專利名稱：包括不同類型轉(zhuǎn)移因子的組合物,制備該組合物的方法,以及使用該組合物的治療方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明總地涉及包括轉(zhuǎn)移因子的組合物，更具體地，涉及包括來自不同類型來源動(dòng)物的轉(zhuǎn)移因子的組合物。本發(fā)明還涉及制備包括不同類型轉(zhuǎn)移因子的組合物的方法以及涉及引發(fā)或提高患者免疫系統(tǒng)的T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的方法。
背景技術(shù)：
許多致命的病原體從動(dòng)物界傳到人類。例如，猴子是I型人免疫缺陷病毒(HIV-I)的來源，該病毒導(dǎo)致獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)和猴痘，后者與天花相似；認(rèn)為居住地面的哺乳動(dòng)物是埃博拉病毒的來源；果蝠和豬是Nipah病毒的來源；Hendra病毒來自馬；引起“香港流感”的病毒源自雞；以及野生鳥類，尤其是鴨，是許多致命流感病毒的來源。許多疾病也具有動(dòng)物儲(chǔ)存庫(kù)。例如，小鼠攜帶漢坦病毒，大鼠攜帶黑鼠疫，以及鹿攜帶萊姆病。
免疫系統(tǒng)脊椎動(dòng)物的免疫系統(tǒng)是配備用來識(shí)別侵入的病原性生物如寄生蟲、細(xì)菌、真菌和病毒并保護(hù)身體免遭其侵害的。脊椎動(dòng)物的免疫系統(tǒng)通常包括細(xì)胞組分和非細(xì)胞組分。
免疫系統(tǒng)的細(xì)胞組分包括通常所說的“淋巴細(xì)胞”或白細(xì)胞，其存在幾種類型。成熟免疫系統(tǒng)的細(xì)胞組分通常引起對(duì)入侵病原體的初次、非特異性應(yīng)答，以及參與對(duì)病原體的二次、特異性應(yīng)答。
對(duì)病原體感染的初次或初始應(yīng)答中，稱為吞噬細(xì)胞的白細(xì)胞定位并攻擊入侵病原體。通常，吞噬細(xì)胞將內(nèi)在化，或“吃掉”病原體，然后消化病原體。此外，白細(xì)胞在應(yīng)答致病感染中生產(chǎn)并分泌化學(xué)物質(zhì)，預(yù)期該化學(xué)物質(zhì)攻擊病原體或有助于指導(dǎo)對(duì)病原體的攻擊。
只有當(dāng)入侵病原體感染持續(xù)逃避初次免疫應(yīng)答時(shí)，才需要對(duì)病原體的特異性、二次免疫應(yīng)答。因?yàn)檫@種二次免疫應(yīng)答通常是延遲的，因此也稱為“遲發(fā)型超敏反應(yīng)”。哺乳動(dòng)物，靠其自身，通常直至病原體感染后約七(7)至約十四(14)天才引發(fā)對(duì)病原體的二次免疫應(yīng)答。二次免疫應(yīng)答也被稱為對(duì)特異性病原體的獲得性免疫。病原體具有一種或多種特征蛋白，其稱為“抗原”。二次免疫應(yīng)答中，稱為B淋巴細(xì)胞或“B-細(xì)胞”和T淋巴細(xì)胞或“T-細(xì)胞”的白細(xì)胞“學(xué)習(xí)”識(shí)別病原體的一種或多種抗原。B-細(xì)胞和T-細(xì)胞一起起作用來產(chǎn)生稱為“抗體”的蛋白質(zhì)，其對(duì)于病原體上的一種或多種特定抗原是特異性的(例如，經(jīng)構(gòu)造來結(jié)合或“識(shí)別”所述抗原)。
T-細(xì)胞主要引起對(duì)病原體或抗原物質(zhì)的二次免疫應(yīng)答或遲發(fā)型超敏反應(yīng)。存在三種類型的T-細(xì)胞T-輔助細(xì)胞、抑制性T-細(xì)胞和抗原特異性T-細(xì)胞，后者還稱為細(xì)胞毒性(意思是“細(xì)胞殺傷”)T-淋巴細(xì)胞(CTL)或T-殺傷細(xì)胞或天然殺傷(NK)細(xì)胞。T-輔助細(xì)胞和抑制性T-細(xì)胞，盡管對(duì)某些抗原不是特異性的，但是執(zhí)行調(diào)節(jié)功能(例如，通常伴隨感染的炎癥)，該調(diào)節(jié)功能幫助從感染宿主除去病原體或抗原物質(zhì)。
抗體，其只構(gòu)成免疫系統(tǒng)非細(xì)胞組分的一部分，識(shí)別特異性抗原并因此認(rèn)為是“抗原特異性的”。然后產(chǎn)生的抗體主要幫助白細(xì)胞定位并消除身體中的病原體。通常，一旦白細(xì)胞產(chǎn)生針對(duì)病原體的抗體，白細(xì)胞及其所有的遠(yuǎn)祖細(xì)胞持續(xù)產(chǎn)生抗體。消除感染后，少量與所識(shí)別抗原對(duì)應(yīng)的T-細(xì)胞和B-細(xì)胞保持于“休眠”狀態(tài)。當(dāng)相應(yīng)的致病物質(zhì)或抗原物質(zhì)再次感染宿主時(shí)，“休眠”T-細(xì)胞和B-細(xì)胞激活并在約四十八(48)小時(shí)內(nèi)誘導(dǎo)快速的免疫應(yīng)答。通過如此的應(yīng)答，免疫系統(tǒng)引發(fā)對(duì)病原體的二次免疫應(yīng)答，認(rèn)為免疫系統(tǒng)具有對(duì)該病原體的“記憶”。
還知道哺乳動(dòng)物的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生較小的蛋白，稱為“轉(zhuǎn)移因子”，作為對(duì)感染病原體二次免疫應(yīng)答的一部分。轉(zhuǎn)移因子是哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)的另一種非細(xì)胞組分。認(rèn)為抗原特異性轉(zhuǎn)移因子結(jié)構(gòu)上與抗體類似，但是分子大小小得多?？乖禺愋赞D(zhuǎn)移因子和抗體都包括抗原特異性位點(diǎn)。此外，轉(zhuǎn)移因子和抗體都包括與其各自效應(yīng)細(xì)胞上受體位點(diǎn)相互作用的高度保守區(qū)域。轉(zhuǎn)移因子和抗體分子中，第三個(gè)區(qū)域，“銜接物”，連接抗原特異性位點(diǎn)和高度保守區(qū)域。
轉(zhuǎn)移因子在免疫系統(tǒng)中的作用轉(zhuǎn)移因子是淋巴細(xì)胞的低分子量分離物。狹義地說，轉(zhuǎn)移因子可具有對(duì)單個(gè)抗原的特異性。美國(guó)專利5,840,700和5,470,835，兩者都是頒發(fā)給Kirkpatrick等的(此后共同稱為“Kirkpatrick專利”)，公開了對(duì)某些抗原具有特異性的轉(zhuǎn)移因子的分離。更廣義地說，已經(jīng)從單克隆淋巴細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)物產(chǎn)生“特異性”轉(zhuǎn)移因子。即使這些轉(zhuǎn)移因子是針對(duì)單個(gè)病原體產(chǎn)生的，它們也具有對(duì)該病原體多個(gè)抗原位點(diǎn)的特異性。因此，認(rèn)為這些轉(zhuǎn)移因子是“病原體特異性的”，而不是抗原特異性的。同樣地，從已經(jīng)感染特定病原體的宿主得到的轉(zhuǎn)移因子是病原體特異性的。盡管由于當(dāng)特定抗原存在時(shí)它們引發(fā)二次免疫應(yīng)答的能力通常在本領(lǐng)域中將這樣的制品稱為“抗原特異性的”，但是具有不同特異性的轉(zhuǎn)移因子也可以存在于這樣的制品中。因此，甚至所稱的“抗原特異性的”，病原體特異性轉(zhuǎn)移因子制品也可以對(duì)多種抗原是特異性的。
