苦玄參苷元Ⅰ在制備腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑中的用途
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及苦玄參苷元Ⅰ在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，尤其是苦玄參苷元Ⅰ在制備抗腫瘤藥物耐藥逆轉(zhuǎn)劑中的應(yīng)用?？嘈④赵袷翘烊划a(chǎn)物，具有逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞多藥耐藥的作用，可以作為腫瘤多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)劑；苦玄參苷元Ⅰ還具有增加腫瘤多藥耐藥細胞對抗腫瘤藥物敏感性的作用，可以作為化療增敏劑使用。本發(fā)明還提供了抗腫瘤藥物和苦玄參苷元Ⅰ聯(lián)合使用的藥物組合物抑制腫瘤多藥耐藥細胞增殖的用藥方法?？嘈④赵褡鳛樾碌目鼓[瘤藥物或者其輔助成分進行開發(fā)，抑瘤效果明顯，將為治療和治愈腫瘤提供了一種新的途徑和手段。
【專利說明】苦玄參音元I在制備腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑中的用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域，涉及逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥和增敏抗腫瘤藥物的，具體涉及 苦玄參巧元I的新用途，即苦玄參巧元I在制備腫瘤多藥逆轉(zhuǎn)劑和抗腫瘤藥物增敏劑中的 應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 惡性腫瘤嚴重危害人類的生命健康，已成為當今疾病致死亡的主要原因之一。目 前惡性腫瘤的主要治療手段有手術(shù)治療、放療和化療等。對于被診斷為晚期腫瘤的患者和 已經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者來說，化療是一個較好的選擇。臨床醫(yī)生通過調(diào)節(jié)用藥劑量可W優(yōu)化 得到最大的療效和最小的毒性，幫助患者延長生存時間和提高預(yù)后生活質(zhì)量。然而，腫瘤細 胞的耐藥性的產(chǎn)生導(dǎo)致腫瘤細胞對化療藥物的敏感性下降，大大限制了化療的治療的效果 [Dean, M.， T. Fojo, and S. Bates, Tumour stem cells and drug resistance. 始y Cancer, 2005. 5(4): p. 275-84.]。腫瘤細胞對某種藥物產(chǎn)生耐藥性么后，會對從未接觸 過的、結(jié)構(gòu)不同、作用機制各異的多種化療藥物產(chǎn)生交叉耐藥，這種現(xiàn)象稱為腫瘤的多藥耐 藥性（Multiple Drug Resistance, MDR)。多藥耐藥的產(chǎn)生是當前腫瘤治療的所面臨的重大 難題么一 [H, L.，An overview of cancer multidrug resistance : a still unsolved 仍(9/?7€掛.Cell. Mol. Life Sci.，2008. 65: p. 3145 - 3167. Mellor,比 R. and R. Callaghan， Resistance to chemotherapy in cancer: a complex and integrated 。€分。7赴' 打96/7(9打6*€. Pharmacology, 2008. 81(4): p. 275-300. Mimeault, M.，R. Hauke, and S. Batra, Recent Advances on the Molecular Mechanisms Involved in the Drug Resistance of Cancer Cells and Novel Targeting Therapies. Clin Pharmacol Ther.，2008. 83: p. 673 - 691.]。MDR -旦產(chǎn)生，通過加大藥物劑量是無效的，會產(chǎn)生 更強的毒性和進一步誘導(dǎo)耐藥的產(chǎn)生[Akan，I.，et al.，€/?如打。