專利名稱：酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑與抗癌藥物組合在制備治療腸癌藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑藥物的新用途，具體涉及酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑聯(lián)合抗癌藥物在治療腸癌中的應(yīng)用，其中所述酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑為酪酸梭菌和雙歧桿菌為主要藥物活性成分制成的活菌制劑。
背景技術(shù)：
腸癌包括小腸癌和大腸癌，大腸癌也稱結(jié)腸直腸癌或結(jié)直腸癌。腸癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅人類的健康。全世界腸癌的發(fā)病率處于惡性腫瘤的第三位，在美國(guó)是因癌癥死亡的第二大死因。在我國(guó)，隨著生活水平的提高，飲食結(jié)構(gòu)的變化，腸癌的發(fā)病率呈逐年升高的趨勢(shì)，近25 年來(lái)，大腸癌已成為我國(guó)增長(zhǎng)率最快的惡性腫瘤，為第五位惡性腫瘤。我國(guó)的腸癌發(fā)病率呈明顯上升趨勢(shì)，而且經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)的地區(qū)似乎上升速度更快，這一事實(shí)應(yīng)該引起我們足夠的重視。手術(shù)治療作為大腸癌治療的首選方法，但其5年生存率僅在50%左右，手術(shù)后再配合放療、化療、免疫治療和中藥治療等。中藥雖然副作用小，但效果不理想。以5-FU(5-氟尿嘧啶)+LV(甲酰四氫葉酸)為基礎(chǔ)的化療方案是目前大腸癌治療的經(jīng)典方案，主要包括FOLFOX (奧沙利鉬+5-氟尿嘧啶+亞葉酸鈣)和F0LFIRI (伊立替康+5-氟尿嘧啶+亞葉酸鈣)。本專利中涉及的環(huán)磷酰胺為廣譜抗癌藥物，對(duì)多種惡性腫瘤均有作用。放療、化療、免疫治療雖然效果明顯，但副作用非常大，患者很難耐受，有的患者甚至死于副作用。因此，尋找能預(yù)防腸癌發(fā)生且無(wú)毒副作用的藥品、保健食品等迫在眉睫，如早期預(yù)防結(jié)或直腸息肉、血吸蟲病、細(xì)菌性痢疾、阿米巴、克羅恩病及潰瘍性結(jié)腸炎等易發(fā)展為腸癌的腸道慢性疾病癌變的治療藥物。腸道菌群的變化，或者說(shuō)菌群平衡失調(diào)是引發(fā)腸道疾病的極其重要的原因，例如，腹瀉、腸炎、腸癌等，大多與腸道菌群平衡失調(diào)有密切的關(guān)系。微生態(tài)制劑主要是根據(jù)微生態(tài)學(xué)原理，利用正常微生物群或促進(jìn)物研制的制劑，可補(bǔ)充或充實(shí)微生物群落，維持或調(diào)整微生態(tài)平衡，達(dá)到防病治病的目的。酪酸梭菌是人的正常腸道菌之一，是一種安全、有效、沒有毒副作用的益生菌，通過研究發(fā)現(xiàn)酪酸梭菌預(yù)防和治療腸癌的作用機(jī)制主要為以下幾個(gè)方面:①分泌酪酸，營(yíng)養(yǎng)腸道，修復(fù)粘膜；②分泌酪酸，調(diào)控基因表達(dá)；③抑制腸道有害菌，消除腸道毒素，預(yù)防術(shù)后感染；④產(chǎn)生激肽酶，溶解癌組織；⑤提高機(jī)體免疫力；⑥消除炎癥恢復(fù)腸道菌群平衡，建立腸道生物屏障。雙歧桿菌是構(gòu)成腸道膜菌群和定植抗力的最主要成分，對(duì)維持腸道的微生態(tài)平衡起重要作用。它在體內(nèi)具有抗感染、抗腫瘤、免疫賦活、延緩衰老和降血脂等多種生理功能。雙歧桿菌作為人體有益細(xì)菌，其數(shù)量是衡量人體健康的一個(gè)標(biāo)志，因此，它一直是研究的熱點(diǎn)。近年來(lái)，關(guān)于雙歧桿菌抗腫瘤作用機(jī)制的報(bào)道較多，主要有如下幾點(diǎn):①清除致癌物。雙歧桿菌磷壁酸可與亞硝胺或亞硝基胍結(jié)合，抑制其致癌活性；②生物拈抗作用。雙歧桿菌可抑制結(jié)腸中腐敗菌的生長(zhǎng)，減少致癌物的產(chǎn)生調(diào)節(jié)免疫作用。雙歧桿菌可激活體內(nèi)巨噬細(xì)胞和淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞的吞噬作用，并產(chǎn)生一定量的細(xì)胞毒性效應(yīng)分子和介質(zhì)，其中TNF-a可直接殺死腫瘤細(xì)胞，抑制腫瘤血管的形成，破壞腫瘤血管，導(dǎo)致腫瘤缺血壞死；④誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡或誘導(dǎo)細(xì)胞成熟分化誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞老化或異質(zhì)化，促進(jìn)腫瘤壞死因子和巨噬細(xì)胞的識(shí)別和捕殺，達(dá)到清除腫瘤的目的促進(jìn)腸道蠕動(dòng)，減少腸粘膜與致癌物質(zhì)的接觸時(shí)間，促進(jìn)致癌物的排泄，維持宿主基因組的穩(wěn)定性，降低腫瘤細(xì)胞的增殖活性。酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑為一種已經(jīng)上市應(yīng)用的藥物，適用于急性非特異性感染引起的急性腹瀉、抗生素、慢性肝病等多種原因引起的腸道菌群失調(diào)及相關(guān)的急慢性腹瀉和消化不良。