此外，認(rèn)為抗原特異性和病原體特異性轉(zhuǎn)移因子可以導(dǎo)致宿主來引發(fā)對(duì)病原體或抗原的遲發(fā)型超敏反應(yīng)免疫應(yīng)答，該轉(zhuǎn)移因子分子對(duì)所述病原體或抗原不是特異性的。轉(zhuǎn)移因子至少“招引”非特異性T-細(xì)胞、誘導(dǎo)性T-細(xì)胞和抑制性T-細(xì)胞至感染病原體或抗原物質(zhì)，以促進(jìn)對(duì)感染病原體或抗原物質(zhì)的二次免疫應(yīng)答或遲發(fā)型超敏反應(yīng)。
通常，轉(zhuǎn)移因子包括蛋白質(zhì)的分離物，該蛋白質(zhì)是從免疫活性哺乳動(dòng)物來源獲得的，分子量小于約10,000道爾頓(D)。已知當(dāng)體外或體內(nèi)加入哺乳動(dòng)物免疫細(xì)胞系統(tǒng)中時(shí)，轉(zhuǎn)移因子提高或正常化受體哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)的應(yīng)答。
新生兒的免疫系統(tǒng)通常沒有足夠發(fā)育或“成熟”來有效保護(hù)新生兒免遭入侵病原體的侵害。此外，在出生前，許多哺乳動(dòng)物通過其母親使之不受各種病原體的侵害。因此，許多新生哺乳動(dòng)物不能立即引發(fā)對(duì)各種病原體的二次應(yīng)答。相反地，通常其母親給予了新生哺乳動(dòng)物對(duì)病原體的二次免疫。已知母親加強(qiáng)新生兒免疫系統(tǒng)的一種方式是給新生兒提供一套轉(zhuǎn)移因子。哺乳動(dòng)物中，母親在初乳中給新生兒提供轉(zhuǎn)移因子，初乳通常在一天或兩天后由母親的乳汁替代。轉(zhuǎn)移因子主要將母親的獲得性、特異性(即，遲發(fā)型超敏)免疫性傳遞給新生兒。該傳遞的免疫性通常調(diào)節(jié)新生兒免疫系統(tǒng)的細(xì)胞以抗原特異性方式以及以抗原或病原體非特異性方式反應(yīng)來對(duì)抗病原體，直至新生兒的免疫系統(tǒng)能夠獨(dú)立地保護(hù)新生兒免遭病原體的侵害。因此，當(dāng)轉(zhuǎn)移因子存在時(shí)，調(diào)節(jié)新生兒的免疫系統(tǒng)以超敏應(yīng)答對(duì)病原體作出反應(yīng)，如以典型的遲發(fā)型超敏應(yīng)答發(fā)生的超敏反應(yīng)。因此，認(rèn)為轉(zhuǎn)移因子“助推起動(dòng)”了免疫系統(tǒng)對(duì)病原體的反應(yīng)性。
近些年已經(jīng)進(jìn)行了許多涉及轉(zhuǎn)移因子的研究。通常，認(rèn)為轉(zhuǎn)移因子是具有約四十四(44)個(gè)氨基酸長(zhǎng)度的蛋白質(zhì)。轉(zhuǎn)移因子通常具有約3,000至約5,000道爾頓(Da)，或約3kDa至約5kDa的分子量，但是轉(zhuǎn)移因子分子可能具有該范圍外的分子量。還認(rèn)為轉(zhuǎn)移因子包括三個(gè)功能部分，其中每個(gè)部分包括不同類型的轉(zhuǎn)移因子分子誘導(dǎo)部分；免疫抑制部分；和抗原特異性部分。本領(lǐng)域中許多人認(rèn)為轉(zhuǎn)移因子還包括核苷部分，其可以連接蛋白分子或與其分開，該核苷部分可以提高轉(zhuǎn)移因子導(dǎo)致哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)引發(fā)二次免疫應(yīng)答的能力。核苷部分可以是轉(zhuǎn)移因子的誘導(dǎo)部分或抑制部分的一部分。
認(rèn)為抗原特異性轉(zhuǎn)移因子的抗原特異性區(qū)域包括約八個(gè)(8)至約十二(12)個(gè)氨基酸。認(rèn)為約十個(gè)(10)氨基酸的第二個(gè)高度保守區(qū)域是非常高親合性的T-細(xì)胞受體結(jié)合區(qū)域。剩余的氨基酸可以用來連接兩個(gè)活性區(qū)域或可以具有另外的，至今未發(fā)現(xiàn)的特性。轉(zhuǎn)移因子分子的抗原特異性區(qū)域，其與抗體已知的抗原特異性結(jié)構(gòu)類似，但是分子量大小小得多，看來似乎是高變區(qū)并適合識(shí)別一種或多種病原體上的特征蛋白。認(rèn)為誘導(dǎo)部分和免疫抑制部分給予了轉(zhuǎn)移因子調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)各種細(xì)胞的能力，使得細(xì)胞更充分地應(yīng)答其環(huán)境中的病原刺激。
非細(xì)胞免疫系統(tǒng)組分的來源按照慣例，已經(jīng)從奶牛的初乳中獲得轉(zhuǎn)移因子，如通過Wilson等的美國(guó)專利4,816,563中所述的方法(下文中稱為“Wilson”)。盡管奶牛通常產(chǎn)生大量初乳且因此在相對(duì)短的時(shí)間段內(nèi)產(chǎn)生大量轉(zhuǎn)移因子，但是奶牛每年只有約一天或一天半產(chǎn)初乳。因此，奶牛既不是轉(zhuǎn)移因子的恒定來源也不是轉(zhuǎn)移因子的有效來源。
還從多種其它哺乳動(dòng)物來源獲得了轉(zhuǎn)移因子。例如，在研究轉(zhuǎn)移因子中，已經(jīng)將小鼠用作轉(zhuǎn)移因子的來源。通常將抗原皮下引入小鼠中，然后在對(duì)抗原產(chǎn)生遲發(fā)型超敏反應(yīng)后將小鼠處死。此后從小鼠的脾細(xì)胞中獲得轉(zhuǎn)移因子。
盡管通常使用不同機(jī)理來產(chǎn)生抗體，抗體的原始來源也可以是哺乳動(dòng)物。例如，可以通過如下方法獲得單克隆抗體，給小鼠、兔子或另一種哺乳動(dòng)物注射抗原，從哺乳動(dòng)物獲得產(chǎn)生抗體的細(xì)胞，然后將產(chǎn)生抗體的細(xì)胞與無限增殖化細(xì)胞融合來產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞系，其將在細(xì)胞幾個(gè)世代的整個(gè)過程中，因此在長(zhǎng)時(shí)間段內(nèi)持續(xù)產(chǎn)生單克隆抗體。
已經(jīng)從多種來源獲得針對(duì)哺乳動(dòng)物病原體的抗體，這些來源包括小鼠、兔子、豬、牛和其它哺乳動(dòng)物。此外，導(dǎo)致一些人類疾病如感冒的病原體，已知起源于鳥類。因?yàn)橐呀?jīng)認(rèn)識(shí)到鳥類(即，鳥)免疫系統(tǒng)和哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)非常相似，一些研究者已經(jīng)轉(zhuǎn)向?qū)ⅧB作為產(chǎn)生抗體的來源。