€6* multidrug resistance-associated protein I mediated doxorubici打 resistance. Eur J Clin Invest, 2004. 34(10): p. 683-9. Akan, I., et al. , Multidrug resista打ce-associated protein I (MRPl) mediated vincristine resista打ce: effects of N-acetylcysteine and Buthionine sulfoximine. Cancer Cell Int, 2005. 5(1): p. 22. Choi, C?比，ABC transporters as multidrug resistance mechanisms and the development of chemosensitizers for their reversal. Cancer Cell Int, 2005. 5: p. 30. Liscovitch, M. and Y. Lavie, Cancer multidrug resistance: a review of recent drug discovery research. !Drugs, 2002. 5(4) : p. 349-55.]。多數(shù)與MDR有關(guān)的藥物都是疏水性或者兩親性的天然產(chǎn)物，如紫杉燒類、蔥環(huán)類 抗生素、長春花生物堿類等[Qioi，C.比，^鳳^ 36* 必'解別測?C6 mechanisms and the development of chemosensitizers for their reversal. Cancer Cell Int, 2005. 5: p. 30.，Ambudkar, S. V.，et al.，Biochemical， cellular， and pharmacological aspects of the multidrug transporter, Annu Rev Pharmacol Toxicol, 1999. 39: p. 361-98. Krishna,民.and L. D. Mayer, Multi drug resistance (MDR) in cancer. Mechanisms, reversal using modulators of MDR and the role of MDR modulators in influencing the pharmacokinetics of anticancer drugs. Eur J Pharm Sci，2000. 11(4): p. 265-83. ]。MDR的產(chǎn)生具有多種機制，包括細胞對 一些水溶性藥物攝取的減少，細胞周期的改變，DNA修復(fù)功能的增強，抑制細胞的調(diào)亡， 藥物在細胞內(nèi)的代謝過程的改變，對疏水性藥物和易于進入細胞的一些藥物外排的增加 等[Stavrovskaya, A. A. , Cellular mechanisms of multidrug resistance of tumor Biochemistry (Mosc), 2000. 65(1): p. 95-106.]。腫瘤MDR的形成過程復(fù)雜，該 些耐藥機制常同時存在，但W-種機制為主，不同機制之間互相影響，可能單獨或聯(lián)合起作 用[Szakacs, G. , et al. , Target!打g multidrug resista打ce i打 cancer. Nat Rev Drug Discov, 2006. 5(3): p. 219-34]。
[0003] 為了克服腫瘤細胞對化療藥物的MDR特性，研究者們一直在尋找有效的ABC轉(zhuǎn)運 蛋白的抑制劑，該些化合物又被稱為MDR的抑制劑、調(diào)節(jié)劑、逆轉(zhuǎn)劑或者化療增敏劑，它們 通常能夠調(diào)節(jié)多個48〔轉(zhuǎn)運蛋白的功能[010；[,。比，心於皆<3/7巧76的6?/：5<35曲化把'血媒' resistance mecha打isms and the development of chemose打sitizers for their reversal. Cancer Cell Int, 2005. 5: p. 30. Liscovitch, M. and Y. Lavie, Cancer multidrug resistance: a revie評 of recent drug discovery research. !Drugs, 2002. 