用于治療細菌感染的成分的制作方法
【專利摘要】用于治療細菌感染的成分，包含牛至屬植物的濃縮物或提取物與至少另一種植物的一種濃縮物或提取物。
【專利說明】用于治療細菌感染的成分
[0001] 本發(fā)明涉及一種用于治療細菌感染的包含牛至屬植物的濃縮物或提取物的成分。
[0002]許多疾病由細菌感染引起。與細菌感染作斗爭代表了現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的至高點之一。在20世紀40年代，抗生素的發(fā)展給醫(yī)生提供了對抗細菌感染的有力工具，拯救了數(shù)百萬人的生命。然而，由于抗生素的廣泛應(yīng)用及偶爾的不恰當(dāng)使用，已經(jīng)開始出現(xiàn)耐抗生素的細菌株。這些新的、更強大的細菌對公共利益和健康造成了重大的威脅。
[0003]細菌感染可以由多種細菌引起，導(dǎo)致輕度疾病至需要直接干預(yù)的威脅生命的疾病(例如細菌性腦膜炎)。常見的細菌感染包括，例如肺炎、耳部感染、腹瀉、尿路感染以及皮膚病。
[0004]細菌感染的治療在大多數(shù)情況下通過使用以殺滅入侵細菌(殺菌劑作用方式)或抑制細菌生長(抑菌劑作用方式)為目的而不傷害宿主的抗生素來實現(xiàn)?？股氐男ЧQ于作用機理、藥物分布、感染部位、宿主的免疫狀態(tài)以及細菌耐藥性因素?？股赝ㄟ^不同的機理發(fā)揮作用；一些抗生素抑制細菌細胞壁的形成。其它抗生素阻止細菌蛋白質(zhì)合成。還有一些其它的抗生素抑制新陳代謝或干擾DNA合成和/或細胞膜滲透性。
[0005]自從20世紀40年代發(fā)現(xiàn)抗生素之后，許多抗生素已經(jīng)失去對抗常見細菌感染的效果，原因是細菌產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致住院治療、健康成本和死亡率的增加。
[0006]特別是,金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),—種兼性厭氧的革蘭氏陽性球菌，由于它對所有的包括例如萬古霉素在內(nèi)的常見抗生素的耐藥性，被認為是我們?nèi)粘Ｗ钗ｋU的微生物之一。金黃色葡萄球菌可以引起一系列的疾病，從輕微的皮膚感染例如丘疫、膿皰病、市子、蜂窩織炎性毛囊炎、癰、皮膚燙傷綜合征(skaled skin syndrome)以及膿腫，至威脅生命的疾病例如肺炎、腦膜炎、骨髓炎、心內(nèi)膜炎、中毒性休克綜合征、菌血癥以及膿毒病。其影響范圍從皮膚、軟組織、呼吸道、骨骼、關(guān)節(jié)、血管內(nèi)到傷口感染。特別是，耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌(MRSA)令人煩惱，因為這些微生物不僅對β -內(nèi)酰胺產(chǎn)生了抗性，還對許多其它抗微生物劑產(chǎn)生了抗性。MRSA常常出現(xiàn)在醫(yī)院和療養(yǎng)院，這些場所中具有開放性創(chuàng)傷的、使用侵入式醫(yī)療設(shè)備的和免疫系統(tǒng)虛弱的病人比一般大眾面臨更大的感染風(fēng)險。
[0007]另一種用于治療細菌感染的方法在于抑菌物質(zhì)的使用。例如，多個世紀以來，因其抗菌活性而為人熟知的牛至屬植物。
[0008]在遠東和中東文化中，牛至屬植物精油已被使用了很長一段時間，用于治療呼吸道感染、慢性炎癥、尿路感染、痢疾以及黃疸病。大量體外研究已經(jīng)表明牛至屬植物油，或其最有效的組分香芹酚和麝香草酚，能抑制多種細菌的生長。
[0009]例如，Hammer和同事研究了 52種植物油對抗9種細菌的活性。牛至屬植物油是能抑制引起人類傷口感染的難以殺滅的銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)生長的僅有的3種植物油之一?？傊龣幟视屯?，牛至屬植物油在抑制細菌生長上比所有的測試過的油更好(Hammer, K.et al.J.Appl.Microbial 1999, 86, 985-990) ?
[0010]Baretta和同事測試了牛至屬植物油以及鼠尾草油、迷迭香油、月桂油和香菜油對抗25種細菌的活性。他們發(fā)現(xiàn)牛至屬植物油顯示出對幾乎所有的測試菌最廣泛的和最強的抗性；實際上，在調(diào)查研究中，它有力地抑制了 25種細菌菌株中的19種(Baretta，Μ.T.etal.J.Essent.0il Res.1998, 10, 618-627)。
[0011]通過各種研究已經(jīng)證實牛至屬植物油在抑制金黃色葡萄球菌(S.aureus)的生長中提供了有效的活性。
[0012]例如，Celik和同事研究了 Origanum hypericifolium精油對包括MRSA株系在內(nèi)的許多金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)株系的抗微生物活性。結(jié)果表明，0.hypericifolium因其抗菌和抗氧化劑活性,有可能被用于食物和藥物中(Celik, A.；NurHerken, E.；Arslan, 1.；Zafer Ozel, M.；Mercan, N.Nat.Prod.Res.2010, 24, 1568-1577) ?