本發(fā)明嘗試使用酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑和抗腸癌藥物結(jié)合用于腸癌的治療，意外的發(fā)現(xiàn)其具有協(xié)同增效作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑與抗癌藥物組合在制備治療腸癌藥物中的應(yīng)用，即在使用抗癌藥物的基礎(chǔ)上，聯(lián)合酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑，達(dá)到治療腸癌的目的；酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑與抗癌藥物組合具有更加有效的治療腸癌的作用，延長(zhǎng)腸癌患者壽命，提高腸癌患者的生活質(zhì)量。本發(fā)明所述酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑的主要藥物成分為酪酸梭菌和雙歧桿菌。其中，所述酪酸梭菌選自但不限于酪酸梭菌(Clostridium butyricum)、CGMCC、保存編號(hào)0313.1;雙歧桿菌選自但不限于雙歧桿菌(bifidobacterium)、CGMCC、保存編號(hào)0313.2，兩者均為現(xiàn)有技術(shù)。本發(fā)明所述酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑，是以有效劑量的酪酸梭菌和雙歧桿菌作為主要藥物活性成分，根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)制成的適合于臨床上使用的劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液體制劑、其他液體制劑或栓劑等臨床所需劑型。本發(fā)明所指有效劑量是指以酪酸梭菌和雙歧桿菌根據(jù)上面所述作為主要藥物活性成分制成的最終活菌制劑包含的酪酸梭菌活菌數(shù)不能低于lX107CFU/g，一般在I X 108CFU/g以上；雙歧桿菌活菌數(shù)不能低于I X 106CFU/g 一般在I X 108CFU/g以上。酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑包含以酪酸梭菌和雙歧桿菌為主要活性成分的藥品、保健食品、飲品。本發(fā)明所述酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑可通過口服、灌腸或注入組織內(nèi)等方式給藥。本發(fā)明所述抗癌藥物，選自任何一種適用于腸癌的藥物，優(yōu)選環(huán)磷酰胺和異環(huán)磷酰胺，它們都屬于現(xiàn)有技術(shù)， 可以根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)制備和使用。本發(fā)明通過給予腸癌動(dòng)物酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑和治療腸癌的抗癌藥物，意外的發(fā)現(xiàn)其對(duì)腸癌的治療有協(xié)同增效作用。本發(fā)明還包括，上述兩種藥物的使用方法，其中酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑和抗癌藥物在聯(lián)合治療腸癌時(shí)可同時(shí)、先后給予。本友明的使用方法還包括，酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑聯(lián)合抗癌藥物預(yù)防和治療腸道慢性疾病及癌變，可在腸癌手術(shù)后應(yīng)用該組合藥物，促進(jìn)手術(shù)創(chuàng)面的愈合、預(yù)防手術(shù)創(chuàng)面的感染和抗炎、預(yù)防腸癌復(fù)發(fā)和擴(kuò)散、提高腸癌患者機(jī)體免疫力。根據(jù)本發(fā)明的研究成果，本發(fā)明提供一種組合包裝，所述組合包裝中包括至少一種酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑和至少一種抗腸癌藥物制劑。本發(fā)明的組合包裝，其中所述酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑，是以有效劑量的酪酸梭菌和雙歧桿菌作為主要藥物活性成分，根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)制成的適合于臨床上使用的劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑，口服液體制劑、或栓劑等臨床所需劑型。如:420mg /粒的口服酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌膠囊，500mg /袋的口服酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌散(有效期內(nèi)含酪酸梭菌活菌不低于1.0XlO7CFU / g，含雙歧桿菌活菌粉不低于
1.0XlO6CFU / g).