通過將抗原引入蛋中已經(jīng)獲得對(duì)感染哺乳動(dòng)物的病原體或“哺乳動(dòng)物病原體”具有特異性的鳥抗體?；蛘?，將來源動(dòng)物暴露于抗原后，抗體可以存在于蛋中，抗原包括哺乳動(dòng)物病原體的抗原。美國(guó)專利5,080,895，于1992年1月14日頒發(fā)給Tokoro(下文中稱為“895專利”)，公開了一種方法，包括給母雞注射導(dǎo)致新生哺乳動(dòng)物腸感染疾病的病原體。然后母雞產(chǎn)生對(duì)這些病原體具有特異性的抗體，其將存在于母雞產(chǎn)的蛋中。“895”專利公開了包括這些病原體特異性抗體的組合物及其治療和預(yù)防新生小豬和牛犢腸疾病的用途。然而，用鳥抗體治療哺乳動(dòng)物的病原體感染可能具有不良結(jié)果，因?yàn)椴溉閯?dòng)物的免疫系統(tǒng)可以通過引發(fā)針對(duì)體自身的免疫應(yīng)答來消極地應(yīng)答大的鳥抗體分子。此外，由于哺乳動(dòng)物的免疫系統(tǒng)不因鳥抗體識(shí)別某些病原體的能力或鳥抗體對(duì)這類病原體的抗原的特異性而將其識(shí)別為有用的，鳥抗體通常不能在哺乳動(dòng)物中引發(fā)所需的免疫應(yīng)答。
還已知可以從蛋獲得轉(zhuǎn)移因子。Hennen等的美國(guó)專利6,468,534(下文中稱為“Hennen”)描述了一種方法，通過該方法將雌性小雞(即，母雞)暴露于一種或多種抗原，導(dǎo)致小雞引發(fā)免疫應(yīng)答，免疫應(yīng)答包括二次免疫應(yīng)答。二次免疫應(yīng)答的結(jié)果是，轉(zhuǎn)移因子分子存在于雞的蛋中。然后可以將蛋進(jìn)行加工來提供其中存在轉(zhuǎn)移因子的產(chǎn)品。這樣的產(chǎn)品可以采取噴霧干燥或冷凍干燥或凍干蛋粉的形式，并可以包括蛋的全部或部分。然后將蛋粉直接摻入明膠膠囊中或與其它物質(zhì)混合然后引入明膠膠囊。
圖2圖示了通常用于將蛋粉形式的蛋衍生的鳥轉(zhuǎn)移因子包入膠囊的一種類型的裝膠囊設(shè)備。該裝膠囊設(shè)備20包括組分供料斗24，進(jìn)料站28，以及每個(gè)組分供料斗24和進(jìn)料站28之間傳送的推進(jìn)加料器26。推進(jìn)加料器26將全蛋粉從組分供料斗24傳送至進(jìn)料站28。
當(dāng)推進(jìn)加料器26運(yùn)行時(shí)，其發(fā)熱至超過膽固醇相對(duì)低熔點(diǎn)的溫度，膽固醇來自蛋粉中的蛋黃。溫?zé)岬哪懝檀际钦承缘模采w了推進(jìn)加料器26，與此連通的管道，和進(jìn)料站28，因此降低了裝膠囊設(shè)備20運(yùn)轉(zhuǎn)的效率。因此，必須定期拆卸并清洗裝膠囊設(shè)備，可能花費(fèi)相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間(例如，長(zhǎng)達(dá)約8小時(shí))，使得裝膠囊設(shè)備20的生產(chǎn)力顯著降低，并因此顯著降低以此形成的膠囊數(shù)量。因此，加工全蛋粉來獲得含有轉(zhuǎn)移因子的產(chǎn)品稍微有些不理想。
此外，源自單個(gè)來源動(dòng)物產(chǎn)品(例如，蛋或初乳)的組合物通常只包括對(duì)來源動(dòng)物所暴露的抗原具有特異性的轉(zhuǎn)移因子分子。這樣有限暴露的結(jié)果可能是含有這樣轉(zhuǎn)移因子的組合物在預(yù)防或治療某些類型的感染或病癥中的有效性也是有限的。
因此，需要可用于促使所治療患者的免疫系統(tǒng)引發(fā)對(duì)更寬范圍病原體的免疫應(yīng)答的組合物，以及需要提高裝膠囊和其它形成組合物設(shè)備的運(yùn)轉(zhuǎn)效率和生產(chǎn)力的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明包括引發(fā)患者中T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的組合物。該組合物包括來自至少兩種不同類型來源動(dòng)物的轉(zhuǎn)移因子。如在此所用的關(guān)于來源動(dòng)物的術(shù)語(yǔ)“類型”，描述了可以從其獲得轉(zhuǎn)移因子的來源動(dòng)物并涉及不同綱的來源動(dòng)物(例如，哺乳動(dòng)物、鳥類、爬行動(dòng)物、兩棲動(dòng)物、昆蟲，等)。如在此所用的術(shù)語(yǔ)“類型”，也涉及來自不同亞綱、目(例如，偶蹄目、靈長(zhǎng)目、食肉動(dòng)物等)、科(?？啤⑷丝?、貓科，等)、亞科、屬(例如，牛、人、家貓，等)，甚至種和亞種的來源動(dòng)物。在此使用關(guān)于轉(zhuǎn)移因子的術(shù)語(yǔ)“類型”表示從其獲得轉(zhuǎn)移因子的來源動(dòng)物的類型。
組合物的示范性實(shí)施方案包括來自哺乳動(dòng)物和非哺乳動(dòng)物來源動(dòng)物兩者的轉(zhuǎn)移因子，轉(zhuǎn)移因子的類型在此也分別稱為“哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子”和“非哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子”。作為非限制性實(shí)例，哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子可以以初乳或其部分或提取物包括于組合物中，其在此總地稱為“初乳衍生產(chǎn)物”或如本領(lǐng)域已知的其它形式(例如，作為白血球(白細(xì)胞)提取物，作為脾的(“來自脾的”)提取物，等)。還例如，示范性組合物的非哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子可以從蛋或其部分或提取物獲得，其在此也稱為“蛋衍生產(chǎn)物”。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)當(dāng)將不同類型的轉(zhuǎn)移因子組合并給藥于所治療的動(dòng)物(例如，哺乳動(dòng)物)時(shí)，發(fā)生了一定的協(xié)同作用。
當(dāng)本發(fā)明的組合物包括初乳衍生產(chǎn)物和蛋衍生產(chǎn)物時(shí)，這兩種產(chǎn)物可以以大約相等的量(例如，以總混合物的重量、體積等計(jì))，或初乳衍生產(chǎn)物和蛋衍生產(chǎn)物中的一種比另一種多的量包括在混合物中。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明來自具有高度依賴性幼崽的來源動(dòng)物如奶牛的轉(zhuǎn)移因子，誘導(dǎo)了相對(duì)快的二次免疫應(yīng)答，伴隨相對(duì)快的無反應(yīng)性(即，白細(xì)胞對(duì)轉(zhuǎn)移因子分子敏感性的缺乏)建立。來自具有獨(dú)立幼崽的來源動(dòng)物如雞或其它“鶉雞類”鳥類的轉(zhuǎn)移因子，沒有誘導(dǎo)快的二次免疫應(yīng)答，但是確實(shí)提供了更持久的二次免疫應(yīng)答。因此，可以調(diào)整初乳衍生的轉(zhuǎn)移產(chǎn)物和蛋衍生產(chǎn)物的相對(duì)濃度來引發(fā)二次免疫應(yīng)答發(fā)生或持續(xù)特定的時(shí)間段。
