一種抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的組合物、混合凍干粉及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的組合物、混合凍干粉及制備方法，該組合物包括以下重量份數(shù)的組分：抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體94?97份，抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子1?2份。采用本發(fā)明的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的組合物制成的混合凍干粉，將抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體與抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子進(jìn)行復(fù)配，并輔以多種輔料，各組分相互配合，協(xié)調(diào)作用，可以顯著提高其綜合防治豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的效果，具有常溫下保存時(shí)間長(zhǎng)、抗體效價(jià)高、生物活性良好的優(yōu)點(diǎn)，是一種具有廣泛應(yīng)用前景的強(qiáng)效生物制劑。
【專利說(shuō)明】一種抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的組合物、混合凍 干粉及制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于獸藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的組 合物，同時(shí)還涉及一種抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉及該混合凍干粉的 制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 豬瘟俗稱"爛腸瘟"，是由黃病毒科豬瘟病毒屬的豬瘟病毒（CSFV)引起的一種急 性、發(fā)熱、接觸性傳染病，具有高度傳染性和致死性。主要特征是高溫、微血管變性而引起全 身出血、壞死、梗塞。豬瘟于1885年首先在美國(guó)發(fā)現(xiàn)，隨后傳播到世界各大洲。1903年美國(guó) 獸醫(yī)學(xué)家德希尼茲和多賽特鑒定該病的病原是黃病毒科的瘟病毒屬（Pestivirus)中的豬 瘟病毒，主要通過(guò)直接接觸或接觸污染的媒介物而發(fā)??；消化道、鼻腔粘膜和破裂的皮膚均 是感染途徑。
[0003] 豬偽狂犬病是由偽狂犬病毒引起的急性傳染病。偽狂犬病毒屬于皰疹病毒 科（Herpesviridae)、豬皰疫病毒屬，病毒粒子為圓形，直徑150_180nm，核衣殼直徑為 105-110nm ;病毒粒子的最外層是病毒囊膜，它是由宿主細(xì)胞衍生而來(lái)的脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)。囊 膜表面有長(zhǎng)約8-10nm呈放射狀排列的纖突。在豬場(chǎng)，偽狂犬病毒主要通過(guò)已感染豬排毒而 傳給健康豬；空氣傳播是偽狂犬病毒擴(kuò)散的最主要途徑。豬發(fā)生偽狂犬病候，成年豬一般呈 隱性感染，可引起生長(zhǎng)停滯、增重緩慢；可導(dǎo)致懷孕母豬流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎，以及種豬不 育等綜合癥候群；15日齡以內(nèi)的仔豬發(fā)病死亡率高達(dá)100%。
[0004] 豬圓環(huán)病毒（Porcine circovirus，PCV)是迄今發(fā)現(xiàn)的一種最小的動(dòng)物病毒?，F(xiàn) 已知PCV有兩個(gè)血清型，即PCV1和PCV2, PCV2為致病性的病毒，它是斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭 綜合征（Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome，PMWS)的主要病原。豬對(duì) PCV2 具有較強(qiáng)的易感性，感染豬可自鼻液、糞便等廢物中排出病毒，經(jīng)口腔、呼吸道途徑感染不 同年齡的豬。懷孕母豬感染PCV2后，可經(jīng)胎盤垂直傳播感染仔豬。
[0005] 目前防治豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的方法較多，主要是使用西藥、接種免 疫、中草藥等進(jìn)行防治。其中，西藥使用的泛濫給豬肉類食品帶來(lái)了極大的安全隱患，藥物 殘留已經(jīng)成為影響豬肉產(chǎn)品安全的主要因素之一。接種免疫早期效果較好，但是需要多次 接種，操作麻煩，成本較高，容易造成應(yīng)激反應(yīng)；而且疫苗對(duì)于保藏條件要求較高，需要在 2_8°C條件下冷藏，室溫條件下一段時(shí)間則失去效果。中草藥飼料添加劑也是目前的研究方 向之一，但是由于中草藥的種類較多，相同的中藥材對(duì)不同的禽畜疾病的作用差異很大，且 中草藥對(duì)疾病的免疫效果極其有限，因此應(yīng)用也具有一定的局限性。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的組合物，解決現(xiàn)有 技術(shù)同時(shí)防治豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病存在的操作不便、藥劑不易保存、效果較差 的問(wèn)題。
[0007] 本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干 粉。