本發(fā)明的組合包裝，其中所述抗腸癌藥物制劑選白環(huán)磷酰胺制劑和異環(huán)磷酰胺制齊U，其為根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)制成的適合于臨床上使用的劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液體制劑、注射制劑或栓劑等臨床所需劑型。如:0。05g /支，O。Ig /支，O。2g /支的環(huán)磷酰胺制劑和600mg /支:500mg /支，Ig /支的異環(huán)磷酰胺制劑。本發(fā)明的組合包裝，其中可以包括一次使用劑量的以上兩種制劑，或I天使用劑量的兩種制劑，也可以包括一個(gè)療程使用劑量的兩種制劑，以使用方便快捷為目標(biāo)。本發(fā)明組合包裝的使用方法包括，給患者按照常規(guī)方法給予環(huán)磷酰胺制劑，在整個(gè)療程的治療過程中，按照常規(guī)方法持續(xù)給予患者酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑。如環(huán)磷酰胺的使用如下:成人常用量:單藥?kù)o脈注射按體表面積每次500 IOOOmg / m2，力口生理鹽水20 30ml，靜脈注射，每周I次，連用2次，休息I 2周重復(fù)。聯(lián)合用藥500 600mg / m2。兒童常用量:靜脈注射每次10 15mg / kg,加生理鹽水20ml稀釋后緩慢注射，每周I次，連用2次，休息I 2周重復(fù)。也可肌內(nèi)注射。如酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌膠囊的使用如下:1、成人口服，一次3粒，一天2次，用涼開水送服。連用3— 7天；或連用14一21天，或遵醫(yī)囑。2、兒童口服，一次I粒，一天2次，或遵醫(yī)囑。
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本發(fā)明的研究采用酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑與環(huán)磷酰胺聯(lián)合治療腸癌，通過試驗(yàn)證明:采用酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑聯(lián)合環(huán)磷酰胺治療效果明顯優(yōu)于單獨(dú)使用酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑和單獨(dú)使用環(huán)磷酰胺治療。本發(fā)明優(yōu)先采用酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑與環(huán)磷酰胺聯(lián)合治療腸癌，取得了較好的效果。國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)尚未見酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑與環(huán)磷酰胺合用治療腸癌的報(bào)道，此方法有望成為一種治療腸癌的新方法。


圖1為酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑聯(lián)合環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠腸癌生長(zhǎng)的抑制作用圖，其中:1、生理鹽水對(duì)照組2、酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑給藥組3、環(huán)磷酰胺給藥組4、酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑聯(lián)合環(huán)磷酰胺給藥組
具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但不作為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例1，組合包裝其中包括一天用量的酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌膠囊，以及一次用量的注射用環(huán)磷酰胺。實(shí)施例2，
組合包裝其中包括一周用量的酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌膠囊，以及一次用量的注射用環(huán)磷酰胺。實(shí)施例3，組合包裝其中包括兩周用量的酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌膠囊，以及一次用量的注射用環(huán)磷酰胺。實(shí)施例4，組合包裝其中包括一個(gè)月用量的酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌膠囊，以及一次用量的注射用環(huán)磷酰胺。實(shí)施例5，組合包裝其中包括三天用量的酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌膠囊，以及一次用量的注射用環(huán)磷酰胺。療效觀察實(shí)驗(yàn)例酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑聯(lián)合環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠腸癌生長(zhǎng)的影響1、受試藥品:酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑:含酪酸梭菌IXlO8CFU / g，雙歧桿菌
IX IO10CFU / g;樣品密閉包裝置4°C冰箱保存。取Ig酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑溶于IOml無(wú)菌生理鹽水的三角燒瓶中，內(nèi)放玻璃珠數(shù)粒，搖10-20分鐘混勻，每日用前現(xiàn)配。環(huán)磷酰胺:注射用環(huán)磷酰胺IOOmg /支。取200mg環(huán)磷酰胺溶于50ml生理鹽水中，配成4mg / ml的環(huán)磷酰胺溶液，無(wú)菌分裝8支，每日用I支。2、試驗(yàn)動(dòng)物:Balb / c小鼠，SPF級(jí)，體重:18±2克，四周齡，雌性；由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心繁育場(chǎng)提供，合格證:京動(dòng)許字017。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào):syxk (京)2009-0016。