用n-乙酰半胱氨酸(nac)抗卵巢衰老的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明是一種抗卵巢衰老的方法。該方法是將N-乙酰半胱氨酸(NAC)以1mM和0.1mM的濃度加入到小鼠的日常飲用水當(dāng)中，并使小鼠自由進(jìn)水進(jìn)食。本發(fā)明的方法能使小鼠的卵巢衰老發(fā)生時間延緩，維持卵子數(shù)量和質(zhì)量，因此對抵抗雌鼠的卵巢衰老具有重要意義。并且，人類的雌性生殖衰老與小鼠相似，該發(fā)明的實驗結(jié)果也可用于人類的抗卵巢衰老、延長女性生殖年齡中，對于制藥提供直接證據(jù)。此外，除直接用藥外，在保健品中加入N-乙酰半胱氨酸，也可以對抵抗卵巢衰老、延長生殖年齡具有重要幫助。
【專利說明】用N-乙酰半胱氨酸（NAC)抗卵巢衰老

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及用N-乙酰半胱氨酸（NAC)抗卵巢衰老的方法，屬于生物與新醫(yī)藥領(lǐng) 域。

【背景技術(shù)】
[0002] N-乙酰半胱氨酸（N-Acetylcysteine，簡稱NAC)，是谷胱甘肽的前體，分子中含有 活性巰基（-SH)，可對抗不同原因所致的組織氧化損傷。NAC是一種具有研究價值的用途廣 泛的藥物，在呼吸、心血管、神經(jīng)系統(tǒng)和AIDS的治療等方面均能發(fā)揮一定的作用。NAC作為 一種巰基供給體，除具有上述作用外，主要還是一種抗氧化劑，對體內(nèi)氧自由基（超氧陰離 子、過氧化氫、羥自由基等）具有明顯的拮抗作用，可清除已生成的自由基，調(diào)節(jié)細(xì)胞的代 謝活性，預(yù)防DNA的損傷，調(diào)整基因的表達(dá)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)，抗細(xì)胞凋亡，抗血管生成，抑制 惡性腫瘤發(fā)展，抑制新生物的生成和轉(zhuǎn)移等作用，而且在臨床和實驗中都得到了廣泛的應(yīng) 用。
[0003] 在將NAC作為抗氧化劑進(jìn)行研究的例子中，有幾個效果比較明顯的實驗。2003年， Lin Liu和Keef等人便發(fā)現(xiàn)NAC可以通過降低胚胎內(nèi)氧化應(yīng)激水平來防止由環(huán)境污染物砷 引起的端粒損耗、染色體末端融合以及細(xì)胞壞死的發(fā)生。2005年，Sablina AA利用NAC成 功延緩了抑癌基因 P53敲除掉的老鼠模型中的腫瘤發(fā)生。2007年，Tothova Z等人在對重 要轉(zhuǎn)錄因子F0X0的研究中，發(fā)現(xiàn)NAC可以減緩由于F0X0表達(dá)降低造成的病理性變化。2009 年，Roman V.等人也發(fā)現(xiàn)了 NAC可以緩解由BMAL1表達(dá)降低誘發(fā)的卵巢早衰的相關(guān)癥狀。
[0004] 本研究發(fā)現(xiàn)，通過口服NAC的方法可以抵抗雌鼠增齡過程中發(fā)生的卵巢衰老，利 用NAC可以有效清除機(jī)體內(nèi)氧化物這一功能，減少體內(nèi)的R0S，可以減輕卵巢中DNA受損程 度，提高卵子的質(zhì)量，從而使受孕成功率大大增加，由此延長雌性小鼠的生殖年齡，由于人 類和小鼠的雌性生殖衰老過程相似，該發(fā)明的結(jié)果也適用于延緩人類女性的卵巢衰老，只 是在NAC用量上會有所不同。除直接用藥外，在保健品中加入一定量的NAC，也可以對延緩 女性衰老、延長生殖年齡具有重要作用。因此，本發(fā)明為延緩雌性生殖衰老的制藥提供直接 的根據(jù)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明是一種通過口服NAC抗卵巢衰老的方法。實驗中采用昆明雌鼠，對實驗組 采取口服lmM、〇. ImM高低兩種濃度NAC的方法，來檢測NAC在延緩昆明雌鼠卵巢衰老方面 的作用。研究結(jié)果表明，在持續(xù)喂藥7至12個月后，0. ImM NAC喂藥組雌鼠所產(chǎn)后代總數(shù)高 于同齡對照組雌鼠。對于各組雌鼠進(jìn)行超排并進(jìn)行紡錘體免疫熒光染色的結(jié)果表明NAC可 以在一定程度上維持卵子的數(shù)量和質(zhì)量。同時，喂藥12個月的雌鼠卵巢中的衰老相關(guān)基 因 Sirtl、Sirt2、細(xì)胞增殖相關(guān)基因 C-myc表達(dá)量及端粒酶活性、端粒長度均高于同齡對照 組雌鼠，更接近于年輕對照組。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0006] 圖1為用NAC喂藥不同時間后KM雌鼠的生仔數(shù)目。A :用ImM和0. ImM NAC喂藥 32-57周后每只小鼠見栓后生仔數(shù)目分布趨勢圖，與沒有喂藥（OmM NAC)的同齡小鼠進(jìn)行 比較；B:7-8月齡、9-10月齡、11-12月齡喂藥小鼠的平均生仔數(shù)量，與沒有喂藥同齡小鼠進(jìn) 行比較，以6-8周齡年前KM雌鼠作為對照。從圖中可以看到，在7-8月齡時0. ImM NAC喂 藥小鼠生仔數(shù)量顯著多于同齡未喂藥組小鼠。在9-10月齡和11-12月齡時NAC喂藥組平 均生仔數(shù)較未喂藥組有少量增加，但無顯著性差異。
