專利名稱：一種豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物制品的制備方法，特別是涉及一種豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法。
背景技術(shù)：
現(xiàn)代集約化養(yǎng)殖業(yè)，常發(fā)性、多發(fā)性傳染病種類繁多，應(yīng)用疫苗接種免疫預(yù)防各種傳染病成為養(yǎng)殖業(yè)成敗的關(guān)鍵。疫苗免疫效果受外因和內(nèi)因多種因素的影響，外因有疫苗質(zhì)量、保管和使用方法等，關(guān)鍵是內(nèi)因，主要是機(jī)體抗病力和對(duì)疫苗的反應(yīng)，尤其是機(jī)體的免疫系統(tǒng)功能狀態(tài)。影響機(jī)體免疫系統(tǒng)功能狀態(tài)的因素很多，如某些疾病、應(yīng)激、抗生素的應(yīng)用、營養(yǎng)不良等都能使機(jī)體的免疫系統(tǒng)功能下降或抑制而影響免疫效果。開發(fā)應(yīng)用動(dòng)物免疫增強(qiáng)劑改善機(jī)體特異性、非特異性免疫系統(tǒng)功能，提高疫苗免疫效果，增強(qiáng)機(jī)體抗感染能力已日益引起人們的重視。轉(zhuǎn)移因子(Transfer factor)是動(dòng)物體內(nèi)有免疫活性的T淋巴細(xì)胞所釋放的多種因子中一種能夠轉(zhuǎn)移免疫致敏信息的因子，它能夠特異性地將供體某一細(xì)胞免疫功能轉(zhuǎn)移給受體動(dòng)物，非特異性地增強(qiáng)受體動(dòng)物免疫功能，是一種新型的免疫激發(fā)劑。傳統(tǒng)生產(chǎn)方法生產(chǎn)豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液，原料經(jīng)預(yù)處理、絞碎、勻漿、反復(fù)凍融、離心、透析、離心、過濾等工藝制成，經(jīng)傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝加工會(huì)破壞原材料的生物活性成分，有效成分利用率低，且生產(chǎn)周期長，至少需要7天。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法，以解決上述工藝生物活性成分被破壞，有效成分利用率低和生產(chǎn)周期長的問題。

技術(shù)方案如下:—種豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法，包括:將檢驗(yàn)合格的豬脾臟預(yù)處理后，初絞I 3遍；將初絞的豬脾臟精絞研磨1.5 8分鐘，制成勻漿；在所述勻漿中加入甲醛溶液滅活；將滅活的勻漿反復(fù)凍融6 10次；將反復(fù)凍融的勻漿經(jīng)離心分離、過濾與超濾，得到半成品；向檢驗(yàn)合格的半成品中加入注射用水，得到成品。進(jìn)一步，所述預(yù)處理過程中，將豬脾臟解凍融化后，用剪刀剪去脂肪，再用濃度為
0.5 1.5%氯化鈉溶液清洗2 3次。進(jìn)一步，所述精絞過程中，將初絞的豬脾與純化水按1:1 3的比例混合，置于膠體磨中研磨。進(jìn)一步，所述滅活過程中，甲醛溶液的加入量占勻漿總量的0.1 0.2%。進(jìn)一步，所述滅活條件為，37 42°C下滅活18 24小時(shí)，中間間隔4 6小時(shí)震搖I次。進(jìn)一步，所述離心分離過程中，將反復(fù)凍融的勻漿置管式分離機(jī)中，將凍融的勻漿，室溫下以16000 20000r/min的轉(zhuǎn)速連續(xù)離心，去沉淀，取上清液備用。進(jìn)一步，所述過濾過程中，將離心分離得到的上清液先經(jīng)0.43 0.46 μ m的微孔濾膜第一次過濾，再用0.20 0.26 μ m的微孔濾膜第二次過濾。進(jìn)一步，所述超濾使用截留分子量為5000 6000道爾頓超濾膜。 進(jìn)一步，將檢驗(yàn)合格的豬脾臟去除脂肪，用濃度為0.9%氯化鈉溶液清洗3次，于絞肉機(jī)中初絞I遍；將初絞的豬脾臟與純化水按1: 1.5的比例混合，于膠體磨中研磨5分鐘，制成勻漿；向勻漿中加入勻漿總量0.1%的甲醛溶液，37°C滅活24小時(shí)，間隔5小時(shí)震搖I次；將滅活的勻漿置于-20°C冷庫反復(fù)凍融8次，融化溫度不得超過37°C ;將離心分離得到的上清液先用0.45 μ m的微孔濾膜進(jìn)行過濾，再用0.22 μ m的微孔濾膜進(jìn)行過濾，最后用截留分子量為5000道爾頓超濾膜進(jìn)行超濾。