)體的制造中使用的脂肪族羧酸，優(yōu)選pKa為5. 0以下者，更優(yōu)選pKa為3. 0? 5. 0者，進(jìn)而優(yōu)選pKa為3. 5?5. 0者。
[0093] 作為前述有機(jī)溶劑，可以優(yōu)選列舉例如甲醇、乙醇、異丙醇、丁醇、叔丁醇、甘油、二 甲基亞砜（DMS0)、二甲基甲酰胺（DMF)、吡啶、乙腈、丙酮等。這些有機(jī)溶劑可以單獨(dú)使用或 者將2種以上組合使用。
[0094] 作為前述脂肪族羧酸，可以優(yōu)選使用例如碳原子數(shù)為1?6的飽和或不飽和的一 元羧酸、二元羧酸、三元羧酸，更具體而言，可以優(yōu)選列舉出例如甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、琥 珀酸、乳酸、丙烯酸、2- 丁烯酸、3- 丁烯酸等。這些脂肪族羧酸可以單獨(dú)使用或者將2種以 上組合使用。
[0095] 作為前述氨基酸，可以優(yōu)選列舉例如纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、甘氨酸、丙氨酸、 絲氨酸、蘇氨酸、蛋氨酸等單氨基羧酸；天冬氨酸、谷氨酸等單氨基二羧酸（酸性氨基酸） 等脂肪族氨基酸；苯丙氨酸等芳香族氨基酸；羥脯氨酸等具有雜環(huán)的氨基酸等，其中，從 易于調(diào)整形狀的觀點(diǎn)出發(fā)，優(yōu)選酸性氨基酸、羥脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸等含羥基氨基酸 (oxyamino acid)。從同樣的觀點(diǎn)出發(fā)，酸性氨基酸中更優(yōu)選單氨基羧酸，特別優(yōu)選天冬氨 酸、谷氨酸，含羥基氨基酸中優(yōu)選羥脯氨酸。這些氨基酸可以單獨(dú)使用任一種或?qū)?種以上 組合使用。
[0096] 另外，氨基酸中有L性和D型的光學(xué)異構(gòu)體，由于使用L性和D型時(shí)所得到的絲纖 蛋白多孔質(zhì)體在結(jié)構(gòu)、機(jī)械特性方面看不出差異，所以可以使用任一種類(lèi)型的氨基酸。
[0097] 絲纖蛋白水溶液中的添加劑的含量相對(duì)于絲纖蛋白水溶液的總量?jī)?yōu)選為0. 1? 18質(zhì)量％，更優(yōu)選為0. 1?5. 0質(zhì)量％，進(jìn)而優(yōu)選為0. 2?4. 0質(zhì)量％。通過(guò)設(shè)定在該范圍 內(nèi)，能夠制造具有充分強(qiáng)度的絲纖蛋白多孔質(zhì)體。此外，當(dāng)為18. 0質(zhì)量％以下時(shí)，將在絲纖 蛋白水溶液中添加了前述添加劑而成的絲纖蛋白水溶液靜置時(shí)，該水溶液不易凝膠化，可 以穩(wěn)定地獲得優(yōu)質(zhì)的絲纖蛋白多孔質(zhì)體。
[0098] 然后，將添加了前述添加劑的絲纖蛋白水溶液流入模具或容器中，放入低溫恒溫 槽中使其凍結(jié)，然后融解，經(jīng)上述工序制造絲纖蛋白多孔質(zhì)體。關(guān)于凍結(jié)溫度，只要是使含 有添加劑的絲纖蛋白水溶液凍結(jié)的溫度即可，沒(méi)有特別限制，優(yōu)選為-10?_30°C左右。此 夕卜，關(guān)于凍結(jié)時(shí)間，為了充分凍結(jié)且能夠使凍結(jié)狀態(tài)保持一定時(shí)間，優(yōu)選在規(guī)定的凍結(jié)溫度 下凍結(jié)4小時(shí)以上。
[0099] 另外，作為凍結(jié)的方法，可以一次性將絲纖蛋白水溶液降溫至凍結(jié)溫度進(jìn)行凍結(jié)， 但從獲得力學(xué)強(qiáng)度高的絲纖蛋白多孔質(zhì)體的角度出發(fā)，優(yōu)選暫時(shí)在_5°C左右保持2小時(shí)左 右使其為過(guò)冷卻狀態(tài)，然后降溫至凍結(jié)溫度進(jìn)行凍結(jié)。通過(guò)調(diào)整由_5°C至凍結(jié)溫度所花的 時(shí)間，能夠在一定程度上控制絲纖蛋白多孔質(zhì)體的結(jié)構(gòu)、強(qiáng)度。