[0008] 本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干 粉的制備方法。
[0009] 為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓 環(huán)病毒病的組合物，包括以下重量份數(shù)的組分：抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵 黃抗體94?97份、抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子1?2份。
[0010] 一種抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉，包括以下重量份數(shù)的組 分：抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體94?97份、抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓 環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子1?2份、防腐劑0. 01?0. 02份、滅活劑0. 2?0. 3份、硒0. 05? 0. 1份、維生素 C0. 5?1份、聚乙烯吡咯烷酮1?2份、甘氨酸0. 5?1份。
[0011] 所述滅活劑為甲醛。
[0012] 所述防腐劑為硫柳汞。
[0013] 一種上述的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方法，包括下 列步驟：
[0014] a.采用豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒標(biāo)準(zhǔn)株制備三聯(lián)疫苗，免疫健康雞群獲得高 免蛋，將高免蛋經(jīng)過(guò)消毒、酸化處理、離心處理得到含有抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病 三聯(lián)卵黃抗體的上清液；
[0015] b.將含有抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體的上清液與抗豬瘟、豬 偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子、防腐劑、滅活劑、硒、維生素 C、聚乙烯吡咯烷酮、甘 氨酸混合，再凍干即得。
[0016] 優(yōu)選的，抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方法，包括下列 步驟：
[0017] 1)取豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒標(biāo)準(zhǔn)株進(jìn)行增殖，將其滅活制備成三聯(lián)疫苗， 每間隔7天對(duì)健康產(chǎn)蛋雞群進(jìn)行免疫，一共免疫三次，第二次免疫后開(kāi)始檢測(cè)抗體效價(jià)，當(dāng) 抗體效價(jià)達(dá)到1 :256時(shí)，收集高免蛋，將收集的高免蛋進(jìn)行清理、消毒，晾干備用；
[0018] 2)將步驟1)所得高免蛋分離得到高免蛋卵黃，加入等體積的無(wú)菌水，充分?jǐn)嚢?，?到卵黃抗體溶液，在卵黃抗體溶液中加入酸化水溶液，混勻、靜置沉淀，取上清液備用；
[0019] 3)在步驟2)所得上清液中加入鈉鹽使鈉鹽體積占總體積的0. 8%，離心分離，得含 有抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體的上清液；
[0020] 4)取步驟3)所得的含有94?97重量份的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三 聯(lián)卵黃抗體的上清液，加入1?2重量份抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子， 過(guò)濾，留濾液備用；
[0021] 5)將步驟4)所得濾液濃縮至2. 5ml/500羽份，加入防腐劑0. 01?0. 02重量份、 滅活劑〇. 2?0. 3重量份、硒0. 05?0. 1重量份、維生素 C0. 5?1重量份、聚乙烯批咯燒 酮1?2重量份、甘氨酸0. 5?1重量份進(jìn)行混合，先-20°C預(yù)冷，再在-80°C條件下凍干， 即得。
[0022] 步驟2)中所述酸化水溶液的pH為4. 9?5. 2 ;酸化水溶液的加入量為卵黃抗體 溶液體積的8倍。所述酸化水溶液可為鹽酸化水溶液。
[0023] 步驟3)中所述鈉鹽為NaCl與NaS04的質(zhì)量比為4:1的混合物。
[0024] 步驟3)中所述離心分離的轉(zhuǎn)速為15000rpm，時(shí)間為20min。
[0025] 步驟4)中所述過(guò)濾是先用0. 45 μ m的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，截留分子量大于200KD的大 分子，再將濾液用〇. 22 μ m的濾膜過(guò)濾。
[0026] 卵黃抗體是一種免疫球蛋白，由于機(jī)體受到外界抗原的刺激而產(chǎn)生的一種應(yīng)激產(chǎn) 物，可以和相應(yīng)抗原結(jié)合，消除病因。本發(fā)明將豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的三聯(lián)疫苗 免疫接種健康的雞群，可以使獲得的雞蛋蛋黃中產(chǎn)生有效的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病 毒病三聯(lián)卵黃抗體，同時(shí)減少了毒株返祖的可能性。
[0027] 轉(zhuǎn)移因子攜帶有致敏淋巴細(xì)胞的特異性免疫信息，能夠?qū)⑻禺愋悦庖咝畔⒊蔬f給 受體淋巴細(xì)胞，使受體無(wú)活性的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)樘禺愋灾旅袅馨图?xì)胞，從而激發(fā)受體細(xì)胞 介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。
