專(zhuān)利名稱(chēng)：一種重組人干擾素α2b制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種可直接注射用的重組人干擾素a 2b制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
干擾素屬蛋白質(zhì)類(lèi)物質(zhì)，可廣泛應(yīng)用于治療各種疾病。但是蛋白質(zhì)類(lèi)物質(zhì)在水性溶液中容易變性或者喪失其生物活性，因此通常將其制成凍干制劑或通過(guò)添加穩(wěn)定劑將其制成液體制劑。由于凍干制劑的凍干工藝復(fù)雜且操作費(fèi)用高，病人使用之前還需要復(fù)溶，因此從經(jīng)濟(jì)和使用便捷性方面考慮，更趨向于研制可長(zhǎng)期穩(wěn)定保存干擾素液體制劑。重組人干擾素a 2b屬于干擾素的一種，被廣泛的應(yīng)用于急慢性病毒性肝炎(乙型、丙型)、尖銳濕疣、毛細(xì)胞性白血病、慢性粒細(xì)胞白血病等的治療。目前將其制成液體制劑的研究主要有以下報(bào)道:名稱(chēng)為“穩(wěn)定的α干擾素水溶液制劑”(CN1160355A)的中國(guó)專(zhuān)利文獻(xiàn)公開(kāi)了以下方案:采用穩(wěn)定劑(多乙氧基醚80)、螯合劑(乙二胺四乙酸鹽)、張力劑(氯化鈉)、抗菌防腐劑(間-甲酚)、緩沖劑和干擾素a -2b制成pH范圍在4.5 7.1的重組人干擾素液體制劑。名稱(chēng)為“一種穩(wěn)定的重組人干擾素制劑”(CN1255377A)的中國(guó)專(zhuān)利文獻(xiàn)公開(kāi)了以下方案:采用PH5.0 7.5的檸檬酸鹽緩沖液，氯化鈉濃度為0.4-1.0%，然后加入助劑物質(zhì)，即濃度為0.1-1%。的EDTA、制劑中含濃度為1-20μ 1/lOOml的Tween80、制劑中含保護(hù)劑濃度為0.5-1.8%。的對(duì)羥基苯甲酸甲酯和濃度為0.05-0.18%。的對(duì)羥基苯甲酸丙酯，同時(shí)通以無(wú)菌過(guò)濾的氮?dú)?，使溶液中氧氣含量低?.25ppm，最后加入重組人α-干擾素蛋白100-600萬(wàn)單位/毫升,配置成水針制劑。以及，名稱(chēng)為“一種穩(wěn)定的干擾素水溶液”(CN1256148A)的中國(guó)專(zhuān)利文獻(xiàn)公開(kāi)的方案:該干擾素由α干擾素、穩(wěn)定劑、等滲劑、ΡΗ4.5-9.0范圍的緩沖體系、非離子表面活性齊IJ (聚氧乙烯失水山梨醇單油酸酯)、制劑用水配置而成，不含防腐劑。上述三種方案中，雖然都能夠制取得到穩(wěn)定的干擾素液體制劑，但其所采用的方案中均不同程度的需要添加表面活性劑和/或防腐劑。而表面活性劑和防腐劑的添加會(huì)帶來(lái)安全風(fēng)險(xiǎn)，如表面活性劑:聚山梨酯80，會(huì)發(fā)引發(fā)過(guò)敏反應(yīng)，產(chǎn)生皮疹、蕁麻疹、呼吸抑制、心跳過(guò)速、溶血等不良反應(yīng)，發(fā)生率約為5% 40% ;丙二醇、聚乙二醇和苯甲醇也都均可引起溶血現(xiàn)象。另外，防腐劑雖然能抑菌生長(zhǎng)，但其帶來(lái)的安全風(fēng)險(xiǎn)非常大，兒童用藥和靜脈注射中都已明確規(guī)定禁用防腐劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的首要目的是提供一種可直 接注射用的重組人干擾素a 2b制劑，不含有表面活性劑和防腐劑，且穩(wěn)定性好、存儲(chǔ)時(shí)間長(zhǎng)，使用風(fēng)險(xiǎn)低。其采取的方案為:
一種重組人干擾素a 2b制劑，該制劑是由以下組分和制劑用水構(gòu)成:
重組人干擾素 a 2b1.0Xl(fIU/inl~6X106IlI/ml 鱗酸鹽緩沖液 5.0mmol/L 20.0 mmol./L 乙二胺四乙酸二鈉鹽 0.lmg/ml 1.0 mg/ml 組氣酸 1.0mg/ml 5.0mg/ml 氯化鈉 8.9 9.lmg/ml
