一種微圖案化的納米纖維體的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種微圖案化納米纖維體的制備方法。本發(fā)明產(chǎn)品利用靜電紡PLGA納米纖維膜作為工程唾液腺組織的優(yōu)勢，結(jié)合光刻微圖案陣列在納米和微米尺度范圍內(nèi)模擬唾液腺腺泡細(xì)胞系的物理結(jié)構(gòu)，光刻圖案陣列的加入能夠顯著增強(qiáng)納米纖維基材的表面積。本發(fā)明涉及的納米纖維體在制備組織工程用唾液腺領(lǐng)域具有更實(shí)際的應(yīng)用價(jià)值。
【專利說明】一種微圖案化的納米纖維體的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種PLGA納米纖維體的制備方法，尤其涉及一種用于唾腺細(xì)胞和組織分化的微圖案化PLGA納米纖維體的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]不能分泌足夠的唾液，也就是唾液腺功能不良是一種重要的臨床問題，是口腔干燥最初形成的原因。通常由自身免疫疾病、輻射治療或頭部損傷引起的這種失調(diào)會降低一個(gè)人的咀嚼、吞咽、消化和說話能力，更嚴(yán)重的會導(dǎo)致口腔感染、牙齦病和蛀牙。唾液腺功能不良的治療方法，通常包括使用一些具有很多副作用藥物或者人工唾液，而這些都是暫時(shí)的并且是不充分的。一種可能的用于治療唾液腺功能不良的方法就是建立一種工程唾液腺，這種唾液腺能夠永久性地代替腺泡組織的喪失或損壞。 [0003]人工唾液腺主要涉及兩種組織工程的方法:一種方法是將唾液腺上皮細(xì)胞系或者初始細(xì)胞自組裝在三維基材中，可以是人工基底膜或者是自然的基材如透明質(zhì)酸，但缺點(diǎn)是形成的密閉的球體缺乏相互連接性，因而不利于唾液的捕獲，而且，人工基底膜是不能實(shí)現(xiàn)人體移植的；另一種是利用平的合成或天然的基材來組織唾液腺細(xì)胞呈為單層膜，然而在平的聚合物基底上生長的唾液腺細(xì)胞往往不能形成緊的連接結(jié)，而這種連接結(jié)對唾液的定向分泌是必須的，且這種方法也不能形成可以提供足夠大的表面積、能產(chǎn)生足夠唾液的三維的枝狀結(jié)構(gòu)。
[0004]靜電紡納米纖維膜已經(jīng)用于很多研究中來制備具有可以模擬細(xì)胞外基質(zhì)的納米尺度結(jié)構(gòu)的具有大表面積的基材，這些基材通常被用作支架材料用于間葉細(xì)胞的粘附、延展和滲透，在細(xì)胞外基質(zhì)中的纖維狀支撐蛋白質(zhì)上組裝成三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。用納米纖維膜作為基材用于唾液腺上皮細(xì)胞，聚乳酸共聚羥基乙酸(PLGA)納米纖維有能力促進(jìn)產(chǎn)生更多的三維類上皮細(xì)胞的形貌。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明涉及一種用于唾腺細(xì)胞分化和組織的微圖案化的PLGA納米纖維體的制備，具體制備步驟如下:
[0006](I)微圖案化條形陣列的制備:將200nm的單晶硅片用體積比3:1的硫酸和30%的過氧化氫溶液清洗2min，然后洗滌干燥，在2500rpm的轉(zhuǎn)速下旋涂上P20助粘劑，旋涂時(shí)間為50s，正性光致抗蝕劑SPR2207.0在轉(zhuǎn)速為1000rpm的條件下旋涂5min，然后在80°C烘焙IOmin ;然后在接觸式光刻機(jī)中曝光IOmin,軟接觸模式為小于3mJ / cm2,曝光后,抗蝕劑在溫和的攪拌條件下在AZ300MIF顯影劑下顯影l(fā)Omin，提高溫度到160°C烘焙5min，按照前驅(qū)體和交聯(lián)劑比例為10:1的比例將聚二甲基硅氧烷徹底混合，旋涂到圖案化的硅片上，旋涂速度為1000rpm，旋涂時(shí)間為80s，然后在80°C熱處理6h。熱處理后，將聚二甲基硅氧烷剝離，浸入到乙醇中Ih以去除多余的光刻膠。
[0007](2)圓形的玻璃蓋玻片先用Vectabond試劑處理以便于聚合物的粘附和干燥。在進(jìn)行靜電紡絲之前，蓋玻片用一層薄薄的聚二甲基硅氧烷(~IOy m)前驅(qū)體/交聯(lián)劑涂覆作為粘結(jié)層，固定大小的圓形陣列從聚二甲基硅氧烷片上切割下來后覆蓋到聚二甲基硅氧烷層的表面然后在80°C干燥lOmin，將含有陣列的蓋玻片放到接收箔上沉積靜電紡納米纖維膜，靜電紡絲液含有15wt^^PLGA(溶劑為全氟異丙醇)和2被％的似(:1以及5iimol的SRB ;紡絲頭為19G的注射器，紡絲電壓為20kV，紡絲距離為20cm，紡絲液推進(jìn)速度為2mL /h，紡絲時(shí)間為lh。靜電紡絲結(jié)束后，樣品立即在37°C下干燥24h。
