擬肽大環(huán)化合物的制作方法
【專利摘要】本文提供了擬肽大環(huán)化合物以及使用此類大環(huán)化合物治療疾病的方法。
【專利說明】擬肽大環(huán)化合物
【背景技術(shù)】
[0001] 人轉(zhuǎn)錄因子蛋白質(zhì)P53響應于DNA損傷和細胞應激而誘導細胞周期停滯和凋亡， 從而在保護細胞免于惡性轉(zhuǎn)化方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。E3遍在蛋白連接酶MDM2 (也稱為HDM2) 通過中和P53反式激活活性的直接結(jié)合相互作用而負調(diào)節(jié)p53的功能，導致p53蛋白質(zhì)從 核輸出，并經(jīng)由遍在蛋白化-蛋白酶體途徑使P53降解。由缺失、突變或MDM2過表達而引 起的P53活性喪失是人類癌癥的最常見缺陷。表達野生型p53的腫瘤易受到穩(wěn)定或提高活 性P53濃度的藥劑的攻擊。在此背景下，已出現(xiàn)了對MDM2活性的抑制，作為經(jīng)過驗證的、用 于在體外和體內(nèi)恢復P53活性并使癌細胞再次對凋亡敏感的方法。MDMX(MDM4)最近已被鑒 定為P53的相似的負調(diào)節(jié)劑，并且研究顯示在MDM2和MDMX的p53結(jié)合界面之間具有顯著 的結(jié)構(gòu)同源性。P53-MDM2和p53-MDMX的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用由p53的同一個15個殘 基的α螺旋反式激活域介導，所述α螺旋反式激活域插入MDM2和MDMX的表面上的疏水 性裂隙內(nèi)。Ρ53的這個域內(nèi)的三個殘基（F19、W23和L26)對與MDM2和MDMX的結(jié)合至關(guān)重 要。
[0002] 對于能夠與p53、MDM2和/或MDMX結(jié)合并調(diào)節(jié)其活性的化合物存在相當大的需 求。本文提供了能調(diào)節(jié)p53活性的基于p53的擬肽大環(huán)化合物。本文還提供了能抑制p53、 MDM2和/或MDMX蛋白之間相互作用的基于p53的擬肽大環(huán)化合物。此外，本文提供了能夠 用于治療包括但不限于癌癥和其它高增生性疾病的疾病的基于P53的擬肽大環(huán)化合物。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0003] 本文描述了與人p53的一部分相關(guān)的穩(wěn)定交聯(lián)的肽（"p53擬肽大環(huán)化合物"）。 這些交聯(lián)的肽含有至少兩個經(jīng)修飾的氨基酸，這些氨基酸一起形成分子內(nèi)交聯(lián)，該分子內(nèi) 交聯(lián)可幫助穩(wěn)定被認為對于P53與MDM2的結(jié)合和p53與MDMX的結(jié)合至關(guān)重要的p53 -部 分的α螺旋二級結(jié)構(gòu)。因此，本文描述的交聯(lián)多肽可具有相對于對應的非交聯(lián)多肽改善的 生物活性。據(jù)認為，Ρ53擬肽大環(huán)化合物干擾ρ53與MDM2和/或ρ53與MDMX的結(jié)合，從而 釋放功能性P53并抑制其破壞。本文描述的p53擬肽大環(huán)化合物可治療性地使用，例如用 來治療以不希望的低P53水平或低p53活性為特征的癌癥和其它病癥，以及/或者用來治 療以不希望的高水平MDM2或MDMX活性為特征的癌癥和其它病癥。p53擬肽大環(huán)化合物也 可用于治療與遭到破壞的P53轉(zhuǎn)錄途徑的調(diào)節(jié)相關(guān)的任何病癥（這種遭到破壞的調(diào)節(jié)導 致過量細胞存活和增殖的病狀，如癌癥和自身免疫?。?，以及不適當?shù)募毎芷谕偷蛲?的病狀，如神經(jīng)變性和免疫缺陷。在一些實施方案中，P53擬肽大環(huán)化合物與MDM2(例如， GenBank? 登錄號：228952 ;gi :228952)和 / 或 MDMX(也被稱為 MDM4 ;Gen.Bank? 登 錄號：88702791 ;GI :88702791)結(jié)合。
[0004] 在一個方面，本文提供一種擬肽大環(huán)化合物，其包含的氨基酸序列與選自表1、表 la、表lb或表lc中氨基酸序列的氨基酸序列至少約60%、80%、90%或95%相同?；蛘撸?所述擬肽大環(huán)化合物的氨基酸序列選自表4中的氨基酸序列。在一些實施方案中，該擬肽 大環(huán)化合物不是如表2a或2b所示的肽。在其它情況下，該擬肽大環(huán)化合物不包含如表2a 或2b所示的結(jié)構(gòu)。在一些實施方案中，該擬肽大環(huán)化合物具有選自表1的氨基酸序列。在 一些實施方案中，該擬肽大環(huán)化合物具有選自表la的氨基酸序列。在一些實施方案中，該 擬肽大環(huán)化合物具有選自表lb的氨基酸序列。在一些實施方案中，該擬肽大環(huán)化合物具有 選自表lc的氨基酸序列。
[0005] 或者，所述擬肽大環(huán)化合物的氨基酸序列如上所述進行選擇，并且進一步其中該 大環(huán)化合物不包括硫醚或三唑。在一些實施方案中，擬肽大環(huán)化合物包含螺旋，如α-螺 旋。在其它實施方案中，擬肽大環(huán)化合物包含α，α-二取代的氨基酸。擬肽大環(huán)化合物可 包含連接至少兩個氨基酸的ct-位的交聯(lián)體（crosslinker)。所述兩個氨基酸中的至少一 個可以是α，α-二取代的氨基酸。
[0006] 在一些實施方案中，提供了下式的擬肽大環(huán)化合物：
[0007]
【權(quán)利要求】
1. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