3、試驗(yàn)方法:3.1瘤株及實(shí)體腫瘤移植:腸癌細(xì)胞(C26)從液氮內(nèi)取出，37°C迅速解凍復(fù)蘇后，接種于Balb / c小鼠的右側(cè)腋窩皮下，2周后移植腫瘤生長(zhǎng)達(dá)1.5—2.0cm直徑左右，處死小鼠，在無(wú)菌條件下，剝離腫瘤按常規(guī)方法傳代。3.2腫瘤接種:腫瘤生長(zhǎng)良好的荷瘤鼠處死后剝離腫瘤，去除壞死組織，挑選生長(zhǎng)良好的腫瘤組織，切割成2_直徑大小的組織塊，用玻璃勻漿器研磨腫瘤，過200目細(xì)胞篩制成癌細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)并配置成2X IO7的細(xì)胞原液,每只小鼠腋窩皮下接種0.2ml (4X IO6細(xì)胞)。3.3將試驗(yàn)小鼠隨機(jī)分為4組，每組10只。(I)對(duì)照組:在接種后的第二天開始，于瘤組織內(nèi)注射生理鹽水0.2ml/只，連續(xù)注射7天。(2)酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑給藥組:在接種后的第二天開始，于瘤組織內(nèi)注射酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑溶液(其中酪酸梭菌IXlO7CFU / ml，雙歧桿菌I X IO9CFU / ml)0.2ml / 只，連續(xù)注射 7 天；(3)環(huán)磷酰胺給藥組:在接種后的第二天開始，于腹腔注射環(huán)磷酰胺溶液(4mg /ml)0.2ml /只，連續(xù)注射7天；(4)酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑聯(lián)合環(huán)磷酰胺給藥組:在接種后的第二天開始，于瘤組織內(nèi)注射酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑(其中酪酸梭菌I X IO7CFU / ml,雙歧桿菌I X IO9CFU / ml)0.2ml /只，腹腔注射環(huán)磷酰胺溶液(4mg / ml)0.2ml /只，連續(xù)注射7天。實(shí)驗(yàn)第14天，稱量每組實(shí)驗(yàn)小鼠的腫瘤重量并按腫瘤重量計(jì)算抑瘤率。
權(quán)利要求
1.酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑與抗癌藥物組合在制備治療腸癌藥物中的應(yīng)用。
2.按權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，其中酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑的主要藥物成分為酪酸梭菌和雙歧桿菌。
3.按權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述抗癌藥物選白環(huán)磷酰胺。
4.按權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑選白:片劑、膠囊劑、散劑、液體制劑、栓劑、灌腸劑。
5.按權(quán)利要求 1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑和抗癌藥物在聯(lián)合治療腸癌時(shí)可同時(shí)、先后給予這兩種藥物。
6.按權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，患者按照常規(guī)方法給予環(huán)磷酰胺制劑，在整個(gè)療程的治療過程中，按照常規(guī)方法持續(xù)給予患者酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑。
7.按權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括預(yù)防腸道慢性疾病癌變藥物中的應(yīng)用，以及在制備腸癌手術(shù)后輔助治療組合物中的應(yīng)用，包括促進(jìn)手術(shù)創(chuàng)面的愈合、預(yù)防手術(shù)創(chuàng)面的感染和抗炎、預(yù)防腸癌復(fù)發(fā)和擴(kuò)散、提高腸癌患者機(jī)體免疫力。
8.一種組合包裝，其特征在于，所述組合包裝中包括至少一種酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑和至少一種抗腸癌藥物制劑。
9.按權(quán)利要求8所述的組合包裝，其特征在于，其中所述酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑，是以有效劑量的酪酸梭菌和雙歧桿菌作為主要藥物活性成分，根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)制成的適合于臨床上使用的劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑，口服液體制劑、或栓劑等臨床所需劑型。如:420mg /粒的口服酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌膠囊，500mg /袋的口服酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌散。
其中所述抗腸癌藥物制劑選白環(huán)磷酰胺制劑和異環(huán)磷酰胺制劑，其為根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)制成的適合于臨床上使用的劑型，如片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液體制劑、注射制劑或栓劑等臨床所需劑型。如:0.05g /支，0.1g /支，0.2g /支的環(huán)磷酰胺制劑和600mg /支:500mg /支，Ig /支的異環(huán)磷酰胺制劑。
10.按權(quán)利要求8所述的組合包裝，其特征在于，其中可以包括一次使用劑量的兩種制齊U，或I天使用劑量的兩種制劑，也可以包括一個(gè)療程使用劑量的兩種制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑與抗癌藥物組合在制備治療腸癌藥物中的應(yīng)用，是在使用抗癌藥物的基礎(chǔ)上，聯(lián)合酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑，達(dá)到治療腸癌的目的；酪酸梭菌、雙歧桿菌二聯(lián)活菌制劑與抗癌藥物組合具有更加有效的治療腸癌的作用，延長(zhǎng)腸癌患者壽命，提高腸癌患者的生活質(zhì)量。
文檔編號(hào)A61K35/74GK103202861SQ201310129539
公開日2013年7月17日 申請(qǐng)日期2013年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月15日
發(fā)明者何詢, 于萍, 何社輝, 竇娟 申請(qǐng)人:山東科興生物制品有限公司