疫苗的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供用于在皮膚免疫中使用的免疫原性組合物，其包含一種或多種抗原和佐劑，其中所述佐劑是免疫學(xué)活性皂苷。
【專利說(shuō)明】疫苗【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明提供了用于在皮膚免疫中使用的免疫原性組合物，其包含抗原和佐劑，其中佐劑是免疫學(xué)活性皂苷和/或TLR-4激動(dòng)劑。
_2] 發(fā)明背景
無(wú)論是接觸抗原免疫還是加強(qiáng)免疫，一般均存在增加患者對(duì)疫苗接種的依從性，以及提高疫苗生產(chǎn)和運(yùn)輸?shù)囊子眯缘男枰?。皮膚免疫可解決這些需求的一些，并且可以用于與佐劑組合施用抗原，以誘導(dǎo)抗原特異性免疫應(yīng)答。
[0003]發(fā)明概沭
本發(fā)明的目標(biāo)是在對(duì)象中刺激針對(duì)疫苗的免疫應(yīng)答。所述疫苗包含免疫原性組合物并且皮膚施用，所述免疫原性組合物包含抗原和佐劑。
[0004]免疫原性組合物中的佐劑是免疫學(xué)活性皂苷和/或TLR-4激動(dòng)劑。
[0005]附圖簡(jiǎn)沭
圖1:小鼠抗原特異性IgG
圖2A =IFN- Y、TNF- a、IL-2三者陽(yáng)性的CD4 T細(xì)胞(小鼠數(shù)據(jù))
圖2 B =IFN- Y、TNF- a、IL-2三者陽(yáng)性的CD8 T細(xì)胞(小鼠數(shù)據(jù))
圖3:小鼠抗原特異性IgG
圖4 A =IFN- Y、TNF- a、IL-2三者陽(yáng)性的CD4 T細(xì)胞(小鼠數(shù)據(jù))
圖4 B =IFN- Y、TNF- a、IL-2三者陽(yáng)性的CD8 T細(xì)胞(小鼠數(shù)據(jù))
圖5:尤卡坦微型豬的免疫原性數(shù)據(jù) 圖6:家豬(在接觸抗原和加強(qiáng)方案中的免疫原性)。
[0006]發(fā)明詳沭
本發(fā)明提供了用于在皮膚免疫中使用的免疫原性組合物，其包含一種或多種抗原和佐劑，其中所述佐劑是免疫學(xué)活性皂苷和/或TLR-4激動(dòng)劑。
[0007]在另一個(gè)實(shí)施方案中提供了包含一種或多種抗原和佐劑的免疫原性組合物在制備用于皮膚免疫的藥物中的用途，其中所述佐劑是免疫學(xué)活性皂苷和/或TLR-4激動(dòng)劑。
[0008]在另一個(gè)實(shí)施方案中提供了皮膚免疫的方法，其包括給對(duì)象皮膚應(yīng)用包含一種或多種抗原和佐劑的免疫原性組合物的步驟，其中所述佐劑是免疫活性皂苷和/或TLR-4激動(dòng)劑。
[0009]本文所用的術(shù)語(yǔ)皮膚地意指應(yīng)用抗原進(jìn)入到人類皮膚的真皮和/或表皮。本發(fā)明尤其利用用于皮膚免疫的遞送系統(tǒng)，其誘導(dǎo)動(dòng)物或人中的免疫應(yīng)答，盡管也涵蓋了常規(guī)的施用方法。
[0010]包含至少一種抗原和佐劑(其中所述佐劑是免疫學(xué)活性皂苷和/或TLR-4激動(dòng)劑)的免疫原性組合物的皮膚應(yīng)用可以通過(guò)使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何皮膚方法進(jìn)行，其包括但不限于使用短針裝置(包括約I至約2_長(zhǎng)度的針的裝置)遞送或使用皮膚貼劑遞送。
[0011]用于與本文所描述的皮膚疫苗使用的合適的裝置包括短針裝置，例如在US4，886，499、US5, 190，521、US 5，328，483、US 5，527，288、US 4，270，537、US 5，015，235、US5，141, 496,US 5，417，662和EP1092444中描述的那些。皮膚疫苗也可通過(guò)限制針進(jìn)入皮膚的有效穿透長(zhǎng)度的設(shè)備施用，所述裝置諸如在W099/34850 (其通過(guò)引用并入本文)中描述的那些，以及它們的功能等同物。還合適的是，通過(guò)液體噴射注射器或通過(guò)刺穿角質(zhì)層并產(chǎn)生到達(dá)真皮的噴射的針遞送液體疫苗到真皮的噴射注射裝置。噴射注射裝置描述于，例如US5, 480, 38UUS 5, 599, 302,US 5,334，144,US 5, 993, 412,US 5, 649, 912,US 5,569，189,US5, 704, 91UUS 5, 383, 85UUS 5, 893, 397,US 5, 466, 220,US 5,339，163,US 5, 312, 335,US
5,503, 627,US 5, 064, 413,US 5, 520, 639,US 4, 596, 556,US 4, 790, 824,US 4, 941, 880,US4，940, 460、WO 97/37705和WO 97/13537。同樣合適的是使用壓縮氣體以加速粉末形式的疫苗通過(guò)皮膚的外層到真皮的彈道粉末/顆粒遞送裝置。此外，常規(guī)注射器可以在皮膚施用的經(jīng)典曼托法(mantoux method)中使用。然而,使用常規(guī)注射器需要高度熟練的操作人員，并且因此能夠在沒(méi)有高度熟練的使用者的情況下準(zhǔn)確地遞送的裝置是優(yōu)選的。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了本發(fā)明的用于在皮膚免疫中使用的免疫原性組合物，其中所述免疫原性組合物不通過(guò)使用常規(guī)的注射器的曼托法施用。
[0012]在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，提供了包含如本文所描述的本發(fā)明的免疫原性組合物的貼劑。該貼劑將一般包括背板，其包括固體基質(zhì)(如閉塞性或非閉塞外科敷料)。本發(fā)明的貼劑遞送本發(fā)明的抗原和佐劑到真皮或表皮。因此，本發(fā)明的貼劑包含一個(gè)或多個(gè)適合于遞送本發(fā)明的免疫原性組合物到表皮或真皮的微突出(microprojection)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)微突出在IOMm和2mm之間，例如20Mm至500Mm、30Mm至 lmm、100 至 200,200 至 300,300 至 400,400 至 500,500 至 600,600 至 700、700、800、800至900、100|^至400|^，尤其在約200Mm和300Mm之間或在約150Mm和250Mm之間。