進(jìn)一步， 半成品中加入注射用水后，加入鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)pH至6.3 7.5之間。本發(fā)明的有益效果:(I)本發(fā)明生產(chǎn)的豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液主要成分為低分子活性多肽和核糖，是一種低分子肽一核苷酸復(fù)合物，而不是蛋白質(zhì)。(2)本發(fā)明所用原料、儀器取材容易，工藝簡單，成本低，可大大縮短生產(chǎn)周期，周期為4天，節(jié)省了大量的人力物力，提高了轉(zhuǎn)移因子的生產(chǎn)效率，為滿足工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)提供了可行途徑。(3)本發(fā)明生產(chǎn)的豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液應(yīng)用安全，過量使用也無毒副作用，無藥物殘留；活性高，臨床用量小，見效快，使用后24 36小時(shí)就可發(fā)揮作用，效果可持續(xù)7天以上。(4)本發(fā)明生產(chǎn)的豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液能增強(qiáng)動(dòng)物免疫功能，提高機(jī)體抗感染能力；不僅可用于預(yù)防，也可用于病毒感染引起的疾病的緊急輔助治療；配合疫苗同時(shí)使用，增強(qiáng)疫苗免疫效果，并且可以彌補(bǔ)疫苗接種后，抗體產(chǎn)生的時(shí)間空缺。(5)傳統(tǒng)工藝中離心分離多采用4°C，6000r/min離心15min，收集上清液。本發(fā)明的改進(jìn)工藝中應(yīng)用管式分離機(jī)，克服了制備過程中原料粘度大，顆粒小，比重差小，絮狀物多等問題；且加工材料原有生物活性成分主要為多肽、氨基酸，本發(fā)明工藝有效的保護(hù)了加工材料原有生物活性成分不被破壞；同時(shí)采用室溫下16000 20000r/min高速連續(xù)離心的方法，極大的節(jié)省了人力物力，增加了產(chǎn)量，每天產(chǎn)量可達(dá)2噸，約2000L，提高了收益率，Ikg脾臟大約出1.8L半成品，適用于工業(yè)化大規(guī)模推廣應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式本實(shí)施例中以豬脾臟為原料，經(jīng)剪摘、稱量清洗、初絞、精絞、滅活、凍融、離心分離、澄清過濾與超濾等過程制成轉(zhuǎn)移因子注射液半成品，傳統(tǒng)生產(chǎn)方法將原料經(jīng)預(yù)處理、絞碎、勻漿、反復(fù)凍融、離心、透析、離心、過濾過程制成，本發(fā)明更注重了對(duì)離心分離過程、初絞次數(shù)、精絞時(shí)間、甲醛滅活終濃度、凍融次數(shù)的控制。半成品經(jīng)檢驗(yàn)合格后，調(diào)整含量、PH值進(jìn)一步制成轉(zhuǎn)移因子注射液成品。
實(shí)施例1:豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法一種豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法，具體步驟如下:S1:豬脾臟的收集與檢驗(yàn)；原料選取標(biāo)準(zhǔn)化生豬養(yǎng)殖、屠宰企業(yè)收集豬脾臟，標(biāo)準(zhǔn)化生豬養(yǎng)殖、屠宰企業(yè)，此屠宰企業(yè)應(yīng)具有《動(dòng)物防疫合格證》，屠宰場應(yīng)符合中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T17236-1998《生豬屠宰操作規(guī)范》規(guī)定，衛(wèi)生要求應(yīng)符合《肉類加工衛(wèi)生規(guī)范》GB12649的規(guī)定。本實(shí)施例所用原料——豬脾臟來自山東得利斯集團(tuán)，符合豬脾臟原料地及屠宰要求。豬脾臟經(jīng)外觀檢驗(yàn)、衛(wèi)生檢驗(yàn)、病原微生物檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格后方可用作原料。