引入本發(fā)明教導(dǎo)的組合物中還可以包括另外的成分。例如，本發(fā)明的組合物可以包括一種或多種維生素、礦物質(zhì)、蛋白質(zhì)或天然產(chǎn)物(例如，草藥、蘑菇、根，等)或其提取物。特別地，認(rèn)為多糖在本發(fā)明組合物引發(fā)治療動(dòng)物二次免疫應(yīng)答的有效性中提供進(jìn)一步的協(xié)同作用。示范性多糖以β-葡聚糖和蘑菇提取物(當(dāng)然，其包括其它成分)的形式可獲得。
另一方面，本發(fā)明包括加工或制造包括轉(zhuǎn)移因子的蛋衍生產(chǎn)物的方法。本發(fā)明的加工或制造方法包括在將蛋衍生產(chǎn)物引入制造或其它加工設(shè)備之前或同時(shí)，將基本上無脂肪的成分如初乳衍生產(chǎn)物和蛋衍生產(chǎn)物混合，初乳衍生產(chǎn)物可以包括或不包括轉(zhuǎn)移因子。裝膠囊是其中可以使用這樣技術(shù)的加工或制造方法的一個(gè)實(shí)例。
另外，本發(fā)明包括降低用于加工蛋衍生產(chǎn)物的制造或其它加工設(shè)備如裝膠囊設(shè)備的清洗頻率的方法。該方法包括在蛋衍生產(chǎn)物引入加工設(shè)備之前或同時(shí)，將少脂肪或基本上無脂肪的物質(zhì)如初乳衍生產(chǎn)物和蛋衍生產(chǎn)物混合。
本發(fā)明還包括治療患者的方法。引入本發(fā)明教導(dǎo)的治療方法包括將根據(jù)本發(fā)明的組合物給藥于患者。因?yàn)榻M合物包括轉(zhuǎn)移因子，所以將組合物給藥于患者將促使患者的免疫系統(tǒng)引發(fā)T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答或?qū)⑼ㄟ^已經(jīng)在進(jìn)行中的患者的免疫系統(tǒng)來提高T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。
根據(jù)隨后的說明、附圖和所附的權(quán)利要求，對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說本發(fā)明的其它方面和優(yōu)勢(shì)將變得顯而易見。


在附圖中，描繪了本發(fā)明各個(gè)方面的示范性實(shí)施方案圖1描繪了可以使引入本發(fā)明教導(dǎo)的組合物具體化的方式的實(shí)例；圖2是裝膠囊設(shè)備的圖示，該裝膠囊設(shè)備可以用于將本發(fā)明組合物的粉末狀實(shí)施方案引入明膠膠囊中；和圖3圖示說明了示范性測(cè)試實(shí)驗(yàn)方案，進(jìn)行該測(cè)試實(shí)驗(yàn)方案來測(cè)定本發(fā)明各方面的功效。
實(shí)施本發(fā)明的最佳方式引入本發(fā)明教導(dǎo)的組合物的示范性實(shí)施方案包括來自至少兩種不同類型來源動(dòng)物的轉(zhuǎn)移因子。作為非限制性實(shí)例，根據(jù)本發(fā)明的組合物可以包括哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子和非哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子。
本發(fā)明組合物不同類型的轉(zhuǎn)移因子可以從任何合適的來源獲得。例如，可以從初乳獲得哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子，如Wilson中所述的或如本領(lǐng)域已知的(例如，白細(xì)胞(白血球)提取物，脾的(即，“來自脾的”)提取物，等)。非哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子的示范性來源是動(dòng)物如雞的蛋，如Hennen中所述的。因此，根據(jù)本發(fā)明的組合物可以包括第一種成分，其包括初乳或其部分或提取物，在此將其總地稱為“初乳衍生產(chǎn)物”，以及第二種成分，包括蛋或其部分或提取物，在此也稱為“蛋衍生產(chǎn)物”。
由于引入本發(fā)明教導(dǎo)的組合物包括來自不同類型來源動(dòng)物的轉(zhuǎn)移因子，所以它們可以包括具有比常規(guī)含有轉(zhuǎn)移因子的組合物更寬陣列抗原特異性或病原體特異性的轉(zhuǎn)移分子。因此，根據(jù)本發(fā)明的組合物能夠使得治療動(dòng)物的免疫系統(tǒng)來引發(fā)T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答以對(duì)抗比常規(guī)含有轉(zhuǎn)移因子的組合物有效對(duì)抗的那些更寬陣列的病原體。這是因?yàn)椴煌愋偷膭?dòng)物可以暴露于不同類型的抗原或病原體，如通過接種疫苗，動(dòng)物的環(huán)境，等等。此外，已知某些動(dòng)物中的一些病癥通過多重感染引起，甚至進(jìn)一步擴(kuò)展根據(jù)本發(fā)明的組合物的特異性。例如，一種或多種病原體對(duì)宿主的免疫系統(tǒng)可以具有不利影響(例如，抑制或壟斷)，同時(shí)可以允許一種或多種其它病原體來引起宿主的病況。作為另一實(shí)例，一些病況由病原體的組合引起。
例如，包括來自奶牛和雞兩者的含有轉(zhuǎn)移因子成分的組合物將包括對(duì)奶牛所暴露的抗原和病原體具有特異性的轉(zhuǎn)移因子分子，以及對(duì)雞所暴露的抗原或病原體具有特異性的轉(zhuǎn)移因子分子。因?yàn)槟膛：碗u兩者均可能暴露于另一者所未暴露的抗原或病原體，這樣的組合物可以包括具有只包括來自奶牛的轉(zhuǎn)移因子(例如，通過初乳衍生產(chǎn)物)或來自雞的轉(zhuǎn)移因子(例如，通過蛋衍生產(chǎn)物)的組合物中不存在的抗原或病原體特異性的轉(zhuǎn)移因子分子。
就重量或體積測(cè)量而言，本發(fā)明的組合物可以包括約相同量的初乳衍生產(chǎn)物和蛋衍生產(chǎn)物(即，約50％的初乳衍生產(chǎn)物和約50％的蛋衍生產(chǎn)物)。或者，引入本發(fā)明教導(dǎo)的組合物可以包括比蛋衍生產(chǎn)物(約15％或40％，以重量計(jì))多量的初乳衍生產(chǎn)物(例如，約85％或60％，以初乳衍生產(chǎn)物和蛋衍生產(chǎn)物的總重來計(jì))。作為另一可供選擇的方案，本發(fā)明的組合物包括比初乳衍生產(chǎn)物(例如，約40％或15％重量)多量的蛋衍生產(chǎn)物(例如，約60％或85％重量)。作為另一實(shí)施例，引入本發(fā)明教導(dǎo)的組合物包括約1％重量的初乳衍生產(chǎn)物和蛋衍生產(chǎn)物中的一種，和約99％重量的初乳衍生產(chǎn)物和蛋衍生產(chǎn)物中的另一種。盡管提供了初乳衍生產(chǎn)物和蛋衍生產(chǎn)物的特定量，其任意組合是在本除了包括轉(zhuǎn)移因子的來源(例如，初乳衍生產(chǎn)物，蛋衍生產(chǎn)物，等)，引入本發(fā)明教導(dǎo)的組合物可以包括一種或多種其它成分，包括但不限于，維生素、礦物質(zhì)、蛋白質(zhì)、天然產(chǎn)物(例如，草藥，蘑菇，根，等，或其提取物)，等等。其它成分可以用于對(duì)施用該組合物的患者提供更多的優(yōu)勢(shì)，或可以提高組合物中轉(zhuǎn)移因子引發(fā)或增強(qiáng)二次免疫應(yīng)答或延遲型超敏反應(yīng)的能力。