[0013]另一項研究調(diào)查了來源于牛至的精油與浸液以及煎湯相比，對屬于3個屬的23個不同種的111種革蘭氏陽性菌分離菌的抗菌活性。盡管精油和浸液尤其表現(xiàn)出對腐生葡萄球菌(S.saprophyticus)和金黃色葡萄球菌(S.aureus)的抗菌活性,但發(fā)現(xiàn)分離菌對牛至屬植物的煎湯具有抗性(Saeed, S.；Tariq, P ；Pak.J.Pharm.Sc1.2009，22，421-424)。
[0014]牛至屬植物油的抗菌效果也在小鼠的體內(nèi)研究中得到了證實。在金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的兩個株系(ATCC#14154 和 #14775)的培養(yǎng)物中，0.25mg/mL 的牛至屬植物油表現(xiàn)出殺菌性。在體外，甘油一月桂酸酯的效果與牛至屬植物油相似。兩者分別以0.125mg/mL的濃度組合具有殺菌性。在兩個單獨的體內(nèi)試驗中，14只注射金黃色葡萄球菌(ATCC#14775)的小鼠未經(jīng)治療在一周時間內(nèi)全部死亡。在治療的小鼠中，超過三分之一的小鼠存活了 30天，在這30天中每日給它們口服牛至屬植物油(6/14)。當(dāng)接受每日一次的牛至屬植物油和甘油一月桂酸酯組合物治療時，超過60%的小鼠存活下來(5/8)。這項研究表明，牛至屬植物油與甘油一月桂酸酯的組合可以證明是預(yù)防和治療金黃色葡萄球菌感染的有效的抗微生物劑。
[0015]大多數(shù)調(diào)查牛至屬植物的抗菌性質(zhì)的研究使用蒸餾獲得的精油。研究牛至屬植物提取物的抗氧化劑和抗炎活性的Yoshino和同事已描述了通過將牛至屬植物葉片溶解在乙醇中獲得的提取物。然而，這項研究不涉及牛至屬植物的抗菌性質(zhì)(Yoshino K.；Higashi, N.，Koga, K.J.0f Health Sc1.2006，52，169-173)。
[0016]進一步的研究致力于通過無溶劑微波萃取法(SFME)、超臨界流體萃取法或水蒸餾法獲得的牛至屬植物精油。Karakaya等人進行的研究表明，通過無溶劑微波萃取法在不同的微波功率下獲得的精油以及水蒸餾法獲得的精油抑制了單核細胞增生性李斯特氏菌(Listeria monocytogenases)、鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)及大腸桿菌 0157:H7 (Escherichia coli 0157:H7)的存活，然而金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的存活沒有受到影響。
[0017]上述研究表明牛至屬植物的抗微生物活性取決于活性化合物從植物中分離的過程。根據(jù)大多數(shù)完成的研究，通過蒸餾法獲得的牛至屬植物精油似乎在抑制細菌生長方面具有最大潛能。
[0018]增強藥用植物活性譜的功效的不同策略在于不同藥草的組合，以便協(xié)同增強藥效。例如，W0-A-2010091415描述了一種含有低濃度的精油和植物提取物以及果酸和烷二醇，以及任意溶劑的抗菌成分 。然而，這個發(fā)明未提到關(guān)于使用牛至屬植物提取物作為可選組分，并且這個發(fā)明所述的成分可以用于個人護理產(chǎn)品例如乳霜或肥皂產(chǎn)品，而非用作藥物。[0019]US-A-20100092581涉及一種含有屬于松杉寄生屬的植物(例如美洲云杉)的提取物的成分。所述成分顯示出對抗MRSA的活性并且可能用于藥物組成或殺菌劑。雖然如此，在這份文件中未將牛至屬植物列為可能的組分。
[0020]在Arzte Zeitung(16.12.2002)中描述了由山葵和旱金蓮提取物組成的成分。所
述成分對抗MRSA的抑菌活性來自組分芥子油；然而，所述組分根本不涉及牛至屬植物。
[0021]W0-A-2010049542描述了至少一種植物材料的至少一種提取物的水解產(chǎn)物顯示出抗菌活性，特別是對MRSA的抗菌活性。在這份文件中雖然列出了多種可能的植物材料，但未列出牛至屬植物的提取物。
[0022]因此，本發(fā)明的目的在于提供一種用于治療細菌感染的新的有效的抗菌成分。所述目的通過用于治療細菌感染的包含牛至屬植物的濃縮物或提取物以及至少另一種植物的一種濃縮物或提取物的成分來實現(xiàn)。
[0023]本發(fā)明所述的牛至屬植物的濃縮物或提取物可以來自物種Origanum acutidens、Origanum amanum、Origanum calcaratum、野馬郁蘭(Origanum compactum)、苦牛至(Origanum dicta mnus)、光葉牛至(Origanum laevigatum)、Origanum leptocladum、Origanum libanoticum、馬郁蘭(Origanum majorana)、小葉牛至(Origanummicrophyllum)、圓葉牛至(Origanum rotundifolium)、Origanum scabrum、西亞馬祖林(Origanum sipyleum)、敘利亞牛至(Origanum syriacum)、牛至(Origanum vulgare)。本發(fā)明優(yōu)選的牛至屬植物物種為牛至(Origanum vulgare)。
[0024]在本發(fā)明優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，根據(jù)本發(fā)明，所述成分為牛至屬植物的提取物以及至少另一種植物的一種提取物。
[0025]在本發(fā)明進一步優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，所述成分的濃縮物或提取物來自植物的地上部分。
[0026]術(shù)語“植物”指的是植物地上的所有部分，包括葉、枝、花、果實和種子。
[0027]在優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，上述成分的植物選自傘形科(Apiaceae)、覓科(Armaranthaceae)、薔薇科(Rosaceae)、茶薦子科(Grossulariaceae)、菊科(Astereraceae)、半日花科(Cistaceae)、唇形科(Lamiaceae)、?科(Fabaceae)和胡頹子科(Elaeagnaceae)的植物。
[0028]在本發(fā)明另一個優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，所述成分的植物選自羊角芳:屬(Aegopodium)、海蓬子屬(Salicornia)、藜屬(Chenopodium)、媼梓屬(Cydonia)、花楸屬(Sorbus)、酷栗屬(Ribes)、菊苣屬(Cichorium)、巖茨屬(Cistus)、水楊梅屬(Geum)、沙棘屬(Hippophae)、西達瑞梯屬(Sideritis)、鷹咀豆屬(Cicer)和李屬(Prunus)。
[0029]在本發(fā)明更優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，上述成分的植物選自羊角芳:(Aegopodium podagraria)、亨利藜(Chenopodium bonus-henricus)、花楸(Sorbusterminalis)、黑果茶薦(Ribes nigrum)、紅茶薦子(Ribes rubrum)、百瑞木(Cistus incanus)、媼梓(Cydonia oblonga)、菊苣(Cichorium intybus)、鹽角草(Salicornia europaea)、菩提香(Geum urbanum)、沙棘(Hippopha0 rhamnoides)、鐵尖草(Sideritis scardica)、鷹嘴豆(Cicer arietinum)、黑刺李(Prunus spinosa)。
[0030]為準備本發(fā)明所述的濃縮物或提取物，植物地上部分的所有組成部分都可以使用。優(yōu)選地，使用葉、枝和花。優(yōu)選地，粗切植物材料。
[0031]根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“濃縮物”用于代表通過從新鮮植物中去除水分，從藥草中獲得的所有產(chǎn)物。