[0008]本發(fā)明中利用靜電紡PLGA納米纖維膜作為工程唾液腺組織的優(yōu)勢，結(jié)合光刻微圖案陣列在納米和微米尺度范圍內(nèi)模擬唾液腺腺泡細(xì)胞系的物理結(jié)構(gòu)，光刻圖案陣列的加入能夠顯著增強(qiáng)納米纖維基材的表面積，因此在制備工程用唾液腺領(lǐng)域具有更實(shí)際的應(yīng)用價(jià)值。
【具體實(shí)施方式】
[0009]為了加深對本發(fā)明的理解，下面結(jié)合具體實(shí)例對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳述:
[0010](I)微圖案化條形陣列的制備:200nm的單晶硅片用體積比3:1的硫酸和30%的過氧化氫溶液清洗2min，然后洗滌干燥，在2500rpm的轉(zhuǎn)速下旋涂上P20助粘劑，旋涂時(shí)間為50s，正性光致抗蝕劑SPR2207.0在轉(zhuǎn)速為1000rpm的條件下旋涂5min，然后在80°C烘焙IOmin ;然后在接觸式光刻機(jī)中曝光IOmin,軟接觸模式為小于3mJ / cm2,曝光后,抗蝕劑在溫和的攪拌條件下在AZ300MIF顯影劑下顯影l(fā)Omin，提高溫度到160°C烘焙5min，按照前驅(qū)體和交聯(lián)劑比例為10:1的比例將聚二甲基硅氧烷徹底混合，旋涂到圖案化的硅片上，旋涂速度為1000rpm，旋涂時(shí)間為80s，然后在80°C熱處理6h。熱處理后，將聚二甲基硅氧烷剝離，浸入到乙醇中Ih以去除多余的光刻膠。
[0011](2)圓形的玻璃蓋玻片先用Vectabond試劑處理以便于聚合物的粘附和干燥。在進(jìn)行靜電紡絲之前，蓋玻片用一層薄薄的聚二甲基硅氧烷前驅(qū)體/交聯(lián)劑涂覆作為粘結(jié)層。固定大小的圓形陣列從聚二`甲基硅氧烷片上切割下來后覆蓋到聚二甲基硅氧烷層的表面然后在80°C干燥lOmin，將含有陣列的蓋玻片放到接收箔上沉積靜電紡納米纖維膜，靜電紡絲液含有15wt^^^PLGA(溶劑為全氟異丙醇)和2被％的似(:1以及5iimol的SRB;紡絲頭為19G的注射器，紡絲電壓為20kV，紡絲距離為20cm，紡絲液推進(jìn)速度為2mL / h,紡絲時(shí)間為Ih ;靜電紡絲結(jié)束后，樣品立即在37°C下干燥24h。
【權(quán)利要求】
1.一種微圖案化的納米纖維體的制備方法，其步驟如下: (1)微圖案化條形陣列的制備: 將200nm的單晶硅片用硫酸和30 %的過氧化氫溶液清洗2min，然后洗滌干燥,在2500rpm的轉(zhuǎn)速下旋涂上P20助粘劑，旋涂時(shí)間為50s，正性光致抗蝕劑SPR2207.0在轉(zhuǎn)速為1000rpm的條件下旋涂5min，然后在80°C烘焙lOmin，然后在接觸式光刻機(jī)中曝光IOmin,軟接觸模式為小于3mJ / cm2,曝光后,抗蝕劑在溫和的攪拌條件下在AZ300MIF顯影劑下顯影l(fā)Omin，提高溫度到160°C烘焙5min，按照前驅(qū)體和交聯(lián)劑比例為10:1的比例將聚二甲基硅氧烷徹底混合，旋涂到圖案化的硅片上，旋涂速度為lOOOrpm，旋涂時(shí)間為80s，然后在80°C熱處理6h;熱處理后，將聚二甲基硅氧烷剝離，浸入到乙醇中Ih; (2)圓形的玻璃蓋玻片先用Vectabond試劑處理以便于聚合物的粘附和干燥；在進(jìn)行靜電紡絲之前，蓋玻片用一層聚二甲基硅氧烷前驅(qū)體/交聯(lián)劑涂覆作為粘結(jié)層，固定大小的圓形陣列從聚二甲基硅氧烷片上切割下來后覆蓋到聚二甲基硅氧烷層的表面然后在80°C干燥lOmin，將含有陣列的蓋玻片放到接收箔上沉積靜電紡納米纖維膜，靜電紡絲液含有(溶劑為全氟異丙醇)和以及5iimol的SRB，紡絲時(shí)間為Ih ;靜電紡絲結(jié)束后，樣品立即在37°C下干燥24h。
2.如權(quán)利要求1所述的納米纖維體的制備方法，其特征在于:所述體積比3:1的硫酸和30%的過氧化氫溶液。
3.如權(quán)利要求1所述的納米纖維體的制備方法，其特征在于:所述紡絲條件是:噴絲頭為19G的注射器，紡絲電壓為20kV，紡絲距離為20cm，紡絲液推進(jìn)速度為2mL / h。
4.如權(quán)利要求1所述的納米纖維體的制備方法，其特征在于:所述紡絲條件為:所述聚二甲基硅氧烷的厚度小于lOiim。
【文檔編號】A61L27/18GK103599562SQ201310586083
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年11月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月15日
【發(fā)明者】韓志超, 許杉杉, 佴剛 申請人:無錫中科光遠(yuǎn)生物材料有限公司