如圖1中所示，在不限制本發(fā)明的范圍的情況下，根據(jù)本發(fā)明的組合物10可以采取粉末或顆粒物質(zhì)的形式，其包括多種類型的轉(zhuǎn)移因子(未顯示)。為了確保將合適和精確劑量的組合物10給藥于患者(未顯示)，可以將組合物10包含于公知類型且本領(lǐng)域技術(shù)人員容易獲得的明膠膠囊12中。結(jié)果是圖示的膠囊14?；蛘?，根據(jù)本發(fā)明的組合物可以具體化為片劑，所謂的“囊片”，未包膠的粉末、液體、凝膠或任何其它藥物學(xué)上可接受的形式。將本發(fā)明的組合物放入任何這樣形式中的合適方法對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。
制造或形成根據(jù)本發(fā)明的組合物的方法的示范性實(shí)施方案中，可以將第一種類型的轉(zhuǎn)移因子與第二種類型的轉(zhuǎn)移因子組合。此外，可以將一種或多種其它類型的轉(zhuǎn)移因子與第一種和第二種類型的轉(zhuǎn)移因子組合。組合的不同類型的轉(zhuǎn)移因子可以是基本上純化的轉(zhuǎn)移因子，包括轉(zhuǎn)移因子的成分或“產(chǎn)物”，或其任何組合。
再次轉(zhuǎn)向圖2，提供了形成如圖1中所示的填充了組合物的膠囊14的方法，只是作為制造引入本發(fā)明教導(dǎo)的組合物的方法的實(shí)例。如所示的，使用工業(yè)中已知類型的標(biāo)準(zhǔn)裝膠囊設(shè)備20，如從CapPlusTechnologies of Phoenix，Arizona可獲得的SF-135膠囊填充機(jī)制得組合物10和形成填充了組合物的膠囊14。
除了一個(gè)或多個(gè)組分供料斗24，與每個(gè)組分供料斗24連接的推進(jìn)加料器26，以及與每個(gè)推進(jìn)加料器26和其中包含推進(jìn)加料器26的導(dǎo)管27連通的進(jìn)料站28之外，裝膠囊設(shè)備20還包括一個(gè)或多個(gè)膠囊料斗30，以及用于將膠囊體12a和/或膠囊帽12b運(yùn)送至進(jìn)料站28的風(fēng)力給料系統(tǒng)32。
因?yàn)檠b膠囊設(shè)備將混合物引入患者可以吞咽的膠囊中，通常優(yōu)選以粉末形式將基本上無脂肪的成分和蛋衍生產(chǎn)物引入裝膠囊設(shè)備中。相對(duì)于蛋衍生產(chǎn)物中存在的脂肪濃度，基本上無脂肪的成分稀釋了混合物中存在的脂肪(例如，來自蛋黃)的量或濃度。因此，可以調(diào)整基本上無脂肪產(chǎn)物和蛋衍生產(chǎn)物的相對(duì)量來提供最小化裝膠囊設(shè)備堵塞的脂肪濃度。
繼續(xù)組合物10的實(shí)例，其包括作為基本上無脂肪成分的初乳衍生產(chǎn)物10a和蛋衍生產(chǎn)物10b，初乳衍生產(chǎn)物10a和蛋衍生產(chǎn)物10b可以同時(shí)引入裝膠囊設(shè)備20的單個(gè)組分供料斗24中。例如，初乳衍生產(chǎn)物10a和蛋衍生產(chǎn)物10b可以在其引入組分供料斗24時(shí)混合，如所示的，或預(yù)混合。通過將脂肪含量比蛋衍生產(chǎn)物10b低的物質(zhì)與蛋衍生產(chǎn)物10b一起引入組分供料斗24中，所得到混合物的脂肪含量(例如，濃度)低于蛋衍生產(chǎn)物10b的脂肪含量，降低或消除了組分供料斗24、推進(jìn)加料器26、管道27、進(jìn)料站28或裝膠囊設(shè)備20的任何其它部件將被膽固醇或脂肪覆蓋的可能性。
將預(yù)定量的組合物10引入在進(jìn)料站的膠囊體12a后，將裝滿的膠囊體12a運(yùn)送至膠囊封閉站34，在那里裝配膠囊帽12b以將組合物10完全包含在膠囊12中。
另外，填充了組合物的膠囊14只是可以使引入本發(fā)明教導(dǎo)的組合物具體化的方式的一個(gè)實(shí)例。本發(fā)明的組合物還可以采取其它形式，如片劑、囊片、松散的粉末、液體、凝膠、填充了液體或填充了凝膠的膠囊，本領(lǐng)域已知的任何其它藥物學(xué)上可接受的形式，每種形式都可以通過已知的方法制得。
可以通過任何合適的方法(例如，腸內(nèi)、胃腸外等)將本發(fā)明的組合物給藥于患者(例如，哺乳動(dòng)物，如人、狗或貓，鳥，爬行動(dòng)物，魚，等)，當(dāng)然，取決于組合物的形式。例如，實(shí)際上任何形式的組合物(例如，膠囊、片劑、囊片、粉末、液體、凝膠，等)都可以口服給藥(即，通過患者的口)，只要該組合物包括本領(lǐng)域已知類型的藥物學(xué)上可接受的載體，該載體將防止由于持續(xù)存在于患者消化道中的條件而引起的轉(zhuǎn)移因子分子的降解或破壞而基本上不會(huì)影響組合物中所含轉(zhuǎn)移因子分子的功效。
給藥于患者的組合物或組合物中轉(zhuǎn)移因子的劑量取決于各種因素，包括但不限于，患者的體重，患者的健康狀況，或患者已經(jīng)暴露的環(huán)境(例如，病原體)。
將組合物給藥于患者可以促使患者的免疫系統(tǒng)引發(fā)針對(duì)一種或多種抗原或病原體的T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答。因此，可以將組合物給藥于患者來治療患者經(jīng)受的病況，預(yù)防患者呈現(xiàn)由特定病原體引起的病況，或只是提高患者免疫系統(tǒng)的整體健康和擊退感染或入侵病原體的能力。
具體實(shí)施方案以下實(shí)施例說明了包括來自多種類型來源動(dòng)物的轉(zhuǎn)移因子的組合物促使所治療患者的免疫系統(tǒng)引發(fā)對(duì)靶細(xì)胞形式的各種病原體的T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的提高的能力。實(shí)施例中所用的比例基于特定測(cè)試樣品中所用材料(例如，蛋粉，初乳粉)的重量。
實(shí)施例1實(shí)施例1中，初步試驗(yàn)，靶細(xì)胞包括細(xì)菌(例如，肺炎衣原體(C.pneumoniae)和幽門螺桿菌(H.pylori))和病毒(例如，單純皰疹病毒-1(HSV-1)和單純皰疹病毒-2(HSV-2)，以病毒感染細(xì)胞的形式存在，以及癌，或惡性細(xì)胞(例如，K562紅白血病細(xì)胞)。
用于進(jìn)行這些測(cè)定的體外技術(shù)為所謂的“鉻-51釋放測(cè)定法”，其包括測(cè)量由受到NK細(xì)胞攻擊的細(xì)胞所釋放的放射性鉻-51(Cr-51)的量。例如，可以使用Beckman 2000 Gamma Counter獲得放射性測(cè)量，其可以從Beckman Coulter，Inc.，F(xiàn)ullerton，California獲得。