[0013]在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的貼劑包含多個(gè)微突出。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的貼劑包含在2和5000個(gè)之間的微針，例如在1000和2000個(gè)之間的微突出。
[0014]在具體實(shí)施方案中，所述微突出分開約50Mm和1000Mm之間的距離。
[0015]所述微突出可以是適合于刺穿角質(zhì)層、表皮和/或真皮，和遞送抗原和佐劑到表皮或真皮的任何形狀。微突出可以做成如在例如W02000/074765和W02000/074766中所公開的形狀。所述微突出可以具有至少3:1 (高度對(duì)基底處的直徑)，至少約2:1或至少約1:1的高寬比。對(duì)于微突出的具體優(yōu)選的形狀是具有多邊形的底部，例如六邊形或菱形的椎體。其它可能的微突出形狀顯示于，例如美國(guó)公開的專利申請(qǐng)2004/0087992。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的微突出具有朝向基底變厚的形狀。
[0016]陣列中微突出的數(shù)目?jī)?yōu)選至少約100、至少約500、至少約1000、至少約1400、至少約1600或至少約2000。鑒于它們小的尺寸，微突出的面積密度不可以特別高，但是例如每平方厘米的微突出的數(shù)目可以是至少約50、至少約250、至少約500、至少約750、至少約1000或至少約1500。
[0017]在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗原和佐劑在將貼劑置于宿主的皮膚上的5小時(shí)內(nèi)，例如4小時(shí)、3小時(shí)、2小時(shí)、2小時(shí)或30分鐘內(nèi)遞送到宿主。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗原和佐劑在放置皮膚貼劑20分鐘內(nèi)，例如30秒，1、2、3、4、5、6、7、8、
9、10、11、12、13、14、15、16、17、18 或 19 分鐘內(nèi)遞送。
[0018]所述微突出可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何合適的材料制成。在具體實(shí)施方案中，至少部分微突出是生物可降解的，尤其是在微突出的最外層的微突出的頂端。在具體實(shí)施方案中，基本上所有的微突出是生物可降解的。如本文所用術(shù)語(yǔ)“生物可降解的”指在體內(nèi)使用(例如插入皮膚)的預(yù)期條件下可降解，而無(wú)論生物降解機(jī)制如何。生物降解的示例性的機(jī)制包括崩解、分散、溶解、腐蝕、水解和酶促降解。通過(guò)基本上所有，其指至少70%的微突出是生物可降解的，例如至少75%、80%、85%、90%或至少95%是生物可降解的。
[0019]在具體實(shí)施方案中，生物可降解的微突出包含生物可降解的聚合物。例如，合適的生物相容的，生物可降解的或生物可腐蝕的聚合物包括聚(乳酸)(PLA)，聚(乙醇酸)(PGA)，聚(乳酸-共-乙醇酸)類(PLGAs)，聚酐類，聚原酸酯類，聚醚酯類，聚己內(nèi)酯(PCL)類，聚酯酰胺類，聚(丁酸)，聚(戊酸)，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，聚乙烯醇(PVA )，聚乙二醇(PEG), PEG-PLA、PEG-PLA-PEG、PLA-PEG-PLA、PEG-PLGA, PEG-PLGA-PEG、PLGA-PEG-PLGA、PEG-PCL、PEG-PCL-PEG、PCL-PEG-PCL的嵌段共聚物，乙二醇-丙二醇-乙二醇的共聚物(PEG-PPG-PEG,商品名Pluronic?或泊洛沙姆?),葡聚糖，輕乙基淀粉(hetastarch),四聚淀粉(tetrastarch),五聚淀粉(pentastarch),輕乙基淀粉類(hydroxyethyl starches),纖維素，羥丙基纖維素(HPC)，羧甲基纖維素鈉(Na CMC)，熱敏HPMC (羥丙基甲基纖維素)，聚磷腈，羥乙基纖維素(HEC)，其它多糖類，多元醇類，明膠，藻酸鹽，脫乙酰殼多糖，透明質(zhì)酸及其衍生物，膠原蛋白及其衍生物，聚氨酯類，和這些聚合物的共聚物和共混物。優(yōu)選的羥乙基淀粉可以具有0-0.9范圍中的替換度。
[0020]在具體實(shí)施方案中，微突出的生物可降解部分包含抗原和/或佐劑。所述抗原和/或佐劑可以見于不同的微突出，例如分別約90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%的微突出可以包含抗原和10%、20%、30%、40%、50%、60%或70%的微突出可以包含佐劑。在具體實(shí)施方案中，提供了包含一個(gè)或多個(gè)，尤其是多個(gè)生物可降解的包含如本文所述免疫原性組合物的微突出的貼劑。包含活性物諸如抗原的微突出的實(shí)例公開于W02008/130587和W02009/048607?？纱x的微針的制造方法公開于W02008/130587和W02010/124255。
[0021]在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述佐劑和抗原包被在一個(gè)或多個(gè)微突出上。包被可以通過(guò)任何本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法進(jìn)行，例如通過(guò)公開于W006/055844，W006/055799的方法。
[0022]所述抗原和/或佐劑可以包被在不同的微突出上，分別約90%、80%、70%、60%、50%、40%,30%的微突出可以包被有抗原并且10%、20%、30%、40%、50%、60%或70%的微突出可以包被有佐劑。
[0023]本發(fā)明的貼劑可以通過(guò)任何手段應(yīng)用于佩帶者的皮膚，例如通過(guò)用手將貼劑置于皮膚上。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的貼劑使用敷料器應(yīng)用于皮膚，例如W02008/091602中所述輔料器。具體而言，所述應(yīng)用包括用于保證所述貼劑已經(jīng)以足夠的壓力施加到皮膚以保證一個(gè)或多個(gè)微突出刺穿角質(zhì)層、表皮和/或真皮的手段，例如當(dāng)已施加了足夠的壓力時(shí)發(fā)出可聽到的聲音的裝置。