[0032]根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“提取物”用于代表通過使用溶劑的提取，例如浸潰或滲透，從藥草中獲得的所有產(chǎn)物。
[0033]關(guān)于提取，植物的地上部分以天然狀態(tài)或干燥狀態(tài)進行浸潰或滲透。在優(yōu)選的實施例中，使用干燥的植物材料。
[0034]在提取之前，植物各部分可以用合適的方式破碎成小片，例如通過搓揉或切割它們。此外 ，植物各部分在收割后，即在天然狀態(tài)下，可以直接進行壓榨，以便在提取之前通過壓榨產(chǎn)生汁液。
[0035]通常，包含葉、枝和花的植物各部分的提取使用合適的溶劑進行。合適的溶劑是水、醇類，例如甲醇、乙醇或異丙醇，或氯化溶劑例如二氯甲烷，以及丙酮、乙酰丙酮、乙酸乙酯、氨水或冰醋酸，還有超臨界二氧化碳。也可以使用上述溶劑的混合物。
[0036]此外，脂肪例如豬油、蠟例如蜂臘，或油例如橄欖油和杏仁油，可以用于提取。優(yōu)選地，使用杏仁油。
[0037]在本發(fā)明優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，所述成分的提取物是水提取物或醇提取物。在更優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，使用了水或水與甲醇或乙醇的混合物。
[0038]提取通常在25_100°C的溫度下進行，取決于所用溶劑的沸點。優(yōu)選在95_100°C的溫度下進行提取。
[0039]在另一個優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，提取通常進行I分鐘至8小時，更優(yōu)選地進行1-3小時，特別是提取進行I小時。
[0040]為了獲得最高可能的產(chǎn)量，植物材料可以提取多次。優(yōu)選地，重復(fù)提取2-6次，更優(yōu)選地重復(fù)3次。既然這樣，也可以在不同的提取步驟中使用不同的溶劑，或使用溶劑提取后接著用脂肪、蠟或油提取，反之亦然。
[0041]浸潰過程通常在室溫下用水和乙醇的混合物進行5-9天，優(yōu)選進行7天，通過將溶劑混合物灌澆在植物組成部分上的方式進行浸潰，并在上述時間段內(nèi)一直保持這種狀態(tài)。
[0042]根據(jù)本發(fā)明，植物各部分的滲透通常是通過用水浸透植物各部分，在95-100°C用水處理植物各部分4-5小時來實現(xiàn)。
[0043]粗提產(chǎn)物在使用前也可以進行濃縮和/或干燥和/或進一步處理。為產(chǎn)生干燥提取物，溶劑可以通過例如噴霧干燥、冷凍干燥或真空干燥從液態(tài)天然提取物、濃縮提取物或凈化的提取物中回收。進一步的處理可以包括，例如本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的純化步驟，例如離心、過濾和傾析，以便從提取物中去除懸浮物。層析法，例如柱層析法、氣相色譜法或高效液相色譜法(HPLC)或蒸汽蒸餾也用于提純。在優(yōu)選的實施例中，使用未經(jīng)進一步提純步驟的粗產(chǎn)物。
[0044]本發(fā)明所述的成分可以在進行提取之前通過混合牛至屬植物(Origanum)和另一種植物的地上部分來獲得；或者優(yōu)選地，混合牛至屬植物(Origanum)的濃縮物或提取物與另一種植物的提取物，來獲得本發(fā)明所述的成分。
[0045]在本發(fā)明優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，本發(fā)明所述成分包含牛至屬植物(Origanum)的濃縮物或提取物與另一種植物的濃縮物或提取物以1:10至10:1的比例混合，優(yōu)選地1:5至5:1，以及更優(yōu)選地1:2至2:1并且特別是1:1。
[0046]牛至屬植物(Origanum)與其它植物的組合包括牛至屬/傘形科(Origanum/Apiaceae)、牛至屬 / 覓科(Origanum/Armaranthaceae)、牛至屬 / 薔薇科(Origanum/Rosaceae)、牛至屬 / 茶薦子科(Origanum/Grossulariaceae)、牛至屬 / 菊科(Origanum/Astereraceae)、牛至屬 / 半日花科(Origanum/Cistaceae)、牛至屬 / 唇形科(Origanum/Lamiaceae)、牛至屬 / 豆科(Origanum/Fabaceae)，以及牛至屬 / 胡頹子科(Origanum/Elaeagnaceae)。優(yōu)選的組合是牛至屬/羊角序?qū)?Origanum/Aegopodium)、牛至屬/海蓬子屬(Origanum/Salicornia)、牛至屬植物 / 藜屬(Origanum/Chenopodium)、牛至屬/媼梓屬(Origanum/Cydonia)、牛至屬/花楸屬(Origanum/Sorbus)、牛至屬/酷栗屬(Origanum/Ribes)、牛至屬/菊苣屬(Origanum/Cichorium)、牛至屬/巖茨屬(Origanum/Cistus)、牛至屬 / 水楊梅屬(Origanum/Geum)、牛至屬 / 沙棘屬(Origanum/Hippophae)、牛至屬/西達瑞梯屬(Origanum/Sideritis)、牛至屬/鷹咀豆屬(Origanum/Cicer)，以及牛至屬/李屬(Origanum/Prunus)。更優(yōu)選的組合是牛至屬植物/羊角序(Origanum/Aegopodium podagraria)、牛至屬植物 / 亨利藜(Origanum/Chenopodiumbonus-henricus)、牛至屬植物 / 花揪(Origanum/Sorbus terminalis)、牛至屬植物 / 黑果荼薦(Origanum/Ribes nigrum)、牛至屬植物 / 紅荼薦子(Origanum/Ribes rubrum)、牛至屬植物 / 百瑞木(O riganum/Cistus incanus)、牛至屬植物 / 媼梓(Origanum/Cydoniaoblonga)、牛至屬植物/菊苣(Origanum/Cichorium intybus)、牛至屬植物/鹽角草(Origanum/Salicornia eurpaea)、牛至屬植物 / 菩提香(Origanum/Geum urbanum)、牛
至屬植物 / 沙棘(OtiganumIHippopha^ rhamnoides)、牛至屬植物 / 鐵尖草(Origanum/Sideritis scardica)、牛至屬植物 / 鷹嘴豆(Origanum/Cicer arietinum)、牛至屬植物/黑剌李(Origanum/Prunus spinosa)。特別優(yōu)選的組合是牛至/百瑞木(Origanumvulgare/Cistus incanus)、牛至 / 黑果荼薦(Origanum vulgare/Ribus nigrum)、牛至/ 媼梓(Origanum vu I gar e/Cydon i a oblonga)，以及牛至 / 羊角序(Origanum vulgare/Aegopodium podagraria)。
[0047]在優(yōu)選的實施例中，結(jié)合以上和以下任何實施例，本發(fā)明所述成分此外還包括牛至屬植物與兩種或更多種其它植物的組合。優(yōu)選的實施例是牛至屬/巖茨屬/酷栗屬(Origanum/Cistus/Ribes)以及牛至屬 / 媼梓屬 / 羊角序?qū)?Or i ganum/Cydon i a/Aegopodium)，特別是牛至 / 百瑞木/ 黑果荼薦(Origanum vulgare/Cistus incanus/Ribesnigrum)以及牛至 / 媼梓 / 羊角序(Origanum vu I gar e/Cydon i a oblonga/Aegopodiumpodagraria)0
[0048]在本發(fā)明優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，本發(fā)明所述的成分為液體的、干燥的或半固體形式。
[0049]在本發(fā)明另一個優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，所述細菌感染由病原菌引起。