[0028] 本發(fā)明的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的組合物中，抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬 圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體是一種免疫球蛋白，對(duì)豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病有很好的 防治效果；抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子本身是一種特異抗病毒因子， 將兩者結(jié)合使用，可極大地提高綜合預(yù)防和治療豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的效果。
[0029] 本發(fā)明的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉，將抗豬瘟、豬偽狂犬 病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體與抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子進(jìn)行復(fù) 配，并輔以防腐劑、滅活劑、硒、維生素 C、聚乙烯吡咯烷酮和甘氨酸制備混合凍干粉，各組分 相互配合，協(xié)調(diào)作用，可以顯著提高其綜合防治豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的效果，具 有針對(duì)性強(qiáng)、常溫下保存時(shí)間長(zhǎng)、抗體效價(jià)高、生物活性良好的優(yōu)點(diǎn)，是一種具有廣泛應(yīng)用 前景的強(qiáng)效生物制劑；經(jīng)動(dòng)物試驗(yàn)證明，本發(fā)明的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混 合凍干粉，對(duì)豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的綜合防治效果要明顯優(yōu)于抗豬瘟、豬偽狂 犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體，抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子中任 意一種單獨(dú)使用的情況。
[0030] 本發(fā)明的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉，使用時(shí)，可作為飼料 添加劑按質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%?3%混入飼料中；發(fā)病時(shí)采用肌注方式給藥，每100ml注射液中含有 混合凍干粉2g，注射液的使用量為每次0. 1?0. 2ml/kg體重；首次用藥加倍，治療效果更 好。
[0031] 本發(fā)明的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方法，將抗豬 瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體、抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移 因子和多種輔料進(jìn)行復(fù)配，并通過(guò)調(diào)整輔料的成分、控制其用量，進(jìn)一步延長(zhǎng)了卵黃抗體的 保存時(shí)間，保證了卵黃抗體在常溫下較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)的活性，降低了凍干粉制劑的保存和運(yùn)輸 成本，使用方便，具有廣泛的應(yīng)用前景；制備方法工藝簡(jiǎn)單，操作方便，極大的降低了生產(chǎn)成 本，適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。

【具體實(shí)施方式】
[0032] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0033] 本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】中，所用豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)毒株。
[0034] 本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】中，所用抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因 子，是由以下方法制備的：
[0035] 1)用豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒標(biāo)準(zhǔn)抗原(市售）對(duì)豬脾臟進(jìn)行免疫后，去其表 面筋、脂肪，再用滅菌后的生理鹽水沖洗；
[0036] 2)將沖洗后的豬脾臟破碎后，加入2倍體積的預(yù)冷后的PBS緩沖液，用組織勻漿儀 將其勻質(zhì)，得勻漿液；
[0037] 3)將勻漿液用超聲破碎儀處理5?lOmin后，調(diào)節(jié)pH為5. 5,在5000?6000rpm 轉(zhuǎn)速下離心30min，收集上清液；
[0038] 4)將步驟3)所得上清液用微濾膜過(guò)濾，截留分子量為7000道爾頓以上的物質(zhì)，將 所得濾液用除菌濾膜過(guò)濾，即得抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子原液，在 4°C條件下保存?zhèn)溆谩?br> [0039] 實(shí)施例1