其中： Xaa3、Xaa5、Xaa6、Xaa7、Xaa 8、Xaa9 和 Xaa1(l 中的每一個單獨地為氨基酸，其中 Xaa3、Xaa5、 Xaa6、Xaa7、Xaa8、Xaa9 和 Xaa1(l 中的至少三個是與序列 Phe3-X4-His5-Tyr6-Trp 7-Ala8-Gln9-L eu1(l-X n-Ser12的相應位置處的氨基酸相同的氨基酸，其中各個X為氨基酸； 各個D和E獨立地為氨基酸； 札和R2獨立地為-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜烷基或雜環(huán) 烷基，它們是未取代的或被鹵素-取代的；或者&和1?2中的至少一個形成連接至所述D或 E氨基酸之一的α位置的大環(huán)形成連接體L' ； 各個L或L'獨立地為式-U - L2 -的大環(huán)形成連接體； U和L2獨立地為亞烷基、亞烯基、亞炔基、亞雜烷基、亞環(huán)烷基、亞雜環(huán)烷基、亞環(huán)芳基、 亞雜環(huán)芳基或[_R4-K-R4-]n，它們各自任選地被R5取代； 為氧、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、雜燒基、環(huán)燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)燒基燒基、環(huán)芳基或 雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被r5取代； 各個r4為亞烷基、亞烯基、亞炔基、亞雜烷基、亞環(huán)烷基、亞雜環(huán)烷基、亞芳基或亞雜芳 基； 各個 K 為 0、S、SO、S02、CO、C02 或 CONR3 ; 各個r5獨立地為鹵素、烷基、-or6、-n(r6)2、-sr 6、-sor6、-so2r6、-co2r 6、熒光部分、放射 性同位素或治療劑； 各個&獨立地為-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基、熒光部分、放 射性同位素或治療劑； R7為_ H、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、環(huán)燒基、雜燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)芳基 或雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被R5取代，或是與D殘基形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的一部分； R8為_ H、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、環(huán)燒基、雜燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)芳基 或雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被R5取代，或是與E殘基形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的一部分； v 為 1-1000 的整數(shù)，例如 1-500、1-200、1-100、1-50、1-30、1-20 或 1-10 ; w 為 3-1000 的整數(shù)，例如 3-500、3-200、3-100、3-50、3-30、3-20 或 3-10 ;且 η為1-5的整數(shù)。
2. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
其中： Xaa3、Xaa5、Xaa6、Xaa7、Xaa 8、Xaa9 和 Xaa1(l 中的每一個單獨地為氨基酸，其中 Xaa3、Xaa5、 Xaa6、Xaa7、Xaa8、Xaa9 和 Xaa1(l 中的至少三個是與序列 Phe3-X4-Glu5-Tyr6-Trp 7-Ala8-Gln9-L eu1(l/Cba 1(|-Xn-Ala12的相應位置處的氨基酸相同的氨基酸，其中各個X為氨基酸； 各個D和E獨立地為氨基酸； 札和R2獨立地為-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜烷基或雜環(huán) 烷基，它們是未取代的或被鹵素-取代的；或者&和1?2中的至少一個形成連接至所述D或 E氨基酸之一的α位置的大環(huán)形成連接體L' ； 各個L或L'獨立地為式-U - L2 -的大環(huán)形成連接體； U和L2獨立地為亞烷基、亞烯基、亞炔基、亞雜烷基、亞環(huán)烷基、亞雜環(huán)烷基、亞環(huán)芳基、 亞雜環(huán)芳基或[_R4-K-R4-]n，它們各自任選地被R5取代； 為氧、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、雜燒基、環(huán)燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)燒基燒基、環(huán)芳基或 雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被r5取代； 各個r4為亞烷基、亞烯基、亞炔基、亞雜烷基、亞環(huán)烷基、亞雜環(huán)烷基、亞芳基或亞雜芳 基； 各個 K 為 0、S、SO、S02、CO、C02 或 CONR3 ; 各個r5獨立地為鹵素、烷基、-or6、-n(r6)2、-sr 6、-sor6、-so2r6、-co2r 6、熒光部分、放射 性同位素或治療劑； 各個&獨立地為-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基、熒光部分、放 射性同位素或治療劑； R7為_ H、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、環(huán)燒基、雜燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)芳基 或雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被R5取代，或是與D殘基形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的一部分； R8為_ H、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、環(huán)燒基、雜燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)芳基 或雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被R5取代，或是與E殘基形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的一部分； v 為 1-1000 的整數(shù)，例如 1-500、1-200、1-100、1-50、1-30、1-20 或 1-10 ; w 為 3-1000 的整數(shù)，例如 3-500、3-200、3-100、3-50、3-30、3-20 或 3-10 ;且 η為1-5的整數(shù)。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的擬肽大環(huán)化合物，其中該擬肽大環(huán)化合物相對于其中w為 0、1或2的對應擬肽大環(huán)化合物具有改善的對MDM2或MDMX的結(jié)合親和力。