[0050]這里使用的術(shù)語“病原菌”指的是引起細菌感染的細菌。病原菌包括形成小球桿菌；小的、圓的、卵圓形的桿狀細胞；大的、鈍端的桿狀細胞；小的、纖細的、多型的桿狀細胞；卵圓形至球形的桿狀細胞；長的、纖細的、易彎曲的、盤旋的或螺旋形的桿狀細胞；纖細的、短的桿狀細胞；具有單極鞭毛的弧形桿狀細胞，以及菜豆形的桿狀細胞的革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。
[0051]在本發(fā)明優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，所述細菌感染為胃腸道感染、泌尿生殖道感染、呼吸道感染，如同，例如鼻炎、扁桃體炎、咽炎、支氣管炎、肺炎，內(nèi)部器官感染，如同，例如腎炎、肝炎、腹膜炎、心內(nèi)膜炎、腦膜炎、骨髓炎，眼部、耳部感染以及皮膚和皮下感染、腹瀉、皮膚病、中毒性休克綜合癥、菌血病、膿毒病，以及結(jié)核病。
[0052]還在本發(fā)明另一個優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，所述病原菌選自葡萄球菌屬(Staphylococcus)、鏈球菌屬(Streptococcus)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、埃希氏菌屬(Escherichia)、沙門氏菌屬(Salmonella)、螺桿菌屬(Helicobacter)、奈瑟氏菌屬(Neisseria)、彎曲桿菌屬(Campylobacter)、衣原體屬(Chlamydia)、梭狀芽胞桿菌屬(Clostridium)、弧菌屬(Vibrio)、螺旋體屬(Triponema)、分支桿菌屬(Mycobacterium)、克雷白氏桿菌屬(Klebsiella)、放線菌屬(Actinomyces)、類菌體(Bacterioides)、博代氏菌屬(Bordetella)、包柔螺旋體屬(Borrelia)、布氏桿菌屬(Brucella)、棒狀桿菌屬(Corynebacterium)、雙球菌屬(Diplococcus)、腸桿菌屬(Enterobacter)、梭形桿菌屬(Fusobacterium)、鉤端螺旋體屬(Leptospira)、李斯特氏菌屬(Listeria)、巴斯德氏菌屬(Pasteurella)、變形桿菌屬(Proteus)、立克次氏體屬(Rickettsia)、志賀氏菌屬(Shigella)、球狀菌屬(Sphaerophorus)、耶爾森氏菌屬(Yersinia),或它們的組合。
[0053]在本發(fā)明進一步優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，所述細菌選自突變鏈球菌(Streptococcus mutans)、鼠傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphimurium)、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa),以及小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(Yersinia enterocolitica)。
[0054]在本發(fā)明進一步優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，所述細菌是耐抗生素的細菌。這里使用的“耐抗生素的”本意是普通抗生素，如β_內(nèi)酰胺類抗生素、四環(huán)素、氨基糖苷類抗生素、大環(huán)內(nèi)酯類抗生素、林可酰胺類抗生素、促旋酶抑制劑(氟喹諾酮類)、磺胺類藥物和三甲氧芐二氨嘧啶、糖肽類抗生素、多肽類抗生素和硝基咪唑衍生物，當(dāng)上述抗生素作用于細菌時，既不能殺菌，也不能獲得抑菌效果。
[0055]在另一個優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，所述耐抗生素的細菌表示耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。此處使用的術(shù)語“耐甲氧西林的”與“多重抗藥性的”和“耐萬古霉素的”同義。
[0056]在本發(fā)明優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，所述成分通過口服給藥、鼻腔給藥或局部給藥。
[0057]在另一個優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，所述成分為鼻腔藥劑、吸入藥混合物、噴霧劑、漱口劑、口腔噴霧劑、鼻腔噴霧劑或室內(nèi)噴霧劑的形式。更優(yōu)選地，所述成分為口腔噴霧劑、鼻腔噴霧劑或室內(nèi)噴霧劑的形式，特別是鼻腔噴霧劑的形式。
[0058]在更優(yōu)選的實施例中，所述成分為噴霧劑或室內(nèi)噴霧劑的形式。優(yōu)選地，本發(fā)明所述的液體或固體的成分用于此。除了提取物，噴霧劑或室內(nèi)噴霧劑也可以包含藥學(xué)上的無害物質(zhì)、載體介質(zhì)和輔助劑。噴霧劑或室內(nèi)噴霧劑可以用于給細菌接觸的或有可能接觸的物體和房間消毒，特別是人類、動物和/或食品被傳播的各種方式。例如，飛機在起飛前可以用本發(fā)明所述的噴霧劑或本發(fā)明所述的室內(nèi)噴霧劑進行噴霧，以便預(yù)防病毒傳播，從而將人們感染的風(fēng)險降至最低。所述噴霧劑或室內(nèi)噴霧劑也可以在人面前進行噴霧，例如，在等候室，因為它不會對人引起任何毒性作用。
[0059]在特別優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，所述成分作為鼻腔噴霧劑使用，特別是用于治療細菌引起的呼吸道和鼻竇疾病。在這種情況下，所述成分優(yōu)選為液體提取物的形式。
[0060]在另一個優(yōu)選的實施例中，結(jié)合以上所列出的任一實施例，本發(fā)明所述的成分為片劑、包衣片劑、泡騰片劑、膠囊、粉末、顆粒、糖衣片、含片、丸劑、一次用量的針劑、滴劑、栓劑、乳劑、軟膏、凝膠、酊劑、泥膏劑、乳膏、濕敷劑、漱口溶液或植物汁液的形式。
[0061]關(guān)于口服使用，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，所述成分優(yōu)選以片劑形式給藥。在這種情況下，所述成分優(yōu)選是干燥的提取物的形式。
[0062]在另一個優(yōu)選的實施例中，結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，根據(jù)本發(fā)明，所述成分可以作為溶液特別是漱口溶液、漱口劑或酊劑使用，特別是用于治療口腔和上咽喉的細菌感染。
[0063]結(jié)合上文和下文所列出的任一實施例，栓劑代表了本發(fā)明所述成分用于直腸和陰道給藥的優(yōu)選實施例。
[0064]關(guān)于局部給藥，本發(fā)明所述的成分以乳劑、軟膏、凝膠、酊劑、泥膏劑、乳膏或濕敷劑的形式給藥。在這種情況下，所述成分優(yōu)選以提取物的形式使用，其中活性成分通過使用脂肪、蠟或油提取的方法從植物中提取。此外，所述提取物優(yōu)選對其進行進一步加工獲得干燥的提取物，隨后與脂肪、蠟或油混合或溶解于脂肪、蠟或油中。
[0065]在給藥形式中，所述成分的濃度隨給藥類型不同而不同。通常，固體給藥形式的每劑量單位中所述成分的質(zhì)量為0.5至1，OOOmgo優(yōu)選地，所述成分的質(zhì)量為每單位I至500mgo在液體給藥形式中，所述成分的濃度可以是I μ g/ml至100mg/ml,優(yōu)選為25 μ g/ml至50mg/ml。在半固體給藥形式的情況下，所述成分的含量共計重量的I % -90%，優(yōu)選為重量的 5% -75%。
[0066]更多的元素，例如維生素和礦物質(zhì)，可以加入本發(fā)明所使用的成分中。
[0067]所述成分也可以，例如，加入到動物飼料或食品中，例如飲料。以提取物的形式，所述成分本身也可以作為茶來泡。然而，也可以將熱水直接澆在植物各部分如牛至屬植物(origanum)的葉片上來制茶。此外，所述成分可以作為食品增補劑的成分，在冬季月份里服用所述增補劑能夠有助于增強身體的抵抗力并且有助于治療細菌感染。
[0068]通過下列實施例對本發(fā)明進行說明。
[0069]生產(chǎn)液體提取物和干燥提取物的一般程序:
[0070]對采集的植物材料進行肉眼觀察，去除非原始狀態(tài)的、損壞的或被咬掉的部分。