[0040] 本實(shí)施例的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的組合物，包括以下重量份數(shù)的組 分：抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體94份、抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病 毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子2份。
[0041] 本實(shí)施例的使用上述組合物制成的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍 干粉，包括以下重量份數(shù)的組分：抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體94份、 抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子2份、硫柳汞0. 02份、甲醛0. 2份、硒0. 05 份、維生素 C1份、聚乙烯吡咯烷酮2份、甘氨酸0. 5份。
[0042] 本實(shí)施例的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方法，包括下 列步驟：
[0043] 1)取豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒標(biāo)準(zhǔn)毒株進(jìn)行增殖，將其滅活制備成三聯(lián)疫 苗，每間隔7天對(duì)健康產(chǎn)蛋雞群進(jìn)行免疫，一共免疫三次，第一次免疫健康雞群接種滅活疫 苗1. 5ml，第二次、第三次免疫接種加量1倍，第二次免疫后開(kāi)始檢測(cè)抗體效價(jià)，當(dāng)抗體效價(jià) 達(dá)到1 :256時(shí)，收集高免蛋，將收集的高免蛋進(jìn)行清理、消毒，晾干備用；
[0044] 2)將步驟1)所得高免蛋分離得到高免蛋卵黃，加入等體積的無(wú)菌水，充分?jǐn)嚢?，?到卵黃抗體溶液，在卵黃抗體溶液中加入pH為5. 0的酸化水溶液，酸化水溶液加入量為卵 黃抗體溶液體積的8倍，混勻、靜置沉淀，取上清液備用；
[0045] 3)在步驟2)所得上清液中加入由NaCl與NaS04按質(zhì)量比為4:1的比例混合形成 的混合鈉鹽，使混合鈉鹽體積占總體積的0. 8%，以15000rpm的轉(zhuǎn)速離心20min，得含有抗豬 瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體的上清液；
[0046] 4)取步驟3)所得的含有94重量份的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃 抗體的上清液，加入2重量份抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子，用0. 45 μ m 的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，截流分子量大于200KD的大分子物質(zhì)，再將濾液經(jīng)0. 22 μ m濾膜過(guò)濾，留 濾液備用；
[0047] 5)將步驟4)所得濾液濃縮至2. 5ml/500羽份，加入硫柳汞0. 02重量份、甲醛0. 2 重量份、硒〇. 05重量份、維生素 C1重量份、聚乙烯吡咯烷酮2重量份、甘氨酸0. 5重量份進(jìn) 行混合，先-20°C預(yù)冷，再在-80°C條件下凍干，即得。
[0048] 實(shí)施例2
[0049] 本實(shí)施例的抗豬癌、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的組合物，包括以下重量份數(shù)的組 分：抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體95份、抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病 毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子1. 5份。
[0050] 本實(shí)施例的使用上述組合物制成的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍 干粉，包括以下重量份數(shù)的組分：抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體95份、 抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子1. 5份、硫柳汞0. 01份、甲醛0. 3份、硒 0. 1份、維生素 C0. 5份、聚乙烯吡咯烷酮1. 5份、甘氨酸1份。
[0051] 本實(shí)施例的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方法，包括下 列步驟：
[0052] 1)取豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒標(biāo)準(zhǔn)毒株進(jìn)行增殖，將其滅活制備成三聯(lián)疫 苗，每間隔7天對(duì)健康產(chǎn)蛋雞群進(jìn)行免疫，一共免疫三次，第一次免疫健康雞群接種滅活疫 苗1. 5ml，第二次、第三次免疫接種加量1倍，第二次免疫后開(kāi)始檢測(cè)抗體效價(jià)，當(dāng)抗體效價(jià) 達(dá)到1 :256時(shí)，收集高免蛋，將收集的高免蛋進(jìn)行清理、消毒，晾干備用；
[0053] 2)將步驟1)所得高免蛋分離得到高免蛋卵黃，加入等體積的無(wú)菌水，充分?jǐn)嚢?，?到卵黃抗體溶液，在卵黃抗體溶液中加入pH為5. 0的酸化水溶液，酸化水溶液加入量為卵 黃抗體溶液體積的8倍，混勻、靜置沉淀，取上清液備用；