4. 如權(quán)利要求1或2所述的擬肽大環(huán)化合物，其中該擬肽大環(huán)化合物相對于其中w為 0、1或2的對應擬肽大環(huán)化合物具有降低的MDMX結(jié)合親和力與MDM2結(jié)合親和力之比。
5. 如權(quán)利要求1或2所述的擬肽大環(huán)化合物，其中該擬肽大環(huán)化合物相對于其中w為 〇、1或2的對應擬肽大環(huán)化合物具有改善的針對ρ53陽性腫瘤細胞系的體外抗腫瘤效力。
6. 如權(quán)利要求1或2所述的擬肽大環(huán)化合物，其中該擬肽大環(huán)化合物相對于其中w為 0、1或2的對應擬肽大環(huán)化合物在p53陽性腫瘤細胞系中顯示出改善的體外凋亡誘導。
7. 如權(quán)利要求1或2所述的擬肽大環(huán)化合物，其中該擬肽大環(huán)化合物相對于其中w為 〇、1或2的對應擬肽大環(huán)化合物具有改善的針對p53陽性腫瘤細胞系與針對p53陰性或突 變腫瘤細胞系的體外抗腫瘤效力比。
8. 如權(quán)利要求1或2所述的擬肽大環(huán)化合物，其中該擬肽大環(huán)化合物相對于其中w為 〇、1或2的對應擬肽大環(huán)化合物具有改善的針對p53陽性腫瘤的體內(nèi)抗腫瘤效力。
9. 如權(quán)利要求1或2所述的擬肽大環(huán)化合物，其中該擬肽大環(huán)化合物相對于其中w為 0、1或2的對應擬肽大環(huán)化合物在p53陽性腫瘤中具有改善的體內(nèi)凋亡誘導。
10. 如權(quán)利要求1或2所述的擬肽大環(huán)化合物，其中該擬肽大環(huán)化合物相對于其中w為 〇、1或2的對應擬肽大環(huán)化合物具有改善的細胞透性。
11. 如權(quán)利要求1或2所述的擬肽大環(huán)化合物，其中該擬肽大環(huán)化合物相對于其中w為 〇、1或2的對應擬肽大環(huán)化合物具有改善的溶解度。
12. 如權(quán)利要求1-11中任一項所述的擬肽大環(huán)化合物，其中Xaa5為Glu或其氨基酸類 似物。
13. 如權(quán)利要求12所述的擬肽大環(huán)化合物，其中Xaa5為Glu或其氨基酸類似物，并且 其中該擬肽大環(huán)化合物相對于其中Xaa 5為Ala的對應擬肽大環(huán)化合物具有改善的性質(zhì)，如 改善的結(jié)合親和力、改善的溶解度、改善的細胞效力、改善的螺旋度、改善的細胞透性、改善 的體內(nèi)或體外抗腫瘤效力，或改善的凋亡誘導。
14. 如權(quán)利要求1或2所述的擬肽大環(huán)化合物，其中各個E獨立地為選自Ala(丙氨 酸）、D-Ala(D_丙氨酸）、Aib(a-氨基異丁酸）、Sar(N_甲基甘氨酸）和Ser (絲氨酸）的 氨基酸。
15. 如權(quán)利要求1或2所述的擬肽大環(huán)化合物，其中[D]v為-LeUl-Thr2。
16. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的擬肽大環(huán)化合物，其中w為3-10。
17. 如權(quán)利要求16所述的擬肽大環(huán)化合物，其中w為3-6。
18. 如權(quán)利要求16所述的擬肽大環(huán)化合物，其中w為6-10。
19. 如權(quán)利要求16所述的擬肽大環(huán)化合物，其中w為6。
20. 如前述權(quán)利要求中任一項所述的擬肽大環(huán)化合物，其中v為1-10。
21. 如權(quán)利要求20所述的擬肽大環(huán)化合物，其中v為2-10。
22. 如權(quán)利要求20所述的擬肽大環(huán)化合物，其中v為2-5。
23. 如權(quán)利要求20所述的擬肽大環(huán)化合物，其中v為2。
24. -種擬肽大環(huán)化合物，其包含與選自表1、表la、表lb或表lc中的氨基酸序列的氨 基酸序列至少約60%相同的氨基酸序列，其中該擬肽大環(huán)化合物具有下式 ：
其中： 各個A、C、D和E獨立地為氨基酸； B 為氛基酸、
[-NH_L3-C〇-]、[-NH_L 3-S02-]或[-NH_L3-]; 札和R2獨立地為-Η、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜烷基或雜環(huán) 烷基，它們是未取代的或被鹵素-取代的；或者&和1?2中的至少一個形成連接至所述D或 Ε氨基酸之一的α位置的大環(huán)形成連接體L' ； 為氧、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、雜燒基、環(huán)燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)燒基燒基、環(huán)芳基或 雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被r5取代； 各個L或L'獨立地為式-Li - L2 -的大環(huán)形成連接體； Q和L2和L3獨立地為亞烷基、亞烯基、亞炔基、亞雜烷基、亞環(huán)烷基、亞雜環(huán)烷基、亞環(huán) 芳基、亞雜環(huán)芳基或[-R4-K-R4-]n，它們各自任選地被R 5取代； 各個R4為亞烷基、亞烯基、亞炔基、亞雜烷基、亞環(huán)烷基、亞雜環(huán)烷基、亞芳基或亞雜芳 基； 各個 K 為 0、S、SO、S02、CO、C02 或 CONR3 ; 各個r5獨立地為鹵素、烷基、-or6、-n(r6)2、-sr 6、-sor6、-so2r6、-co2r 6、熒光部分、放射 性同位素或治療劑； 各個&獨立地為-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基、熒光部分、放 射性同位素或治療劑； R7為_ H、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、環(huán)燒基、雜燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)芳基 或雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被R5取代，或是與D殘基形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的一部分； R8為_ H、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、環(huán)燒基、雜燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)芳基 或雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被R5取代，或是與E殘基形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的一部分； v 和 w 獨立地為 1-1000 的整數(shù)，例如 1-500、1-200、1-100、1-50、1-30、1-20 或 1-10 ; u為1-10的整數(shù)，例如1-5、1-3或1-2 ; X、y和z獨立地為0-10的整數(shù)，例如x+y+z之和為2、3或6 ; η為1-5的整數(shù)；并且 其中該擬肽大環(huán)化合物不是表2a或2b的擬肽大環(huán)化合物。
25. 如權(quán)利要求24所述的擬肽大環(huán)化合物，其中各個E獨立地為選自Ala (丙氨酸）、 D-Ala (D-丙氨酸）、Aib ( α -氨基異丁酸）、Sar (N-甲基甘氨酸）和Ser (絲氨酸）的氨基 酸。
26. 如權(quán)利要求24所述的擬肽大環(huán)化合物，其中〇)幾為-LeUl-Thr2。
27. -種擬肽大環(huán)化合物，其包含與選自表1、表la、表lb或表lc中的氨基酸序列的氨 基酸序列至少約60%相同的氨基酸序列，其中該擬肽大環(huán)化合物具有下式 ：
其中： 各個A、C、D和E獨立地為氨基酸； B 為氛基酸、
[-NH-L3_C〇-]、[-NH_L 3-S02-]或[-NH_L3-]; 札和R2獨立地為-Η、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜烷基或雜環(huán) 烷基，它們是未取代的或被鹵素-取代的；或者&和1?2中的至少一個形成連接至所述D或 Ε氨基酸之一的α位置的大環(huán)形成連接體L' ； 為氧、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、雜燒基、環(huán)燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)燒基燒基、環(huán)芳基或 雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被r5取代； 各個L或L'獨立地為式-Li - L2 -的大環(huán)形成連接體； Q和L2和L3獨立地為亞烷基、亞烯基、亞炔基、亞雜烷基、亞環(huán)烷基、亞雜環(huán)烷基、亞環(huán) 芳基、亞雜環(huán)芳基或[-R4-K-R4-]n，它們各自任選地被R 5取代； 各個R4為亞烷基、亞烯基、亞炔基、亞雜烷基、亞環(huán)烷基、亞雜環(huán)烷基、亞芳基或亞雜芳 基； 各個 K 為 0、S、SO、S02、CO、C02 或 CONR3 ; 各個r5獨立地為鹵素、烷基、-or6、-n(r6)2、-sr 6、-sor6、-so2r6、-co2r 6、熒光部分、放射 性同位素或治療劑； 各個&獨立地為-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基、熒光部分、放 射性同位素或治療劑； R7為_ H、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、環(huán)燒基、雜燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)芳基 或雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被R5取代，或是與D殘基形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的一部分； R8為_ H、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、環(huán)燒基、雜燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)芳基 或雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被R5取代，或是與E殘基形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的一部分； v 和 w 獨立地為 1-1000 的整數(shù)，例如 1-500、1-200、1-100、1-50、1-30、1-20 或 1-10 ; u為1-10的整數(shù)，例如1-5、1-3或1-2 ; X、y和z獨立地為0-10的整數(shù)，例如x+y+z之和為6 ; η為1-5的整數(shù)； 其中w>2并且由Ε表示的前兩個氨基酸中的每一個包含不帶電荷的側(cè)鏈或帶負電荷的 側(cè)鏈， 條件是該擬肽大環(huán)化合物不是表2a的擬肽大環(huán)化合物并且不具有以下序列： Ac-RTQATF$r8NQWAibANle$TNAibTR-NH2, Ac-$r8SQQTFS$LWRLLAibQN-NH2, Ac-QSQ$r8TFSNLff$LLAibQN-NH2, Ac-QS$r5QTFStNLW$LLAibQN-NH2,或 Ac-QSQQ$r8FSNLWR$LAibQN-NH2, 其中Aib表示2-氨基異丁酸，$表示通過包含一個雙鍵的全碳交聯(lián)體連接的a -Me S5-戊烯基-丙氨酸烯烴氨基酸，$r5表示通過包含一個雙鍵的全碳交聯(lián)體連接的a-Me R5-戊烯基-丙氨酸烯烴氨基酸，且$r8表示通過包含一個雙鍵的全碳交聯(lián)體連接的a -Me R88-辛烯基-丙氨酸烯經(jīng)氨基酸。