5(4) : p. 349-55. ]。1981年，Tsuruo首次報道了巧通道阻滯劑異搏定（Verapamil)和巧 調(diào)蛋白抑制劑H氣拉嗦（TFP)在體外和體內(nèi)實驗中均能增強耐藥小鼠白血病P388/VCR細 胞對長春新堿（vincristine, VCR)的敏感性[Ozben, T., ifecAanisffis ant/ Stra的知e占 to overcome multiple drug resistance i打 cancer. FEBS Lett, 2006. 580(12): p. 2903-9.]。在隨后30年的研究中，新的MDR逆轉(zhuǎn)劑的不斷被發(fā)現(xiàn)和研究，但較高的細胞毒 性一直是困擾MDR抑制劑研究開發(fā)的一大問題。因此，開發(fā)毒性較小、逆轉(zhuǎn)作用更強的MDR 抑制劑或逆轉(zhuǎn)劑仍然是腫瘤藥物研究的熱點之一。
[0004] 在新一代MDR抑制劑的研究過程中，從天然產(chǎn)物中篩選高效低毒的MDR逆轉(zhuǎn)劑日 益被醫(yī)學(xué)界所重視并逐漸成為研究的熱點。多種天然產(chǎn)物被發(fā)現(xiàn)具有逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞MDR的 作用。
[0005] 苦玄參，通常是指玄參科（Scro地ulariaece)植物苦玄參（Picriafe；L-terrae) 的干燥全草，又名苦草、熊膽草、四環(huán)素草，為多年生草本植物。全草均可用藥，民間用 于治療肺炎、感冒、咽喉炎、跌打損傷、淋己結(jié)炎等炎癥（廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳，1992， 廣西中藥材標準[S].南寧，廣西科學(xué)技術(shù)出版社，225)。
[0006] 已有較多的學(xué)者對苦玄參的化合物成分進行了較為系統(tǒng)的研究，從中分離到了 H聰類、黃麗類及苯己醇巧類等不同類型的化合物；黃燕等對苦玄參的抗菌消炎活性進 行了研究（黃燕，肖艷芬，甄漢深，等.2008.苦玄參體外抗菌作用的實驗研究[J] .廣西中醫(yī)藥，31 ( 1) : 46- 47);同時，方宏等對苦玄參巧IA和IB的含量進行了 分析；梁小燕等（ 2007)對苦玄參的指紋圖譜進行了研究（方宏，梁小燕，寧德生， et al. 2008.苦玄參藥材中苦玄參巧IA和IB的含量分析.廣西植物，28 ( 5) : 708-710)?？嘈⑻崛∥锓謱瘘S色葡萄球菌、綠賊桿菌等多種細菌都有一定的抑菌作用。
[0007] 苦玄參巧元1是苦玄參普元的主要成分，含量約為全草的25%，多對四硝基甲焼 顯淡黃色，示有孤立雙鍵，對H苯基四氮哇、H氯化鐵和過楓酸軸皆呈負反應(yīng)，似無鄰輕 麗、鄰帰醇麗和鄰二醇的結(jié)構(gòu)單元。成桂仁等將苦玄參經(jīng)酸水解后得一系列苦玄參昔元， 再通過娃膠柱層析分離得一系列昔元，其中之一便是苦玄參巧元1(成桂仁，金靜蘭，文 永新，陳銃群，甘立憲，周維善.苦玄參化學(xué)成分的研究一I.苦玄參巧元I的結(jié)構(gòu) [J].化學(xué)學(xué)報，1982，（08))。周維善等則通過譜學(xué)數(shù)據(jù)（紫外光譜、紅外光譜、核磁共振 譜和質(zhì)譜、X-射線衍射對苦玄參巧元1作了進一步的分析(周維善，甘立憲.苦玄參式元 I 一VI (1-6)和苦玄參麗（7)的結(jié)構(gòu)[J].有機化學(xué)，1982，（0扣）。
[0008] 目前關(guān)于苦玄參巧元I對腫瘤細胞耐藥性的調(diào)節(jié)尚未見報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的是提供一種小分子化合物苦玄參巧元I在制備腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn) 劑中的新用途。
[0010] 本發(fā)明的另一目的在于提供包含苦玄參巧元I和VCR及ADR等抗腫瘤藥物的抗腫 瘤藥物組合物在制備治療多藥耐藥腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明提供了苦玄參巧元I在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述的應(yīng)用是苦玄參巧元I 在制備抗腫瘤藥物的耐藥逆轉(zhuǎn)劑中的應(yīng)用。
[0012] 其中，苦玄參巧元I可W是腫瘤多藥耐藥逆轉(zhuǎn)劑。
