一種熒光標(biāo)記的腫瘤靶向示蹤劑及制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】一種熒光標(biāo)記的腫瘤靶向示蹤劑及制備方法和應(yīng)用，屬于熒光標(biāo)記【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明示蹤劑由異硫氰酸熒光素FITC與7肽IF7構(gòu)成，記為FITC-IF7；7肽IF7為異亮氨酸－苯丙氨酸－亮氨酸－亮氨酸－色氨酸－谷氨酰胺－精氨酸。其制備方法為：取FITC加入于IF7堿性溶液中，4℃反應(yīng)24h，NH4Cl終止反應(yīng)，制備型HPLC分離純化得到FITC－IF7。FITC－IF7具有良好的穩(wěn)定性，對(duì)腫瘤細(xì)胞親和力高，能進(jìn)入不同的腫瘤細(xì)胞：人表皮癌細(xì)胞（A431）、人肺腺癌細(xì)胞（A549）、人肝癌細(xì)胞（Bel-7402）、小鼠黑色素瘤細(xì)胞（B16）。FITC-IF7利用FITC等熒光材料作為示蹤劑，檢測(cè)方便，各種熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀都可檢測(cè)，還可用于腫瘤診斷的熒光成像。
【專利說(shuō)明】一種熒光標(biāo)記的腫瘤靶向示蹤劑及制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]熒光標(biāo)記的腫瘤靶向示蹤劑及制備方法和應(yīng)用，屬于熒光標(biāo)記【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明示蹤劑FITC-1F7可用于檢測(cè)其進(jìn)入不同腫瘤細(xì)胞的能力，在抗腫瘤藥物研制和光學(xué)成像等生物應(yīng)用領(lǐng)域具有重要的作用。
【背景技術(shù)】
[0002]在生命科學(xué)及現(xiàn)代分子生物學(xué)領(lǐng)域里，研究和應(yīng)用高靈敏度的非同位素檢測(cè)方法一直是各國(guó)學(xué)者共同努力的方向。熒光標(biāo)記技術(shù)是指利用一些能發(fā)熒光的物質(zhì)共價(jià)結(jié)合或物理吸附在所要研究分子的某個(gè)基團(tuán)上，利用它的熒光特性來(lái)提供被研究對(duì)象的信息。該技術(shù)具有聞靈敏度、聞穩(wěn)定性和聞選擇性等特點(diǎn)。
[0003]糖模擬肽(carbohydrate mimetic peptide, CMP),是一短序列肽分子，能模擬生物大分子或細(xì)胞表面復(fù)雜的糖結(jié)構(gòu)，常用于替代糖分子進(jìn)行誘導(dǎo)免疫反應(yīng)制備特異性抗體。CMP分子小，血漿清除快，在藥代動(dòng)力學(xué)方面極具優(yōu)勢(shì)，備受研究者青睞，現(xiàn)在也多用于篩選受體或抗體的特異性高親和力配體。如能篩選出一種與腫瘤新生血管特異性結(jié)合的CMP,將有較高應(yīng)用前景。Shingo Hatakeyama等在研究糖模擬肽的過(guò)程中，發(fā)現(xiàn)了一個(gè)名為IF7的七肽片段，能有效靶向腫瘤血管，而且基本不引起免疫反應(yīng)。Anxal是鈣磷脂結(jié)合蛋白Anx家族的成員之一，高表達(dá)于腫瘤新生血管，是EGFR的底物，可以特異性調(diào)節(jié)MAPK/ERK信號(hào)傳導(dǎo)通路，同時(shí)作為PLA2的抑制劑等參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞凋亡、鈣離子通道的形成等眾多生理過(guò) 程，在腫瘤的形成及發(fā)展中起重要作用。結(jié)合Shingo Hatakeyama等的研究，我們發(fā)展了以IF7為基礎(chǔ)，以Anxal為靶點(diǎn)，熒光為標(biāo)記的腫瘤靶向示蹤劑，檢測(cè)其進(jìn)入不同腫瘤細(xì)胞的能力，這對(duì)研究抗腫瘤藥物和光學(xué)成像等生物應(yīng)用領(lǐng)域具有重要的作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種熒光標(biāo)記的腫瘤靶向示蹤劑及制備方法和應(yīng)用。用熒光基團(tuán)標(biāo)記IF7制備腫瘤靶向示蹤劑，并且檢測(cè)其進(jìn)入腫瘤細(xì)胞的能力，在抗腫瘤藥物研制和光學(xué)成像等生物應(yīng)用領(lǐng)域具有重要的作用。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案:一種熒光標(biāo)記的腫瘤靶向示蹤劑，該示蹤劑由異硫氰酸熒光素FITC與7肽IF7構(gòu)成，記為FITC-1F7 ；7肽IF7為異亮氨酸一苯丙氨酸一亮氨酸一亮氨酸一色氨酸一谷氨酰胺一精氨酸。
[0006]FITC -1F7的結(jié)構(gòu)式為
【權(quán)利要求】
1.一種熒光標(biāo)記的腫瘤靶向示蹤劑，其特征在于該示蹤劑由異硫氰酸熒光素FITC與7肽IF7構(gòu)成，記為FITC-1F7 ；7肽IF7為異亮氨酸一苯丙氨酸一亮氨酸一亮氨酸一色氨酸一谷氨酰胺一精氨酸。
2.權(quán)利要求1所述熒光標(biāo)記的腫瘤靶向示蹤劑的制備方法，其特征在于:(1)IF7、FITC分別用DMSO溶解配制成10mg/mL溶液，再用0.5mol/L的碳酸氫鈉緩沖溶液稀釋成lmg/mL溶液；(2)取lmg/mL的FITC溶液10μ L緩慢加入于lmg/mL的IF7 100 μ L溶液中，邊加邊輕輕晃動(dòng)使其混合均勻，暗處4V反應(yīng)24 h ；(3)加入5mol/L的NH4C1至終濃度50mmol/L，4°C終止反應(yīng)2h。
3.權(quán)利要求1所述的腫瘤靶向示蹤劑的分離純化方法，其特征在于:(1)制備型高效液相HPLC純化FITC標(biāo)記的IF7用制備型高效液相HPLC純化，Waters XBridge, C-18色譜柱150 mmX 19mm, 5 μ m,流動(dòng)相A為含0.1%TFA的純水，B為含0.1%TFA的乙腈，流速20mL/min,進(jìn)樣體積為1 mL,檢測(cè)波長(zhǎng)218nm ；(2)梯度洗脫，0-1.2min:95%A 和 5% B ；1.2-21 min:95%A 和 5% B_35%A 和 65% B ；21-24 min:35%A 和 65% B ;24-27 min:35%A 和 65% B_5%A 和 95% B ；27-30min:5%A 和 95%B-95%A和5% B ;收集16.51min的流出液。
4.權(quán)利要求1所述的腫瘤靶向示蹤劑的應(yīng)用，其特征在于應(yīng)用于腫瘤細(xì)胞的示蹤，用熒光顯微鏡和/或流式細(xì)胞儀 技術(shù)觀察示蹤劑對(duì)腫瘤細(xì)胞的親和力。
【文檔編號(hào)】A61K47/42GK103623418SQ201310254778
【公開日】2014年3月12日 申請(qǐng)日期:2013年6月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月25日
【發(fā)明者】蔣孟軍, 吳鵬西, 殷瑩, 李小雯, 謝平 申請(qǐng)人:蔣孟軍, 吳鵬西, 殷瑩, 李小雯, 謝平