[0024]本發(fā)明的貼劑還可以包含膠粘劑以幫助貼劑在釋放/遞送抗原和佐劑進(jìn)入真皮和/或表皮期間保留在皮膚 上。
[0025]本發(fā)明的免疫原性組合物包含抗原和佐劑兩者。佐劑是免疫原性組合物的組分，其幫助誘導(dǎo)對(duì)抗原的免疫應(yīng)答。在本發(fā)明中，所述用于在皮膚免疫中使用的免疫原性組合物，包含佐劑，其是免疫學(xué)活性皂苷和/或TLR-4激動(dòng)劑。[0026]用于在本發(fā)明中使用的免疫學(xué)地特別合適的皂苷是Quil A及其衍生物。QuilA是從南美樹木石堿木(Qui llaja Saponaria Molina )分離的阜苷制備物，并且首先由 Dalsgaard 等人在 1974 年(“Saponin adjuvants，，，Archiv.fiir die gesamteVirusforschung, Vol.44, Springer Verlag, Berlin, p243_254)描述為具有佐劑活性。Quil A的純化的片段已通過(guò)HPLC分離，其保留佐劑活性而無(wú)Quil A相關(guān)的毒性(EP O 362278)，例如QS7和QS21(也稱為QA7和QA21)。QS-21是衍生自石堿木的樹皮的天然皂苷，其誘導(dǎo)⑶8+細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTLs)、Thl細(xì)胞和主要的IgG2a抗體應(yīng)答并且在本發(fā)明的背景下是優(yōu)選的皂苷。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，免疫學(xué)活性的皂苷是QS21。具體而言，基本上純的形式的QS21，也就是說(shuō)，QS21是至少90%純，優(yōu)選至少95%純和最優(yōu)選至少98%純。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，QS21用留醇配制。優(yōu)選的留醇包括β_谷留醇、豆留醇、麥角甾醇、麥角鈣化留醇與膽固醇。這些留醇是本領(lǐng)域熟知的，例如膽固醇公開于默克索引，第11版，第341頁(yè)，作為在動(dòng)物脂肪中發(fā)現(xiàn)的天然存在的留醇。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述留醇是膽固醇。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，QS21與膽固醇的比例是在1:100和1:1之間，具體在1:2和1:10之間，例如1:5。
[0027]TLR-4激動(dòng)劑是Toll樣受體4的激動(dòng)劑，后者是Toll樣受體家族的成員。這是熟知的受體家族，其所有均在某種程度上參與免疫應(yīng)答。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述TLR-4激動(dòng)劑是脂多糖，合適地脂質(zhì)A的非毒性衍生物，具體是單磷酰脂質(zhì)A或更具體是3-脫酰基單磷酰脂質(zhì)A (3D-MPL)。
[0028]3D-MPL 以名稱 MPL 由 GlaxoSmithKline Biologicals N.A.銷售，并且在整個(gè)文獻(xiàn)中稱為MPL或3D-MPL。參見，例如美國(guó)專利號(hào)4，436，727、4，877，611,4, 866，034和4，912，094。3D-MPL主要促進(jìn)具有IFN-g (Thl)表型的CD4+ T細(xì)胞應(yīng)答。3D-MPL可以根據(jù)GB 2 220 211 A中公開的方法生產(chǎn)。化學(xué)上，其是具有3、4、5或6條?；湹?-脫?；鶈瘟柞Ｖ|(zhì)A的混合物。
[0029]可用于本發(fā)明中的其它TLR-4激動(dòng)劑是氨基烷基氨基葡糖苷磷酸酯(AGPs)，其是可從GlaxoSmithKline Biologicals S.A.獲得的合成的TLR-4激動(dòng)劑。合適的實(shí)例是在W098/50399或美國(guó)專利號(hào)6303347中公開的那些(用于制備AGP的方法也被公開)，合適地如在美國(guó)專利號(hào)6764840中公開的RC527或RC529或AGPs的藥學(xué)可接受的鹽。
[0030]在一個(gè)實(shí)施方案中，所述免疫原性組合物包含如本文所定義的免疫學(xué)活性皂苷和/或TLR-4激動(dòng)劑并且無(wú)其它佐劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述免疫原性組合物包含TLR-5激動(dòng)劑和一種或多種其它佐劑。在此實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述一種或多種其它佐劑選自如本文所述的TLR-4激動(dòng)劑，TLR-5激動(dòng)劑、TLR7/8激動(dòng)劑和如本文所述的免疫學(xué)活性的皂苷級(jí)分。
[0031]所述TLR-5激動(dòng)劑可以是鞭毛蛋白或保留TLR-5激動(dòng)劑活性的鞭毛蛋白的片段。所述鞭毛蛋白可以包括選自下列的多肽:幽門螺旋桿菌0? pylori),鼠傷寒沙門菌(5:iTpAi皿ria?)、霍亂弧菌(V.)、粘質(zhì)沙雷氏菌(51 marcesens)、福氏痢疾桿菌(51flexneri)、梅毒螺旋體(T.palIidum)、肺炎軍團(tuán)菌pneumophilia)、伯氏疏螺旋體(B.burgdorferei)、艱難梭狀芽孢桿菌iC.difficile)、苜猜根瘤菌iR.meIiloti)、羽扇豆根瘤菌0?.、卡氏巴爾通體(漢c7arr1、奇異變形桿菌0°.、枯草芽胞桿菌(B.、 單核細(xì)胞增生李斯特菌(L.、銅綠假單胞菌(P.aerwgifliosa)和大腸桿菌 C￡ coif)。
[0032]在具體實(shí)施方案中，所述鞭毛蛋白選自鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白B (Genbank登錄號(hào)AF045151)、鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白B的片段、大腸桿菌FliC (Genbank登錄號(hào)AB028476)、大腸桿菌FliC的片段、鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白FliC (ATCC14028)和鼠傷寒沙門菌鞭毛蛋白FliC的片段。