[0013] 所述的腫瘤包括口腔癌、乳腺癌、肝癌、肺癌、宮頸癌、肺腺癌、結(jié)腸癌或膜腺癌。
[0014] 所述的抗腫瘤藥物是長春新堿、柔紅霉素、紫杉醇或者5-氣尿嚼巧。
[0015] 苦玄參巧元I也可W是抗腫瘤藥物的增敏劑。
[0016] 本發(fā)明還提供了一種抗腫瘤藥物組合物，所述的抗腫瘤藥物組合物的有效成分是 抗腫瘤藥物和苦玄參巧元I。
[0017] 所述的抗腫瘤藥物是細胞周期特異性藥物或者細胞周期非特異性藥物。
[0018] 所述的抗腫瘤藥物是長春新堿、柔紅霉素、紫杉醇或者5-氣尿嚼巧。
[0019] 本發(fā)明還提供了一種促使體外耐藥腫瘤細胞增敏的方法，即在耐藥腫瘤細胞的培 養(yǎng)基中加入苦玄參巧兀I。
[0020] 所述的腫瘤包括口腔癌、乳腺癌、肝癌、肺癌、宮頸癌、肺腺癌或者膜腺癌。
[0021] 本發(fā)明提供了苦玄參巧元I在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用?？嘈⑶稍狪是天然產(chǎn)物， 在高劑量時能夠明顯抑制腫瘤細胞的增殖。實驗表明，苦玄參巧元I能夠明顯克服多藥耐 藥細胞KB/VCR和MCF-7/ADR的耐藥性，逆轉(zhuǎn)腫瘤多藥耐藥細胞的耐藥特性，增強化療藥物 對耐藥腫瘤細胞的治療效果。本發(fā)明的小分子化合物作為新的抗腫瘤藥物或者其輔助成分 進行開發(fā)，抑瘤效果明顯，將為治療和治愈腫瘤提供了一種新的途徑和手段。

【具體實施方式】
[0022] 苦玄參巧元I的細胞毒作用較小，對多種腫瘤細胞的ICw大都大于40 U M，具有 良好的安全性。本發(fā)明通過隨機篩選，發(fā)現(xiàn)該天然產(chǎn)物具有逆轉(zhuǎn)MDR的作用。鑒于其低毒 高效的特點，具有良好的應(yīng)用前景。實驗表明，苦玄參巧元I能夠增強化療藥物對腫瘤多 藥耐藥細胞株增殖的抑制效果，逆轉(zhuǎn)多藥耐藥的作用。例如實施例中顯示的，苦玄參巧元I 能夠逆轉(zhuǎn)KB/VCR細胞對VCR的耐藥作用，增強KB/VCR細胞對化療藥物VCR的敏感性，促進 VCR對邸/VCR細胞的調(diào)亡的誘導(dǎo)作用?？嘈⑶稍狪能夠顯著克服多藥耐藥細胞邸/VCR 和MCF-7/ADR的耐藥性，逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞的多藥耐藥特性，增強化療藥物對腫瘤多藥耐藥腫 瘤細胞的治療效果。
[0023] 本發(fā)明的苦玄參巧元I部分購自中國科學(xué)院藥物研究所，高效液相色譜法測純 度，HPLC > 98%。其結(jié)構(gòu)如下所示：

【權(quán)利要求】
1. 苦玄參苷元I在制備抗腫瘤藥物耐藥逆轉(zhuǎn)劑中的應(yīng)用。
2. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的腫瘤包括口腔癌、乳腺癌、肝癌、肺 癌、肺腺癌、結(jié)腸癌或胰腺癌。
3. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗腫瘤藥物是長春新堿、柔紅霉素、 紫杉醇或者5-氟尿嘧啶。
4. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，苦玄參苷元I是抗腫瘤藥物的增敏劑。
5. -種抗腫瘤藥物組合物，其特征在于，所述的抗腫瘤藥物組合物的有效成分是抗腫 瘤藥物和苦玄參苷元I。
6. 如權(quán)利要求5所述的抗腫瘤藥物組合物，其特征在于，所述的抗腫瘤藥物是細胞周 期特異性藥物或者細胞周期非特異性藥物。
7. 如權(quán)利要求5所述的抗腫瘤藥物組合物，其特征在于，所述的抗腫瘤藥物是長春新 堿、柔紅霉素、紫杉醇或者5-氟尿嘧啶。
8. -種促使體外耐藥腫瘤細胞增敏的方法，其特征在于，在耐藥腫瘤細胞的培養(yǎng)基中 加入苦玄參苷元I。
9. 如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述的腫瘤是口腔癌、乳腺癌、肝癌、肺癌、 宮頸癌、肺腺癌或者胰腺癌。
【文檔編號】A61P35/00GK104224801SQ201310240994
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2013年6月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年6月18日
【發(fā)明者】余龍, 朱恒銳 申請人:復(fù)旦大學(xué)