[0071]將凈化的材料鋪在溫室內(nèi)的桌子上并用紙蓋住進行干燥。每日對植物各部分進行翻轉(zhuǎn)并通過肉眼觀察去除非原始狀態(tài)的和損壞的部分。定期測定植物材料中的殘留水分。當(dāng)殘留水分的含量最大為10%的時候，該材料適于進一步的處理。
[0072] 粗切植物材料并轉(zhuǎn)移至燒杯；加入冷的蒸餾水(植物材料重量的10-30倍)。將產(chǎn)生的混合物置于電爐上加熱并攪拌直至它開始沸騰。慢煮持續(xù)I小時。[0073]過濾熱的液體，并壓榨剩余的植物材料。產(chǎn)生的水提取物直接裝入瓶中。
[0074]對于制備干燥提取物，將液體提取物裝入金屬碗并置于干燥爐中在80°C進行濃縮直到溶劑完全蒸發(fā)。將殘余物從金屬碗中刮凈并稱重。或者，按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標準程序凍干液體提取物。
[0075]牛至屬植物(Origanum)提取物的制備
[0076]將牛至(Origanum vulgare)的所有地上部分用于提取。
[0077]按照一般程序，將150g粗切的牛至在1500ml蒸餾水中加熱I小時。產(chǎn)生的水提取物直接裝入瓶中。
[0078]黑果茶薦(Ribes nigrum)提取物的制備
[0079]將黑果茶薦的葉片用于提取。
[0080]按照一般程序，將26.7g粗切的黑果茶薦葉片在800ml蒸餾水中加熱I小時。產(chǎn)生的水提取物直接裝入瓶中。
[0081]百瑞木(Cistus incanus)提取物的制備 [0082]將百瑞木的花和幼枝用于提取。
[0083]按照一般程序，將100g粗切的百瑞木材料在1500ml蒸餾水中加熱I小時。產(chǎn)生的水提取物直接裝入瓶中。
[0084]牛至(Origanumvulgare)、黑果茶薦(Ribes nigrum)和百瑞木(Cistus incanus)對金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抗菌效果
[0085]牛至(測試物A)
[0086]配方:固體物質(zhì)(冷凍干燥)的水中濃度為5mg/ml
[0087]測丨試體系:
[0088]測試模型:馬-欣二氏瓊脂(MH-瓊脂)上的金黃色葡萄球菌(USA300 = MRSA)
[0089]測試組:物質(zhì)A (5mg)
[0090]程序:將干燥冷凍的提取物溶解于水中。將100 μ I的MRSA溶液涂布在MH瓊脂上。隨后，在MH瓊脂上打孔產(chǎn)生8mm的孔洞，并在孔洞內(nèi)加入100 μ I的提取物溶液。在37°C放置22小時后，光學(xué)檢測孔洞中的生長抑制情況。
[0091]MRSA 細菌的使用:10-3/1.63χ105/100 μ I/ 瓊脂平板
[0092]MRSA的過夜培養(yǎng):在8ml TBS培養(yǎng)液中加入10 μ I菌液，37°C搖床培養(yǎng)22小時
[0093]黑果荼薦(測試物B)
[0094]配方:固體物質(zhì)(干燥冷凍)的水中濃度為5mg/ml
[0095]測丨試體系:
[0096]測試模型:馬-欣二氏瓊脂(MH-瓊脂)上的金黃色葡萄球菌(USA300 = MRSA)
[0097]測試組:物質(zhì)B (5mg)
[0098]程序:將干燥冷凍的提取物溶解于水中。將100 μ I的MRSA溶液涂布在MH瓊脂上。隨后，在MH瓊脂上打孔產(chǎn)生8mm的孔洞，并在孔洞內(nèi)加入100 μ I的提取物溶液。在37°C放置22小時后，光學(xué)檢測孔洞中的生長抑制情況。
[0099]MRSA 細菌的使用:ΙΟ—3/!.63χ105/100 μ I/ 瓊脂平板
[0100]MRSA的過夜培養(yǎng):在8ml TBS培養(yǎng)液中加入10 μ I菌液，37°C搖床培養(yǎng)22小時
[0101]百瑞木(測試物C)[0102]配方:固體物質(zhì)(干燥冷凍)的水中濃度為2.5mg/ml
[0103] 測試體系:
[0104]測試模型:馬-欣二氏瓊脂(MH-瓊脂)上的金黃色葡萄球菌(USA300 = MRSA)
[0105]測試組:物質(zhì)C (2.5mg)
[0106]程序:將干燥冷凍的提取物溶解于水中。將100 μ I的MRSA溶液涂布在MH瓊脂上。隨后，在MH瓊脂上打孔產(chǎn)生8mm的孔洞，并在孔洞內(nèi)加入100 μ I的提取物溶液。在37°C放置22小時后，光學(xué)檢測孔洞中的生長抑制情況。
[0107]MRSA 細菌的使用:10-3/1.63χ105/100 μ I/ 瓊脂平板
[0108]MRSA的過夜培養(yǎng):在8ml TBS培養(yǎng)液中加入10 μ I菌液，37°C搖床培養(yǎng)22小時
[0109]牛至(Origanum vulgare)和黑果茶薦(Ribes nigrum)對金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的協(xié)同抗菌效果
[0110]測試對象:
[0111]測試物:A (=牛至)+B (=黑果茶薦)
[0112]配方:物質(zhì)A:固體物質(zhì)(干燥冷凍)的水中濃度為5mg/ml ;物質(zhì)B:固體物質(zhì)(干燥冷凍)的水中濃度為5mg/ml
[0113]測試體系:
[0114]測試模型:馬-欣二氏瓊脂(MH-瓊脂)上的金黃色葡萄球菌(USA300 = MRSA)
[0115]測試組:物質(zhì)A (5mg) +物質(zhì)B (5mg)
[0116]程序:將干燥冷凍的物質(zhì)溶解于水中。將100 μ I的MRSA溶液涂布在MH瓊脂上。隨后，在MH瓊脂上打孔產(chǎn)生8mm的孔洞，并在孔洞內(nèi)加入100 μ I的物質(zhì)溶液。在37°C放置22小時后，光學(xué)檢測孔洞中的生長抑制情況。
[0117]MRSA 細菌的使用:10-3/1.63χ105/100 μ I/ 瓊脂平板
[0118]MRSA的過夜培養(yǎng):在8ml TBS培養(yǎng)液中加入10 μ I菌液，37°C搖床培養(yǎng)22小時
[0119]結(jié)果:
[0120]從圖1可見，當(dāng)牛至和黑果茶薦組合使用時，獲得了更好的MRSA生長抑制效果。
[0121]牛至(Origanum vulgare)和百瑞木(Cistus incanus)對金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的協(xié)同抗菌效果
[0122]測試物:A(=牛至)+C(=百瑞木)
[0123]配方:物質(zhì)A:固體物質(zhì)(干燥冷凍)的水中濃度為5mg/ml ;物質(zhì)C:固體物質(zhì)(干燥冷凍)的水中濃度為2.5mg/ml
[0124]測試體系:
[0125]測試模型:馬-欣二氏瓊脂(MH-瓊脂)上的金黃色葡萄球菌(USA300 = MRSA)
[0126]測試組:物質(zhì)A (5mg) + 物質(zhì) C (2.5mg)
[0127]程序:將干燥冷凍的物質(zhì)溶解于水中。將100 μ I的MRSA溶液涂布在MH瓊脂上。隨后，在MH瓊脂上打孔產(chǎn)生8mm的孔洞，并在孔洞內(nèi)加入100 μ I的物質(zhì)溶液。在37°C放置22小時后，光學(xué)檢測孔洞中的生長抑制情況。
[0128]MRSA 細菌的使用:10-3/1.63χ105/100 μ I/ 瓊脂平板
[0129]MRSA的過夜培養(yǎng):在8ml TBS培養(yǎng)液中加入10 μ I菌液，37°C搖床培養(yǎng)22小時
[0130]結(jié)果:[0131]從圖2可見，當(dāng)牛至和百瑞木組合使用時，獲得了更好的MRSA生長抑制效果。
[0132]牛至(Origanum vulgare)和黑果茶薦(Ribes nigrum)對突變鏈球菌(Streptococcus mutans)的抗菌效果
[0133]牛至和黑果茶薦的液體提取物的制備
[0134]將牛至的所有地上部分和黑果茶薦的葉片用于提取。
[0135]按照一般程序，將70g粗切的牛至和30g粗切的黑果茶薦葉片在1000ml蒸餾水中煮沸I小時。將產(chǎn)生的水提取物過濾并再煮沸5分鐘。產(chǎn)生的提取物直接裝入瓶中。液體提取物的濃度為30.5mg/ml。
[0136]牛至的干燥提取物的制備
[0137]將牛至的所有地上部分用于提取。