[0033]在具體實(shí)施方案中，所述TLR-5激動(dòng)劑是如在W02009/156405中所述的截短的鞭毛蛋白，即其中高變結(jié)構(gòu)域已被缺失的鞭毛蛋白。在此實(shí)施方案的一個(gè)方面，所述TLR-5激動(dòng)劑選自 FliCA174_4(l(l、FliCM61_4Q5 和 FliC.,。
[0034]在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述TLR-5激動(dòng)劑是如W02009/128950中所述的鞭毛蛋白。
[0035]如果TLR-5激動(dòng)劑是鞭毛蛋白的片段，可以理解所述片段將保留TLR5激動(dòng)劑活性并且必須因此保留對(duì)TLR-5激活負(fù)責(zé)的其序列部分。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道鞭毛蛋白的NH2和COOH末端結(jié)構(gòu)域?qū)τ赥LR-5相互作用和激活是重要的，尤其例如沙門氏菌中氨基酸86-92。
[0036]TLR7和8是toll樣受體家族的進(jìn)一步的成員。作為TLR7受體或TLR8受體或兩者的激動(dòng)劑的小分子是已知的。TLR7/8激動(dòng)劑指可以激動(dòng)(agonise) (B卩，增加)TLR7受體或TLR8受體或兩者受體的信號(hào)傳導(dǎo)的分子。因此在一方面，TLR7/7配體是作為TLR7激動(dòng)劑而非TLR8激動(dòng)劑的分子。在另一方面，TLR7/8配體是TLR8激動(dòng)劑而非TLR7激動(dòng)劑。在進(jìn)一步的方面，TLR7/8配體作為TLR7和TLR8受體兩者的激動(dòng)劑發(fā)揮作用。合適的TLR7/8配體可以見于，例如 W020 10/018133、W02010048520、W02010/018134、WO 2008004948、WO2007034882 和 WO 2005092893。
[0037]在本發(fā)明進(jìn)一步的方面，提供了包含一種或多種抗原和佐劑的免疫原性組合物，其用于皮膚免疫，其中所述佐劑是一種或多種TLR激動(dòng)劑。在具體實(shí)施方案中，所述TLR激動(dòng)劑是TLR-2激動(dòng)劑或TLR7和/或TLR8激動(dòng)劑。
[0038]在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述TLR激動(dòng)劑是TLR2激動(dòng)劑(Satooe等，JI2003 pl630-5)。合適地，能夠?qū)е峦ㄟ^(guò)TLR-2的信號(hào)傳導(dǎo)應(yīng)答的TLR激動(dòng)劑是來(lái)自結(jié)核分枝桿菌(M tuberculosis')、似氏疏螺旋體、梅毒螺旋體的脂蛋白、肽聚糖、細(xì)菌脂肽；來(lái)自包括金黃色葡萄球菌的物種的肽聚糖；脂磷壁酸、甘露糖醛酸、奈瑟氏菌孔蛋白、細(xì)菌菌毛、耶爾森氏菌毒力因子、CMV病毒顆粒、麻疹血凝素和來(lái)自酵母的酵母聚糖中的一種或多種。在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述TLR2激動(dòng)劑是合成的脂肽Pam3Cys-Lip(參見，例如Fisette 等，Journal of Biological Chemistry 278(47) 46252)。
[0039]在可選的實(shí)施方案中，使用能夠?qū)е峦ㄟ^(guò)TLR-7的信號(hào)傳導(dǎo)應(yīng)答的TLR激動(dòng)劑(Sabroe等，JI 2003 pl630_5)。合適地，所述能夠?qū)е峦ㄟ^(guò)TLR-7的信號(hào)傳導(dǎo)應(yīng)答的TLR激動(dòng)劑是單鏈RNA(ssRNA)、洛索立賓、在位置N7和C8的鳥苷類似物或咪唑喹啉化合物，或其衍生物。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述TLR激動(dòng)劑是咪喹莫特。進(jìn)一步的TLR7激動(dòng)劑描述于W002085905。
[0040]在可選的實(shí)施方案中，使用能夠?qū)е峦ㄟ^(guò)TLR-8的信號(hào)傳導(dǎo)應(yīng)答的TLR激動(dòng)劑(Sabroe等，JI 2003 pl630_5)。合適地，能夠?qū)е峦ㄟ^(guò)TLR-8的信號(hào)傳導(dǎo)應(yīng)答的TLR激動(dòng)劑是單鏈RNA (ssRNA)，具有抗病毒活性的咪唑喹啉分子，例如瑞喹莫德(R848);雷西莫特也能夠被TLR-7識(shí)別?？梢允褂玫钠渌黅LR-8激動(dòng)劑包括在W02004071459中描述的那些。
[0041]在一個(gè)實(shí)施方案中，提供了本發(fā)明的免疫原性組合物，其中TLR7/8激動(dòng)劑，咪唑喹啉分子，尤其是共價(jià)連接到磷脂或膦脂(phosphonolipid)基團(tuán)的咪唑喹啉。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的免疫原性組合物包含CRX642 (參見W02010/048520)。
[0042]如本文進(jìn)一步討論的，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，在抗原制劑中可以存在一些天然佐劑，如果這些制劑是包含天然病原體相關(guān)分子模式的活的減毒病毒或殺死的全病毒。在此背景下，術(shù)語(yǔ)“無(wú)其它佐劑”不意在排除在一些抗原性制劑中發(fā)現(xiàn)的那些天然佐劑，但是意在指無(wú)進(jìn)一步的佐劑特別添加到免疫原性組合物。
[0043]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的免疫原性組合物用于皮膚初次免疫。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的免疫原性組合物用于在對(duì)象中皮膚加強(qiáng)免疫，所述對(duì)象已經(jīng)通過(guò)非經(jīng)皮途徑(如舌下、鼻內(nèi)或肌內(nèi))接受初次免疫。在又一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的免疫原性組合物可以提供皮膚初次免疫和皮膚加強(qiáng)免疫。