28. 如權(quán)利要求27所述的擬肽大環(huán)化合物，其中各個E獨立地為選自Ala (丙氨酸）、 D-Ala (D-丙氨酸）、Aib ( α -氨基異丁酸）、Sar (N-甲基甘氨酸）和Ser (絲氨酸）的氨基 酸。
29. 如權(quán)利要求27所述的擬肽大環(huán)化合物，其中[D]VS -LeUl-Thr2。
30. 如權(quán)利要求27所述的擬肽大環(huán)化合物，其中由E表示的第一 C-末端氨基酸和/或 第二C-末端氨基酸包含疏水性側(cè)鏈。
31. 如權(quán)利要求30所述的擬肽大環(huán)化合物，其中所述疏水性鏈為大的疏水性側(cè)鏈。
32. -種擬肽大環(huán)化合物，其包含與選自表1、表la、表lb或表lc中的氨基酸序列的氨 基酸序列至少約60%相同的氨基酸序列，其中該擬肽大環(huán)化合物具有下式 ：
其中： 各個A、C、D和E獨立地為氨基酸； B 為氛基酸、
[-NH_L3-C〇-]、[-NH_L 3-S02-]或[-NH_L3-]; 札和R2獨立地為-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜烷基或雜環(huán) 烷基，它們是未取代的或被鹵素-取代的；或者&和1?2中的至少一個形成連接至所述D或 Ε氨基酸之一的α位置的大環(huán)形成連接體L' ； 為氧、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、雜燒基、環(huán)燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)燒基燒基、環(huán)芳基或 雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被r5取代； 各個L或L'獨立地為式-Li - L2 -的大環(huán)形成連接體； Q和L2和L3獨立地為亞烷基、亞烯基、亞炔基、亞雜烷基、亞環(huán)烷基、亞雜環(huán)烷基、亞環(huán) 芳基、亞雜環(huán)芳基或[-R4-K-R4-]n，它們各自任選地被R 5取代； 各個R4為亞烷基、亞烯基、亞炔基、亞雜烷基、亞環(huán)烷基、亞雜環(huán)烷基、亞芳基或亞雜芳 基； 各個 K 為 0、S、SO、S02、CO、C02 或 CONR3 ; 各個r5獨立地為鹵素、烷基、-or6、-n(r6)2、-sr 6、-sor6、-so2r6、-co2r 6、熒光部分、放射 性同位素或治療劑； 各個&獨立地為-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基、熒光部分、放 射性同位素或治療劑； R7為_ H、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、環(huán)燒基、雜燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)芳基 或雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被R5取代，或是與D殘基形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的一部分； R8為_ H、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、環(huán)燒基、雜燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)芳基 或雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被R5取代，或是與E殘基形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的一部分； v 和 w 獨立地為 1-1000 的整數(shù)，例如 1-500、1-200、1-100、1-50、1-30、1-20 或 1-10 ; u為1-10的整數(shù)，例如1-5、1-3或1-2 ; X、y和z獨立地為0-10的整數(shù)，例如x+y+z之和為6 ; η為1-5的整數(shù)；并且 w>2,其中由Ε表示的第三氨基酸中的每一個包含大的疏水性側(cè)鏈， 條件是該擬肽大環(huán)化合物不是表2a的擬肽大環(huán)化合物并且不具有以下序列： Ac-Q$r8QQTFSN$WRLLAibQN-NH2 〇
33. 如權(quán)利要求32所述的擬肽大環(huán)化合物，其中除由E表示的第三氨基酸之外的各個 E為選自Ala (丙氨酸）、D-Ala (D-丙氨酸）、Aib ( α -氨基異丁酸）、Sar (N-甲基甘氨酸） 和Ser (絲氨酸）的氨基酸。
34. 如權(quán)利要求32所述的擬肽大環(huán)化合物，其中〇)幾為-LeUl-Thr2。
35. 如權(quán)利要求32-34中任一項所述的擬肽大環(huán)化合物，其中由E表示的前兩個氨基酸 中的每一個包含不帶電荷的側(cè)鏈或帶負電荷的側(cè)鏈。
36. 如權(quán)利要求32-34中任一項所述的擬肽大環(huán)化合物，其中由E表示的第三氨基酸為 選自異亮氨酸（I)、亮氨酸（L)、甲硫氨酸（M)、苯丙氨酸（F)、色氨酸（W)和酪氨酸（Y)的氨 基酸。
37. 如權(quán)利要求1至36中任一項所述的擬肽大環(huán)化合物，其中Q和L2獨立地為亞烷 基、亞烯基、亞炔基、亞雜烷基、亞環(huán)烷基、亞雜環(huán)烷基、亞環(huán)芳基或亞雜環(huán)芳基，它們各自任 選地被r5取代。
38. 如權(quán)利要求1至36中任一項所述的擬肽大環(huán)化合物，其中Q和L2獨立地為亞烷 基或亞烯基。
39. 如權(quán)利要求1至36中任一項所述的擬肽大環(huán)化合物，其中L為亞烷基、亞烯基或亞 塊基。
40. 如權(quán)利要求39所述的擬肽大環(huán)化合物，其中L為亞烷基。
41. 如權(quán)利要求40所述的擬肽大環(huán)化合物，其中L為C3-C16亞烷基。
42. 如權(quán)利要求41所述的擬肽大環(huán)化合物，其中L為C1(l-C14亞烷基。