該制劑的pH值為6.0 7.5。 本發(fā)明中通過(guò)長(zhǎng)期對(duì)重組人干擾素α 2b穩(wěn)定性、活性實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，按上述方案配制的重組人干擾素a 2b制劑，可在不加入表面活性劑和防腐劑的同時(shí)，能夠在2 8°C條件下能穩(wěn)定重組人干擾素a 2b有效期2年以上，在25°C條件下能保持有效期6個(gè)月以上，在振搖和反復(fù)凍融等破壞性試驗(yàn)中也能很好的保持重組人干擾素a 2b活性和穩(wěn)定性；提高重組人干擾素a 2b制劑使用的安全性。另外本發(fā)明中也不需要采用人血清白蛋白作為穩(wěn)定劑，防止血液制品帶來(lái)的污染風(fēng)險(xiǎn)，降低醫(yī)藥的生產(chǎn)成本。本發(fā)明的另一目的是提供該重組人干擾素a 2b制劑的制備方法，該方法包括以下步驟:S1:按制劑的原料比稱(chēng)取各原料藥品待用；S2:將稱(chēng)取好的氯化鈉配置成氯化鈉水溶液，然后將稱(chēng)取好的磷酸鹽緩沖液、乙二胺四乙酸二鈉鹽、組氨酸按順序依次加入氯化鈉水溶液中溶解混勻配制成穩(wěn)定劑母液，磷酸鹽緩沖液、乙二胺四乙酸二鈉鹽和組氨酸各原料的加入是分別在前一原料完全溶解混勻后再加入后一原料進(jìn)行溶解混勻；S3:將稱(chēng)取好的重組人干擾素a 2b加入S2中得到的穩(wěn)定劑母液中，混勻后再加制劑用水進(jìn)行定容，使得混合溶液中各原料組分的濃度與制劑的要求相一致，再將定容后的溶液經(jīng)濾膜過(guò)濾除菌后即可制得該制劑。通過(guò)上述操作方法依次溶解各原料和經(jīng)濾膜過(guò)濾除菌后即可制得該能夠穩(wěn)定儲(chǔ)存且保持重組人干擾素a 2b活性的制劑。具體實(shí)施時(shí)，優(yōu)選采用磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉配制磷酸鹽緩沖液，以取得最佳效果?？筛鶕?jù)制劑的PH值來(lái)選取磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉的比例進(jìn)行配置。為了獲取更好的儲(chǔ)存穩(wěn)定性和臨床治療效果，本申請(qǐng)優(yōu)選采用以下方案生產(chǎn)該重組人干擾素a 2b制劑，亦即:該制劑是由以下組分和制劑用水構(gòu)成，
重組人干擾素 a2b1.0X 106-6.0X 106IU/ml
磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉15.0 mmol/L
乙二胺四乙酸二鈉鹽0.5mg/ml
組氨酸2.0mg/ml氯化鈉9.0mg/ml
該制劑的pH值為7.0。該實(shí)施方案相對(duì)于實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的其它技術(shù)參數(shù)方案在制劑的穩(wěn)定性、重組人干擾素a 2b活性以及臨床治療效果上都有顯著的提升。


圖1是本發(fā)明制得的重組人干擾素a 2b的蛋白純度檢測(cè)結(jié)果。
具體實(shí)施例方式以下通過(guò)具體實(shí)施例來(lái)對(duì)本申請(qǐng)作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但以下實(shí)施例不應(yīng)構(gòu)成限制本發(fā)明保護(hù)范圍的理由。