[0044]術(shù)語(yǔ)初次免疫意在指對(duì)象接受針對(duì)具體病原體的首次疫苗接種過(guò)程。例如，在UK疫苗接種計(jì)劃中，嬰兒在13個(gè)月齡時(shí)針對(duì)麻疹、腮腺炎和風(fēng)疹免疫(初次免疫)。他們?cè)?歲零4個(gè)月年齡時(shí)針對(duì)相同的病原體再次接種疫苗(加強(qiáng)免疫)。在乙型肝炎領(lǐng)域可以見到另一個(gè)實(shí)例。需要接種疫苗的人(成人或嬰兒)在0、1和6個(gè)月給予三次疫苗劑量的初始計(jì)劃(primary schedule)(初次免疫)。如果有必要，(例如，按照加速的初始計(jì)劃，或抗體滴度已下降)在初始 疫苗接種之后在I歲或5歲可以給予另一次疫苗接種(加強(qiáng)免疫)。進(jìn)一步的實(shí)例可以見于所謂的“DTP”疫苗一白喉、破傷風(fēng)、百日咳疫苗。通常，初次破傷風(fēng)和白喉免疫在生命的第一年期間以兩個(gè)劑量進(jìn)行。根據(jù)國(guó)家，在第二年期間和/或在4歲和10歲年齡之間施用加強(qiáng)劑量。
[0045]本領(lǐng)域充分理解術(shù)語(yǔ)抗原是指產(chǎn)生免疫應(yīng)答的試劑。所述抗原可以是能夠引起人或動(dòng)物中免疫應(yīng)答的一種或多種蛋白、多糖、肽、核酸、蛋白-多糖綴合物、分子或半抗原?？蛇x地，所述抗原可以是全病原體，例如減毒的或滅活的病原體。全的滅活的病原體可以進(jìn)一步拆分，例如拆分的流感病毒。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，抗原衍生自甲型肝炎病毒和/或乙型肝炎病毒(例如，乙型肝炎病毒表面抗原)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，抗原衍生自人乳頭瘤病毒。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，抗原是煙堿，或其衍生自煙堿。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，抗原衍生自登革熱病毒。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，抗原衍生自呼吸道合胞病毒(RSV)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗原與阿爾茨海默氏病有關(guān)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗原衍生自導(dǎo)致麻疹、腮腺炎、風(fēng)疹或其組合的病毒。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗原衍生自水痘-帶狀皰疫病毒(VZV)。在另一個(gè)實(shí)施方案中,所述抗原衍生自腫瘤相關(guān)的抗原(例如，MAGE和/或PRAME)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗原衍生自引起人類痕疾的寄生蟲，尤其是惡性痕原蟲O0Za1SwotZiiffl? falciparum")和/或間日痕原蟲{Plasmodium vivax)?在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述抗原衍生自巨細(xì)胞病毒(CMV)。
[0046]如果本發(fā)明的免疫原性組合物用作加強(qiáng)免疫，則初次免疫可以是佐劑化的或未佐劑化的。顯而易見的是，一些疫苗天然包含佐劑，例如活的減毒的或殺死的病毒疫苗將保留在原始病原體中發(fā)現(xiàn)的一些病原體相關(guān)的分子模式(PAMPS)。當(dāng)初次免疫是“未佐劑化的”時(shí)，此術(shù)語(yǔ)意在指所述初次免疫在除了可以在抗原制劑中存在的那些之外不包含任何佐劑。
[0047]在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，所述初次免疫是佐劑化的(B卩，已經(jīng)摻入抗原制劑中可以是天然存在的那些之外的佐劑)。佐劑是本領(lǐng)域理解的術(shù)語(yǔ)，指幫助誘導(dǎo)對(duì)抗原的免疫應(yīng)答的組分?？捎糜诔醮谓臃N的佐劑是，例如金屬鹽、TLR調(diào)節(jié)劑、水包油乳液、脂質(zhì)體免疫原性組合物、皂苷佐劑或這些的任何組合。
[0048]在一個(gè)實(shí)施方案中，在初次免疫中使用的佐劑包括TLR調(diào)節(jié)劑，例如TLR-4調(diào)節(jié)劑，例如脂多糖或它們的衍生物，例如單磷酰脂質(zhì)A或3-脫酰基單磷酰脂質(zhì)A (稱為3D-MPL 并可以從 GlaxoSmithKline Biologicals North America 獲得,參見例如美國(guó)專利號(hào) 4，436，727,4, 877，611,4, 866，034 和 4，912，094)。
[0049]在另一個(gè)實(shí)施方案中，在初次免疫中使用的佐劑包含皂苷佐劑，例如Quil A和其衍生物。Quil A是從南美樹木石堿木(以Saponaria分離的阜苷制備物，并且首先由 Dalsgaard等人在 1974年(“Saponin adjuvants”，Archiv.fiir die gesamteVirusforschung, Vol.44, Springer Verlag, Berlin, p243_254)描述為具有佐劑活性。Quil A的純化的片段已通過(guò)HPLC分離，其保留佐劑活性而無(wú)Quil A相關(guān)的毒性(EP O 362278)，例如 QS7 和 QS21 (也稱為 QA7 和 QA21)。
[0050]在一個(gè)實(shí)施方案中，在初次免疫中使用的佐劑包括皂苷佐劑和TLR-4調(diào)節(jié)劑兩者，例如稱為ASOlB的佐劑(在脂質(zhì)體免疫原性組合物中的3D-MPL和QS21，5(^g 3D-MPL和50 μδ QS21)或稱為ASOlE的佐劑(在脂質(zhì)體免疫原性組合物中的3D-MPL和QS21，25Pg3D-MPL和 25 μδ QS21)。
[0051]在一個(gè)實(shí)施方案中，在初次免疫中使用的佐劑包括金屬鹽，例如氫氧化鋁或磷酸鋁和3-脫?；鶈瘟柞Ｖ|(zhì)Α。在此實(shí)施方案的具體實(shí)例中，在初次免疫中使用的佐劑是稱作AS04的佐劑(5(^g 3D-MPL吸附到500 μδ鋁鹽上)。