[0054] 3)在步驟2)所得上清液中加入由NaCl與NaS04按質(zhì)量比為4:1的比例混合形成 的混合鈉鹽，使混合鈉鹽體積占總體積的0. 8%，以15000rpm的轉(zhuǎn)速離心20min，得含有抗豬 瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體的上清液；
[0055] 4)取步驟3)所得的含有95重量份的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián) 卵黃抗體的上清液，加入1. 5重量份抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子，用 0. 45 μ m的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，截流分子量大于200KD的大分子物質(zhì)，再將濾液經(jīng)0. 22 μ m濾膜 過(guò)濾，留濾液備用；
[0056] 5)將步驟4)所得濾液濃縮至2. 5ml/500羽份，加入硫柳汞0. 01重量份、甲醛0. 3 重量份、硒〇. 1重量份、維生素 C0. 5重量份、聚乙烯吡咯烷酮1. 5重量份、甘氨酸1重量份 進(jìn)行混合，先-20°C預(yù)冷，再在-80°C條件下凍干，即得。
[0057] 實(shí)施例3
[0058] 本實(shí)施例的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的組合物，包括以下重量份數(shù)的組 分：抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體97份、抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病 毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子1份。
[0059] 本實(shí)施例的使用上述組合物制成的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍 干粉，包括以下重量份數(shù)的組分：抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體97份、 抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子1份、硫柳汞〇. 01份、甲醛〇. 25份、硒 0. 08份、維生素 C1份、聚乙烯吡咯烷酮1份、甘氨酸0. 5份。
[0060] 本實(shí)施例的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方法，包括下 列步驟：
[0061] 1)取豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒標(biāo)準(zhǔn)毒株進(jìn)行增殖，將其滅活制備成三聯(lián)疫 苗，每間隔7天對(duì)健康產(chǎn)蛋雞群進(jìn)行免疫，一共免疫三次，第一次免疫健康雞群接種滅活疫 苗1. 5ml，第二次、第三次免疫接種加量1倍，第二次免疫后開(kāi)始檢測(cè)抗體效價(jià)，當(dāng)抗體效價(jià) 達(dá)到1 :256時(shí)，收集高免蛋，將收集的高免蛋進(jìn)行清理、消毒，晾干備用；
[0062] 2)將步驟1)所得高免蛋分離得到高免蛋卵黃，加入等體積的無(wú)菌水，充分?jǐn)嚢瑁?到卵黃抗體溶液，在卵黃抗體溶液中加入pH為5. 0的酸化水溶液，酸化水溶液加入量為卵 黃抗體溶液體積的8倍，混勻、靜置沉淀，取上清液備用；
[0063] 3)在步驟2)所得上清液中加入由NaCl與NaS04按質(zhì)量比為4:1的比例混合形成 的混合鈉鹽，使混合鈉鹽體積占總體積的0. 8%，以15000rpm的轉(zhuǎn)速離心20min，得含有抗豬 瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體的上清液；
[0064] 4)取步驟3)所得的含有97重量份的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃 抗體的上清液，加入1重量份抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子，用〇. 45 μ m 的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，截流分子量大于200KD的大分子物質(zhì)，再將濾液經(jīng)0. 22 μ m濾膜過(guò)濾，留 濾液備用；
[0065] 5)將步驟4)所得濾液濃縮至2. 5ml/500羽份，加入硫柳汞0. 01重量份、甲醛0. 25 重量份、硒〇. 08重量份、維生素 C1重量份、聚乙烯吡咯烷酮1重量份、甘氨酸0. 5重量份進(jìn) 行混合，先-20°C預(yù)冷，再在-80°C條件下凍干，即得。
[0066] 實(shí)驗(yàn)例1
[0067] 本實(shí)驗(yàn)例對(duì)實(shí)施例1?3所得混合凍干粉進(jìn)行性能檢測(cè)，結(jié)果如表1、2所示。
[0068] 常溫效價(jià)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方法：將實(shí)施例1?3所得混合凍干粉制劑保存在37°C培養(yǎng)箱 中，保存24個(gè)月，分別在1周、2周、1月、2月、4月、8月、12月、16月、20月、24月后，用瓊脂 擴(kuò)散(AGP)法，測(cè)定每個(gè)時(shí)間點(diǎn)所取樣品的卵黃抗體效價(jià)變化。
[0069] 表1實(shí)施例1?3所得混合凍干粉常溫效價(jià)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0070]