[0138]按照一般程序，將150g粗切的牛至在1500ml蒸餾水中加熱I小時。按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標準程序?qū)Ξa(chǎn)生的水提取物進行干燥。干物質(zhì)的含量至少為干燥提取物的總重量的92%。
[0139]黑果茶薦的干燥提取物的制備 [0140]將黑果茶薦的葉片用于提取。
[0141]按照一般程序，將26.7g粗切的黑果茶薦葉片在800ml蒸餾水中加熱I小時。按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標準程序?qū)Ξa(chǎn)生的水提取物進行干燥。干物質(zhì)的含量至少為干燥提取物的總重量的92%。
[0142]牛至和黑果茶薦的干燥提取物的制備
[0143]將牛至的干燥提取物和黑果茶薦的干燥提取物以1:1的質(zhì)量比徹底混合。
[0144]程序:
[0145]BacLight活性檢測,體外實驗
[0146]LIVE/DEAD BacLight細菌活性檢測試劑盒(Invitrogen,分子探針,達姆施塔特，德國)采用兩種核酸染色劑-綠色熒光SYT09染色劑和紅色熒光碘化丙啶染色劑。對于存活的細胞，小分子SYT09用于穿透存活的和死亡的(非存活的)細胞，然而復(fù)染劑碘化丙啶只對死亡細胞染色。
[0147]按照廠家的用法說明進行試驗并在96孔板讀數(shù)器上測量熒光強度。過夜培養(yǎng)后在鹽溶液中制備突變鏈球菌的懸浮液；通過加熱(95°C，1小時)使50%的細菌失活。
[0148]使用超聲波將上述牛至和黑果茶薦的干燥提取物溶解在蒸餾水中。牛至和黑果茶薦的液體提取物不經(jīng)過進一步稀釋而直接使用。制備下列儲備溶液并測試其對突變鏈球菌的抗菌活性:
[0149]l)8mg/ml的牛至和8mg/ml的黑果茶薦(來自上述干燥提取物)
[0150]2) 0.8mg/ml的牛至和0.8mg/ml黑果茶薦(來自上述干燥提取物)
[0151 ] 3) 30.5mg/ml (來自上述液體提取物)。
[0152] 將存活細菌與每一種儲備溶液以1:1混合并孵育10分鐘。然后，將這些懸浮液與加熱失活的細菌混合(0:100 ；5:95 ；25:75 ；45:55 ；50:50)。將 0.5 μ I 體積的 BacLight 染色溶液(組分A和B 1:1)加到250 μ I的這些混合物中。在暗室中孵育染色10分鐘。從每個樣品中吸取100 μ I到微量滴定板中，并測量熒光。激發(fā)波長為470nm ;在530nm處記錄存活細胞的發(fā)射信號強度并在620nm處記錄非存活細胞的發(fā)射信號強度。所有測量都做一個重復(fù)，以均衡懸浮液的不均一性。對于記錄數(shù)據(jù)的評估，存活的和死亡的(非存活的)細胞的比例按照存活細菌發(fā)射信號強度/死亡細菌發(fā)射信號強度來計算。用鹽溶液做的試驗作為參照/陰性對照。
[0153]結(jié)果:
[0154]從圖3可見，牛至和黑果茶薦的提取物表現(xiàn)出抗突變鏈球菌的抗菌活性。
[0155]牛至(Origanum vulgare)和黑果茶薦(Ribes nigrum)的液體提取物的制備
[0156]將牛至 的所有地上部分和黑果茶薦的葉片用于提取。
[0157]按照一般程序，將70g粗切的牛至和30g粗切的黑果茶薦葉片在1000ml蒸餾水中煮沸I小時。將產(chǎn)生的水提取物過濾并再煮沸5分鐘。產(chǎn)生的提取物直接裝入瓶中。純的液體提取物的濃度為30.5mg/ml。所述提取物用LB培養(yǎng)基按指定比例做進一步稀釋。
[0158]金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑制圈試驗
[0159]試駘體系:
[0160]MRSA的過夜培養(yǎng):在8ml TBS培養(yǎng)液中加入10 μ I菌液，37°C搖床培養(yǎng)22小時
[0161]試驗?zāi)Ｐ?馬-欣二氏瓊脂(MH-瓊脂)上的金黃色葡萄球菌(USA300 = MRSA)
[0162]試驗組:上述牛至和黑果茶薦的液體提取物；純提取物，1:2的提取物稀釋液以及1:4的提取物稀釋液
[0163]程序:將100 μ I的MRSA溶液涂布在MH瓊脂上。隨后，在MH瓊脂上打孔產(chǎn)生8mm的孔洞，并在孔洞中加入100 μ I指定濃度的液體提取物。在37°C放置22小時后，光學(xué)檢測孔洞中的生長抑制情況。
[0164]MRSA 細菌的使用:10-3/1.63χ105/100 μ I/ 瓊脂平板
[0165]結(jié)果:
[0166]觀察到MRSA的生長受到抑制。當(dāng)使用牛至和黑果茶薦的純提取物時，在MH瓊脂上觀察到28mm的抑制圈。使用1:2(提取物:LB培養(yǎng)液)稀釋液時，抑制圈為19mm，使用1:4(提取物:LB培養(yǎng)液)稀釋液時，抑制圈為13mm。
[0167]鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)的抑菌圈試驗
[0168]試駘體系:
[0169]鼠傷寒沙門氏菌的過夜培養(yǎng):在8ml LB培養(yǎng)液中加入10 μ I菌液，37°C搖床培養(yǎng)22小時，用LB培養(yǎng)液以1:100稀釋
[0170]試驗?zāi)Ｐ?馬-欣二氏瓊脂(MH-瓊脂)上的鼠傷寒沙門氏菌
[0171]試驗組:上述牛至和黑果茶薦的液體提取物；純提取物
[0172]程序:將100 μ I的鼠傷寒沙門氏菌溶液涂布在MH瓊脂上。隨后，在MH瓊脂上打孔產(chǎn)生8mm的孔洞，并在孔洞中加入100 μ I指定濃度的液體提取物。在37°C放置22小時后，光學(xué)檢測孔洞中的生長抑制情況。
[0173]結(jié)果:
[0174]觀察到鼠傷寒沙門氏菌的生長受到抑制。在MH瓊脂上觀察到IOmm的抑菌圈。
[0175]小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(Yersinia enterocolitica)的抑菌圈試驗
[0176]試駘體系:
[0177]小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的過夜培養(yǎng):在8ml LB培養(yǎng)液中加入10 μ I菌液，27°C搖床培養(yǎng)22小時，用LB培養(yǎng)液以1:1000稀釋[0178]試驗?zāi)Ｐ?馬-欣二氏瓊脂(MH-瓊脂)上的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌
[0179]試驗組:上述牛至和黑果茶薦的液體提取物；純提取物，1:2的提取物稀釋液
[0180]程序:將100 μ I的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌溶液涂布在MH瓊脂上。隨后，在MH瓊脂上打孔產(chǎn)生8_的孔洞，并在孔洞中加入100 μ I指定濃度的液體提取物。在27°C放置22小時后，光學(xué)檢測孔洞中的生長抑制情況。
[0181]結(jié)果:
[0182]觀察到小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的生長受到抑制。當(dāng)使用純的牛至和黑果茶薦的提取物時，在MH瓊脂上觀察到14mm的抑菌圈。使用1:2(提取物:LB培養(yǎng)液)稀釋液時，抑菌圈為10mm。
[0183]液體提取物存在時鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)的生長曲線
[0184]試駘體系:
[0185]鼠傷寒沙門氏菌的過夜培養(yǎng):在8ml LB培養(yǎng)液中加入10 μ I菌液，37°C搖床培養(yǎng)22小時
[0186]試驗?zāi)Ｐ?馬-欣二氏瓊脂(MH-瓊脂)上的鼠傷寒沙門氏菌
[0187]如下制備IOml混合物:
[0188]a) LB 培養(yǎng)液
[0189]b) LB培養(yǎng)液+50 μ I鼠傷寒沙門氏菌
[0190]c)LB培養(yǎng)液+上述牛至和黑果茶薦的液體提取物(4:1)
[0191]d)LB培養(yǎng)液+上述牛至和黑果茶薦的液體提取物(4:1)+50μ I鼠傷寒沙門氏菌