[0052]在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，在初次免疫中使用的佐劑包含水包油乳液，其本身包含可代謝的油，例如角鯊烯和表面活性劑例如吐溫80和/或司盤85。在此實(shí)施方案的具體實(shí)例中，所述水包油乳液是MF59。在此實(shí)施方案的一個(gè)實(shí)例中，水包油乳液可以包含可代謝的油的組合，例如角鯊烯和α-生育酚。在此實(shí)施方案的具體實(shí)例中，所述水包油乳液佐劑是AS03a、AS03b、AS03?；?AS03D，其所有都是來(lái)自 GlaxoSmithKline Biologicals S.A.的基于α -生育酚的水包油乳液。
實(shí)施例
[0053]實(shí)施例1
為了評(píng)價(jià)通過(guò)皮內(nèi)途徑注射的多種化合物的佐劑效力，C57BL/6小鼠的組在第O天和第14天皮內(nèi)注射2 yg或20 μ g單獨(dú)的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)或與I yg或10 μ g下列化合物組合的HBsAg:MPL、DQ、CRX-642、Pam3Cys Lip或CT。小鼠的基準(zhǔn)比較組也分別肌內(nèi)注射吸附到50 μ g或500 Ug明礬上的2 μ g或20 yg HBsAgo最后一次免疫后14天，處死小鼠并通過(guò)心臟穿刺收集血液樣品。在每次免疫之前也收集血液樣品。將血液樣品進(jìn)行處理并且血清樣品冷凍在_80°C，用于通過(guò)ELISA的抗原特異性抗體測(cè)定。簡(jiǎn)而言之，微孔板的孔用最佳濃度的HBsAg或用于標(biāo)準(zhǔn)曲線的抗小鼠IgG在室溫包被4小時(shí)。清洗和封閉微孔后，血清樣品系列稀釋到板中，并且板在4°C孵育過(guò)夜。在充分清洗步驟后，使用綴合HRP的第二抗體檢測(cè)小鼠IgG(在37°C 30分鐘)，隨后與TMB底物溶液一起孵育。反應(yīng)在30分鐘后用IM硫酸終止。板在450nm讀數(shù)。測(cè)試樣品的抗體濃度從標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線在每個(gè)板上，由純化的小鼠免疫球蛋白制成，使用SoftMaxPro通過(guò)應(yīng)用4參數(shù)公式進(jìn)行。值表示為每毫升血清特異性抗體的納克數(shù)，并且將測(cè)試組的抗體濃度的平均值與已皮內(nèi)接受未佐劑化的HBsAg (圖上的空心圓圈)對(duì)照組比較，或與已接受相同劑量的明礬吸附的HBsAg相應(yīng)的基準(zhǔn)組比較，所述比較通過(guò)單因素方差分析隨后是Dunnett氏多重比較測(cè)試。
[0054]來(lái)自在第28天收集的樣品的抗原特異性血清IgG濃度的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析揭示，當(dāng)MPL和DQ與HBsAg混合用于皮內(nèi)注射時(shí),與無(wú)佐劑給予的等效劑量的HBsAg相比記錄了強(qiáng)的佐齊嗷應(yīng)(圖1)。對(duì)于所有測(cè)試的涉及MPL或DQ的免疫方案，顯示引發(fā)的抗原特異性抗體應(yīng)答與由肌內(nèi)給予的吸附到明礬的基準(zhǔn)疫苗引發(fā)的那些相匹配。當(dāng)抗原特異性抗體濃度與由等效的未佐劑化的疫苗引發(fā)的應(yīng)答比較時(shí)，所評(píng)價(jià)的4個(gè)基于CRX-642的制劑的3個(gè)顯示顯著的但更低(相對(duì)MPL和DQ)的佐劑效應(yīng)。當(dāng)與HBsAg通過(guò)皮內(nèi)途徑共施用時(shí)，Pam3CysLip也展示強(qiáng)的佐劑效應(yīng)。4個(gè)測(cè)試的制劑中的3個(gè)可以引發(fā)與由基準(zhǔn)明礬吸附的疫苗引發(fā)的等效的抗原特異性抗體應(yīng) 答。當(dāng)皮內(nèi)注射20 yg HBsAg時(shí)，CT也顯示與通過(guò)明礬吸附的基準(zhǔn)疫苗引發(fā)的應(yīng)答相匹配的強(qiáng)的佐劑效應(yīng)。
[0055]還評(píng)價(jià)了通過(guò)多種疫苗制劑引發(fā)的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫(CMI)應(yīng)答。作為CMI的替代，通過(guò)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色在⑶4和⑶8 T細(xì)胞子集中評(píng)價(jià)了細(xì)胞因子產(chǎn)生。簡(jiǎn)而言之，從處死后的小鼠收集脾并使用尼龍細(xì)胞濾器和注射器栓塞處理成單細(xì)胞懸浮液。脾細(xì)胞在完全RPMI中培養(yǎng)。在存在抗⑶28、抗⑶49d和多種刺激劑例如HBsAg、涵蓋HBsAg的合成的15聚體肽和來(lái)自HIV的對(duì)照肽的情況下刺激脾細(xì)胞。作為陰性對(duì)照，脾細(xì)胞僅與完全RPMI培養(yǎng)基孵育。在2小時(shí)的刺激后，添加布雷菲德菌素A持續(xù)額外的16至18小時(shí)。使用Cytofix/Cytoperm試劑盒清洗、固定和透化細(xì)胞,并用下列mAb染色:APC_H7-綴合的大鼠抗-小鼠CD4 (L3T4)、PerCP-Cy5.5-綴合的大鼠抗-小鼠CD8a(Ly_2)、FITC_綴合的大鼠抗-小鼠IL-2、PE-綴合的大鼠抗-小鼠IL-5、APC-綴合的大鼠抗-小鼠IFN- Y和PE-Cy7-綴合的大鼠抗-小鼠TNF-α。在BD FACS Canto ? II上獲得細(xì)胞并使用BD FACSDiva?軟件分析。結(jié)果表示為同時(shí)產(chǎn)生細(xì)胞因子TNF-a ,IFN-Y和IL-2的⑶4或⑶8細(xì)胞頻率(％)。
[0056]如圖2 CA, B)中所示，結(jié)果表明對(duì)于產(chǎn)生細(xì)胞因子的⑶4和⑶8 T細(xì)胞的引發(fā)最佳的佐劑是DQ并且在較低程度上是MPL，極佳的制劑是10 μ g DQ與20 yg HBsAg—起皮內(nèi)給予。測(cè)試的其它制劑顯示在用HBsAg或合成的15聚體肽(HBsAg)重刺激(從每組5只小鼠的2個(gè)合并物中制成的脾細(xì)胞懸浮液)后誘導(dǎo)非常低或無(wú)可檢測(cè)的三細(xì)胞因子陽(yáng)性CD4和CD8 T細(xì)胞。
[0057]實(shí)施例2MPL和DQ的協(xié)同效應(yīng)或纟目合效應(yīng)