豬脾臟外觀檢驗(yàn)，健康豬脾臟應(yīng)呈扁長條形，色澤均勻一致，呈暗紅色或棕紅色，無充血、結(jié)節(jié)、出血點(diǎn)及腫脹等病灶，具有一定的彈性和硬度，被膜呈灰白色、淺褐色或微灰紅色，切面呈深紅色，實(shí)質(zhì)柔軟，較脆，無腐敗變質(zhì)等現(xiàn)象，有豬脾臟固有的氣味。衛(wèi)生檢驗(yàn)，包括細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)，大腸桿菌最可能數(shù)(Most probable number, MPN)檢驗(yàn),霉菌總數(shù)檢驗(yàn)。細(xì)菌檢驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌總數(shù)應(yīng)< 104/g為合格；大腸桿菌最可能數(shù)檢驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)大腸桿菌MPN < 150萬/g為合格；霉菌總數(shù)< 100個(gè)/克為合格。病原微生物檢驗(yàn)，包括口蹄疫病毒檢驗(yàn)，豬瘟病毒、豬細(xì)小病毒檢驗(yàn)?？谔阋卟《緳z驗(yàn)采用乳鼠檢查法；豬瘟病毒、豬細(xì)小病毒采用外源病毒檢查法。S2:剪摘:將解凍融化的豬脾臟去掉裝袋，按豬脾臟原料標(biāo)準(zhǔn)中外觀項(xiàng)要求，嚴(yán)格挑選，并用鑷子夾住脂肪，用剪刀剪去。S3:清洗:將剪摘后的原料用濃度為0.5%氯化鈉溶液清洗2次。S4:初絞:將豬脾原料 置于絞肉機(jī)裝料斗內(nèi)，按絞肉機(jī)操作規(guī)程進(jìn)行操作，初絞2遍，并用潔凈物料桶盛裝。S5:精絞:將初絞的豬脾與純化水按1:1的比例混合，置于膠體磨裝料斗中，按膠體磨操作規(guī)程將其研磨1.5分鐘，制成勻漿，并用潔凈物料桶盛接。所用純化水為原水經(jīng)蒸餾法、離子交換法、反滲透法或其適宜方法制得的供藥用的水，不含任何添加劑。S6:滅活:按勻漿總量的0.2%加甲醛溶液，42°C滅活18小時(shí)，間隔4小時(shí)震搖I次。S7:凍融:將滅活的勻漿，置_18°C冷庫反復(fù)凍融6次，融化溫度不得超過37°C。S8:離心分離:將凍融的勻漿置管式分離機(jī)中，室溫以18000r/min連續(xù)離心，去沉淀，取上清液備用。S9:澄清過濾與超濾:上清液用0.43 μ m的微孔濾膜進(jìn)行過濾，再用0.20 μ m的微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，然后用截留分子量為6000道爾頓超濾膜進(jìn)行超濾，即得轉(zhuǎn)移因子注射液半成品。超濾液在_20°C以下，保存期為12個(gè)月。SlO:半成品檢驗(yàn):半成品經(jīng)pH值、無菌檢驗(yàn)、含量測定、鑒別檢驗(yàn)、高分子量物質(zhì)檢驗(yàn)等檢驗(yàn)項(xiàng)目合格后，_20°C保存?zhèn)溆?。Sll:成品制備:將半成品溶液移入配液罐中，根據(jù)半成品含量測定結(jié)果，加入注射用水，使多肽含量不少于1.5mg/ml,核糖含量不少于50 μ g/ml,攪拌30分鐘后,用鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)pH至6.3 7.5之間，混勻，即得成品。所用注射用水是普通注射用水，由純化水經(jīng)蒸餾所得。實(shí)施例2:豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法
—種豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法，具體步驟如下:S1:豬脾臟的收集與檢驗(yàn)；原料選取標(biāo)準(zhǔn)化生豬養(yǎng)殖、屠宰企業(yè)收集豬脾臟，標(biāo)準(zhǔn)化生豬養(yǎng)殖、屠宰企業(yè)，此屠宰企業(yè)應(yīng)具有《動(dòng)物防疫合格證》，屠宰場應(yīng)符合中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T17236-1998《生豬屠宰操作規(guī)范》規(guī)定，衛(wèi)生要求應(yīng)符合《肉類加工衛(wèi)生規(guī)范》GB12649的規(guī)定。本實(shí)施例所用原料——豬脾臟來自山東得利斯集團(tuán)，符合豬脾臟原料地及屠宰要求。