[0100] 然后，將凍結(jié)的絲纖蛋白水溶液融解，從而可以獲得絲纖蛋白多孔質(zhì)體。對(duì)融解的 方法沒(méi)有特別限制，除了自然融解外，可以優(yōu)選列舉出在恒溫槽內(nèi)保管的方法等。
[0101] 獲得的絲纖蛋白多孔質(zhì)體中含有前述添加劑，根據(jù)用途需要除去添加劑時(shí)，可以 通過(guò)適當(dāng)?shù)姆椒◤慕z纖蛋白多孔質(zhì)體中除去添加劑。例如，作為最簡(jiǎn)便的方法，可以列舉出 將絲纖蛋白多孔質(zhì)體浸漬在純水中除去添加劑的方法。或者，通過(guò)將絲纖蛋白多孔質(zhì)體冷 凍干燥，還能夠同時(shí)除去添加劑和水分。
[0102] 該絲纖蛋白多孔質(zhì)體可以通過(guò)適當(dāng)選擇制作該多孔質(zhì)體時(shí)的模具、容器而制成片 狀、塊狀、管狀、球狀等與目的相應(yīng)的形狀。本發(fā)明中，如前所述優(yōu)選為片狀。
[0103] 作為模具、容器，只要是絲纖蛋白水溶液不會(huì)流出的形狀、形態(tài)即可，沒(méi)有限制，作 為其材料，從獲得結(jié)構(gòu)均一的絲纖蛋白多孔質(zhì)體的觀點(diǎn)出發(fā)，優(yōu)選使用鐵、不銹鋼、鋁、金、 銀、銅等導(dǎo)熱率高的材料。此外，關(guān)于模具、容器的壁厚，從其功能和防止凍結(jié)時(shí)膨脹等所致 的變形等的觀點(diǎn)出發(fā)，優(yōu)選為〇. 5_以上，從操作容易、冷卻效率的觀點(diǎn)出發(fā)，更優(yōu)選為1? 3mm 〇
[0104] 此外，可以在這里所使用的模具、容器的內(nèi)側(cè)的與絲纖蛋白水溶液接觸的內(nèi)壁面 設(shè)置片層。由此，能夠在絲纖蛋白多孔質(zhì)體的表面配置薄膜層。即，能夠獲得具有多孔質(zhì)層 和薄膜層的絲纖蛋白多孔質(zhì)體。這里，多孔質(zhì)層為具有存在多個(gè)細(xì)孔的海綿狀多孔質(zhì)結(jié)構(gòu) 的層，薄膜層為實(shí)質(zhì)上不具有細(xì)孔的層。
[0105] 可以通過(guò)設(shè)置在模具、容器的內(nèi)壁面的片層的特性來(lái)控制薄膜層的結(jié)構(gòu)、厚度。
[0106] 作為片層中使用的片，可以優(yōu)選列舉由聚四氟乙烯（PTFE)、四氟乙烯-六氟丙烯 共聚物（FEP)、四氟乙烯-全氟烷基乙烯基醚共聚物（PFA)等含氟樹(shù)脂所形成的片，或由聚 對(duì)苯二甲酸乙二醇酯（PET)、聚丙烯（PP)等形成的經(jīng)過(guò)脫模處理的片等。使用這些片時(shí)能 夠獲得細(xì)孔少、平滑的薄膜層。此外，在不希望設(shè)置薄膜層時(shí)，也可以設(shè)置濾紙等表面粗糙 的片。可以根據(jù)絲纖蛋白多孔質(zhì)體的用途適當(dāng)選擇使用這些片。此外，片優(yōu)選使用的是難 以妨礙熱傳導(dǎo)的厚度為1mm以下的片。
[0107] 可以在前述融解工序之后經(jīng)歷切削工序而獲得絲纖蛋白多孔質(zhì)體。在優(yōu)選用作本 發(fā)明的體外用藥劑緩釋載體的片形狀中，在為僅包含多孔質(zhì)層的多孔質(zhì)體時(shí)，除了通過(guò)選 擇容器的材質(zhì)以外，還可以通過(guò)切除薄膜層來(lái)選擇表面結(jié)構(gòu)。由此能夠獲得由僅包含多孔 質(zhì)層的多孔質(zhì)體構(gòu)成的片。具體而言，例如可以如下獲得：使用其內(nèi)壁面設(shè)置有特氟龍（注 冊(cè)商標(biāo)）片等片的塊狀的模具或容器，從該模具或容器取出后，除去四個(gè)側(cè)面的薄膜層，切 削多孔質(zhì)層的部分，從而獲得。此外，使用在其內(nèi)壁面的僅一面設(shè)置有特氟龍（注冊(cè)商標(biāo)） 片等片、內(nèi)壁面的其它面設(shè)置有濾紙的模具或容器，也能夠獲得僅一面具有薄膜層的多孔 質(zhì)體。