初步試驗(yàn)的實(shí)施例1中，營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基和細(xì)胞環(huán)境中提供了固定量(每毫升營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基和細(xì)胞環(huán)境5微克)的粉末狀組合物，以及基本上固定量的NK細(xì)胞。所用的粉末狀組合物的實(shí)例包括漂白的小麥粉，轉(zhuǎn)移因子TM(TF)，從4Life Research，LLC，Sandy，Utah可獲得，轉(zhuǎn)移因子PlusTM(TFP或TF+)，也可以從4Life Research獲得，凍干(即，冷凍干燥的)全蛋粉中可獲得的鳥轉(zhuǎn)移因子，以及TF和TFP(在美國(guó)銷售的配方和在國(guó)際上銷售的配方)與鳥轉(zhuǎn)移因子的混合物，比例為約85％重量的TF或TFP(即，牛轉(zhuǎn)移因子)對(duì)約15％重量的鳥轉(zhuǎn)移因子。將粉末狀組合物、營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基、NK細(xì)胞和靶細(xì)胞混合并在測(cè)量通過NK細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的破壞所釋放的放射性原子之前孵育四小時(shí)。每個(gè)示范性反應(yīng)重復(fù)進(jìn)行三次，將三次反應(yīng)的結(jié)果進(jìn)行平均。
除了包括一種或多種類型的轉(zhuǎn)移因子之外，TF+還包括多種其它成分，包括灰樹花和香菇、冬蟲夏草、肌醇六磷酸、β葡聚糖、β谷甾醇和橄欖葉提取物。已知灰樹花和香菇是多糖的良好來源并促進(jìn)T-細(xì)胞的功能。冬蟲夏草也富含多糖。β葡聚糖，另一類多糖，也已知是重要的免疫細(xì)胞刺激劑。
下表包括用靶細(xì)胞和粉末狀組合物的每種組合獲得的每分鐘計(jì)數(shù)的數(shù)據(jù)，以及每種粉末狀組合物在引發(fā)NK細(xì)胞介導(dǎo)的針對(duì)靶細(xì)胞的免疫應(yīng)答相對(duì)于在漂白小麥粉存在下對(duì)相同類型和濃度的靶細(xì)胞的NK細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答(以百分比增加測(cè)量)的功效。
實(shí)施例1表1靶細(xì)胞


值得注意的是，“TF+”表示的制劑只包括約一半(0.466667)“TF”表示的制劑中存在的轉(zhuǎn)移因子。因此，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員期望對(duì)應(yīng)于以“Bov-Av TF+US”和“Bov-Av TF+Intl”表示的產(chǎn)物誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性的數(shù)據(jù)稍微低于以Bov-Av TF表示的產(chǎn)物誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性。相反，這些數(shù)字高得多。實(shí)際上，看來對(duì)應(yīng)于“Bov-Av TF+US”和“Bov-AvTF+Intl”的數(shù)據(jù)約高10倍多。因此，已經(jīng)對(duì)表1進(jìn)行了適當(dāng)?shù)男Ｕ４送?，從隨后的實(shí)施例明顯看出，已經(jīng)進(jìn)行了進(jìn)一步的測(cè)試來評(píng)價(jià)和證明不同類型轉(zhuǎn)移因子的組合來引發(fā)所治療動(dòng)物中T-細(xì)胞應(yīng)答的能力。
列于表1中的初步結(jié)果顯示了將本發(fā)明的組合物給藥于患者可能會(huì)增強(qiáng)通過NK細(xì)胞實(shí)現(xiàn)的，患者針對(duì)一種或多種病原體的二次免疫應(yīng)答或延遲型超敏反應(yīng)至遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過由初乳衍生的轉(zhuǎn)移因子和蛋衍生的轉(zhuǎn)移因子單獨(dú)啟動(dòng)的NK細(xì)胞活性的程度。實(shí)際上，結(jié)果顯示了引入本發(fā)明教導(dǎo)的組合物可導(dǎo)致具有意想不到程度的協(xié)同作用的NK細(xì)胞活性的促進(jìn)。
鑒于這些結(jié)果，進(jìn)行了進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)來測(cè)定更寬范圍的本發(fā)明各方面的功效。
實(shí)施例2評(píng)價(jià)了各種轉(zhuǎn)移因子組合物，包括引入本發(fā)明教導(dǎo)的組合物對(duì)淋巴細(xì)胞在攻擊癌細(xì)胞中的活性的影響。圖3圖示了評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)方案。從健康捐獻(xiàn)者獲得血液，參照符號(hào)40。通過標(biāo)準(zhǔn)phycol-urographin方法，使用密度梯度p＝i，077g/cm3，從血液的其它成分中分離出單核細(xì)胞，包括天然殺傷細(xì)胞，參照符號(hào)42。然后將分離的單核細(xì)胞，或“效應(yīng)細(xì)胞”，以約60,000細(xì)胞/100μl培養(yǎng)基的稀釋度，以100μl的等份引入96孔微量滴定平板的孔中，如平板可以以COSTAR的商品名稱從Corning Incorporated of Corning，New York獲得，如參照符號(hào)44所示。
此后，將含有轉(zhuǎn)移因子的測(cè)試樣品或“添加物”，如以下表2至表5中所注釋的，引入每個(gè)孔中，所得到的測(cè)試樣品濃度為1mg/ml、0.1mg/ml、0.01mg/ml，0.001mg/ml、0.0001mg/ml和0.00001mg/ml，也如參照符號(hào)44所示。還使用了沒有包括轉(zhuǎn)移因子產(chǎn)物的對(duì)照。然后將微量滴定平板放入CO2-培養(yǎng)箱中溫育24小時(shí)和48小時(shí)，條件為5％CO2氣氛，100％濕度，和37℃的溫度。每個(gè)研究變量重復(fù)進(jìn)行三次。
溫育后，將約30,000個(gè)K-562腫瘤細(xì)胞(即，骨髓成紅血細(xì)胞增多性人白血病)或“靶細(xì)胞”引入每個(gè)孔中，如參照符號(hào)46所示，提供了效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞的比例約為2∶1。然后在上述相同的條件下，將效應(yīng)細(xì)胞和靶細(xì)胞在CO2培養(yǎng)箱中溫育18小時(shí)和24小時(shí)。
此后，如參照符號(hào)48，限定細(xì)胞培養(yǎng)物存活力的MTT方法，其使用可溶性的黃色溴化物，3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-四唑(MTT)，用于測(cè)定每個(gè)孔中殺滅的K-562腫瘤細(xì)胞的數(shù)量。該測(cè)試中，活細(xì)胞將MTT還原成MTT-甲(MTT-f)的不溶性紫-藍(lán)色胞內(nèi)晶體。不能生活的死細(xì)胞不能夠?qū)TT還原成MTT-f。因此，可以評(píng)價(jià)所獲得溶液的光學(xué)特性來表明各種含有轉(zhuǎn)移因子產(chǎn)物對(duì)效應(yīng)細(xì)胞殺滅K-562腫瘤細(xì)胞的能力的影響。更具體地，MTT轉(zhuǎn)化成MTT-f的強(qiáng)度反映出所研究細(xì)胞的脫氫酶活性的總的水平并通過所結(jié)合的發(fā)酵系統(tǒng)的活性來調(diào)節(jié)；例如，電子傳遞的呼吸鏈，等。