[0007] 圖2為用NAC喂藥6個月和12個月后各組KM雌鼠超排得到卵子的數(shù)量。對兩個 年齡段的各組小鼠施以一定量的激素使其超數(shù)排卵，將輸卵管劃破后釋放出卵泡，此時記 錄每只雌鼠取到的卵子數(shù)量及碎裂卵子數(shù)量。統(tǒng)計結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與6-8周齡未喂藥年輕KM雌 鼠相比隨著小鼠年齡的增加小鼠的排卵數(shù)量明顯減少，而且NAC喂藥6個月并沒有明顯減 少老年小鼠產(chǎn)生的碎裂卵子比率，但是與同齡未喂藥小鼠相比NAC喂藥12個月則顯著地降 低了碎裂卵子的比率。
[0008] 圖3為喂藥6個月和12個月時各組小鼠超排后取得的卵子的質(zhì)量。（紡錘體形態(tài) 比較A、異常率比較B)。A圖中顯示的是NAC喂藥12個月后小鼠 MII期的卵子經(jīng)過微管染 色（綠色）和核酸（藍(lán)色）染色后，用熒光顯微鏡照相后的形態(tài)。紡錘體的正常形態(tài)和染 色體的正常排列是卵子進(jìn)行下一步分裂至關(guān)重要的條件。在未喂藥年老對照組中，染色體 排列異常的情況增多（如圖A白色箭頭所示），標(biāo)志著卵子質(zhì)量的下降。進(jìn)一步的統(tǒng)計結(jié)果 顯示，喂藥（ImM和0. ImM NAC)6個月并未降低紡錘體與染色體排列異常的卵子比例，而在 喂藥12個月時，NAC喂藥組小鼠紡錘體和染色體排列異常的卵子比例較同齡未喂藥老年小 鼠卻有所降低，說明NAC的攝入可以緩解卵巢衰老過程中發(fā)生的卵子質(zhì)量的下降。
[0009] 圖4為用NAC喂藥12個月后各組小鼠卵巢中的衰老相關(guān)基因 Sirtl、Sirt2,凋 亡相關(guān)基因 Bcl-2、Bax，增殖相關(guān)基因 c-Myc和DNA損傷修復(fù)相關(guān)基因 Mlhl的表達(dá)情況。 Sirtl、Sirt2的表達(dá)在6-8周年輕小鼠和12個月年老小鼠中無明顯差異，然而在NAC喂藥 12個月的小鼠中卻比同齡對照小鼠顯著升高。Bcl-2、Bax、MLHl的表達(dá)量在各組之間無明 顯差異。但喂藥組c-Myc的表達(dá)量卻顯著高于同齡未喂藥組，更接近于年輕對照組。這說 明NAC的攝入提高了小鼠卵巢中抗衰老基因及增殖基因的表達(dá)，從而對延緩卵巢衰老起到 一定的作用。
[0010] 圖5為用NAC喂藥12個月后各組小鼠卵巢中的端粒酶活性⑶和端粒長度（C)。 端粒酶活性和端粒長度對于維持生物體的壽命有重要作用，端粒酶活性會隨年齡增加而降 低，而端粒長度也會因機(jī)體內(nèi)積累下來活性氧化物對端粒DNA造成的損傷而變短。從圖中 我們可以看到，端粒酶活性在喂藥組中相對于未喂藥年老對照組有顯著的提升，更接近于 年輕對照組。喂藥組端粒長度較未喂藥年老對照組也更長，尤其是0. ImM NAC喂藥組端粒 長度顯著長于年老對照組。
[0012] 星號表示兩組之間存在顯著性差異，代表p < 0. 05，"**"代表p < 0. 01，"***" 代表P < 0. 001。"Young"代表6-8周齡的年輕對照組，"0"代表與喂藥組同齡的喂正常飲 用水的年老對照組，"0. ImM"代表飲用水中添加了 0. ImM的NAC的喂藥組，"ImM"代表飲用 水中添加了 ImM的NAC的喂藥組。

【具體實施方式】
[0013] 將NAC以0. ImM和ImM的濃度加入到小鼠的日常飲用水中，讓其自由進(jìn)水進(jìn)食。
【權(quán)利要求】
1. 一種延緩雌鼠卵巢衰老的方法，即將N-乙酰半胱氨酸（NAC)加入到雌鼠的飲用水 中，使其長期并自由地飲用這樣的水。
2. 因為人的生殖衰老與小鼠相似，該發(fā)明也適用于抗人的卵巢衰老，只是在用量上不 同。
3. 該發(fā)明除應(yīng)用于直接用藥外，在保健藥品中加入N-乙酰半胱氨酸（NAC)以期獲得抗 小鼠及人類的卵巢生殖衰老的作用。
【文檔編號】A61P15/00GK104116726SQ201310140642
【公開日】2014年10月29日 申請日期:2013年4月23日 優(yōu)先權(quán)日:2013年4月23日
【發(fā)明者】葉孝穎, 劉金苗, 劉林 申請人:南開大學(xué)