進(jìn)行小鼠免疫原性研究以評(píng)估MPL和DQ協(xié)同作用以引發(fā)針對(duì)HBsAg的抗原特異性抗體應(yīng)答和T細(xì)胞應(yīng)答的潛能。C57BL/6小鼠組在第O天和第14天皮內(nèi)注射2 μ g HBsAg,所述HBsAg與或不與I μ g DQ，或I μ g MPL或I μ g MPL與I μ g DQ的組合一起配制。吸附到明礬的相同劑量的HBsAg也肌內(nèi)給予作為基準(zhǔn)對(duì)照。小鼠在第28天處死。收集脾并進(jìn)行心臟穿刺放血。在每次免疫之前也收集血液樣品。將血液樣品進(jìn)行處理并且血清樣品冷凍在_80°C，用于通過(guò)ELISA的抗原特異性抗體測(cè)定。如先前所述測(cè)定抗原特異性抗體水平。還如先前所述重刺激脾細(xì)胞。
[0058]抗原特異性血清IgG水平的比較表明，MPL和DQ (基于重量調(diào)整)當(dāng)與HBsAg皮內(nèi)共施用時(shí)，引發(fā)非常類似水平的抗原特異性IgG水平，分別具有29 489 ng/mL和31 924ng/mL的幾何平均濃度。在兩種情況下，抗原特異性IgG水平顯著高于單獨(dú)接受HBsAg的小鼠所產(chǎn)生的那些。有意思的是，當(dāng)一起配制時(shí)，MPL和DQ的佐劑效應(yīng)對(duì)于抗原特異性IgG的引發(fā)不僅僅是加和性的，具有205 130 ng/mL的幾何平均濃度，其構(gòu)成協(xié)同效應(yīng)的優(yōu)良實(shí)例(圖3)。當(dāng)MPL與DQ—起配制時(shí)，引發(fā)產(chǎn)生細(xì)胞因子的細(xì)胞的效力也顯示最高。用HBsAg肽或抗原重刺激之后，三陽(yáng)性(TNF- α +、IFN- Y +和IL-2+)⑶4和⑶8 T細(xì)胞的頻率優(yōu)于任何其它組(圖4)。
[0059]實(shí)施例3:尤卡坦微型豬中的免疫原性/反應(yīng)原性
設(shè)計(jì)第一個(gè)尤卡坦豬反應(yīng)原性和免疫原性研究以:1)再現(xiàn)透皮貼劑應(yīng)用后由大腸桿菌不耐熱毒素(LT)產(chǎn)生的過(guò)度色素沉著反應(yīng)，2)確保DQ-佐劑化疫苗皮內(nèi)施用后不生成過(guò)度色素沉著反應(yīng)，以及3)驗(yàn)證經(jīng)過(guò)2次免疫后在尤卡坦豬品系中生成針對(duì)皮內(nèi)HBsAg的特異性免疫反應(yīng)的可能性。簡(jiǎn)而言之，總共9只尤卡坦豬(雌性，3-4個(gè)月)分成3組，每組3只動(dòng)物。第一組將在第O天在側(cè)面區(qū)域以100微升的體積皮內(nèi)接受5個(gè)不同劑量(50 μδ>25Pg、12.5 μδ,5 Pg和I Pg)的LT。第二組將在第O和28天在后肢肌內(nèi)(lml/劑量)接受Engerix。第三組將在第O和28天在側(cè)面區(qū)域以100μΙ的體積皮內(nèi)接受混合有5(^g的DQ的2(^g乙型肝炎表面抗原。將通過(guò)Draize評(píng)分觀察和評(píng)估用于皮內(nèi)注射的注射部位，在每次免疫前和在第56天處死時(shí)將收集血清(組2和3)并通過(guò)ELISA測(cè)定抗原特異性IgG水平。注射后，動(dòng)物每天監(jiān)測(cè)作為反應(yīng)原性指標(biāo)的紅斑、水腫、硬結(jié)、壞死和過(guò)度色素沉著進(jìn)行至多21天。
[0060]如下進(jìn)行抗原特異性血清抗體測(cè)定。簡(jiǎn)而言之，微孔NUNC板的孔用最佳濃度的HBsAg或用山羊抗豬IgG在室溫包被I小時(shí)。用DPBS-T 0.05%-BSA 1%在室溫清洗和封閉微孔板30分鐘后，血清樣品系列稀釋到板中并且板在室溫孵育I小時(shí)。充分清洗步驟后，使用HRP綴合的山羊抗豬第二抗體(在室溫I小時(shí))，隨后與TMB底物溶液在室溫孵育30分鐘而檢測(cè)豬IgG。反應(yīng)在30分鐘后用IM硫酸終止。板在450nm讀數(shù)。測(cè)試樣品中的抗體濃度從標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線使用豬參照血清在每個(gè)板上運(yùn)行。通過(guò)使用4參數(shù)公式通過(guò)SoftMaxPiO從標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)算特異性血清IgG濃度。值表示為每毫升血清特異性抗體的納克數(shù)。
[0061]抗原特異性血清IgG測(cè)定表明與由IM給予的人劑量的Engerix構(gòu)成的基準(zhǔn)疫苗相比，皮內(nèi)接受2個(gè)劑量的HBsAg (2(^g)與DQ (5(^g)的動(dòng)物能夠生成至少等效于在相同數(shù)目的劑量后由基準(zhǔn)疫苗引發(fā)的那些的抗體水平。當(dāng)LT皮內(nèi)注射到尤卡坦微型豬的側(cè)面皮膚中時(shí)，在注射部位觀察到嚴(yán)重的持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)的炎癥反應(yīng)。對(duì)于注射的LT的所有劑量和對(duì)于組中的所有3只豬都注意到過(guò)度色素沉著。這些強(qiáng)反應(yīng)在用20 μg HBs+50 μg DQ免疫的動(dòng)物中不存在。在用20 μg HBs+50 μg DQ ID注射的動(dòng)物中可以觀察到在注射部位存在干皮膚(非常溫和)。此外，特異性染色顯示，與正常皮膚相比，在DQ免疫的皮膚部分黑色素含量略微增加(幾乎不能被察覺(jué))。然而，當(dāng)與已通過(guò)相同途徑接受50 μg LT的組相比時(shí)，在用20 μg HBs+50 μg DQ ID注射后，黑色素色素沉著非常弱，幾乎是不可檢測(cè)的。[0062]實(shí)施例3:家豬中的免疫原性/反應(yīng)原性