如本領(lǐng)域已知的，在5mg/ml Henks’鹽水溶液中制備該實(shí)施例中所用的MTT溶液。將相等體積等分的MTT溶液引入微量滴定平板的孔中，然后在上述相同的條件下，將平板在CO2培養(yǎng)箱中溫育約三小時(shí)至約四小時(shí)。然后將微量滴定平板在約1,500rpm下離心約5分鐘，除去上清液，并將150μl等份的二甲基亞砜(DMSO)引入孔中。
然后將微量滴定平板在室溫下靜置30分鐘，使甲晶體完全溶解。此后，使用多孔分光光度計(jì)(LABSYSTEMS MultiScan MSS 340，從Cambridge Scientific Products of Cambridge，Massachusetts可獲得)在波長(zhǎng)540nm下評(píng)價(jià)每個(gè)微量滴定板中的每個(gè)孔。
如參照符號(hào)50所示，然后將用分光光度計(jì)獲得的光密度(OD)測(cè)量值用于計(jì)算每個(gè)孔的細(xì)胞毒性指數(shù)(％)(CI(％))。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的公式進(jìn)行CI(％)的計(jì)算CI(％)＝[I-(ODe+t-ODe)/ODt]*100，
其中ODe+t是實(shí)驗(yàn)系列中的OD，ODe是只包括效應(yīng)細(xì)胞的孔中的OD，而ODt是只包括靶細(xì)胞的孔中的OD。
表224小時(shí)時(shí)的CI(％)

表324小時(shí)時(shí)CI的％增加(相對(duì)于自發(fā)的CI)

表448小時(shí)時(shí)的CI(％)

表548小時(shí)時(shí)CI的％增加(相對(duì)于自發(fā)的CI)

表2至表5所提供的數(shù)據(jù)證實(shí)了多數(shù)測(cè)試樣品(即，含有轉(zhuǎn)移因子的組合物)刺激了健康供體的淋巴細(xì)胞針對(duì)K-562腫瘤細(xì)胞的提高的(相對(duì)于自發(fā)性腫瘤細(xì)胞死亡)抗腫瘤活性和細(xì)胞毒性活性。
最大的刺激作用出現(xiàn)在48小時(shí)的結(jié)果中，刺激濃度的最有效范圍為約0.1mg/ml至約0.0001mg/ml。包括初乳衍生的轉(zhuǎn)移因子和蛋衍生的轉(zhuǎn)移因子兩者的測(cè)試樣品在給定的實(shí)驗(yàn)條件中再次顯示出最有效，裂解了多達(dá)80-98％的K-562腫瘤細(xì)胞。
另外，表5的結(jié)果表明不同類型轉(zhuǎn)移因子的組合，尤其是85∶15比例的TF+和蛋衍生的轉(zhuǎn)移因子，可能比從所治療動(dòng)物體內(nèi)消除不良細(xì)胞和病原體的其它治療過程更有效。更具體地，由于本發(fā)明者在等同的測(cè)試中認(rèn)識(shí)到，用白細(xì)胞介素-2治療獲得的最佳結(jié)果為對(duì)24小時(shí)溫育的K-562腫瘤細(xì)胞76％的細(xì)胞毒性(等于相對(duì)于該細(xì)胞自發(fā)性死亡的322％增加)和對(duì)48小時(shí)溫育的K-562腫瘤細(xì)胞88％的細(xì)胞毒性(等于相對(duì)于該細(xì)胞自發(fā)性死亡的389％增加)。
實(shí)施例3進(jìn)行了另一證實(shí)性測(cè)試來證明上述結(jié)果并評(píng)價(jià)更多種本發(fā)明組合物對(duì)誘導(dǎo)NK細(xì)胞和其它單核細(xì)胞殺滅K-562腫瘤細(xì)胞的作用。在實(shí)施例3的測(cè)試中使用了實(shí)施例2中所述的相同實(shí)驗(yàn)方案。
每種包括蛋粉和牛初乳粉的多種組合物制劑溫育24和48小時(shí)的結(jié)果列于表6至表9中。
表624小時(shí)時(shí)的CI(％)

表724小時(shí)時(shí)CI的增加％(相對(duì)于自發(fā)的CI)

表848小時(shí)時(shí)的CI(％)

表948小時(shí)時(shí)CI的％增加(相對(duì)于自發(fā)的CI)

表6至表9的數(shù)據(jù)，尤其是表6和表8的數(shù)據(jù)，顯示了當(dāng)根據(jù)本發(fā)明的組合物中存在較多的初乳衍生的轉(zhuǎn)移因子時(shí)(例如，85∶15)，初始的(24小時(shí)測(cè)試)應(yīng)答高于由包括較少初乳衍生的轉(zhuǎn)移因子的組合物產(chǎn)生的應(yīng)答，但是隨著時(shí)間沒有顯著增強(qiáng)(48小時(shí)測(cè)試)。這些結(jié)果表明可以相對(duì)快地發(fā)生對(duì)牛衍生的轉(zhuǎn)移因子的無反應(yīng)性(即，降低的敏感性)。
包括更多蛋衍生的轉(zhuǎn)移因子的組合物(例如，50∶50和30∶70)提供了類似的短期結(jié)果(24小時(shí)測(cè)試)，但是提供了更好的長(zhǎng)期(48小時(shí)測(cè)試)結(jié)果。
這些結(jié)果支持組合不同類型的轉(zhuǎn)移因子提供了協(xié)同效應(yīng)的理論。它們還表明了可以調(diào)節(jié)組合物中不同類型轉(zhuǎn)移因子的比例來提供理想的結(jié)果。
實(shí)施例4表10CI(％)

實(shí)施例4比較了以上實(shí)施例2和實(shí)施例3中所獲得的數(shù)據(jù)來說明在TF+中包括另外的成分，主要是多糖，提高了引入本發(fā)明教導(dǎo)的組合物誘導(dǎo)NK細(xì)胞和其它單核血細(xì)胞殺滅K-562腫瘤細(xì)胞并因此引發(fā)二次免疫應(yīng)答的效率。
值得注意的是，48小時(shí)測(cè)試中，在其中包括多糖，在所有高于0.0001mg/ml稀釋度下細(xì)胞毒性大于相應(yīng)的缺少多糖的組合物。因此，認(rèn)為多糖提高了兩種或多種類型的轉(zhuǎn)移因子的協(xié)同作用，或在引發(fā)二次免疫應(yīng)答中提供另外的協(xié)同作用。
盡管以上的描述包含許多細(xì)節(jié)，但是這些不應(yīng)認(rèn)為構(gòu)成對(duì)本發(fā)明范圍的限制，而僅僅是提供了一些本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案的說明。同樣地，可以設(shè)計(jì)其它實(shí)施方案而不脫離本發(fā)明的精神或范圍?？梢越Y(jié)合使用不同實(shí)施方案的特征。因此，本發(fā)明的范圍只通過附加的權(quán)利要求及其法律等價(jià)物，而不是通過之前的描述來表明和限定。因此包括對(duì)在此公開的落入權(quán)利要求的意思和范圍內(nèi)的本發(fā)明的所有添加、刪除和修改。
權(quán)利要求
1.啟動(dòng)患者中T-細(xì)胞介導(dǎo)的應(yīng)答的組合物，包括第一種類型的轉(zhuǎn)移因子；和另一種，第二種類型的轉(zhuǎn)移因子。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述的第一種類型的轉(zhuǎn)移因子包括哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子。