其中實(shí)施例1 4為本申請(qǐng)的具體實(shí)施方案，實(shí)施例5為利用本發(fā)明公開(kāi)的制備方法制取與現(xiàn)有技術(shù)中重組人干擾素a 2b制劑組分相一致的重組人干擾素a 2b制劑的實(shí)施方案，實(shí)施例6是對(duì)實(shí)施例1 5中制取得到的重組人干擾素a 2b制劑在不同條件下的穩(wěn)定性進(jìn)行測(cè)試的實(shí)驗(yàn)，實(shí)施例7為實(shí)施例4中制取得到的重組人干擾素a 2b制劑在不同條件性的蛋白純度進(jìn)行檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)。實(shí)施例1取氯化鈉9g,加入制劑用水500ml溶解混勻，按順序依次加入5mmolpH6.0磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉，IOOmg乙二胺四乙酸二鈉鹽，Ig組氨酸分別進(jìn)行溶解混勻得到穩(wěn)定劑母液；然后再量取重組人干擾素a2bl.0X IO6IU,緩慢加入穩(wěn)定劑母液中，混勻，加制劑用水定容至1000ml，混勻；最后將配制好的含有重組人干擾素a 2b的溶液用濾膜過(guò)濾除菌后，即可得到重組人干擾素a 2b制劑。實(shí)施例2取氯化鈉9g,加入制劑用水500ml溶解混勻，按順序依次加入IOmmol pH6.5磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉，300mg乙二胺四乙酸二鈉鹽，2g組氨酸分別進(jìn)行溶解混勻得到穩(wěn)定劑母液；然后再量取重組人干擾素a 2b3.0 X IO6IU,緩慢加入穩(wěn)定劑母液中，混勻，加制劑用水定容至1000ml，混勻；最后將配制好的含有重組人干擾素a 2b的溶液用濾膜過(guò)濾除菌后，即可得到重組人干擾素a 2b制劑。實(shí)施例3取氯化鈉9g,加入制劑用水500ml溶解混勻，按順序依次加入15mmol pH7.0磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉，500mg乙二胺四乙酸二鈉鹽，2g組氨酸分別進(jìn)行溶解混勻得到穩(wěn)定劑母液；然后再量取重組人干擾素a 2b3.0 X IO6IU,緩慢加入穩(wěn)定劑母液中，混勻，加制劑用水定容至1000ml，混勻；最后將配制好的含有重組人干擾素a 2b的溶液用濾膜過(guò)濾除菌后，即可得到重組人干擾素a 2b制劑。實(shí)施例4取氯化鈉9g,加入制劑用水500ml溶解混勻，按順序依次加入20mmol pH7.5磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉，Ig乙二胺四乙酸二鈉鹽，5g組氨酸分別進(jìn)行溶解混勻得到穩(wěn)定劑母液；然后再量取重組人 干擾素a 2b6.0X IO6IU,緩慢加入穩(wěn)定劑母液中，混勻，加制劑用水定容至1000ml，混勻；最后將配制好的含有重組人干擾素a 2b的溶液用濾膜過(guò)濾除菌后，即可得到重組人干擾素a2b制劑。實(shí)施例5取氯化鈉9g，加入制劑用水500ml溶解混勻，按順序依次加入IOmmol pH7.0磷酸二氫鈉-磷酸氫二鈉，100 μ I吐溫80，20g人血白蛋白分別進(jìn)行溶解混勻得到穩(wěn)定劑母液，然后再量取重組人干擾素a 2b6.0 X IO6IU,緩慢加入穩(wěn)定劑母液中，混勻，加制劑用水定容至1000ml，混勻；最后將配制好的含有重組人干擾素a 2b的溶液用濾膜過(guò)濾除菌后，即可得到重組人干擾素a 2b制劑。實(shí)施例6為了確定本發(fā)明公開(kāi)的重組人干擾素a 2b制劑的穩(wěn)定性，分別將實(shí)施例樣品置于2 8°C、25°C、37°C條件下保存，在規(guī)定時(shí)間點(diǎn)取樣，對(duì)實(shí)施例1 5中制取得到的重組人干擾素a 2b制劑進(jìn)行穩(wěn)定性考察。分別將實(shí)施例樣品置于裝有日光燈的冰箱里，照度條件為4500±5001x，溫度6±2°C，第10天取樣，按考察項(xiàng)目檢測(cè)。分別將實(shí)施例樣品在避光，室溫下，置于搖床(250r/min)中振搖8d,按考察項(xiàng)目檢測(cè)。