[0108] 通過(guò)設(shè)置前述片層而使絲纖蛋白多孔質(zhì)體具有前述薄膜層時(shí)，液狀的藥劑經(jīng)由細(xì) 孔移動(dòng)的速度及蒸發(fā)、擴(kuò)散的速度變慢，因此液體透過(guò)性變差。因此，作為具有薄膜層的絲 纖蛋白多孔質(zhì)體的使用方式，可以優(yōu)選列舉使多孔質(zhì)層接觸皮膚、與皮膚相對(duì)的對(duì)向面具 有薄膜層的方式。這是由于，使用這樣的體外用藥劑緩釋載體時(shí)，能夠有效地保持液狀的藥 齊IJ，具有抑制該藥劑的蒸發(fā)、擴(kuò)散的效果。
[0109] 此外，薄膜層的細(xì)孔數(shù)量是可以控制的，還可以根據(jù)需要制成具有少量細(xì)孔的薄 膜層。此外，薄膜層由于細(xì)孔極少，因此與多孔質(zhì)層相比表面平滑。因此，還可以使用該薄 膜層作為皮膚側(cè)，通過(guò)控制液體透過(guò)性來(lái)控制藥劑的緩釋速度。
[0110] 這樣，本發(fā)明的藥劑緩釋載體根據(jù)其制造方法可以獲得如下的絲纖蛋白多孔質(zhì) 體，因此能夠容易地應(yīng)對(duì)各種用途，該絲纖蛋白多孔質(zhì)體具有僅包含多孔質(zhì)層的結(jié)構(gòu)；具有 多孔質(zhì)層和薄膜層的結(jié)構(gòu)，并且該薄膜層具有各種性狀而具有各種結(jié)構(gòu)。
[0111] 實(shí)施例
[0112] 以下通過(guò)實(shí)施例更具體的說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明不受這些實(shí)施例任何限定。
[0113] 實(shí)施例1
[0114] (絲纖蛋白水溶液的制備）
[0115] 絲纖蛋白水溶液如下獲得：將絲纖蛋白粉末（KB SEIREN，LTD.制造，商品名： "Fibroin頂"）溶解于9M溴化鋰水溶液中，通過(guò)離心分離除去不溶物后，相對(duì)于超純水反 復(fù)透析，從而獲得。將獲得的絲纖蛋白水溶液在透析管中風(fēng)干、濃縮。在該濃縮液中加入作 為添加劑的甲酸水溶液，制備絲纖蛋白濃度為5質(zhì)量％、甲酸濃度為2質(zhì)量％的絲纖蛋白水 溶液。
[0116] (絲纖蛋白多孔質(zhì)體的制造）
[0117] 使該絲纖蛋白水溶液流入用錯(cuò)板制作的模具（內(nèi)側(cè)尺寸：80mmX40mmX4mm)中， 放入低溫恒溫槽（EYELA公司制，NCB-3300)，凍結(jié)保存。
[0118] (凍結(jié)條件）
[0119] 就凍結(jié)而言，預(yù)先將低溫恒溫槽冷卻到_5°C，將流入了絲纖蛋白水溶液的模具放 入該低溫恒溫槽中并保持2小時(shí)，然后冷卻到-20°C后在該溫度下保持5小時(shí)。
[0120] 通過(guò)自然解凍使凍結(jié)的試樣恢復(fù)至室溫后，將其從模具中取出，浸漬于超純水中， 1天交換2次超純水，交換3天，從而除去使用的甲酸。
[0121] (力學(xué)特性的測(cè)定方法）
[0122] 用INSTR0N公司制微型試驗(yàn)機(jī)5548型對(duì)獲得的絲纖蛋白多孔質(zhì)體的力學(xué)特性進(jìn) 行評(píng)價(jià)。從制作的絲纖蛋白多孔質(zhì)體切出40mmX4mmX4mm的試驗(yàn)片，在2mm/min的條件下 拉伸該試驗(yàn)片，測(cè)定此時(shí)的最大斷裂強(qiáng)度（拉伸強(qiáng)度）和最大應(yīng)變（伸長(zhǎng)率）。此外，由對(duì) 強(qiáng)度和應(yīng)變作圖時(shí)的斜率求出彈性模量。其結(jié)果示于表1。此外，測(cè)定結(jié)果表示的是由制作 的多孔質(zhì)體制作5片試驗(yàn)片并從不同日期制作的多孔質(zhì)體切出5片試驗(yàn)片、對(duì)這10片進(jìn)行 測(cè)定而得的平均值。