[0192]程序:將50 μ I的這些混合物在光度比色皿中用450 μ I的LB培養(yǎng)液稀釋，在O小時、I小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、24小時、48小時之后于600nm處測定光密度(OD)。
[0193]結(jié)果:
[0194]牛至和黑果茶薦的液體提取物能長時間地甚至超過48小時地對鼠傷寒沙門氏菌的生長進行有力地抑制。
[0195]液體提取物存在時銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的生長曲線
[0196]試駘體系:
[0197]銅綠假單胞菌的過夜培養(yǎng):在8ml LB培養(yǎng)液中加入10 μ I菌液，37°C搖床培養(yǎng)22小時
[0198]如下制備IOml混合物:
[0199]a) LB 培養(yǎng)液
[0200]b) LB培養(yǎng)液+50 μ I銅綠假單胞菌
[0201]c)LB培養(yǎng)液+上述牛至和黑果茶薦的液體提取物(2:1)
[0202]d)LB培養(yǎng)液+上述牛至和黑果茶薦的液體提取物(4:1)
[0203]e)LB培養(yǎng)液+上述牛至和黑果茶薦的液體提取物(2:1)+50μ I銅綠假單胞菌
[0204]f)LB培養(yǎng)液+上述牛至和黑果茶薦的液體提取物(4:1)+50μ I銅綠假單胞菌
[0205]程序:將100 μ I的這些混合物在光度比色皿中用900 μ I的LB培養(yǎng)液稀釋，在O小時、I小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、24小時、48小時之后于600nm處測定光密度。[0206]結(jié)果:
[0207]如果牛至和黑果茶薦的液體提取物按1:2稀釋使用，那么它對銅綠假單胞菌的生長大約能抑制8小時。在使用1:4稀釋液時，提取物在8小時之后有力地抑制細菌生長。
[0208]液體提取物存在時小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(Yersinia enterocolitica)的生長曲線
[0209]試駘體系:
[0210]小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的過夜培養(yǎng):在8ml LB培養(yǎng)液中加入10 μ I菌液，27°C搖床培養(yǎng)22小時
[0211]如下制備IOml混合物:
[0212]a) LB 培養(yǎng)液
[0213]b) LB培養(yǎng)液+50 μ I小腸結(jié)腸炎耶爾森菌
[0214]c)LB培養(yǎng)液+上述牛至和黑果茶薦的液體提取物(2:1)
[0215]d)LB培養(yǎng)液+上述牛至和黑果茶薦的液體提取物(4:1)
[0216]e)LB培養(yǎng)液+上述牛至和黑果茶薦的液體提取物(2:1)+50 μ I小腸結(jié)腸炎耶爾森菌
[0217]f)LB培養(yǎng)液+上述牛至和黑果茶薦的液體提取物(4:1)+50μ I小腸結(jié)腸炎耶爾森菌
[0218]程序:將100 μ I的這些混合物在光度比色皿中用900 μ I的LB培養(yǎng)液稀釋，在O小時、I小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、24小時、48小時之后于600nm處測定光密度。
[0219]結(jié)果:
[0220]兩種稀釋比例的牛至和黑果茶薦的液體提取物均抑制了小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的生長約8小時。
[0221]MIC5。試驗
[0222]MIC50值描述了抑制50%微生物生長所需的最低抑菌濃度。
[0223]鼠傷寒沙門氏菌(Salmonellatyphimurium)的 MIC5。試驗
[0224]試駘體系:
[0225]鼠傷寒沙門氏菌的過夜培養(yǎng):在8ml LB培養(yǎng)液中加入10 μ I菌液，37°C搖床培養(yǎng)22h
[0226]測試組:上述牛至和黑果茶薦的液體提取物；純提取物，I:2,1:4，1:8，1:16，1:32，I:64以及1:128的提取物稀釋液(用LB培養(yǎng)液稀釋)
[0227]程序:在9ml LB培養(yǎng)液中接種Iml的過夜培養(yǎng)物并于37°C搖床培養(yǎng)，直至經(jīng)光度計測量，OD600達到0.5-0.6之間為止。細菌用Neubauer Z^ihlkammer計數(shù)并稀釋至每ml培養(yǎng)液25xl05。在2ml上述牛至和黑果茶薦的液體提取物，純提取物，1:2，1:4，1:8，1:16，I:32,1:64以及1:128的提取物L(fēng)B培養(yǎng)液稀釋液中接種200 μ I (約5x10s)的鼠傷寒沙門氏菌。用不含有細菌的液體提取物的稀釋液及含有細菌的2ml LB培養(yǎng)液或培養(yǎng)液作為對照。37°C搖床培養(yǎng)19小時。將混合物在光度比色皿中以1:10稀釋并于600nm處測定光密度。
[0228]益果:
[0229] 達到MIC5tl的平均稀釋度為1:9 (提取物:LB培養(yǎng)液)。[0230]銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)的 MIC5tl 試驗
[0231]試駘體系:
[0232]銅綠假單胞菌的過夜培養(yǎng):在8ml LB培養(yǎng)液中加入10 μ I菌液，37°C搖床培養(yǎng)22小時
[0233]測試組:上述牛至和黑果茶薦的液體提取物；純提取物，I:2,1:4，1:8，1:16，1:32，I:64,1:128,1:256，1:512的提取物稀釋液(用LB培養(yǎng)液稀釋)
[0234]程序:在9ml LB培養(yǎng)液中接種Iml的過夜培養(yǎng)物并于37°C搖床培養(yǎng)，直至經(jīng)光度計測量，OD600達到0.5-0.6之間為止。細菌用Neubauer Z0hlkammer計數(shù)并稀釋至每ml培養(yǎng)液25xl05。在2ml上述牛至和黑果茶薦的液體提取物，純提取物，1:2，1:4，1:8，1:16，I:32,1:64,1:128,1:256，1:512的提取物L(fēng)B培養(yǎng)液稀釋液中接種200 μ I (約5x10s)的銅綠假單胞菌。用不含有細菌的液體提取物的稀釋液及含有細菌的2ml LB培養(yǎng)液或培養(yǎng)液作為對照。37°C搖床培養(yǎng)19小時。將混合物在光度比色皿中以1:10稀釋并于600nm處測定光密度。
[0235]:
[0236]達到MIC5tl的平 均稀釋度為1:70 (提取物:LB培養(yǎng)液)。
[0237]小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(Yersinia enterocolitica)的MIC5c!試驗
[0238]試駘體系:
[0239]小腸結(jié)腸炎耶爾森菌的過夜培養(yǎng):在8ml LB培養(yǎng)液中加入10 μ I菌液，27°C搖床培養(yǎng)22小時
[0240]測試組:上述牛至和黑果茶薦的液體提取物；純提取物，I:2,1:4，1:8，1:16，1:32，I:64,1:128,1:256，1:512的提取物稀釋液(用LB培養(yǎng)液稀釋)
[0241]程序:在9ml LB培養(yǎng)液中接種Iml的過夜培養(yǎng)物并于37°C搖床培養(yǎng)，直至經(jīng)光度計測量，OD600達到0.5-0.6之間為止。細菌用Neubauer Zahlkammer計數(shù)并稀釋至每ml培養(yǎng)液25xl05。在2ml上述牛至和黑果茶薦的液體提取物，純提取物，1:2，1:4，1:8，1:16，I:32,1:64,1:128,1:256，1:512的提取物L(fēng)B培養(yǎng)液稀釋液中接種200 μ I (約5x10s)的小腸結(jié)腸炎耶爾森菌。用不含有細菌的液體提取物的稀釋液及含有細菌的2ml LB培養(yǎng)液或培養(yǎng)液作為對照。27°C搖床培養(yǎng)19小時。將混合物在光度比色皿中以1:10稀釋并于600nm處測定光密度。
[0242]:
[0243]達到MIC5tl的平均稀釋度為1:50 (提取物:LB培養(yǎng)液)。