分別將供試品置于_20°C冰箱中12小時(shí)使供試品溶液完全凍結(jié)，然后取出置于2 8°C冰箱中8小時(shí)使供試品溶液完全融化成液體狀態(tài)，如此反復(fù)6次，分別取樣檢測(cè)。結(jié)果:本發(fā)明制取的可直接注射使用的制劑在2 8°C條件下能穩(wěn)定重組人干擾素α 2b有效期至2年以上，在25°C條件下能穩(wěn)定儲(chǔ)存6個(gè)月以上，在光照、振搖和反復(fù)凍融等破壞性試驗(yàn)中也能很好的保持重組人干擾素a 2b的活性和穩(wěn)定，具體結(jié)果詳見(jiàn)表I 6。表I實(shí)施例1 5制取的制劑在2 8°C貯存12個(gè)月的穩(wěn)定性結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種重組人干擾素a 2b制劑，該制劑是由以下組分和制劑用水構(gòu)成:重組人干擾素 a 2b1.0X106IU/ml 6X106IU/ml鱗酸鹽緩沖液5.0mmol/L 20.0 mmol/L乙二胺四乙酸二鈉鹽0.lmg/ml 1.0 mg/ml組氨酸1.0mg/ml 5.0mg/ml氯化鈉8.9 9.lmg/ml該制劑的pH值為6.0 7.5。
2.如權(quán)利要求1所述的注射用重組人干擾素a2b制劑，其特征在于:磷酸鹽緩沖液由磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉配制而成。
3.如權(quán)利要求2所述的重組人干擾素a2b制劑，其特征在于:該制劑是由以下組分和制劑用水構(gòu)成， 重組人千擾素 α 2bLOX IO6 6.0 X 106IlT/ml 磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉15 U mmol /I, 乙二胺四乙酸二鈉鹽0.5mg/ml 組氨酸2.0mg/ml 氯化鈉9.0mg/ml 該制劑的PH值為7.00
4.一種如權(quán)利要求1所述的重組人干擾素a 2b制劑的制備方法，包括以下操作步驟: S1:按制劑的原料比稱(chēng)取各原料藥品待用； S2:將稱(chēng)取好的氯化鈉配置成氯化鈉水溶液，然后將稱(chēng)取好的磷酸鹽緩沖液、乙二胺四乙酸二鈉鹽、組氨酸按順序依次加入氯化鈉水溶液中溶解混勻配制成穩(wěn)定劑母液，磷酸鹽緩沖液、乙二胺四乙酸二鈉鹽和組氨酸各原料的加入是分別在前一原料完全溶解混勻后再加入后一原料進(jìn)行溶解混勻； S3:將稱(chēng)取好的重組人干擾素a 2b加入S2中得到的穩(wěn)定劑母液中，混勻后再加制劑用水進(jìn)行定容，使得混合溶液中各原料組分的濃度與制劑的要求相一致，再將定容后的溶液經(jīng)濾膜過(guò)濾除菌后即可制得該制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種注射用重組人干擾素α2b制劑，該制劑包括重組人干擾素α2b、磷酸鹽緩沖液、乙二胺四乙酸二鈉鹽、組氨酸、氯化鈉和制劑用水構(gòu)成，該制劑的pH值為6.0～7.5。本發(fā)明可在不加入表面活性劑和防腐劑的同時(shí)，能夠在2～8℃條件下能穩(wěn)定重組人干擾素α2b有效期2年以上，在25℃條件下能保持有效期6個(gè)月以上，在振搖和反復(fù)凍融等破壞性試驗(yàn)中也能很好的保持重組人干擾素α2b活性和穩(wěn)定性；提高重組人干擾素α2b制劑使用的安全性。
文檔編號(hào)A61P31/14GK103143000SQ20131007357
公開(kāi)日2013年6月12日 申請(qǐng)日期2013年3月7日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月7日
發(fā)明者宋禮華, 王榮海, 倪曉燕, 李增禮, 儲(chǔ)成風(fēng) 申請(qǐng)人:安徽安科生物工程(集團(tuán))股份有限公司