豬脾臟經(jīng)外觀檢驗(yàn)、衛(wèi)生檢驗(yàn)、病原微生物檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格后方可用作原料。豬脾臟外觀檢驗(yàn)，健康豬脾臟應(yīng)呈扁長條形，色澤均勻一致，呈暗紅色或棕紅色，無充血、結(jié)節(jié)、出血點(diǎn)及腫脹等病灶，具有一定的彈性和硬度，被膜呈灰白色、淺褐色或微灰紅色，切面呈深紅色，實(shí)質(zhì)柔軟，較脆，無腐敗變質(zhì)等現(xiàn)象，有豬脾臟固有的氣味。衛(wèi)生檢驗(yàn)，包括細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)，大腸桿菌最可能數(shù)(Most probable number, MPN)檢驗(yàn),霉菌總數(shù)檢驗(yàn)。細(xì)菌檢驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌總數(shù)應(yīng)< 104/g為合格；大腸桿菌最可能數(shù)檢驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)大腸桿菌MPN < 150萬/g為合格；霉菌總數(shù)< 100個(gè)/克為合格。病原微生物檢驗(yàn)，包括口蹄疫病毒檢驗(yàn)，豬瘟病毒、豬細(xì)小病毒檢驗(yàn)?？谔阋卟《緳z驗(yàn)采用乳鼠檢查法；豬瘟病毒、豬細(xì)小病毒采用外源病毒檢查法。S2:剪摘:將解凍融化的豬脾臟去掉裝袋，按豬脾臟原料標(biāo)準(zhǔn)中外觀項(xiàng)要求，嚴(yán)格挑選，并用鑷子夾住脂肪，用剪刀剪去。S3:清洗:將剪摘后的原料用濃度為0.9%氯化鈉溶液清洗3次。S4:初絞:將豬脾原料置于絞肉機(jī)裝料斗內(nèi)，按絞肉機(jī)操作規(guī)程進(jìn)行操作，初絞I遍，并用潔凈物料桶盛裝。S5:精絞:將初絞的豬脾與純化水按1:1.5的比例混合，置于膠體磨裝料斗中，按膠體磨操作規(guī)程將其研磨5分鐘，制成勻漿，并用潔凈物料桶盛接。所用純化水為原水經(jīng)蒸餾法、離子交換法、反滲 透法或其適宜方法制得的供藥用的水，不含任何添加劑。S6:滅活:按勻漿總量的0.1%加甲醛溶液，37°C滅活24小時(shí)，間隔5小時(shí)震搖I次。S7:凍融:將滅活的勻漿，置_20°C冷庫反復(fù)凍融8次，融化溫度不得超過37°C。S8:離心分離:將凍融的勻漿置管式分離機(jī)中，室溫以16000r/min連續(xù)離心，去沉淀，取上清液備用。S9:澄清過濾與超濾:上清液用0.45 μ m的微孔濾膜進(jìn)行過濾，再用0.22 μ m的微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，然后用截留分子量為5000道爾頓超濾膜進(jìn)行超濾，即得轉(zhuǎn)移因子注射液半成品。超濾液在_20°C以下，保存期為12個(gè)月。SlO:半成品檢驗(yàn):半成品經(jīng)pH值、無菌檢驗(yàn)、含量測定、鑒別檢驗(yàn)、高分子量物質(zhì)檢驗(yàn)等檢驗(yàn)項(xiàng)目合格后，_20°C保存?zhèn)溆?。Sll:成品制備:將半成品溶液移入配液罐中，根據(jù)半成品含量測定結(jié)果，加入注射用水，使多肽含量不少于1.5mg/ml,核糖含量不少于50 μ g/ml,攪拌30分鐘后,用鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)pH至6.3 7.5之間，混勻，即得成品。所用注射用水是普通注射用水，由純化水經(jīng)蒸餾所得。實(shí)施例3:豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法一種豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法，具體步驟如下:
S1:豬脾臟的收集與檢驗(yàn)；原料選取標(biāo)準(zhǔn)化生豬養(yǎng)殖、屠宰企業(yè)收集豬脾臟，標(biāo)準(zhǔn)化生豬養(yǎng)殖、屠宰企業(yè)，此屠宰企業(yè)應(yīng)具有《動(dòng)物防疫合格證》，屠宰場應(yīng)符合中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T17236-1998《生豬屠宰操作規(guī)范》規(guī)定，衛(wèi)生要求應(yīng)符合《肉類加工衛(wèi)生規(guī)范》GB12649的規(guī)定。本實(shí)施例所用原料——豬脾臟來自山東得利斯集團(tuán)，符合豬脾臟原料地及屠宰要求。豬脾臟經(jīng)外觀檢驗(yàn)、衛(wèi)生檢驗(yàn)、病原微生物檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格后方可用作原料。豬脾臟外觀檢驗(yàn)，健康豬脾臟應(yīng)呈扁長條形，色澤均勻一致，呈暗紅色或棕紅色，無充血、結(jié)節(jié)、出血點(diǎn)及腫脹等病灶，具有一定的彈性和硬度，被膜呈灰白色、淺褐色或微灰紅色，切面呈深紅色，實(shí)質(zhì)柔軟，較脆，無腐敗變質(zhì)等現(xiàn)象，有豬脾臟固有的氣味。衛(wèi)生檢驗(yàn)，包括細(xì)菌總數(shù)檢驗(yàn)，大腸桿菌最可能數(shù)(Most probable number, MPN)檢驗(yàn),霉菌總數(shù)檢驗(yàn)。細(xì)菌檢驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌總數(shù)應(yīng)< 104/g為合格；大腸桿菌最可能數(shù)檢驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)大腸桿菌MPN < 150萬/g為合格；霉菌總數(shù)< 100個(gè)/克為合格。病原微生物檢驗(yàn)，包括口蹄疫病毒檢驗(yàn)，豬瘟病毒、豬細(xì)小病毒檢驗(yàn)?？谔阋卟《緳z驗(yàn)采用乳鼠檢查法；豬瘟病毒、豬細(xì)小病毒采用外源病毒檢查法。

S2:剪摘:將解凍融化的豬脾臟去掉裝袋，按豬脾臟原料標(biāo)準(zhǔn)中外觀項(xiàng)要求，嚴(yán)格挑選，并用鑷子夾住脂肪，用剪刀剪去。S3:清洗:將剪摘后的原料用濃度為1.5%氯化鈉溶液清洗3次。S4:初絞:將豬脾原料置于絞肉機(jī)裝料斗內(nèi)，按絞肉機(jī)操作規(guī)程進(jìn)行操作，初絞3遍，并用潔凈物料桶盛裝。S5:精絞:將初絞的豬脾與純化水按1: 3的比例混合，置于膠體磨裝料斗中，按膠體磨操作規(guī)程將其研磨8分鐘，制成勻漿，并用潔凈物料桶盛接。所用純化水為原水經(jīng)蒸餾法、離子交換法、反滲透法或其適宜方法制得的供藥用的水，不含任何添加劑。S6:滅活:按勻漿總量的0.15%加甲醛溶液，40°C滅活20小時(shí)，間隔6小時(shí)震搖I次。S7:凍融:將滅活的勻漿，置_19°C冷庫反復(fù)凍融10次，融化溫度不得超過37°C。S8:離心分離:將凍融的勻漿置管式分離機(jī)中，室溫以20000r/min連續(xù)離心，去沉淀，取上清液備用。S9:澄清過濾與超濾:上清液用0.46 μ m的微孔濾膜進(jìn)行過濾，再用0.23 μ m的微孔濾膜進(jìn)行過濾除菌，然后用截留分子量為5500道爾頓超濾膜進(jìn)行超濾，即得轉(zhuǎn)移因子注射液半成品。超濾液在_20°C以下，保存期為12個(gè)月。SlO:半成品檢驗(yàn):半成品經(jīng)pH值、無菌檢驗(yàn)、含量測定、鑒別檢驗(yàn)、高分子量物質(zhì)檢驗(yàn)等檢驗(yàn)項(xiàng)目合格后，_20°C保存?zhèn)溆谩ll:成品制備:將半成品溶液移入配液罐中，根據(jù)半成品含量測定結(jié)果，加入注射用水，使多肽含量不少于1.5mg/ml,核糖含量不少于50 μ g/ml,攪拌30分鐘后,用鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)pH至6.3 7.5之間，混勻，即得成品。所用注射用水是普通注射用水，由純化水經(jīng)蒸餾所得。實(shí)施例4:初絞次數(shù)對(duì)半成品的影響傳統(tǒng)工藝中初絞次數(shù)一般為3次，經(jīng)反復(fù)研究確定初絞次數(shù)為I次，極大的節(jié)省了人力物力。
本實(shí)施例中，將豬脾臟使用絞肉機(jī)進(jìn)行不同次數(shù)的重復(fù)絞碎，每組絞碎的脾臟樣品設(shè)置3個(gè)平行樣，其他生產(chǎn)工藝按照實(shí)施例2的步驟執(zhí)行，不同絞碎次數(shù)生產(chǎn)出的半成品含量檢測結(jié)果見表I。表I
權(quán)利要求