43. 如任一前述權(quán)利要求所述的擬肽大環(huán)化合物，其中&和R2獨立地為-H、烷基、 烯基、炔基、芳基烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜烷基或雜環(huán)烷基，它們是未取代的或被鹵 素-取代。
44. 如任一前述權(quán)利要求所述的擬肽大環(huán)化合物，其中凡和R2為H。
45. 如任一前述權(quán)利要求所述的擬肽大環(huán)化合物，其中&和R2獨立地為烷基。
46. 如權(quán)利要求45所述的擬肽大環(huán)化合物，其中&和R2為甲基。
47. 如任一前述權(quán)利要求所述的擬肽大環(huán)化合物，其中x+y+z = 6。
48. 如任一前述權(quán)利要求所述的擬肽大環(huán)化合物，其中u為1。
49. 如任一前述權(quán)利要求所述的擬肽大環(huán)化合物，其中該擬肽大環(huán)化合物不是表2a或 表2b的擬肽大環(huán)化合物。
50. 如任一前述權(quán)利要求所述的擬肽大環(huán)化合物，其中各個E為Ser或Ala或其類似 物。
51. 如任一前述權(quán)利要求所述的擬肽大環(huán)化合物，其包含至少一種為氨基酸類似物的 氨基酸。
52. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
53. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
54. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
55. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
56. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
57. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
58. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
59. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
60. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
61. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
62. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
63. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
64. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
65. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
66. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
67. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
68. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
69. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
70. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
71. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
72. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
73. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
74. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
75. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
76. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
77. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
78. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
79. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
80. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
81. 下式的擬肽大環(huán)化合物：
或其藥學上可接受的鹽。
82. -種治療受試者的癌癥的方法，其包括向該受試者施用如任一前述權(quán)利要求所述 的擬肽大環(huán)化合物。
83. 如權(quán)利要求84所述的方法，其中所述癌癥選自頭頸癌、黑素瘤、肺癌、乳腺癌和神 經(jīng)膠質(zhì)瘤。
84. -種調(diào)節(jié)受試者中的p53和/或MDM2和/或MDMX活性的方法，其包括向該受試者 施用如任一前述權(quán)利要求所述的擬肽大環(huán)化合物。
85. -種拮抗受試者中的p53與MDM2之間和/或p53與MDMX蛋白之間的相互作用的 方法，其包括向該受試者施用如任一前述權(quán)利要求所述的擬肽大環(huán)化合物。
86. -種制備包含式（I)的擬肽大環(huán)化合物的組合物的方法：
該擬肽大環(huán)化合物包含與選自表1、表la、表lb或表lc中的氨基酸序列的氨基酸序列 約60%至約100%相同的氨基酸序列，該方法包括用催化劑處理式（II)的化合物：
以產(chǎn)生式I的化合物 其中，在式（I)和（II)的化合物中 各個A、C、D和E獨立地為氨基酸； 各個 B 獨立地為氨基酸、