【權(quán)利要求】
1. 一種抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的組合物，其特征在于：包括以下重量份數(shù) 的組分：抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體94?97份，抗豬瘟、豬偽狂犬病、 豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子1?2份。
2. -種抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉，其特征在于：包括以下重量 份數(shù)的組分：抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體94?97份，抗豬瘟、豬偽狂 犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子1?2份，防腐劑0. 01?0. 02份，滅活劑0. 2?0. 3份， 硒0. 05?0. 1份，維生素 C0. 5?1份，聚乙烯吡咯烷酮1?2份，甘氨酸0. 5?1份。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉，其特征在 于：所述滅活劑為甲醛。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉，其特征在 于：所述防腐劑為硫柳汞。
5. -種如權(quán)利要求2所述的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備 方法，其特征在于：包括下列步驟 ： a. 采用豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒標(biāo)準(zhǔn)株制備三聯(lián)疫苗，免疫健康雞群獲得高免 蛋，將高免蛋經(jīng)過(guò)消毒、酸化處理、離心處理得到含有抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三 聯(lián)卵黃抗體的上清液； b. 將含有抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體的上清液與抗豬瘟、豬偽狂 犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子、防腐劑、滅活劑、硒、維生素 C、聚乙烯吡咯烷酮、甘氨酸 混合，再凍干即得。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方 法，其特征在于：包括下列步驟： 1) 取豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒標(biāo)準(zhǔn)株進(jìn)行增殖，將其滅活制備成三聯(lián)疫苗，每間 隔7天對(duì)健康產(chǎn)蛋雞群進(jìn)行免疫，一共免疫三次，第二次免疫后開(kāi)始檢測(cè)抗體效價(jià)，當(dāng)抗體 效價(jià)達(dá)到1 :256時(shí)，收集高免蛋，將收集的高免蛋進(jìn)行清理、消毒，晾干備用； 2) 將步驟1)所得高免蛋分離得到高免蛋卵黃，加入等體積的無(wú)菌水，充分?jǐn)嚢?，得到?黃抗體溶液，在卵黃抗體溶液中加入酸化水溶液，混勻、靜置沉淀，取上清液備用； 3) 在步驟2)所得上清液中加入鈉鹽使鈉鹽體積占總體積的0. 8%，離心分離，得含有抗 豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵黃抗體的上清液； 4) 取步驟3)所得的含有94?97重量份的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)卵 黃抗體的上清液，加入1?2重量份抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病三聯(lián)轉(zhuǎn)移因子，過(guò) 濾，留濾液備用； 5) 將步驟4)所得濾液濃縮至2. 5ml/500羽份，加入防腐劑0. 01?0. 02重量份、滅活 劑0. 2?0. 3重量份、硒0. 05?0. 1重量份、維生素 C0. 5?1重量份、聚乙烯吡咯烷酮1? 2重量份、甘氨酸0. 5?1重量份進(jìn)行混合，先-20°C預(yù)冷，再在-80°C條件下凍干，即得。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方 法，其特征在于：步驟2)中所述酸化水溶液的pH為4. 9?5. 2 ;酸化水溶液的加入量為卵 黃抗體溶液體積的8倍。
8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方 法，其特征在于：步驟3)中所述鈉鹽為NaCl與NaS04的質(zhì)量比為4:1的混合物。
9. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備方 法，其特征在于：步驟3)中所述離心分離的轉(zhuǎn)速為15000rpm，時(shí)間為20min。
10. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗豬瘟、豬偽狂犬病、豬圓環(huán)病毒病的混合凍干粉的制備 方法，其特征在于：步驟4)中所述過(guò)濾是先用0. 45 μ m的濾膜進(jìn)行過(guò)濾，截留分子量大于 200KD的大分子，再將濾液用0. 22 μ m的濾膜過(guò)濾。
【文檔編號(hào)】A61K39/39GK104208676SQ201310462806
【公開(kāi)日】2014年12月17日 申請(qǐng)日期:2013年9月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月30日
【發(fā)明者】郭俊清, 徐進(jìn), 陳建暉 申請(qǐng)人:鄭州后羿制藥有限公司