3.權(quán)利要求2的組合物，其中所述的哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子包括初乳衍生的產(chǎn)物。
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的組合物，其中所述的第二種類型的轉(zhuǎn)移因子包括非哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子。
5.權(quán)利要求4的組合物，其中所述的非哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子包括鳥轉(zhuǎn)移因子。
6.權(quán)利要求5的組合物，其中所述的鳥轉(zhuǎn)移因子包括蛋衍生的產(chǎn)物。
7.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的組合物，其中調(diào)節(jié)所述的第一種類型的轉(zhuǎn)移因子與所述的第二種類型的轉(zhuǎn)移因子的比例以在所治療的動(dòng)物中提供即時(shí)免疫應(yīng)答。
8.權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的組合物，其中調(diào)節(jié)所述的第一種類型的轉(zhuǎn)移因子與所述的第二種類型的轉(zhuǎn)移因子的比例以在所治療的動(dòng)物中提供延長(zhǎng)的免疫應(yīng)答。
9.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的組合物，其中所述的第一種和第二種類型的轉(zhuǎn)移因子的總重包括多達(dá)約99％重量的所述的第一種類型的轉(zhuǎn)移因子，和少至約1％重量的所述的第二種類型的轉(zhuǎn)移因子。
10.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的組合物，其中所述的第一種和第二種類型的轉(zhuǎn)移因子的總重包括約85％重量的所述的第一種類型的轉(zhuǎn)移因子，和約15％重量的所述的第二種類型的轉(zhuǎn)移因子。
11.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的組合物，其中所述的第一種和第二種類型的轉(zhuǎn)移因子的總重包括約60％重量的所述的第一種類型的轉(zhuǎn)移因子，和約40％重量的所述的第二種類型的轉(zhuǎn)移因子。
12.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的組合物，包括按重量計(jì)約等量的所述的第一種類型的轉(zhuǎn)移因子和所述的第二種類型的轉(zhuǎn)移因子。
13.權(quán)利要求1-12任一項(xiàng)的組合物，進(jìn)一步包括多糖。
14.權(quán)利要求1-13任一項(xiàng)的組合物，其中通過第一種類型的來源動(dòng)物在對(duì)所述第一種類型的來源動(dòng)物所暴露的第一套抗原物質(zhì)的T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答中產(chǎn)生所述的第一種類型的轉(zhuǎn)移因子，和通過第二種類型的來源動(dòng)物在對(duì)所述第二種類型的來源動(dòng)物所暴露的第二套抗原物質(zhì)的T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答中產(chǎn)生所述的第二種類型的轉(zhuǎn)移因子，所述第一套抗原物質(zhì)和所述第二套抗原物質(zhì)包括至少一種非共同的抗原物質(zhì)。
15.形成根據(jù)權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的組合物的方法，包括將所述的第一種類型的轉(zhuǎn)移因子和所述的第二種類型的轉(zhuǎn)移因子組合。
16.提高或引發(fā)患者中T-細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的方法，包括將根據(jù)權(quán)利要求1-14任一項(xiàng)的組合物給藥于患者。
17.降低用于加工蛋衍生產(chǎn)物的設(shè)備的清洗頻率的方法，包括在將蛋衍生產(chǎn)物引入裝膠囊設(shè)備之前或期間將初乳衍生產(chǎn)物與蛋衍生產(chǎn)物組合。
18.權(quán)利要求17的方法，其中所述的組合包括組合約等重的所述初乳衍生產(chǎn)物和蛋衍生產(chǎn)物。
19.權(quán)利要求17的方法，其中所述的組合包括將以重量計(jì)，比蛋衍生產(chǎn)物多量的所述初乳衍生產(chǎn)物與蛋衍生產(chǎn)物組合。
20.權(quán)利要求17的方法，其中所述的組合包括將以重量計(jì)，比蛋衍生產(chǎn)物少量的所述初乳衍生產(chǎn)物與蛋衍生產(chǎn)物組合。
21.權(quán)利要求17-20任一項(xiàng)的方法，進(jìn)一步包括將蛋衍生產(chǎn)物脫脂。
22.權(quán)利要求17-21任一項(xiàng)的方法，進(jìn)一步包括將至少一種多糖與蛋衍生產(chǎn)物和所述初乳衍生產(chǎn)物中的至少一種組合。
23.權(quán)利要求17-22任一項(xiàng)的方法，其中所述組合包括將所述初乳衍生產(chǎn)物和蛋衍生產(chǎn)物與所述的包括轉(zhuǎn)移因子的初乳衍生產(chǎn)物和蛋衍生產(chǎn)物中的至少一種組合。
全文摘要
引發(fā)患者中T－細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的組合物包括來自至少兩種不同類型來源動(dòng)物的轉(zhuǎn)移因子。例如，該組合物可包括哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子和非哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子。例如，該組合物包括含有哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子的初乳衍生產(chǎn)物和含有非哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)移因子的蛋衍生產(chǎn)物的組合。此外，蛋衍生產(chǎn)物基本上無脂肪。還公開了形成組合物的方法和引發(fā)已經(jīng)用組合物治療的患者中T－細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的方法。
文檔編號(hào)A61K39/395GK1901925SQ200480030905
公開日2007年1月24日 申請(qǐng)日期2004年9月15日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月15日
發(fā)明者D·里森比, W·J·漢南, F·J·道爾蒂 申請(qǐng)人:4Life研究有限公司