[-NH_L3-C〇-]、[-NH_L 3-S02-]或[-nh_l3-]; 各個Ri和R2獨立地為氧、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、環(huán)燒基、環(huán)燒基燒基、雜燒基或雜 環(huán)烷基，它們是未取代的或被鹵素取代的；或者&和R2中的至少一個形成連接至所述D或 E氨基酸之一的α位置的大環(huán)形成連接體L' ； 各個R3獨立地為氧、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、雜燒基、環(huán)燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)燒基燒 基、環(huán)芳基或雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被r5取代； 各個L'獨立地為式-Li - L2 -的大環(huán)形成連接體； 各個Li、L2和L3獨立地為亞烷基、亞烯基、亞炔基、亞雜烷基、亞環(huán)烷基、亞雜環(huán)烷基、亞 環(huán)芳基、亞雜環(huán)芳基或[_R4-K-R4-]n，它們各自任選地被R 5取代； 各個&和1?4，獨立地為亞烷基、亞烯基、亞炔基、亞雜烷基、亞環(huán)烷基、亞雜環(huán)烷基、亞芳 基或亞雜芳基； 各個 K 獨立地為 0、S、SO、S02、CO、C02 或 CONR3 ; 各個r5獨立地為鹵素、烷基、-or6、-n(r6)2、-sr 6、-sor6、-so2r6、-co2r 6、熒光部分、放射 性同位素或治療劑； 各個R6獨立地為氧、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、突光部分、放 射性同位素或治療劑； 各個R7獨立地為氧、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、環(huán)燒基、雜燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒 基、環(huán)芳基或雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被R5取代，或是與D殘基形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的一部分； 各個R8獨立地為氧、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、環(huán)燒基、雜燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒 基、環(huán)芳基或雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被R 5取代，或是與E殘基形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的一部分； 各個V和W獨立地為1-1000的整數(shù)； U為1-10的整數(shù)； 各個X、y和Z獨立地為0-10的整數(shù)； 各個η獨立地為1-5的整數(shù)； 各個〇獨立地為1-15的整數(shù)； 各個Ρ獨立地為1-15的整數(shù)； "（E)"表示反式雙鍵；且 式⑴和（Π)化合物中存在的氨基酸A、C和/或當Β為氨基酸時的Β中的一個或多 個具有攜帶保護基團的側(cè)鏈。
87. 如權(quán)利要求86所述的方法，其中所述保護基團為氮原子保護基團。
88. 如權(quán)利要求86-87中任一項所述的方法，其中所述保護基團為Boc基團。
89. 如權(quán)利要求87-88中任一項所述的方法，其中所述攜帶保護基團的氨基酸的側(cè)鏈 包含受保護的吲哚。
90. 如權(quán)利要求89所述的方法，其中所述在其側(cè)鏈上攜帶所述保護基團的氨基酸為在 其吲哚氮上被保護基團所保護的色氨酸（W)。
91. 如權(quán)利要求90所述的方法，其中所述在其側(cè)鏈上攜帶所述保護基團的氨基酸為在 其吲哚氮上被Boc基團所保護的色氨酸（W)。
92. 如權(quán)利要求86-91中任一項所述的方法，其中在式II的化合物與催化劑接觸的步 驟后，以等于或高于為Z異構(gòu)體的對應化合物的量獲得式（I)的化合物。
93. 如權(quán)利要求92所述的方法，其中在式II的化合物與催化劑接觸的步驟后，以2、3、 4、5、6、7、8、9或10倍于為Z異構(gòu)體的對應化合物的量獲得式（I)的化合物。
94. 如權(quán)利要求86-93中任一項所述的方法，其中所述催化劑為釕催化劑。
95. 如權(quán)利要求86-94中任一項所述的方法，進一步包括用還原劑或氧化劑處理式（I) 的化合物的步驟。
96. 如權(quán)利要求86-95中任一項所述的方法，其中所述式（II)的化合物附著到固體載 體上。
97. 如權(quán)利要求86-95中任一項所述的方法，其中所述式（II)的化合物不附著到固體 載體上。
98. 如權(quán)利要求86-97中任一項所述的方法，進一步包括從所述式（I)的化合物上除去 保護基團。
99. 如權(quán)利要求86-98中任一項所述的方法，其中在約20°C至約80°C的溫度下進行閉 環(huán)復分解反應。
100. 如權(quán)利要求86-100中任一項所述的方法，其中所述式（I)的擬肽大環(huán)化合物具有 下式：
其中： Xaa3、Xaa5、Xaa6、Xaa7、Xaa 8、Xaa9 和 Xaa1(l 中的每一個單獨地為氨基酸，其中 Xaa3、Xaa5、 Xaa6、Xaa8、Xaa9 和 Xaa1(l 中的至少兩個是與序列 Phe3-X4-His5-Tyr6-Trp 7-Ala8-Gln9-Leu10-X n_Ser12的相應位置處的氨基酸相同的氨基酸，其中各個X為氨基酸； 各個D和E獨立地為氨基酸； 札和R2獨立地為-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜烷基或雜環(huán) 烷基，它們是未取代的或被鹵素-取代的；或者&和1?2中的至少一個形成連接至所述D或 E氨基酸之一的α位置的大環(huán)形成連接體L' ； 各個L或L'獨立地為式L2-的大環(huán)形成連接體，其中L在Ε構(gòu)型中包含至少一 個雙鍵； U和L2獨立地為亞烷基、亞烯基、亞炔基、亞雜烷基、亞環(huán)烷基、亞雜環(huán)烷基、亞環(huán)芳基、 亞雜環(huán)芳基或[_R4-K-R4-]n，它們各自任選地被R5取代； 