1.一種豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法，包括: 將檢驗(yàn)合格的豬脾臟預(yù)處理后，初絞I 3遍； 將初絞的豬脾臟精絞研磨1.5 8分鐘，制成勻漿； 在所述勻漿中加入甲醛溶液滅活； 將滅活的勻漿反復(fù)凍融6 10次； 將反復(fù)凍融的勻漿經(jīng)離心分離、過濾與超濾，得到半成品； 向檢驗(yàn)合格的半成品中加入注射用水，得到成品。
2.如權(quán)利要求1所述的豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法，其特征在于:所述預(yù)處理過程中，將豬脾臟解凍融化后，用剪刀剪去脂肪，再用濃度為0.5 1.5%氯化鈉溶液清洗2 3次。
3.如權(quán)利要求2所述的豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法，其特征在于:所述精絞過程中，將初絞的豬脾與純化水按1:1 3的比例混合，置于膠體磨中研磨。
4.如權(quán)利要求3所述的豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法，其特征在于:所述滅活過程中，甲醛溶液的加入量占勻漿總量的0.1 0.2%。
5.如權(quán)利要求4所述的豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法，其特征在于:所述滅活條件為，37 42°C下滅活18 24小時(shí)，中間間隔4 6小時(shí)震搖I次。
6.如權(quán)利要求5所述的豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法，其特征在于:所述離心分離過程中，將反復(fù)凍融的勻漿置 管式分離機(jī)中，將凍融的勻漿，室溫下以16000 20000r/min的轉(zhuǎn)速連續(xù)離心，去沉淀，取上清液備用。
7.如權(quán)利要求6所述的豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法，其特征在于:所述過濾過程中，將離心分離得到的上清液先經(jīng)0.43 0.46 μ m的微孔濾膜第一次過濾，再用0.20 0.26 μ m的微孔濾膜第二次過濾。
8.如權(quán)利要求7所述的豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法，其特征在于:所述超濾使用截留分子量為5000 6000道爾頓超濾膜。
9.如權(quán)利要求8所述的豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法，其特征在于:將檢驗(yàn)合格的豬脾臟去除脂肪，用濃度為0.9%氯化鈉溶液清洗3次，于絞肉機(jī)中初絞I遍；將初絞的豬脾臟與純化水按1: 1.5的比例混合，于膠體磨中研磨5分鐘，制成勻漿；向勻漿中加入勻漿總量0.1%的甲醛溶液，37°C滅活24小時(shí)，間隔5小時(shí)震搖I次；將滅活的勻漿置于_20°C冷庫反復(fù)凍融8次，融化溫度不得超過37°C ;將離心分離得到的上清液先用0.45 μ m的微孔濾膜進(jìn)行過濾，再用0.22 μ m的微孔濾膜進(jìn)行過濾，最后用截留分子量為5000道爾頓超濾膜進(jìn)行超濾。
10.如權(quán)利要求1所述的豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法，其特征在于:半成品中加入注射用水后，加入鹽酸或氫氧化鈉溶液調(diào)pH至6.3 7.5之間。
全文摘要
一種豬脾轉(zhuǎn)移因子注射液的制備方法，包括將檢驗(yàn)合格的豬脾臟預(yù)處理后，初絞1～3遍；將初絞的豬脾臟精絞研磨1.5～8分鐘，制成勻漿；在所述勻漿中加入甲醛溶液滅活；將滅活的勻漿反復(fù)凍融6～10次；將反復(fù)凍融的勻漿經(jīng)離心分離、過濾與超濾，得到半成品；向檢驗(yàn)合格的半成品中加入注射用水，得到成品。本發(fā)明工藝簡單，成本低，可大大縮短生產(chǎn)周期，周期為4天，節(jié)省了大量的人力物力，提高了轉(zhuǎn)移因子的生產(chǎn)效率。
文檔編號(hào)A61K38/19GK103212062SQ20131013647
公開日2013年7月24日 申請(qǐng)日期2013年4月18日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月18日
發(fā)明者李朝陽, 喬彥良 申請(qǐng)人:山東信得科技股份有限公司