[0123] 此外，用掃描電子顯微鏡觀察獲得的絲纖蛋白多孔質(zhì)體的結(jié)構(gòu)。掃描電子顯微鏡 使用的是Philips公司制的XL30-FEG，在低真空無(wú)蒸鍍模式、加速電壓10kV下進(jìn)行測(cè)定。 此外，就絲纖蛋白多孔質(zhì)體的結(jié)構(gòu)而言，并非是觀察多孔質(zhì)體的表面，而是觀察切斷多孔質(zhì) 體露出的內(nèi)部。獲得的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片示于圖1。
[0124] 實(shí)施例2?23
[0125] 在實(shí)施例1中分別使用表1所述的添加劑代替甲酸，除此以外與實(shí)施例1同樣進(jìn) 行，獲得絲纖蛋白多孔質(zhì)體。此外，在實(shí)施例10?12中，將添加劑的濃度設(shè)為1質(zhì)量％ (參 照表2)。獲得的絲纖蛋白多孔質(zhì)體的力學(xué)特性、保水率、及吸水速度的評(píng)價(jià)結(jié)果示于表1及 表2。此外，獲得的多孔質(zhì)體的剖面的掃描電子顯微鏡照片分別示于圖2?23。保水率、及 吸水速度為按照前述方式測(cè)得的值。
[0126] 比較例1
[0127] 使用市售的聚氨酯海綿（住友3 Μ公司制）切出測(cè)定用樣品 (60mmX30mmX20mm),測(cè)定保水率,其結(jié)果示于表1。
[0128] [表 1]
[0129]

【權(quán)利要求】
1. 一種藥劑緩釋載體，其使用了絲纖蛋白多孔質(zhì)體。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥劑緩釋載體，其中，所述絲纖蛋白多孔質(zhì)體用水溶性高分 子處理過(guò)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥劑緩釋載體，其中，所述水溶性高分子為包含選自多糖類(lèi) 及聚氨基酸中的至少一種的材料。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥劑緩釋載體，其中，所述多糖類(lèi)包含選自肝素及硫酸軟骨 素中的至少一種。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1?4中任一項(xiàng)所述的藥劑緩釋載體，其中，所負(fù)載的藥劑包含生長(zhǎng)因 子。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥劑緩釋載體，其中，所述生長(zhǎng)因子為選自成纖維細(xì)胞生長(zhǎng) 因子（FGF)、血小板源性生長(zhǎng)因子（PDGF)及表皮生長(zhǎng)因子（EGF)中的至少一種。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1?6中任一項(xiàng)所述的藥劑緩釋載體，其中，所述多孔質(zhì)體的拉伸強(qiáng)度 為 0· 1 ?400kPa。
【文檔編號(hào)】A61K9/70GK104254341SQ201380021448
【公開(kāi)日】2014年12月31日 申請(qǐng)日期:2013年4月24日 優(yōu)先權(quán)日:2012年4月25日
【發(fā)明者】小林一稔, 須藤邦宏, 角直佑, 井上肇, 玉田靖 申請(qǐng)人:日立化成株式會(huì)社, 學(xué)校法人圣瑪麗安娜醫(yī)科大學(xué), 獨(dú)立行政法人農(nóng)業(yè)生物資源研究所