為氧、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、雜燒基、環(huán)燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)燒基燒基、環(huán)芳基或 雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被r5取代； 各個r4為亞烷基、亞烯基、亞炔基、亞雜烷基、亞環(huán)烷基、亞雜環(huán)烷基、亞芳基或亞雜芳 基； 各個 K 為 0、S、SO、S02、CO、C02 或 CONR3 ; 各個r5獨立地為鹵素、烷基、-or6、-n(r6)2、-sr 6、-sor6、-so2r6、-co2r 6、熒光部分、放射 性同位素或治療劑； 各個&獨立地為-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基、熒光部分、放 射性同位素或治療劑； R7為_ H、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、環(huán)燒基、雜燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)芳基 或雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被R5取代，或是與D殘基形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的一部分； R8為_ H、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、環(huán)燒基、雜燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)芳基 或雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被R5取代，或是與E殘基形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的一部分； v為1-1000的整數(shù)； w為3-1000的整數(shù)； η為1-5的整數(shù)；且 Xaa7為Boc-保護的色氨酸。
101.如權(quán)利要求86-99中任一項所述的方法，其中所述式⑴的擬肽大環(huán)化合物具有 下式：
其中： Xaa3、Xaa5、Xaa6、Xaa7、Xaa 8、Xaa9 和 Xaa1(l 中的每一個單獨地為氨基酸，其中 Xaa3、Xaa5、 Xaa6、Xaa8、Xaa9 和 Xaa1(l 中的至少兩個是與序列 Phes-^-GlUs-Tyrjj-Trpy-Alas-Glng-LeUi。/ Cba1(|-Xn-Ala12的相應位置處的氨基酸相同的氨基酸，其中各個X為氨基酸； 各個D和E獨立地為氨基酸； 札和R2獨立地為-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜烷基或雜環(huán) 烷基，它們是未取代的或被鹵素-取代的；或者&和1?2中的至少一個形成連接至所述D或 E氨基酸之一的α位置的大環(huán)形成連接體L' ； 各個L或L'獨立地為式L2-的大環(huán)形成連接體，其中L在Ε構(gòu)型中包含至少一 個雙鍵； U和L2獨立地為亞烷基、亞烯基、亞炔基、亞雜烷基、亞環(huán)烷基、亞雜環(huán)烷基、亞環(huán)芳基、 亞雜環(huán)芳基或[_R4-K-R4-]n，它們各自任選地被R5取代； 為氧、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、雜燒基、環(huán)燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)燒基燒基、環(huán)芳基或 雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被r5取代； 各個r4為亞烷基、亞烯基、亞炔基、亞雜烷基、亞環(huán)烷基、亞雜環(huán)烷基、亞芳基或亞雜芳 基； 各個 K 為 0、S、SO、S02、CO、C02 或 CONR3 ; 各個r5獨立地為鹵素、烷基、-or6、-n(r6)2、-sr 6、-sor6、-so2r6、-co2r 6、熒光部分、放射 性同位素或治療劑； 各個&獨立地為-H、烷基、烯基、炔基、芳基烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)烷基、熒光部分、放 射性同位素或治療劑； R7為_ H、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、環(huán)燒基、雜燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)芳基 或雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被R5取代，或是與D殘基形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的一部分； R8為_ H、燒基、稀基、塊基、芳基燒基、環(huán)燒基、雜燒基、環(huán)燒基燒基、雜環(huán)燒基、環(huán)芳基 或雜環(huán)芳基，它們?nèi)芜x地被R5取代，或是與E殘基形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的一部分； v為1-1000的整數(shù)； w為3-1000的整數(shù)； η為1-5的整數(shù)；且 Xaa7為Boc-保護的色氨酸。
102.如權(quán)利要求86-101中任一項所述的方法，其中所述式（I)的擬肽大環(huán)化合物包含 α -螺旋。
【文檔編號】A61K38/12GK104159595SQ201380009782
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2013年2月14日 優(yōu)先權(quán)日:2012年2月15日
【發(fā)明者】V·蓋爾拉瓦伊斯, C·埃爾金, H·M·納什, T·K·薩維爾, B·J·格拉維斯, E·菲伊凡 申請人:愛勒讓治療公司