[0244]金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的 MIC5tl 試驗
[0245]試駘體系:
[0246]MRSA的過夜培養(yǎng):在8ml LB培養(yǎng)液中加入10 μ I菌液，37°C搖床培養(yǎng)22小時
[0247]測試組:上述牛至和黑果茶薦的液體提取物；純提取物，I:2,1:4，1:8，1:16，1:32，I:64,1:128,1:256，1:512的提取物稀釋液(用LB培養(yǎng)液稀釋)
[0248]程序:在9ml LB培養(yǎng)液中接種Iml的過夜培養(yǎng)物并于37°C搖床培養(yǎng)，直至經(jīng)光度計測量，OD600達到0.5-0.6之間為止。細菌用Neubauer Zjjhlkammer計數(shù)并稀釋至每ml培養(yǎng)液25xl05。在2ml上述牛至和黑果茶薦的液體提取物，純提取物，1:2，1:4，1:8，1:16，I:32,1:64,1:128,1:256，1:512的提取物L(fēng)B培養(yǎng)液稀釋液中接種200 μ I (約5x10s)的金黃色葡萄球菌。用不含有細菌的液體提取物的稀釋液及含有細菌的2ml LB培養(yǎng)液或培養(yǎng)液作為對照。37°C搖床培養(yǎng)19小時。將混合物在光度比色皿中以1:10稀釋并于600nm處測定光密度。
[0249]結(jié)果:
[0250]達到MIC5tl的 平均稀釋度為1:73 (提取物:LB培養(yǎng)液)。
【權(quán)利要求】
1.用于治療細菌感染的成分，包含牛至屬植物的濃縮物或提取物與至少另一種植物的 一種濃縮物或提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的成分，其特征在于：所述濃縮物或提取物來自所述植物的地 上部分。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的成分，其特征在于：所述植物選自傘形科（Apiaceae)、 覓科（Armaranthaceae)、蓄薇科（Rosaceae)、茶薦子科（Grossulariaceae)、菊科 (Asteraceae)、半日花科（Cistaceae)、唇形科（Lamiaceae)、顯科（Fabaceae)和胡顏子科 (Elaeagnaceae)的植物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的成分，其特征在于：所述植物選自羊角序?qū)伲ˋegopodium)、 海蓬子屬（Salicornia)、藜屬（Chenopodium)、媼梓屬（Cydonia)、花楸屬（Sorbus)、酷 栗屬（Ribes)、菊苣屬（Cichorium)、巖茨屬（Cistus)、水楊梅屬(Geum)、西達瑞梯屬 (Sideritis)、鷹咀豆屬（Cicer)、沙棘屬(Hippophae)和李屬(Prunus)。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的成分，其特征在于：所述可食用的植物選自羊角芹 (Aegopodium podagraria)、亨利藜(Chenopodium bonus-henricus)、花揪(Sorbus terminalis)、黑果荼薦(Ribes nigrum)、紅荼薦子(Ribes rubrum)、百瑞木(Cistus incanus)、媼梓(Cydonia oblonga)、菊苣(Cichorium intybus)、鹽角草(Salicorniaeuropaea)、菩提香（Geum urbanum)、沙棘（H/ppopA?ag rhamnoides)、鐵尖草（Sideritisscardica)、鷹嘴豆(Cicer arietinum)和黑剌李(Prunus spinosa) 0
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的成分，其特征在于：所述細菌感染由病原菌引起。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的成分，其特征在于：所述病原菌選自葡萄球菌屬 (Staphylococcus)、鏈球菌屬（Streptococcus)、假單胞菌屬（Pseudomonas)、埃希氏菌 屬（Escherichia)、沙門氏菌屬（Salmonella)、螺桿菌屬（Helicobacter)、奈瑟氏菌屬 (Neisseria)、彎曲桿菌屬（Campylobacter)、衣原體屬（Chlamydia)、梭狀芽胞桿菌屬 (Clostridium)、弧菌屬（Vibrio)、螺旋體屬（Triponema)、分支桿菌屬（Mycobacterium)、 克雷白氏桿菌屬（Klebsiella)、放線菌屬（Actinomyces)、類菌體（Bacterioides)、博 代氏菌屬（Bordetella)、包柔螺旋體屬（Borrelia)、布氏桿菌屬（Brucella)、棒狀桿菌 屬（Corynebacterium)、雙球菌屬（Diplococcus)、腸桿菌屬（Enterobacter)、梭形桿菌 屬（Fusobacterium)、鉤端螺旋體屬（Leptospira)、李斯特氏菌屬（Listeria)、巴斯德氏 菌屬（Pasteurella)、變形桿菌屬（Proteus)、立克次氏體屬（Rickettsia)、志賀氏菌屬 (Shigella)、球狀菌屬（Sphaerophorus)、耶爾森氏菌屬（Yersinia)，或它們的組合。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的成分，其特征在于：所述細菌是耐抗生素的細菌。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的成分，其特征在于：所述耐抗生素的細菌是耐甲氧西林的金 黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一所述的成分，其特征在于：所述成分是液體的、干燥的或半 固體的形式。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-10任一所述的成分，其特征在于：所述提取物是水提取物或醇提 取物。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-11任一所述的成分，其特征在于：所述成分通過口服給藥、鼻腔給藥或局部給藥。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-12任一所述的成分，其特征在于:所述成分為鼻腔藥劑、吸入藥混合物、噴霧劑、漱口劑、口腔噴霧劑、鼻腔噴霧劑或室內(nèi)噴霧劑的形式。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-12任一所述的成分，其特征在于:所述成分為片劑、包衣片劑、泡騰片劑、膠囊、粉末、顆粒、糖衣片、含片、丸劑、一次用量的針劑、滴劑、栓劑、乳劑、軟膏、凝膠、酊劑、泥膏劑、乳膏、濕敷劑、漱口溶液或植物汁液的形式。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-14任一所述的成分，其特征在于:所述細菌感染為胃腸道感染、泌尿生殖道感染、呼吸道感染，包括鼻炎、扁桃體炎、咽炎、支氣管炎、肺炎，內(nèi)部器官感染，包括腎炎、肝炎、腹膜炎、心內(nèi)膜炎、腦膜炎、骨髓炎，眼部、耳部感染以及皮膚和皮下感染、腹瀉、皮膚病、中毒性休克綜合癥、菌血病、膿毒病，以及結(jié)核病。
16.根據(jù)權(quán)利要 求1-8或10-15任一所述的成分，其特征在于:所述細菌選自突變鏈球菌(Streptococcus mutans)、鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，以及小腸結(jié)腸炎耳爾森菌(Yersinia enterocolitica)。
【文檔編號】A61K36/53GK103974708SQ201280058876
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2012年12月14日 優(yōu)先權(quán)日:2011年12月14日
【發(fā)明者】喬治斯·潘德利斯 申請人:喬治斯·潘德利斯