在家豬(Yorkshire/Landrace X Duroc)中進(jìn)行免疫原性研究以評(píng)價(jià)用HBsAg w/wo佐劑皮內(nèi)注射加強(qiáng)先前通過(guò)Engerix經(jīng)由肌內(nèi)注射引發(fā)的應(yīng)答的能力。簡(jiǎn)而言之，總共25只豬(雄性和雌性，3-4月齡)分入6組，并按照2次免疫的計(jì)劃進(jìn)行免疫，在每次免疫之間具有28天的間隔。在第二次免疫后28天處死動(dòng)物。前4組每組由5只動(dòng)物組成，第5組(探索組)由3只動(dòng)物組成,并且第6組由2只豬組成。組I (基準(zhǔn))肌內(nèi)接受Engerix (EngerixHD)的人劑量。組2和3對(duì)于第一次免疫肌內(nèi)接受Engerix HD并且對(duì)于第二次免疫使用100微升的體積皮內(nèi)接受單獨(dú)HBsAg (2(^g)或與DQ (5(^g)—起的HBsAg (2(^g)。組4接受混合5(^g DQ的2(^g HBsAg的兩次皮內(nèi)注射，并且組5是探索組，用混合有5Pg DQ的20μδ HBsAg皮內(nèi)免疫兩次。在每次免疫前和在第56天的處死時(shí)收集血液樣品，并且血清將用于通過(guò)ELISA的抗原特異性IgG測(cè)定。來(lái)自組6的2只動(dòng)物將用于使用伊文思藍(lán)染色鑒定相關(guān)引流淋巴結(jié)。已接受伊文思藍(lán)的動(dòng)物在注射后30分鐘處死用于觀察引流淋巴結(jié)。
[0063]與肌內(nèi)給予的基準(zhǔn)(Engerix HD)相比，接受用Engerix HD頂初次免疫隨后是用混合50 μg DQ的20 μg HBsAg加強(qiáng)的組生成與由基準(zhǔn)頂疫苗誘導(dǎo)的等效的抗體應(yīng)答(圖6)。對(duì)于按照相同的計(jì)劃已接受混合50 Pg DQ的2(^gHBsAg的2次免疫的動(dòng)物，相同的觀察是有效的。但是，在沒(méi)有佐劑的情況下，接觸抗原和加強(qiáng)方案之后，ID接受單獨(dú)的HBsAg(20μ8)作為加強(qiáng)劑的組不能匹配由基準(zhǔn)組生成的抗體應(yīng)答。
[0064]對(duì)于皮內(nèi)給藥的組在免疫后使用Draize評(píng)分表進(jìn)行注射部位的評(píng)分。如表1所總結(jié)，在所有已接受HBsAg (20 μδ) + DQ (50 μδ)的動(dòng)物上第一次免疫后I天觀察到輕微的皮膚紅色(明確界定的)，具有20毫米的平均直徑。在免疫后2天，僅對(duì)于免疫的相同組在5只動(dòng)物的2只上觀察到幾乎難以察覺(jué)的皮膚紅色。在第3天，檢測(cè)不到皮膚反應(yīng)。對(duì)于已接受混合有DQ (5μδ)的HBsAg (20μδ)的組，在免疫后I天對(duì)于3只動(dòng)物中的2只觀察到幾乎難以察覺(jué)的皮膚紅色，并且對(duì)于此組在第2天觀察到無(wú)皮膚反應(yīng)。在第2次免疫后，在用Engerix肌內(nèi)初次接觸抗原并用混合有DQ (50 μ g)的HBsAg (20 μ g)皮內(nèi)加強(qiáng)的組中和在皮內(nèi)接受兩個(gè)劑量的混合有DQ (50 μ g)的HBsAg (20 μ g)的組中觀察到幾乎難以察覺(jué)的紅斑反應(yīng)，持續(xù)2天。對(duì)于皮內(nèi)接受兩個(gè)劑量的混合有DQ (5 μ g)的HBsAg(20 μ g)的組，僅在免疫后I天觀察到幾乎難以察覺(jué)的紅斑反應(yīng)。
[0065] 表1反應(yīng)原件表(家豬)
【權(quán)利要求】
1.用于在皮膚免疫中使用的免疫原性組合物，其包含一種或多種抗原和佐劑，其中所述佐劑是免疫學(xué)活性皂苷。
2.根據(jù)任意前述權(quán)利要求的免疫原性組合物，其中所述免疫學(xué)活性皂苷衍生自QuilA0
3.根據(jù)權(quán)利要求2的免疫原性組合物，其中所述QuilA衍生物是QS21。
4.根據(jù)任意前述權(quán)利要求的免疫原性組合物，其中所述免疫學(xué)活性皂苷用留醇，尤其是膽固醇配制。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的免疫原性組合物，其中免疫學(xué)活性皂苷對(duì)留醇的比例是在1:1和1:100之間，尤其在1:2和1:10之間，尤其約1:5。
6.用于在皮膚免疫中使用的免疫原性組合物，其包含一種或多種抗原和佐劑，其中所述佐劑是TLR-4激動(dòng)劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的免疫原性組合物，其中所述TLR-4激動(dòng)劑是脫毒的脂質(zhì)A，尤其是3D-MPL。
8.根據(jù)任意前述權(quán)利要求的免疫原性組合物，其中所述免疫原性組合物進(jìn)一步包含一種或多種選自下組的額外佐劑:TLR-4激動(dòng)劑、TLR7/8激動(dòng)劑或鞭毛蛋白或其片段，或免疫學(xué)活性皂苷。
9.根據(jù)任意前述權(quán)利要求的免疫原性組合物，其包含免疫學(xué)活性的皂苷，尤其是QS21(尤其用留醇，例如膽固醇配制)和TLR-4激動(dòng)劑，尤其是3D-MPL。
10.根據(jù)任意前述權(quán)利要求的免疫原性組合物，其以貼劑的形式施用。
11.根據(jù)任意前述權(quán)利要求的免疫原性組合物，其使用短針裝置施用。
12.根據(jù)任意前述權(quán)利要求的免疫原性組合物，其中所述TLR-5激動(dòng)劑是鞭毛蛋白或其具有TLR-5活性的片段。
13.根據(jù)任意前述權(quán)利要求的免疫原性組合物，其中所述TLR-5激動(dòng)劑是其中高變結(jié)構(gòu)域已經(jīng)缺失的TLR-5激動(dòng)劑。
14.根據(jù)權(quán)利要求5的免疫原性組合物，其中所述TLR-5激動(dòng)劑選自:FliCM74_4(l(l、Fl ICa 161-405 和 Fl ?0Δ 138-405°
15.根據(jù)任意前述權(quán)利要求的免疫原性組合物，其中所述抗原衍生自乙型肝炎病毒，尤其其中所述抗原是乙型肝炎表面抗原(HBsAg)。
16.用于在皮膚免疫中使用的免疫原性組合物，其包含一種或多種抗原和佐劑，其中所述佐劑是免疫學(xué)活性皂苷。
17.用于在皮膚免疫中使用的免疫原性組合物，其包含一種或多種抗原和佐劑，其中所述佐劑是一種或多種TLR激動(dòng)劑，尤其其中所述TLR激動(dòng)劑是TLR-2 (例如Pam3Cys-lip)激動(dòng)劑或TLR7和/或8激動(dòng)劑(例如CRX642)。
【文檔編號(hào)】A61K39/29GK103957933SQ201280056977
【公開日】2014年7月30日 申請(qǐng)日期:2012年11月19日 優(yōu)先權(quán)日:2011年11月20日
【發(fā)明者】N.M-J.加爾松-約翰遜, M.P.范梅切倫, M.普蘭特 申請(qǐng)人:葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司